同型半胱氨酸对大鼠主动脉内皮细胞分泌一氧化氮,血管紧张素 …

探讨同型半胱氨酸（ＨＣＹ）对大鼠主动脉内皮细胞（ＥＣ）分泌一氧化氮（ＮＯ），血管紧张素Ⅱ和内皮素（ＥＴ）的影响，取体重１５０￣２００ｇ健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠的胸主动脉，以组织贴块法进行ＥＣ培养，传代至第５代用于实验，各实验组及对照组均为６孔细胞，实验组加入不同浓度的ＨＣＹ，对照组不加ＨＣＹ，分别在２，４，６，８，１２，２４ｈ观察细胞形诚并取细胞培养液测定ＮＯ含量。一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）活性、Ａ     

别嘌呤醇对血管内皮细胞舒张功能的保护作用

目的探讨别嘌呤醇(Allo)对同型半胱氨酸(Hcy)和低密度脂蛋白(LDL)协同损伤人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)舒张功能的保护作用。方法将HUVEC与一定浓度的Hey、LDL及不同浓度的hllo共同培养24h,应用MTT试验(用甲欣光吸收OD值表示活细胞数)观察Allo是否对HUVEC有保护作用;测定细胞培养上清液一氧化氮(NO)含量,观察HUVEC血管舒张因子产生情况。同时,利用半定量RT-PCR方法测定内皮型一氧化氮合酶(eNOS)转录水平,以观察Allo是否影响eNOS的转录。结果HUVEC培养24h后,Hey(H)组、Hcy+LDL(H+L)组与Con组相比,活细胞数减少,NO产生减少(P值均<0.05)。H+L组与H组相比,活细胞数进一步减少(MTT试验OD值0.179±0.004.vs0.217±0.001)。Hcy+LDL+Allo(0.2mmol/L)(H+L+A)组,与H+L组相比,活细胞数增加(MTY试验OD值0.207±0.002),NO增加(15.58±0.193μmol/lvs14.21±0.340μmol/1)(P值均<0.05)。同时,活细胞数随Allo浓度增加而升高,至0.3mmol/L时趋于稳定。eNOS的半定量RT-PCR结果显示各组间的产物电泳带无明显差异。结论(1)Hcy可导致内皮细胞损伤、功能障碍;(2)Hcy和LDL对内皮细胞的损伤和功能障碍具有协同作用;(3)别嘌呤醇对Hcy和LDL协同损伤HUVE有保护作用。提示别嘌呤醇对体内存在高氧化状态的患者有对抗动脉粥样硬化的作用。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞合成蛋白聚糖的影响

为探讨同型半胱氨酸对血管内皮细胞合成蛋白聚糖的影响，采用400umol／L同型半胱氨酸作用于培养的人脐静脉内皮细胞，以^35S-Na2SO4为示踪物标记细胞合成的蛋白聚糖，通过离子交换层析，凝胶过滤层析分离蛋白聚糖。结果发现，实验组培养液中总蛋白聚糖降低，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖及硫酸软骨素-硫酸皮肤素蛋白聚糖含量也降低，但其百分含量未见改变。细胞层中蛋白聚糖未见明显变化。     

同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞MTHFR基因mRNA表达的影响及叶酸的拮抗效应

目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(HVSMCd)5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因mRNA表达的影响及叶酸(FA)可能的干预作用.方法 正常人脐动脉血管平滑肌细胞(HVSMCs)体外堵养,在培养基中加入临床相关浓度(30、100、200、500、1 000 μmol/L Hcy,100 μmol/L Hcy+100 μmol/L FA,500μmol/L Hcy+100 μmol/L FA,100 μmol/L FA)的干预液,并孵育72 h.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定MTHFR mRNA的表达水平.结果 不同浓度Hcy处理HVSMCs后,MTHFR mRNA表达增加,其mRNA表达水平在100μmol/L Hcy时达到高峰,直至极高浓度.Hcy时仍刺激MTHFR mRNA呈高表达,与对照组相比有显著差异.而FA能明显抑制Hcy所引起的MTHFR mRNA 高表达,对正常细胞无显著差异.结论 Hcy可促进人血管平滑肌细胞MTHFR mRNA表达增加.由于MTHFR是促使Hcy转化的关键酶,高Hcy诱导的MTHFR基因mRNA表达增加的效应应是一种代偿性的调节反应.FA可一定程度的拮抗这种效应.     

同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡的研究进展

近年的研究发现，血浆同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)水平升高是心肌梗死、脑梗死等心脑血管疾病以及外周阻塞性血管疾病的一个独立危险因素。动物实验发现，HCY可以通过损伤血管内皮细胞，启动粥样斑块和血栓形成。在粥样斑块内存在明显的内皮细胞凋亡。体外内皮细胞培养也显示HCY能诱导其凋亡，提示HCY可能通过内皮细胞凋亡而促进动脉粥样硬化。目前关于HCY引起内皮细胞凋亡的机制尚不明确，作者就HCY的代谢、HCY与内皮细胞凋亡的关系以及细胞凋亡的产生机制综述如下。     

同型半胱氨酸与冠心病的相关性及其机制探讨

目的　探讨血浆同型半胱氨酸 (HCY)与冠心病 (CHD)的相关性、与CHD传统危险因素的关系及其致CHD的机制。方法　分别测定CHD患者 (10 5例 )及对照组 (32例 )血中HCY、内皮素(ET)、一氧化氮 (NO)、一氧化氮合酶 (NOS)水平及血脂各参数。结果　CHD组高同型半胱氨酸血症(HHCY)的发生率明显高于对照组 (49 5 %比 9 4 % ,P <0 0 1) ,CHD组HCY水平明显高于对照组[(15 2 9± 5 14 ) μmol L比 (10 6 6± 2 78) μmol L ,P <0 0 1]。多元回归分析显示HCY对CHD的相对危险度 (RR)为 1 397(95 %可信区间 :1 137～ 1 6 4 5 ,P <0 0 1) ,表明HCY为CHD的独立危险因素。HCY与年龄、甘油三酯有关 (P <0 0 5 )。HCY与ET呈正相关 (P <0 0 1) ,而与NO、NOS呈负相关 (P <0 0 1)。结论　HHCY是CHD的独立危险因素。HCY可能损伤血管内皮细胞 ,使血管内皮功能失调。     

葛根素对同型半胱氨酸损伤内皮细胞的影响

目的探讨葛根素对同型半胱氨酸损伤血管内皮细胞的保护作用。方法建立同型半胱氨酸（homocysteine，Hey）诱导的人脐静脉内皮细胞株（ECV304细胞）损伤模型，通过四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测不同浓度鹞根素对ECV304细胞增殖的影响。结果HCY明显抑制ECV304细胞增殖，葛根素浓度为10-500μ/ml时，细胞活力较模捌组有明显改善；其中当葛根素浓度为100μg／ml时细胞活力最好（P〈0．001）；但与正常组比较仍有显著性差异（P〈0．001）。当葛根索浓度为20mg／ml时，细胞活力较模型组低。结论葛根索在一定浓度范围对内皮细胞有保护作用。     

亚甲基四氢叶酸还原酶基因型对叶酸降同型半胱氨酸的影响

背景 高血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平与亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T多态性是心脑血管疾病的重要危险因素,叶酸降低Hcy水平,从而降低心血管事件已成为心血管领域研究的热点问题,但叶酸、MTHFR基因多态性、Hcy三者之间关系国内外研究的甚少且结论存在差异.目的 探讨MTHFR基因C677T多态性对叶酸...     

甲硫氨酸诱发高同型半胱氨酸血症对内皮细胞的损伤作用

目的　观察甲硫氨酸诱发高同型半胱氨酸血症对内皮细胞的损伤作用。方法　将 18只新西兰白兔 ,随机分为甲硫氨酸组 (9只 )和对照组 (9只 )。分别喂予添加 3%甲硫氨酸的饲料和普通颗粒饲料 ,第 16周末 ,取血和留取主动脉进行指标测定。结果　甲硫氨酸组血清甲硫氨酸和同型半胱氨酸浓度显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,血浆内皮素和血管性血友病因子浓度显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,而血浆一氧化氮含量和动脉一氧化氮合酶活性显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,主动脉尚未剥脱的和明显损伤的内皮细胞血管性血友病因子表达均明显少于对照组。结论　短期喂食甲硫氨酸诱发高同型半胱氨酸血症 ,即使尚未引起明显的内膜增厚和脂质沉着 ,对血管内皮细胞的功能和结构也有显著的损伤作用。     

叶酸对高血压患者血同型半胱氨酸疗效观察

目的探讨叶酸对高血压患者高同型半胱氨酸治疗效果。方法采用荧光标记免疫检测法进行检测。结果治疗组血同型半胱氨酸水平显著低于对照组。结论叶酸可降低高血压患者血同型半胱氨酸水平，减少其危害作用。     

同型半胱氨酸对内皮细胞及脂质过氧化的影响

为观察同型半胱氨酸对内皮细胞,内皮细胞一氧化氮系统及脂质过氧化的影响,在培养兔主动脉内皮细胞中加入兔天然低密度脂蛋白后分为七组;对照组不加任何药物,叶酸组;四氢喋呤ＢＨ４）组,一氧化氮供体药ＳＩＮ－１组,同型半胱氨酸组;同型半胱氨酸加叶酸组和同型半胱氨酸加四氢喋呤组。     

内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化

目的 探讨内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致内皮细胞损伤中的作用机制.方法 原代培养人脐静脉内皮细胞,加入0、50、100、200、500 μmol/L同型半胱氨酸和100 μmol/L同型半胱氨酸+维生素B12+叶酸的培养液中孵育72 h.MTT法检测人脐静脉内皮细胞的增殖活性;实时定量PCR测定内皮型一氧化氮合酶mRNA表达;化学比色法测定内皮型一氧化氮合酶活性;硝酸还原酶法检测一氧化氮生成量.巢式降落式甲基化特异性PCR法检测内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化改变;同位素法检测DNA甲基化转移酶的活性.结果 人脐静脉内皮细胞与不同浓度同型半胱氨酸孵育72 h后,人脐静脉内皮细胞的增殖活性降低,内皮型一氧化氮合酶mRNA表达、内皮型一氧化氮合酶活性和一氧化氮的含量明显下降.内皮型一氧化氮合酶基因启动子序列DNA甲基化程度随同型半胱氨酸浓度的升高而增加,且DNA甲基化转移酶活性升高,而叶酸和维生素B12有一定拮抗作用,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05和P＜0.01).结论 同型半胱氨酸可导致内皮型一氧化氮合酶基因启动子区序列高甲基化修饰,并出现相应的内皮型一氧化氮合酶基因表达下调,这可能是同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的重要机制之一.     

冠状动脉粥样硬化斑块组成成分与斑块破裂的关系

为观察氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞一氧化氮生成的影响,采用体外细胞培养方法将含不同浓度氧化型低密度脂蛋白的ＤＭＥＭ 培养液（ 氧化型低密度脂蛋白终浓度分别为０ ｍｇＬ、５０ ｍｇＬ 、１００ ｍｇＬ 、２００ ｍｇＬ）,与内皮细胞共同孵育（３７ ℃、５％ ＣＯ２）２４ ｈ 后,分别测上清液中乳酸脱氢酶活性和一氧化氮含量及细胞中一氧化氮合酶活性,并用细胞化学染色法记数各组细胞一氧化氮合酶阳性染色细胞数。结果发现,随着培养液中氧化型低密度脂蛋白浓度升高,上清液中乳酸脱氢酶活性增加和一氧化氮含量下降,细胞中一氧化氮合酶活性和一氧化氮合酶阳性染色细胞数下降,可见,氧化型低密度脂蛋白可损伤血管内皮细胞,降低细胞中一氧化氮合酶活性,抑制一氧化氮产生,这可能是氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化的原因之一。     

肾素（前体）受体在高糖诱发的内皮细胞舒缩功能障碍中的作用及机制

目的　探讨高糖对内皮细胞舒缩功能障碍等损害过程中是否有肾素（前体）受体（（P）RR）的过度激活,并探讨其机制。方法　体外培养人脐静脉内皮细胞,分别以不同浓度的葡萄糖（15、30　mmol/L）干预细胞24　h、48　h后收取细胞,用分子生物学方法测定（P）RR以及反映血管舒缩功能的生物标记物蛋白和mRNA的表达,以siRNA的方法抑制（P）RR的表达后,观察葡萄糖对内皮细胞上述作用的改变,进一步分析其机制。结果　高糖显著上调内皮细胞（P）RR的蛋白和mRNA表达;同时上调内皮素1（ET-1）的表达,抑制一氧化氮（NO）的合成。（P）RR-siRNA虽能抑制高糖引起的ET-1　mRNA表达增高,但不抑制其蛋白表达。（P）RR-siRNA显著抑制高糖引起的NO降低。高糖抑制内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达,增加非对称性二甲基精氨酸（ADMA）的合成,（P）RR-siRNA能显著抑制高糖对eNOS和ADMA的影响。结论　高糖能够激活内皮细胞（P）RR的表达;（P）RR可能通过ADMA/eNOS通路介导了高糖诱发的血管内皮舒缩功能障碍。     

卡托普利晚期预处理对人内皮细胞缺氧复氧损伤时内皮素1和一氧化氮合酶表达的影响

观察缺氧复氧损伤时内皮细胞表达内皮素、一氧化氮合酶和一氧化氮的变化 ,并探讨卡托普利晚期预处理对内皮细胞在缺氧复氧损伤时三者的影响及机制。选用体外培养的第 3代人脐静脉内皮细胞 ,设正常对照组、单纯缺氧组、缺氧复氧组、卡托普利预处理组、卡托普利 +缓激肽B2 受体阻断剂组、卡托普利 +蛋白激酶C阻断剂组和卡托普利 +核因子κB阻断剂组 ,然后提取总RNA ,运用半定量逆转录—聚合酶链反应检测内皮素、一氧化氮合酶的mRNA表达。并利用分光光度计检测总一氧化氮合酶和一氧化氮蛋白的表达。结果发现 ,内皮素的灰度值在单纯缺氧组、缺氧复氧组均升高 ,在卡托普利组降低 ,而在三种阻断剂组均升高 ;诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶灰度值的变化规律与内皮素相反 ,其中诱导型一氧化氮合酶的变化较为轻微。与对照组相比 ,单纯缺氧组和缺氧复氧组一氧化氮合酶和一氧化氮有不同程度的降低 (P <0 .0 1) ;与单纯缺氧组和缺氧复氧组相比 ,卡托普利组一氧化氮合酶和一氧化氮均明显升高 (P <0 .0 1) ;与卡托普利组相比 ,3种阻断剂均可使一氧化氮合酶和一氧化氮的表达下降 (P <0 .0 1) ,而与缺氧复氧组相比表达升高 (P <0 .0 1)。结果提示 ,缺氧复氧可以使内皮细胞表达的内皮素增加 ,一氧化氮合酶降低 ,     

氧化型低密度脂蛋白对培养的内皮细胞一氧化氮合成和释放的影响

为观察氧化型你 蛋白对内此一氧化氮生成的影响，采用体外细胞培养方法钭含有不同深度氧化型低宽度脂蛋白的ＤＭＥＭ培养液（氧化型低密度脂蛋白终浓度分别为０ｍｇ／Ｌ、５０ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ、２００ｍｇ／Ｌ），与内皮细胞共同孵育（３７℃、５％ＣＯ２）２４后，分别测上清液中乳酸脱氢酶生和一氧化氮含量及细胞中一氧化氮合酶活性，并用细胞化学染色法记数各组细胞一氧化氮合酶阳性染色细胞数。结果发现，随着陪送２液     

维生素C对脂质过氧化损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

为探讨维生素C对脂质过氧化损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及其可能的分子作用机制 ,在铜离子诱发的低密度脂蛋白氧化修饰的基础上 ,造成内皮细胞的脂质过氧化损伤模型 ,测定细胞上清液中和细胞内乳酸脱氢酶的活性及其乙酰胆碱诱发的内皮型一氧化氮合酶活性及一氧化氮的生成量。结果发现 ,脂质过氧化物明显增加上清液中乳酸脱氢酶活性 (P <0 .0 1 ) ,增加细胞死亡率 (P <0 .0 1 ) ;同时它也抑制内皮型一氧化氮合酶的活性(P <0 .0 1 ) ,具有剂量 -依赖效应。应用不同剂量的维生素C(浓度为 1 0 0 μmol L和 30 0 μmol L)后 ,该效应明显减弱 ;内皮型一氧化氮合酶活性与一氧化氮生成量之间呈正相关 ,r值分别为 0 .9844(P <0 .0 1 )和 0 .880 2 (P <0 .0 5)。由此提示 ,脂质过氧化物能直接损伤内皮细胞 ,抑制内皮型一氧化氮合酶活性 ;维生素C对脂质过氧化损伤有保护作用     

血浆同型半胱氨酸和血清叶酸水平与胃黏膜异型增生的关系

背景近年来,同型半胱氨酸与细胞癌变的关系已引起广泛重视。叶酸及其辅酶对活细胞的生长发育等功能具有重要影响,叶酸缺乏与多种肿瘤的发生有关。目的了解胃黏膜异型增生患者的血浆同型半胱氨酸和血清叶酸水平,并探讨其间的关系。方法选取29例胃黏膜异型增生患者和25名健康对照者,采用高效液相色谱法测定血浆同型半胱氨酸水平,微生物学法测定血清叶酸水平。结果胃黏膜异型增生患者的血浆同型半胱氨酸水平显著高于健康对照者(14.74μmol/L±5.40μmol/L对8.16μmol/L±3.50μmol/L,P<0.001),血清叶酸水平显著低于健康对照者(4.29ng/ml±3.13ng/ml对11.24ng/ml±4.26ng/ml,P<0.001)。结论胃黏膜异型增生与血浆同型半胱氨酸水平升高和血清叶酸水平降低之间存在一定联系。血浆同型半胱氨酸水平升高和血清叶酸水平降低可能是胃黏膜异型增生的危险因素,有必要对此作进一步的探讨。     

普罗布考对溶血磷脂酰胆碱致培养人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

为探讨普罗布考对溶血磷脂酰胆碱致培养人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用 ,采用培养的人脐静脉血管内皮细胞 ,观察溶血磷脂酰胆碱对内皮细胞产生和分泌一氧化氮及其合酶、组织型纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活物抑制剂及乳酸脱氢酶活性的影响 ,并观察普罗布考的保护作用。结果发现 ,溶血磷脂酰胆碱明显增加乳酸脱氢酶活性 (4 8.0± 4 .1比 2 8.0± 7.5 ,P <0 .0 5 ) ,增加细胞死亡率 (9.9± 1.2比 6 .3± 0 .9,P <0 .0 5 ) ;同时抑制内皮型一氧化氮合酶 (4 8.0± 4 .3比 6 3.4± 6 .8)及组织型纤溶酶原激活剂活性 (0 .31± 0 .0 5比 0 .4 3± 0 .0 7,P <0 .0 5 ) ,增强纤溶酶原激活物抑制剂的活性 (1.39± 0 .2 1比 0 .97± 0 .11,P <0 .0 5 ) ,具有剂量—依赖效应。预先应用不同剂量的普罗布考 (10～ 5 0mmol L)后 ,该效应明显减弱。以上提示 ,溶血磷脂酰胆碱能直接损伤内皮细胞 ,抑制组织型纤溶酶原激活剂及内皮型一氧化氮合酶活性 ,增强纤溶酶原激活物抑制剂活性 ,普罗布考对内皮细胞具有保护作用     

氧化型低密度脂蛋白和维生素E对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮及合酶的影响

为研究氧化型低密度脂蛋白和维生素Ｅ对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮及合酶的影响,应用一氧化氮及一氧化氮合酶试剂盒测定培养的人脐静脉内皮细胞一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性。结果发现,氧化型低密度脂蛋白能显著抑制培养的内皮细胞一氧化氮的产生,从对照组的１２６±２４ｍｍｏｌ／ｇ下降为４１±８ｍｍｏｌ／ｇ;并能明显降低一氧化氮合酶的活性,具有浓度和时间效应。抗氧化剂维生素Ｅ显著增加氧化型低密度脂蛋白刺激内皮细胞产生一氧化氮含量以及一氧化氮合酶活性。提示氧化型低密度脂蛋白可以通过抑制内皮细胞一氧化氮合酶的活性而抑制其产生一氧化氮。维生素Ｅ通过增加一氧化氮合酶活性而增加内皮细胞产生一氧化氮。