大鼠永久性脑缺血及缺血再灌注后半暗带caspase—3 mRNA表达变化

目的 研究大鼠永久性脑缺血及缺血再灌注半暗带caspase-3转录水平表达规律。方法 用插线法建立大鼠局灶性脑缺血及再灌注模型,剥取缺血半暗带及中心区皮质组织,采用半定量逆转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）,测定永久性缺血和缺血1．5h再灌注各时间段caspase-3 mRNA水平的变化。结果 永久性缺血组皮质半暗带在缺血8h caspase-3 mRNA开始升高,24h达到峰值,1周恢复正常水平。缺血中心区早期caspase-3 mRNA无明显变化,缺血24h时低于正常。再灌注组半暗带缺血后8h后升高,16h达到高峰并持续至24h。再灌注组caspase-3 mRNA峰值高于永久缺血组,两者具有显著性差异。结论 局灶性脑缺血半暗带caspase-3 mRNA上调,再灌注可诱导caspase-3 mRNA表达。     

大鼠局灶脑缺血—再灌注动物模型半暗带的动态变化

目的 根据黑色神经元辨认不同缺血和再灌注期间的缺血中心区,阐明缺血早期半暗带的范围,并对其进行动态观察,以期阐明半暗带的形态特征。方法 将７２只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为假手术组、空白对照组、持续缺血２４ｈ（Ｏ２４Ｒ０）,缺血４ｈ再灌注２４ｈ组（Ｏ４Ｒ２４）,以下类推,即Ｏ２Ｒ０,Ｏ２Ｒ０．５、Ｏ２Ｒ２、Ｏ２Ｒ４、Ｏ２Ｒ８,Ｏ２Ｒ２４、Ｏ２４８、Ｏ２Ｒ９６组,每组６只动物。实验组经线栓法制成局灶     

大鼠局灶脑缺血-再灌注动物模型半暗带的动态变化

目的　根据黑色神经元辨认不同缺血和再灌注期间的缺血中心区 ,阐明缺血早期半暗带的范围 ,并对其进行动态观察 ,以期阐明半暗带的形态特征。方法　将 72只雄性 Wistar大鼠随机分为假手术组、空白对照组、持续缺血 2 4h(O2 4R0 )、缺血 4h再灌注 2 4h组 (O4R2 4) ,以下类推 ,即 O2 R0、O2 R0 .5、O2 R2、O2 R4、O2 R8、O2 R2 4、O2 R48、O2 R96组 ,每组 6只动物。实验组经线栓法制成局灶脑缺血 -再灌注模型。动物脑组织经灌注固定后进行苏木素 -伊红、甲苯胺蓝和铅铀染色 ,分别作光镜和电镜观察 ,并用图像分析仪测量缺血中心区和半暗带范围。结果　再灌注后短期内半暗带扩大 ,于再灌注 2 h达最大 (P<0 .0 5 ) ,再灌注 4～ 48h内半暗带范围相对稳定。缺血中心区和半暗带内细胞形态有多种类型 ,并随再灌注时间而变化。结论　再灌注最初数小时内由于脑水肿加重使半暗带扩大     

吸烟对大鼠局灶性脑缺血半暗带内细胞凋亡及Fos蛋白表达的影响

目的 探讨吸烟对脑缺血半暗带内细胞凋亡和Fos蛋白表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠48只,随机分为假手术组、吸烟组、缺血组、吸烟+缺血组,每组12只.吸烟组和吸烟+缺血组大鼠连续吸烟12周,吸烟量为20支/d.假手术组、缺血组大鼠不吸烟.12周后,缺血组和吸烟+缺血组大鼠建立大脑中动脉栓塞模型.红四氮唑(TTC)染色确定脑缺血半暗带位置,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学检测Fos蛋白表达水平.结果 TTC染色证实缺血半暗带位于大脑矢状裂至外侧裂上1/3的皮质组织.假手术组、吸烟组、缺血组和吸烟+缺血组的凋亡细胞数分别为2.54±0.37、20.65±3.26、17.07±2.92和44.92±4.67.与假手术组相比,吸烟组和缺血组的凋亡细胞数均明显增加(P<0.05).吸烟+缺血组凋亡细胞数增加更为明显,高于吸烟组和缺血组(P<0.05),吸烟和缺血对于增加脑细胞凋亡表现协同作用(P<0.05).假手术组仅见大脑皮质个别散在分布的Fos蛋白阳性细胞.与假手术组相比,吸烟组、缺血组和吸烟+缺血组的Fos蛋白阳性细胞数量显著增加,平均灰度值显著降低(P<0.05),吸烟+缺血组上述变化最为显著.结论 吸烟增加缺血时脑细胞Fos蛋白表达水平,增加凋亡细胞的数量,加重缺血半暗带脑组织的损伤.     

大鼠局灶性脑缺血半暗带细胞凋亡动态变化规律的研究

用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞 (MCAO)模型 ,然后用特异性细胞凋亡检测方法 (TUNEL法 ) ,对局灶缺血后不同时间点的脑组织进行观察。发现MCAO后各时间点局灶缺血范围内被标记的染色阳性的凋亡细胞主要位于局灶性缺血半暗带区 ,而且随着缺血时间的延长 ,凋亡细胞数逐渐增多 (缺血 1、3、6、1 2h分别为 3.6 0± 1 .0 2、1 5 .6 0± 2 .0 6、2 2 .4 0± 1 .85、33.0 0± 2 .83/mm2 ) ,2 4h达到高峰 ( 4 6 .6 0± 3.0 1 /mm2 ) ,4 8h以后明显减少 ( 1 3.6 0±2 .4 7/mm2 ) ,72h以后 ,凋亡表现逐渐消失 ( 5 .0 0± 1 .4 1 /mm2 ) ,各时间点的凋亡细胞数目有显著差异 (P <0 .0 1 ) ;同时两两比较表明除缺血后 1h与 72h,3h与 1 2h及 4 8h外 ,其余各点之间均有显著性差异 (P <0 .0 1 )。假手术组及对侧大脑半球各时间点基本上没有凋亡细胞出现。本研究从细胞凋亡角度重新认识急性缺血性脑血管病治疗的“时间窗” ,为缺血性卒中的治疗提供依据。     

脑缺血半暗带与凋亡和坏死

Astyup将脑缺血半暗带定义为围绕着梗死中心的缺血脑组织，其电活动停止但保持离子平衡和结构完整。脑缺血半暗带出现后一直处于动态变化之中，Memezawat等证实半暗带损伤的可逆性。及时恢复适量恒定的血流或采用有效的药物治疗，可逆转脑组织的损伤，否则转变为不可逆性损伤。因此，缺血半暗带的转归成了缺血性脑血管疾病的治疗焦点。笔者就局灶性脑缺血与神经细胞凋亡和坏死进行综述。     

急性脑梗死缺血半暗带的灌注加权成像/磁共振弥散加权成像观察

缺血半暗带(ischemic penumbra,IP)的存在是急性脑梗死治疗的关键.IP的确定一直是临床研究的焦点.目前多应用灌注加权成像(perfusionweighted imaging,PWI)＞磁共振弥散加权成像(diffusion-weighted imaging,DWI)不一致区作为半暗带存在和溶栓治疗的基础,但半暗带存在的时间一直存在争议[1].     

依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注血小板活化因子的影响

目的：探讨依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注后血小板活化因子（PAF）含量的影响。方法：50只健康Wistar雄性大鼠,分为5组,每组10只大鼠：Ⅰ组为假手术组;Ⅱa组为生理盐水组中缺血6 h再灌注6 h组;Ⅱb组为生理盐水组中缺血6 h组;Ⅲa组为依达拉奉组中缺血6 h再灌注6 h组;Ⅲb组为依达拉奉组中缺血6 h组。线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）及再通模型。应用ELISA检测对应血浆PAF值。结果：生理盐水组中再灌组及缺血组PAF值分别为（1 480±249）pg/ml和（1052±199）pg/ml,分别与对应假手术组（为506±55 pg/ml）比较有明显差异。依达拉奉组中再灌注及缺血组PAF值分别为（848±80）pg/ml和（743±105）pg/ml,与对应生理盐水组比较有显著差异。结论：依达拉奉可降低脑缺血再灌注后血浆中PAF含量。     

7.O T磁共振灌注和弥散加权成像的缺血半暗带实验研究

目的 探讨高场强磁共振(7.0T)灌注和弥散加权成像在大鼠急性脑梗死缺血半暗带研究中的价值.方法 利用线栓法建立大鼠急性脑梗死模型.60只SD大鼠随机分成6组,即假手术对照组,栓塞0.5、1.5、3、6和24 h组,每组10只.各组大鼠于相应时间点行头颅MRI扫描:PWI、DWI、T1WI、T2WI及MRA.后处理获得脑血容量(CBV)、脑血流量(CBF)、平均通过时间(MTT)形态图,并分别计算rCBV、rCBF、rMTT相对值.测量DWI异常信号区相对体积(rVD)及PWI异常灌注区相对体积(rVP).将结果与四氮唑红(TTC)染色和病理对比.结果 假手术组各序列扫描、TTC染色及病理均未见异常.各栓塞组栓塞侧大脑中动脉供血区rCBV、rCBF明显降低,rMTT明显延长,梗死核心严重,梗死边缘较轻.各栓塞组栓塞侧大脑中动脉供血区于DWI和PWI均可见异常信号区;DWI异常信号区体积随栓塞时间延长而增大,PWI异常信号区体积随时间延长变化不明显,栓塞6 h前PWI异常信号区大于DWI异常信号区(P<0.05),6 h以后PWI、DWI梗死体积大小差异无统计学意义(P>0.05).3 h以后DWI梗死体积与24 hTTC梗死体积差异无统计学意义(P>0.05).结论 高场强磁共振灌注和弥散加权成像动态显示急性脑梗塞缺血半暗带的时间、空间变化,为进一步研究提供基础.     

局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质中Caspase-3蛋白的表达

目的：观察局灶性脑缺血再灌注（FCIR）大鼠大脑皮质Caspase-3的表达。方法：雄性SD大鼠42只，分为假手术组和缺血再灌注（IR）组，IR组又分为缺血2h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h组，每组6只。IR组采用线栓法建立FCIR模型，假手术组仅插线1cm；于脑视交叉平面向后7～11mm处取脑组织。HE染色观察各个时间点细胞形态学变化，免疫组织化学SP法观察不同时间Caspase-3的表达，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：脑缺血2h再灌注6hCaspase-3表达升高，再灌注24h达到高峰，再灌注72h开始下降。凋亡细胞数的变化与Caspase-3表达变化一致。结论：Caspase-3参与了脑缺血再灌注神经元的死亡过程，该作用可能与细胞凋亡有关。     

Caspase-3激活的DNA酶与局灶性脑缺血神经元再灌注损伤的关系研究

日的 在半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)抑制剂的干预下,探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后半胱氨酸蛋白酶-3激活的DNA酶(caspase-activated Dnase,CAD)表达变化与神经元损伤的关系.方法 线拴法建立大鼠大脑中动脉闭塞及再通模型,侧脑室给予抑制剂,应用HE、免疫组化、原位末端标记(TUNEL)染色及电镜观察大鼠大脑中动脉栓塞1 h后再灌注6 h、12 h、24 h、48 h、72 h时caspase-3和CAD蛋白的表达及神经元凋亡程度的变化.结论 模型组蛋白与凋亡细胞的时空动态变化趋势基本一致;干预组各指标趋于平坦,6 h后波峰均有下降.结论caspase-3后继CAD的激活参与了鼠脑再灌注神经元的凋亡,caspase-3抑制剂能一定程度降低缺血再灌注后神经元凋亡,起到神经保护作用.     

缺血后适应对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡的影响

目的：探讨缺血后适应对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响。方法：大脑中动脉线拴法复制大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤动物模型。将30只雄性SD大鼠随机分为假手术（sham）组、脑缺血再灌注（I／R）组和缺血后适应（IP）组,每组10只。利用原位缺口末端标记法研究神经细胞凋亡的变化。应用Westernblotting检测大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后P38和Caspase一3蛋白表达水平的变化。结果：大鼠脑缺血再灌注后凋亡细胞数量,P38和Caspase-3蛋白表达水平均显著升高,而缺血后适应组凋亡细胞数量,P38和Caspase-3蛋白表达水平均显著低于缺血再灌注组（P〈0．01）。结论：缺血后适应可减少大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的发生,此作用可能与抑制P38和Caspase-3蛋白表达有关。     

Involvement of Apoptosis in 3-nitropropionic Acid-induced Ischemicl Tolerance to Transient Focal Cerebral Ischemia in Rats

Preconditioningofbraintissueswithsub lethalstressesorstimulicanresultinresistancetosubse quentlethalischemiceventsinaresponsecalledis chemictolerance .Recently ,severalstudieshaveshownthatasinglesystemicdoseof 2 0mg/kg 3 NPAcausednohistopathologicalabnorm…     

3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血Caspase-3表达和活性的影响

目的探讨小剂量线粒体毒素3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血半暗带半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达和活性的影响。方法大鼠腹腔注射3-NPA20mg/kg或生理盐水3d后制作局灶性脑缺血再灌注模型,采用免疫印迹技术和荧光测定法观察3-NPA预处理对缺血2h再灌注24hCaspase-3的表达和活性的影响。结果缺血2h再灌注24h3-NPA预处理组Caspase-3表达减弱(P<0.05),活性降低(P<0.05),与对照组比较差异有显著性。结论3-NPA预处理诱导脑缺血耐受与降低Caspase-3活性,进而抑制神经细胞凋亡有关。     

p38 MAPK在局灶性脑缺血大鼠缺血中心区和半影区的表达

目的研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间皮质半暗带和中心区p38丝裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）磷酸化水平和蛋白水平的表达。方法用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,分别于术后1、3、6、12、24h剥取缺血半暗带及中心区皮质组织,应用Western blot并结合Gel Doc凝胶成像系统,定量检测p38MAPK磷酸化水平和蛋白表达量。结果与假手术组相比,模型组大鼠皮层缺血核心区和半影区p38MAPK磷酸化水平显著升高（P〈0．05,n=6）,缺血中心区p38MAPK在缺血6h磷酸化程度达高峰,半暗带在3h时达高峰;各组间p38MAPK蛋白表达量水平无明显变化。结论p38MAPK磷酸化激活参与了大鼠脑缺血损伤过程的信号转导,在缺血中心区和半影区的磷酸化增强可能与局部脑缺血损伤的神经元坏死和凋亡过程有密切关系。     

氟西汀预处理对SD大鼠脑缺血再灌注损伤的脑保护作用

[摘要]　目的　探讨预防性应用氟西汀对SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑保护作用。　方法　48只健康雄性SD大鼠随机分为脑缺血再灌注组（对照组,n=24）和氟西汀组（n=24）,对照组与氟西汀组均制备大鼠右侧大脑中动脉闭塞的脑缺血再灌注模型,分别于术前14 d胃内灌注生理盐水和氟西汀。各组按缺血2 h再灌注2 h、6 h、24 h再分为3个亚组（n＝8）。比较相同再灌注时间点两组的神经功能缺损评分、脑梗死体积及缺血侧海马区半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达情况。　结果　相同再灌注时间点,氟西汀组较对照组神经功能缺损评分值降低,其中再灌注2 h及6 h,两组间比较差异均无显著性意义（P>0.05）,再灌注24 h,两组间比较差异具有显著性意义（P<0.05）;氟西汀组较对照组脑梗死体积减小,其中再灌注2 h及6 h,两组间比较差异均无显著性意义（P>0.05）,再灌注24 h,两组间比较差异具有显著性意义（P<0.01）;氟西汀组缺血侧海马区Caspase-3阳性表达细胞数在相同再灌注时间较对照组均减少,差异具有显著性意义（P<0.05）。　结论　氟西汀具有神经保护作用,预防性应用氟西汀在脑缺血再灌注损伤急性期即起显著作用,其机制可能与其减少Caspase-3的表达有关。     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡及神经功能恢复的影响

目的 观察针刺干预对于大鼠局灶性脑缺血再灌注脑细胞内游离钙、Caspase-3 mRNA及大鼠双前肢抓力的影响.方法 145只成年雄性SD大鼠随机分成对照组(sham)、缺血再灌注组(1/R)和针刺组(I/R+EA).选用Longa改良线拴法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO).实验大鼠处死后取材制成单细胞悬液,经Fluo-3/AM标记,用激光扫描共聚焦显微镜检测脑细胞[Ca2+]i浓度.应用RT-PCR技术检测大鼠大脑皮层和纹状体内Caspase-3 mRNA表达的变化.大鼠双前肢抓力试验检测大鼠神经功能重建情况.结果 ①针刺干预6h后[Ca2+]i为10.96±1.18,针刺12h后为20.9±4.73,与缺血再灌注组[16.87±3.56,34.10±1.06]比较显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01).②I/R组大脑皮层及纹状体Caspase-3 mRNA表达增强;电针干预后Caspase-3 mRNA表达与I/R组比较明显下调.③针刺7d、14d大鼠抓力明显高于脑缺血再灌注7d、14d,针刺30d、60d、90d大鼠抓力与脑缺血再灌注30d、60d、90d组大鼠抓力无明显差异.采用单因素方差分析,I/R+EA与sham及I/R组比较(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 缺血急性期针刺干预显著降低大鼠局灶性脑缺血再灌注脑细胞内游离钙的浓度及Caspase-3 mRNA的表达;并有效促进大鼠神经功能的恢复.     

胍丁胺对实验性大鼠局灶脑缺血的保护作用

目的研究胍丁胺对大鼠大脑中动脉闭塞所致局部脑缺血的防治作用。方法应用生理盐水作为对照组,以神经行为学评分和脑梗死体积测定作为指标。结果胍丁胺20,40mg·kg-1静脉注射可显著缩小梗死体积,改善行为障碍。结论胍丁胺对局灶性脑缺血具有保护作用,可作为新的治疗脑缺血的药物。     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡及神经功能恢复的影响

Objective To investigate the influence of acpuncture on free calcium in rat brain cells after focal cerebral ischemia reperfusion.Methods 145 adult male SD rats were randomly divided into control group,simple ischemia reperfusion group and acupuncture with ischemia reperfusion group.The middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) rat model was established by the modified Longa occlusion method. ①The part of free calcium in rat brain cells,focal cevebral ischemia model of rats were made by thread locking up the blood vessel for 15 min.30 min later after reperfusion, the Baihui and Shuigou Point in Du meridian were acupunctured electrically 30 min.After 3h, 6h and 12h, the rat was killed and its brain cells were made into single cell suspension,marked by Fluo-3/AM.The fluorescence optical density was recorded by laser confocal microscopy.②The part of nerve functional reconstruction, focal cevebral ischemia model of rats were made by thread locking up the blood vessel for 12 hours.30 min later after reperfusion, the Baihui and Shuigou Point in Du meridian were acupunctured electrically 30 min.After 7 d, 14 d,30 d,60 d and 90 d, the rat was forced to detect it's strength of the dog.Results ①Free calcium in rats of acupuncture therapy group(6h:10.96±1.18;2h:20.9±4.37) was significantly less than that in control group in 6 h and 12 h after reperfusion (6 h: 16.87 ± 3.56,12 h: 34.10 ±1.06)(P<0.05).②The dog in rats of acupuncture therapy group was significantly more than that in control group in 7 d, 14 d after reperfusion (P＜ 0.05 ).No difference of the dog was detected in 30 d ,60 d and 90 d after reperfusion between the two groups.Conclusion Acupunture could decreases the concentration of free calcium and the expression of Caspase-3 mRNA in rat brain cells after focal cerebral ischemia reperfusion, and it can facilitate the recovery of nerve function.