尼美舒利对胆管癌QBC939细胞增殖与凋亡的调节

目的研究选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）抑制剂尼美舒利对人胆管癌细胞系QBC939增殖和凋亡的影响.方法应用MTT比色法观察尼美舒利对人胆管癌细胞系QBC939增殖的影响,细胞凋亡采用透射电镜及流式细胞仪检测,应用免疫组化、RT-PCR检测尼美舒利对凋亡相关基因表达的影响.结果尼美舒利呈时间、剂量依赖性抑制胆管癌细胞增殖,高浓度（200 μmol/L）尼美舒利不仅抑制胆管癌细胞增殖,而且诱导其凋亡,流式细胞仪研究显示,随药物浓度增加,细胞凋亡率显著增加,透射电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变：细胞核染色质致密浓缩,凋亡小体形成等,免疫组化和RT-PCR测定显示尼美舒利显著下调bcl-2、survivin表达,而bax表达上调.结论尼美舒利显著抑制QBC939细胞增殖,诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性,bcl-2、bax、survivin等凋亡相关基因可能参与了尼美舒利诱导的QBC939细胞凋亡过程.     

RNA干扰降低环氧化酶2基因表达对人胆管癌QBC939细胞的体外作用

目的研究小干扰RNA（siRNA）降低环氧化酶2（COX-2）基因对胆管癌QBC939细胞凋亡及凋亡蛋白caspase-3蛋白表达的影响。方法采用RNA干扰的方法,将胆管癌细胞株QBC939细胞分为4组：COX-2 siRNA干预组、阴性对照siRNA组、空脂质体、空白对照组。将COX-2 siRNA转染入QBC939细胞;流式细胞仪检测siRNA降低COX-2基因表达对凋亡的作用,WesternBlot法检测siRNA降低COX-2基因表达对caspase-3表达变化的影响。结果 RNA干扰后QBC939细胞COX-2表达下降至空白对照组的42%,流式细胞仪检测结果显示COX-2 siRNA干预组细胞的凋亡率以及凋亡蛋白caspase-3的表达明显高于其他3个对照组。结论 RNA干扰可抑制细胞COX-2蛋白的表达,促使胆管癌QBC939细胞的凋亡,caspase-3途径可能是其调控通路之     

GABA对胆管癌细胞株QBC939增殖及凋亡的影响

目的观察γ-氨基丁酸(GABA)对胆管癌细胞QBC939增殖及凋亡的影响。方法采用MTT比色法观察GABA对人系胆管癌细胞QBC939增殖的作用,流式细胞术检测GABA对胆管癌细胞QBC939凋亡及其细胞周期的影响,放射免疫分析法检测cAMP含量。结果GABA抑制胆管癌细胞的增殖,呈剂量依赖性,流式细胞仪检测结果显示,随药物浓度增加,细胞凋亡率显著增加(4.8%增至28.03%,P<0.05),同时促进胆管癌细胞内cAMP含量的增加。结论GABA抑制胆管癌细胞QBC939增殖,诱导细胞凋亡,可能机制是通过受体后信息介导的。     

阻断Hedgehog信号通路可抑制胆管癌细胞QBC939的生长

目的 研究Hedgehog信号通路特异性阻断剂环靶明(cyclopamine)对人胆管癌细胞系QBC939增殖与凋亡的影响.方法 用MTT比色法检测环靶明对QBC939细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率.RT-PCR法分别检测环靶明处理前后PTCH1、GLI1、EGFR在QBC939中的mRNA表达及变化.Western blot检测环靶明处理前后PTCH1、GLI1、EGFR在QBC939中的蛋白表达及变化.结果 环靶明抑制QBC939细胞的增殖,其作用呈剂量和时间依赖性.经5、10、20 μmol/L的环靶明作用48 h后,QBC939细胞的凋亡率逐渐升高,明显高于对照组的凋亡率(P＜0.01).PTCH1、GLI1、EGFR的mRNA和蛋白均在QBC939中表达,环靶明下调QBC939的PTCH1、GLI1、EGFR表达.结论 阻断Hedgehog信号通路能抑制胆管癌细胞QBC939的增殖,促进其凋亡.     

光动力疗法对人胆管癌细胞QBC939凋亡的影响

目的 研究血卟啉衍生物(hematoporphyrin derivative,HPD)介导的光动力作用(photodynamic therapy,PDT)对人胆管癌细胞QBC939凋亡的影响及其作用机制.方法 体外培养人胆管癌QBC939细胞株,用不同浓度HPD处理,并用半导体激光治疗仪不同强度光照后,应用CCK8法检测PDT对QBC939细胞生长的相对抑制率.采用流式细胞术检测PDT作用前后QBC939细胞凋亡情况.应用RT-PCR检测PDT作用前后QBC939细胞中血管内皮细胞生长因子-C (VEGF-C)、环氧合酶-2 (COX-2)基因表达情况.用SP免疫细胞化学法测定PDT作用前后QBC939细胞质中VEGF-C、COX-2两种蛋白表达情况.用ELISA法测定PDT作用前后QBC939细胞上清中VEGF-C、COX-2两种蛋白分泌情况.结果 HPD-PDT在体外能够抑制QBC939细胞生长,HPD 10 mg/L经5 J/cm2光照强度时,实验组与空白组A值差异有统计学意义(P＜0.05),细胞生长抑制率达到70％.继续增加药物浓度或光照剂量,差异无统计学意义,细胞存活率降低不明显.流式细胞术显示HPD-PDT明显促进QBC939细胞早期凋亡.RT-PCR显示HPD-PDT能明显抑制QBC939细胞中VEGF-C、COX-2基因表达.SP免疫细胞化学法显示HPD-PDT能抑制QBC939细胞质中VEGF-C、COX-2两种蛋白表达.ELISA法显示HPD-PDT能抑制QBC939细胞VEGF-C、COX-2两种蛋白细胞外分泌.结论 HPD-PDT能抑制胆管癌QBC939细胞生长,促进胆管癌细胞早期凋亡.HPD-PDT对胆管癌QBC939细胞生长的抑制作用可能是通过促进早期凋亡实现的,而VEGF-C、COX-2从基因到蛋白水平低表达可能是促进胆管癌QBC939细胞早期凋亡的途径.     

NVP-BEZ235体外对胆管癌细胞株QBC939增殖及凋亡的影响

目的研究NVP-BEZ235体外对胆管癌细胞株QBC939增殖及凋亡的影响。方法在体外培养人胆管癌细胞株QBC939,通过流式细胞仪检测NVP-BEZ235对QBC939凋亡的影响;MTT法检测NVP-BEZ235作用24小时、48小时和72小时对QBC939的增殖影响;Western blot分析NVP-BEZ235作用48小时对QBC939凋亡的影响(PARP),并检测分析相关信号通路蛋白Bcl-2、Akt、p-Akt、c-FLIPL和Mcl-1表达水平的变化。结果 NVP-BEZ235能抑制QBC939的增殖,抑制作用具有时间依赖性和浓度依赖性,同时能诱使细胞发生凋亡。NVP-BEZ235导致细胞内抗凋亡蛋白Mcl-1、c-FLIPL和Bcl-2表达下调,并降低p-Akt表达。结论 NVP-BEZ235抑制Akt的磷酸化,NVP-BEZ235通过PI3K/Akt通路下调Bcl-2、Mcl-1和c-FLIPL的表达,从而诱使QBC939出现凋亡,抑制QBC939增殖。     

埃罗替尼和塞来昔布协同抑制胆管癌细胞生长

目的:观察表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂埃罗替尼(erlotinib)与环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对胆管癌细胞生长的协同抑制作用。方法:采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测胆管癌细胞株QBC939增殖,流式细胞术检测用药前、后细胞凋亡和细胞周期的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹方法观察用药前、后细胞中COX-2、EGFR下游信号及凋亡、细胞周期相关基因蛋白表达的变化。结果:QBC939细胞表达COX-2 mRNA和EGFR mRNA及相应蛋白。埃罗替尼、塞来昔布抑制QBC939细胞增殖,促进细胞凋亡,诱导细胞周期阻滞于G0/G1期。同时,塞来昔布增强了埃罗替尼抑制细胞生长、诱导细胞凋亡的作用。联合用药显著降低p-MAPK、p-Akt及PGE2表达。结论:塞来昔布和埃罗替尼均可抑制胆管癌细胞的生长,而联合用药具有协同作用,能同时阻断EGFR和COX-2信号通路。在胆管癌治疗中具有一定应用前景。     

尼美舒利对结肠腺癌细胞MMP-2表达的影响

目的 探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂——尼美舒利对体外培养的结肠癌细胞的生长及对基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达的影响。方法实验分为尼美舒利组、二甲亚砜（DMSO）对照组及不接种细胞的空白对照组，采用MTT法检测不同浓度的尼美舒利对人结肠癌细胞株HT-29（COX-2高表达）及HCT-116（COX-2低表达）增殖的抑制效应；采用改良明胶酶谱分析法检测MMP-2的表达。结果尼美舒利对人结肠癌细胞株HT-29和HCT-116生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性，且对HT-29细胞的抑制作用强于HCT-116细胞；尼美舒利抑制了HT-29细胞的MMP-2表达，而对HCT-116细胞MMP-2的表达的抑制作用不明显。结论尼美舒利可明显抑制COX-2高表达的结肠癌细胞株HT-29的增殖和生长，提示尼美舒利可能通过抑制COX-2活性而降低细胞MMP-2的表达。     

尼美舒利对体外培养人胆管癌细胞QBC939增殖的抑制作用

近年来研究表明,环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）抑制剂具有抑制结肠癌、胃癌、肝癌等癌细胞增殖的作用.我们采用选择性COX-2抑制剂尼美舒利作用于胆管癌QBC939细胞,观察尼美舒利对胆管癌细胞的影响.……     

新维甲类化合物4HPR对人胆管癌细胞周期和凋亡的影响及可能机制

目的　探讨N hydroxyphenyl retinamide(4HPR)对人胆管癌细胞QBC939细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法　采用四甲基氮唑蓝实验 (MTT)、免疫组织化学染色、流式细胞术等技术 ,检测经 5× 10 -6mol/L 4HPR处理后 ,QBC939细胞生长增殖、细胞周期和凋亡的变化 ,以及对P2 1waf1、P2 7kip1、P5 3蛋白表达的影响。结果　 4HPR显著抑制人胆管癌细胞QBC939细胞的生长增殖 ,并呈时间、剂量依赖性。用 5× 10 -6mol/L 4HPR处理细胞后 ,细胞周期停滞于G1期。流式细胞术检测发现 ,4HPR处理 12h细胞凋亡率达 9 7% ,至 4 8h达 5 7 2 %。而P2 1waf1、P2 7kip1蛋白表达呈上升趋势 ,P5 3蛋白表达则无明显变化。结论　 4HPR具有抗增殖和诱导QBC939细胞发生凋亡的作用 ,并可导致细胞周期停滞于G1期。此种机制与其上调P2 1waf1、P2 7kip1蛋白表达有关 ,而与P5 3蛋白表达无关。     

塞来昔布(celecoxib)通过前列腺素E2途径影响胆管癌细胞株生长和凋亡

目的：研究塞来昔布（celecoxib)对环氧合酶－2（COX－2）高表达人胆管癌细胞系QBC939和COX－2低表达人胆管癌细胞系SK－Cha-1生长和凋亡的影响及其作用机制。方法：采用四唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖，光镜和电镜形态学观察，末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位酶标记法（TUNEL）计数细胞凋亡，流式细胞仪测定细胞周期，酶联免疫吸附测定（ELISA）检测前列腺素E2（PGE2）含量。结果：塞来昔布抑制QBC939生长和诱导调亡，这种抗增殖作用能被PGE2拮抗；塞来昔布对结构性低表达COX－2胆管癌细胞SK－Cha-1无显著性作用。结论：塞来昔布通过PGE2途径抑制人胆管癌细胞生长和诱导凋亡。针对COX－2结构性高表达肿瘤塞来昔布可能是一种有效的化学治疗和化学预防药物。     

Oddi括约肌成型术后患者胆汁促增殖活性的探讨

目的　观察经十二指肠Oddi括约肌成型术 (TS)后患者胆汁 (TSB)对人胆管癌细胞QBC 93 9生长的影响 ,探讨TS与胆管癌发生与发展的关系。方法　应用四唑蓝 (MTT)比色法检测 12份TSB和10份正常胆汁 (NB)对QBC93 9细胞增殖的影响 ,应用流式细胞仪测定细胞周期和凋亡。结果　TSB与NB比较 ,前者明显促进QBC 93 9细胞增殖 (P <0 .0 5 ) ;TSB处理 2 4h的QBC93 9细胞增殖指数显著上升 (P <0 .0 5 )。结论　TSB具有潜在的促增殖活性 ,TS与胆管癌的发生与发展关系密切。     

RNA干扰诱导型一氧化氮合酶基因表达对人胆管癌细胞生长的影响

目的:探讨RNA干扰诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的表达对人胆管癌细胞生长的影响。方法:针对iNOS设计并合成3种iNOS-siRNA序列(siRNA1、siRNA2、siRNA3)及阴性对照siRNA序列后,分别转染人胆管癌细胞QBC939细胞,用荧光显微镜下观察转染效率,通过iNOS mRNA与蛋白的变化分析干扰效果,选择干扰效果最为明显的iNOS-siRNA序列,观察其干扰后QBC939细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的变化。实验以无处理的QBC939细胞为空白对照。结果:合成的3种iNOS-siRNA序列均可有效转染人胆管癌QBC939细胞,且转染后均能明显降低QBC939细胞中iNOS mRNA与蛋白的表达(均P0.05),其中siRNA2对iNOS的抑制作用最为明显,阴性对照siRNA序列对QBC939细胞中iNOS mRNA与蛋白的表达无明显影响(均P0.05)。转染siRNA2后,QBC939细胞增值明显降低、出现明显的G0/G1期阻滞、凋亡率明显增加(均P0.05);转染阴性对照siRNA序列的QBC939细胞无上述改变(均P0.05)。结论:RNA干扰能有效降低iNOS基因在胆管癌细胞中的表达,从而抑制胆管癌细胞的增殖,并促进其凋亡。     

幽门螺杆菌感染的成石胆汁促进人胆管癌细胞增殖的研究

目的探讨幽门螺杆菌感染的成石胆汁对人胆管癌细胞QBC939生长的影响，阐明幽门螺杆菌感染与胆管癌发生、发展的内在关系。方法应用噻唑蓝比色法检测20份幽门螺杆菌阳性胆管结石患者胆汁、20份幽门螺杆菌阴性胆管结石患者胆汁以及20份正常胆汁对QBC939细胞增殖的影响，运用流式细胞仪测定细胞周期与凋亡。结果与幽门螺杆菌阴性胆管结石患者胆汁和正常胆汁比较，幽门螺杆菌感染的成石胆汁明显促进QBC939细胞增殖（P〈0.05），用幽门螺杆菌感染的成石胆汁处理48h的QBC939细胞增殖指数显著上升（P〈0.01），S期细胞比例明显增高（P〈0.05），G0／G1期细胞比例明显降低（P〈0．05）。结论幽门螺杆菌感染的成石胆汁具有强大的潜在促增殖活性，胆道幽门螺杆菌感染与胆管癌的发生、发展关系密切。     

靶向survivin的shRNA对人胆管癌细胞体外增殖及凋亡的影响

目的：探讨靶向survivin的shRNA对人胆管癌细胞体外增殖及凋亡的影响。方法：合成具有互补序列的能够编码短发卡RNA（shRNA）的双链寡核苷酸并构建pSilencer2．1真核表达质粒,经稳定转染QBC939细胞后对转基因后胆管癌细胞的生物学行为进行观察。结果：neo基因稳定表达于转染阳性质粒及阴性对照质粒的QBC939细胞中。通过RT—PCR及westernblot检测证实shRNA在mRNA及蛋白质水平抑制survivin表达率分别达68固％和613％。细胞计数及平板克隆形成实验显示转染细胞生长速度及细胞克隆明显减缓（P〈O．01）。流式细胞术测定细胞周期显示转染细胞G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少。DNAladder、透射电镜观察及流式细胞定量研究显示转染细胞凋亡明显增多。结论：靶向survivin的shRNA能有效抑制目的基因的表达,通过增加细胞凋亡在体外抑制人胆管癌细胞的生长,为胆管癌的基因治疗提供一定的实验基础。     

γ-氨基丁酸抑制胆管癌细胞株QBC939增殖及其机制的研究

目的 观察γ-氨基丁酸(GABA)对胆管癌细胞QBC939增殖、凋亡和端粒酶活性的影响.方法 采用MTT比色法观察GABA对人系胆管癌细胞QBC939增殖的作用,流式细胞术检测GABA对胆管癌细胞QBC939凋亡的影响,PCR-ELISA法观察其对QBC939细胞端粒酶活性的影响,放射免疫分析法检测cAMP含量.结果 GABA抑制胆管癌细胞的增殖(抑制率由2.6%增至26.8%,P<0.05),促进细胞凋亡(凋亡率由4.8%增至28.03%,P<0.05),并且抑制癌细胞中端粒酶的活性(0.82±0.048 vs 0.56±0.054,P<0.05),同时促进胆管癌细胞内cAMP含量的增加[(0.59±0.049)nmol/L vs (0.82±0.033)nmol/L,P<0.05].结论 GABA可能通过受体后信息介导途径,诱导细胞凋亡,并抑制癌细胞端粒酶活性,从而抑制胆管癌细胞的增殖.     

shRNA 介导的NGF-β下调对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨shRNA介导的神经生长因子β(NGF-β)下调对人胆管癌细胞系QBC939体外增殖与凋亡的影响.方法:构建稳定转染NGF-β shRNA的QBC939细胞系,将细胞分为干扰组(转染NGF-β shRNA组)和对照组(转染空质粒组).以Western blot方法检测细胞转染效果;细胞增殖实验(CCK-8实验)检测细胞增殖能力,单克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡.结果:干扰组细胞较之对照组的细胞增殖、克隆形成能力明显降低,S期细胞明显减少(P＜0.05),凋亡率明显增加(P＜0.05).结论:抑制NGF-β能降低QBC939细胞系的增殖和克隆形成能力,该作用与其阻滞细胞进入S期,促进细胞凋亡有关.     

长春花对胆管癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察长春花草提取物对体外培养的人胆管癌QBC939细胞的抑制作用.方法 以长春花全草为原料进行分离提取,获得总生物碱层和水层两种提取物,分别采用噻唑蓝(MTT)法、普通倒置光学显微镜观察法和流式细胞术研究两种提取物对QBC939细胞增殖、细胞形态以及细胞周期的影响.结果 长春花两种提取物均能够显著抑制胆管癌细胞的增殖,尤以总碱层的抑制作用最强,半抑制常数IC50分别为0.16mg/L和49.02mg/L;两种提取物均能使细胞的形态发生明显改变.随着作用浓度的增大,长春花碱层作用的细胞G0/G1期从对照组的53.10%减少到5.87%,G2/M期细胞从对照组的26.4%增加到71.8%,Sub-G1期变化不明显;长春花水层提取物作用的细胞G0/G1期也明显减少,G2/M 期细胞明显增多,而Sub-G1期则变化明显,出现明显的凋亡峰.结论 长春花提取物具有抑制胆管癌细胞增殖、改变细胞形态及细胞周期分布的作用.     

p21waf1基因真核表达载体的构建和对人胆管癌细胞生长的影响

目的　探讨p2 1waf1基因过表达在人胆管癌细胞增殖和凋亡中的作用。方法　包含 2 .1kb的 p2 1waf1cDNA片段经阳离子脂质体DOTAP包裹转染人胆管癌细胞QBC939中 ,并得到稳定表达 ,通过聚合酶链反应 (PCR)、逆转录 PCR(RT PCR)、流式细胞仪及免疫组织化学等方法检测p2 1waf1基因表达、细胞生长和细胞凋亡等情况。结果　p2 1waf1基因转染后 ,细胞生长明显受抑制 ,细胞周期停滞于G1期 ,表现为与对照组相比 ,细胞周期G1期比例明显增加 ,S和G2 /M期比例明显减少(G1期 :5 7.32 %→ 73 .6 9% ;S期 :2 1.81%→ 15 .85 % ;G2 /M期 :19.35 %→ 11.76 % ) ,细胞凋亡率增加(3 .47%→ 15 .81% ) ,裸鼠致瘤性降低。结论　p2 1waf1基因能够抑制人胆管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。