保加利亚乳杆菌产β-半乳糖苷酶特性的研究

目的：研究保加利亚乳杆菌产β-半乳糖苷酶的特性，优化产酶条件。方法：以酸奶中分离的保加利亚乳杆菌wch9901和保加利亚乳杆菌标准菌株1．1480为研究对象，观察培养时间、培养基碳源、摇床转速、气体环境对细菌产酶的影响。结果：wch9901于37℃培养18h产酶达高峰，酶活性达0．246 NLU／ml，比酶活达3．465 NLU／g；1．1480于30℃培养36h产酶达高峰，酶活性达0．221 NLU／ml，比酶活达1．637 NLU／g。停止培养前1h加入2％乳糖利于wch9901产酶。两株保加利亚乳杆菌均于静止培养产酶较多。wch9901于厌氧环境培养产酶较多；1．1480于有氧环境培养产酶较多。结论：wch9901的最适产酶条件为37℃厌氧静止培养18h，培养基含乳糖；1．1480的最适产酶条件为30℃有氧静止培养36h。wch9901与1．1480相比具有产酶量多，产酶迅速的特点。     

β-半乳糖苷酶基因及其在基因学中的应用

β -半乳糖苷酶基因 (ｌａｃＺ基因 )编码 β -半乳糖苷酶 ,由4个亚基组成 ,可催化乳糖分解为一分子的葡萄糖和一分子的半乳糖 ,还可催化Ｘ -ｇａｌ (5 -溴 -4 -氯 -3 -吲哚 -β -Ｄ -半乳糖苷 )水解 ,产物呈蓝色 ,便于检测和观察。基于这个特点 ,ｌａｃＺ基因常作为载体基因 ,被广泛地应用于基因学研究当中。ｌａｃＺ基因来源广泛 ,可来源于大肠杆菌、乳酸菌、链球菌等多种微生物。目前 ,已对多种来源的酶基因进行了深入的分析 ,β -半乳糖苷酶基因库已基本建立并日趋完善 ,但在基因学中应用最广的仍然是大肠杆菌ｌａｃＺ基因 ,它是大肠杆…     

适于德氏乳杆菌保加利亚亚种质粒抽提的混合培养基

目的探讨适合提取德氏乳杆菌保加利亚亚种质粒的细菌培养基。方法配制含不同比例MRS的营养肉汤混合培养基,进行德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养,通过生长曲线测定、细菌形态观察,菌体内天然质粒抽提质量等来确定适于该菌质粒抽提的最佳混合培养基。结果单纯营养肉汤培养基不适合德氏乳杆菌保加利亚亚种的增殖,在含20%、40%、60%及80%MRS的营养肉汤混合培养基中该菌的生长曲线与在MRS中的基本一致,但细菌数略低;形态学检测表明含MRS的营养肉汤培养基培养对德氏乳杆菌保加利亚亚种的形态无影响,质粒抽提结果表明,本研究所配制的几种含不同比例MRS的营养肉汤混合培养基中,含20%MRS的营养肉汤混合培养基最适合该菌质粒的抽提,提取的质粒浓度高,质量好。结论本实验制备的混合培养基中,含20%MRS的营养肉汤混合培养基能保证德氏乳杆菌保加利亚亚种的正常增殖,而且可能由于产生较少的胞外多糖,使溶菌酶更易水解该菌细胞壁肽聚糖,最适于该菌质粒的抽提。     

保加利亚乳杆菌和双歧杆菌对衰老小鼠和HepG2细胞端粒长度的影响及机制研究

目的 通过观察保加利亚乳杆菌和双歧杆菌代谢产物对衰老小鼠和HepG2细胞端粒长度及氧化应激水平的影响,探讨发酵微生物对端粒长度的影响及机制。方法 通过连续6周每天皮下注射80mg/kg D-gal建立小鼠衰老模型,利用40μmol/L t-BHP干预12h构建细胞衰老模型;采用qPCR检测相对端粒长度;Western Blot 检测Tert、c-Myc、P53蛋白表达水平;试剂盒检测MAO、SOD、CAT和GSH-Px活性及ROS、LDH和MDA水平。结果 体内实验中,与模型组比,保加利亚乳杆菌和双歧杆菌组小鼠肝、脑、心脏组织及外周血白细胞相对端粒长度更长（P＜0.05）,肝、脑、心脏组织中MDA和MAO生成显著降低（P＜0.05）,SOD、CAT和GSH-Px活性显著升高（P＜0.05）。体外实验中,与模型组比,保加利亚乳杆菌和双歧杆菌组细胞相对端粒长度更长（P＜0.05）,Tert表达量显著升高（P＜0.05）,P53表达显著降低（P＜0.05）,c-Myc表达量无显著变化（P＞0.05）,LDH和MDA水平显著降低（P＜0.05）,SOD、CAT和GSH-Px活性显著增高（P＜0.05）。结论 保加利亚乳杆菌和双歧杆菌代谢产物可通过改善机体氧化应激和调节P53及Tert蛋白表达水平,改善衰老模型小鼠和HepG2端粒磨损,进而延缓衰老。     

一株从酸奶中分离的德氏乳杆菌保加利亚亚种的鉴定和系统发育分析

目的对一株分离自酸奶经表型特征鉴定为德氏乳杆菌保加利亚亚种的菌株(wch9901)进行16S rDNA鉴定和系统发育分析。方法提取wch9901基因组DNA作为模板,以16S rDNA两端的保守序列作为PCR引物,扩增菌株的16S rDNA序列。在T4连接酶的作用下,将扩增得到的16S rDNA序列插入克隆载体pGEM-T,构建重组质粒pGEM-wch990116S rDNA。重组质粒酶切鉴定合格后,交由测序公司对插入的16S rDNA序列进行测序。测序结果于GenBank中Blastn,并用软件Mega3.1构建系统发育树。结果wch9901 16S rDNA序列与Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus中所有菌株的16S rDNA序列同源性均达96%以上;在系统发育树上wch9901单独形成一个分枝,位于Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LGM2遗传分枝和Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus DL2所在的独立小遗传簇及Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus JSQ所在的独立小遗传簇构成的分枝之间,并与Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LGM2遗传分枝距离最近。结论wch9901属于Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus;wch9901与Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LGM2具有最近的亲缘关系。     

保加利亚乳杆菌胞外多糖对人癌细胞抑制作用的研究

乳酸菌胞外多糖（exopolysaccharides，EPS）是乳酸菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的黏液或荚膜多糖。已有的一些报道表明：乳酸菌EPS通过抑制肿瘤、抗溃疡、免疫调节和降低胆固醇活性进而对人体健康产生促进作用。Oda等早在20世纪80年代就确定了由瑞士乳杆菌约古特亚种（Lb．helveticus ssp．jugurti）产生的EPS具有抑制肿瘤活性。为了明确抑制肿瘤作用机制，部分学研究了EPS或是产EPS菌体对免疫系统的影响，大部分研究均可证明乳酸菌EPS可以通过调节机体免疫力来达到抑制肿瘤的作用，但是，由于生物体内各系统相互作用的复杂性，活性多糖的体内抑制肿瘤机制也较复杂，无法说明它是否直接作用于肿瘤细胞，因此，我们采用体外试验的方法，研究保加利亚乳杆菌对人癌细胞的生长的抑制作用和凋亡作用。     

环境镉污染区人群尿N—乙酰—β—D—氨基葡萄糖苷酶的活性变化

观察了７４名居住在含镉废水灌溉区２５年以上的居民尿中ＮＡＧ活性变化，通过与同期测定的尿镉、血镉和尿β２－微球蛋白等指标的比较分析发现，长期低剂量镉暴露可引起人群尿ＮＡＧ活性的增加，尿ＮＡＧ活性测定在监测镉对人群的早期毒性危害中是一个较为理想的生物监测指标。     

不动杆菌高产AmpC酶和超广谱β内酰胺酶的检测及药敏分析

目的 检测71株多重耐药不动杆菌高产AmpC酶和ESBLs流行病学特征及61株鲍曼不动杆菌耐药性。方法 采用改良三维试验检测高产AmpC酶和ESBLs，用K-B法作药敏。结果 71株不动杆菌检测出高产AmpC酶40株、ESBLs23株、SSBL6株、非AmpC酶和非ESBLs广谱酶2株，61株产酶鲍曼不动杆菌除对亚胺培南高度敏感外，对其余所试各药耐药率均超过80％：结论 不动杆菌产AmpC酶检出率高于ESBLs，治疗产酶株不动杆菌感染的首选药物为亚胺培南。     

一株硝化杆菌的筛选及初步鉴定

目的：筛选、分离能够用于治理氮污染的硝化菌。方法：通过富集培养从土壤中筛选自养型硝化菌，在进行形态学和生化的检验之后设计引物，扩增硝化菌的特征性基因norB之后对PCR产物进行测序，并与Genbank上的序列比较同源性。结果：从土壤中筛选到了1株能够氧化亚硝酸盐的细菌，该菌形态小、浅黄色菌落，是杆菌。PCR能扩增出预期大小片段。对其PCR产物直接测序，与Genbank上的序列比较，发现该基因与硝化菌N hamburgensis的norB基因同源性高达99％。结论：可以初步断定该研究所筛选到的细菌属于硝化杆菌。     

脑肿瘤患者脑脊液中β2微球蛋白和β-葡萄糖醛酸酶同步测定的临床意义

目的：探讨脑肿瘤患者脑脊液中β2微球蛋白和β－葡萄粮醛酸酶（β－G）活性测定的临床意义。方法：分别采用放免法和ELISA技术测定脑肿瘤及非肿瘤脑病患者脑脊液中β2微球蛋白和β－C活性。结果：恶性脑瘤患者脑脊液中无论β2微球蛋白和β－G活性均明显高于良性脑瘤和头痛患者，分别为P＜0．05和P＜0．01；且恶性脑瘤患者脑脊液中两者增高程度呈正相关，但与肿瘤大小、恶性程度无关；其中恶性脑瘤患者脑脊液中β-G活性术后呈下降趋势。结论：脑脊液中β2微球蛋白和β-G活性测定对恶性脑肿瘤诊断有一定的辅助参考价值；β-G活性测定对恶性脑肿瘤病程判定有一定临床意义。     

重组α-半乳糖苷酶消除大豆低聚糖引起的小鼠肠胃胀气的研究

目的:分析食用大豆及其制品中的低聚糖引起肠胃胀气的原因。基因重组α-半乳糖苷酶对棉籽糖和水苏糖进行酶解,低聚糖对小鼠肠胃胀气的缓解情况。方法:以棉籽糖和水苏糖标准品作为受试物,分别灌胃给予不同周龄的昆明种小鼠,分析棉籽糖和水苏糖是否引起小鼠肠胃胀气;通过测量小鼠胀肠容积的方法检测胀气情况;硅胶薄层层析(TLC)检测低聚糖;SDS-PAGE法检测大豆蛋白。结果:棉籽糖、水苏糖均能够引起小鼠肠胃胀气;基因重组α-半乳糖苷酶可以消除小鼠食用棉籽糖和水苏糖后的肠胃胀气现象,添加的α-半乳糖苷酶对大豆蛋白没有影响。结论:α-半乳糖苷酶可做为食品添加剂,用来解决食用豆制品时发生的肠胃胀气。     

β-内酰胺类抗生素对阴沟肠杆菌高产AmpC酶突变的选择作用

目的 比较哌拉西林／他哩巴坦、头孢哌酮／舒巴坦、头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟和亚胺培南对阴沟肠杆菌高产AmpC酶突变的选择能力。方法 以10株单纯诱导产AmpC酶的阴沟肠杆菌和5株诱导产AmpC酶并产超广谱β—内酰胺酶(ESBLs)的阴沟肠杆菌为对象，采用肉汤稀释渐进突变选择法筛选突变株，三维试验监测受试菌的AmpC酶产生情况，琼脂稀释法测定突变株的抗生素敏感性。结果 在单纯诱导产AmpC酶的阴沟肠杆菌中，头孢他啶和头孢噻肟对高产AmpC酶突变的选择能力最强。在诱导产AmpC酶并产ESBLs的阴沟肠杆菌中，哌拉西林／他唑巴坦对高产AmpC酶突变的选择能力最强。头孢吡肟对高产AmpC酶突变的选择作用较弱，但可逐渐增强部分受试菌对第三、四代头孢菌素的耐药性。亚胺培南对高产AmpC酶突变没有选择作用，也没有导致受试菌耐药性增强。结论 各种β—内酰胺类抗生素对阴沟肠杆菌高产AmpC酶突变的选择能力是不一致的，在治疗由阴沟肠杆菌引起的各种感染时，应选择具有高抗菌活性、低选择能力的β—内酰胺类抗生素。     

铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影响

目的 探讨铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）的影响。方法 对原代大鼠肾小管上皮细胞提取、纯化、鉴定、培养后,以醋酸铅0、0.02、0.1、0.5 mmol/L,氯化镉0、0.001、0.004、0.02 mmol/L进行染毒,以及铅、镉2X2联合染毒,测定NAG变化。结果 单独染铅0.02、0.1 mmol/L,NAG活力与对照组之间差异无显著性,染铅0.5mmol/L时,差异有显著性;单独染镉0.001、0.004mmol/L,NAG活力与对照组之间差异无显著性,染镉0.02 mmol/L时,差异有显著性。当铅+镉以（0.02+0.001）、（0.02+0.004）、（0.1+0.001）、（0.1+0.004）mmol/L的剂量联合染毒时,4组NAG活力明显高于对照组和单独染铅组;除（0.1+0.001）mmol/L组外,其余3组NAG活力明显高于单独染镉组。结论 铅镉联合作用使大鼠肾小管上皮细胞NAG释放增加。     

产吲哚金黄杆菌和黏金黄杆菌产β-内酰酶的研究

目的 了解产吲哚金黄杆菌和黏金黄杆菌产β-内酰胺酶情况,特别是超广谱β-内酰胺酶和金属β-内酰胺酶.方法 平板琼脂稀释法测定被试菌株对常用的12种抗菌药物的MIC;三维试验测定被试菌株的超广谱β-内酰胺酶和金属β-内酰胺酶;用3对引物扩增相应的基因.结果 25株产吲哚金黄杆菌和10株黏金黄杆菌中,68.0%的产吲哚金黄杆菌和90.0%的黏金黄杆菌金属β-内酰胺酶阳性,但所有菌株中未发现超广谱β-内酰胺酶.结论 金属β-内酰胺酶是产吲哚金黄杆菌和黏金黄杆菌多药耐药的主要原因.     

环境镉污染区人群尿N－乙酰－β－D－氨基葡萄糖苷酶的活性变化

观察了７４名居住在含铜废水灌溉区２５年以上的居民尿中ＮＡＧ活性变化。通过与同期测定的尿镉、血镉和β_（２－）微球蛋白等指标的比较分析发现，长期低剂量镉暴露可引起人群尿ＮＡＧ活性的增加。尿ＮＡＧ活性测定在监测镉对人群的早期毒性危害中是一个较为理想的生物监测指标。     

孕妇血清N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶水平变化与胎盘功能关系的临床探讨

目的探讨孕妇血清N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平变化与胎盘功能关系的临床价值。方法用自动分析法对187例正常孕妇,27例正常产妇及29例正常非孕妇女以及32例非正常孕妇的血清NAG酶分别进行测定。结果孕妇血清NAG酶在13~14孕周高于正常对照并有统计学意义(P<0.001),且随孕龄的增长而增高,至37~40孕周达高峰,之后随孕龄的增加而降低,且分娩后恢复到正常对照水平;先兆流产,过期流产妇女血清NAG酶接近正常对照组,亦有统计学意义(P<0.01),但远低于正常孕妇(P<0.01)。结论孕妇血清NAG酶可反映胎盘功能,定期监测NAG酶活力,有助临床正确处理产科情况。     

尿NGAL和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶对IgA肾病早期诊断的价值研究

目的:探讨尿中性粒细胞明胶酶相关脂蛋白(neutrophil gelatinase associated lipocalin,NGAL)和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG)对IgA肾病早期诊断价值。方法:选择IgA肾病患者85例,根据Hass分级Hass I～II(A组)40例、Hass III～V(B组)45例;正常对照组30例。应用ELISA法检测尿液NGAL(uNGAL)和uNAG的浓度,并计算uNGAL/Cr比值和uNAG/Cr比值,进而对uNGAL/Cr和uNAG/Cr进行受试者工作特征(ROC)曲线分析,计算ROC曲线下面积和最佳诊断界值。结果:IgA肾病患者的uNGAL、uNAG、uNGAL/Cr和uNAG/Cr均较对照组有显著差异(P均<0.05);uNGAL/Cr和uNAG/Cr ROC曲线面积分别为0.941和0.846,其最佳诊断界值分别为3.50 g/mmol Cr和1.20 U/mmol Cr,取该界值时诊断IgA肾病的敏感度和特异度分别为91.2%、93.7%和83.3%、84.9%。结论:尿NGAL可作为判断IgA肾病早期肾脏损害的客观指标;uNGAL/Cr较uNAG/Cr对IgA肾病损伤诊断的敏感度和特异度高。     

尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶对汞作业者肾脏损害的早期诊断意义

[目的]探讨N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶对汞作业者肾脏损害的早期诊断意义。[方法]85名汞作业者分为汞接触正常组、汞接触超标组,并以无汞接触史的65名健康成人作为对照组。分别进行临床体检并测定尿汞(UHg)、血肌酐(BCr)、尿肌酐(UCr)、血尿素氮(BUN)、尿-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG),排除肾病史和患有肾脏疾病患者后对结果进行分析。[结果]汞作业者UHg和NAG均显著高于对照组,但BCr、UCr、BUN与对照组无显著差别。[结论]长期汞接触可造成肾功能损害,尿-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶可作为汞作业工人肾脏损害的早期敏感的诊断指标。