二十二碳六烯酸对体外大鼠C6胶质瘤细胞促凋亡作用

目的 探讨二十二碳六烯酸（DHA）对大鼠C6胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法 10、25、50、75和100 μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后检测细胞活力;100 μmol/L DHA处理C6细胞24 h后,应用TUNEL方法检测凋亡细胞,流式细胞术检测凋细胞的比例;应用免疫荧光和Western blotting方法检测剪切后含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved Caspase-3）在凋亡细胞中的表达情况。结果 25、50、75和100 μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后,抑制细胞活力;100 μmol/L DHA处理细胞24 h后,能够检测到TUNEL阳性的凋亡细胞; 流式细胞术检测后发现,DHA能够明显上调凋亡细胞的比例;此外,细胞经100 μmol/L DHA处理后,免疫荧光能够检测到cleaved Caspase 3阳性细胞,Western blotting能够检测到cleaved Caspase-3阳性蛋白条带。结论 DHA具有促进大鼠C6胶质瘤细胞凋亡的作用。     

顺铂诱导大鼠C6胶质瘤细胞凋亡

为深入进行胶质瘤细胞凋亡的分了生物学研究及提高胶质瘤辅助化疗疗效打下基础。通过光镜,电镜,荧光显微镜分析,DNA断裂分析及流式细胞仪分析,进行顺铂诱导C6胶质瘤细胞调亡研究。本研究证实在3μg／mLCDDP作用72h,C6细胞出观细胞凋亡;光镜和电镜可见细胞形态学上出现细胞皱缩,染色质浓集贴达;流式细胞仅结果提示有凋亡峰出现,凋亡细胞占细胞总数17.3％±1.2％;荧光显微镜观察出现染色质浓集,染色质断裂：DNA电泳未表现出DNA呈梯状带型断裂。上述结果提示用顺铂成功地诱导大鼠C6胶质瘤细胞发生凋亡。     

大鼠C6胶质瘤细胞的基因表达谱

目的:筛选比较大鼠C6胶质瘤细胞与正常星型胶质细胞中的差异表达基因。方法:利用Illumina Hi Seq4000技术对大鼠C6胶质瘤细胞和正常星形胶质细胞进行转录组测序并对测序结果进行功能注释。以|log2 Fold Change|≥1和q值0.05为标准筛选差异表达基因,并通过GO和KEGG数据库分析其功能和参与的信号通路。结果:较之正常星形胶质细胞,大鼠C6胶质瘤细胞中共筛选得到4363个差异表达基因,其中1603个基因表达上调,2760个基因表达下调;GO富集结果表明:4109个差异表达基因共映射到906个GO term,主要与GTP酶活性正性调节、基因表达正性调节、蛋白结合和钙离子结合等功能相关;KEGG富集结果表明:1535个差异表达基因共参与106条通路,富集最多的是PI3K-Akt信号通路和癌症发生通路。结论:成功获取大鼠C6胶质瘤细胞与正常胶质细胞的基因表达谱,并对其差异基因进行GO和KEGG注释,结果有助于胶质瘤发生发展的研究。     

丹参酮ⅡA对C6胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的：探讨丹参酮ⅡA对大鼠胶质瘤细胞株C6的增殖抑制作用及其作用机理。 方法： 应用MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA对C6细胞的增殖抑制，应用流式细胞仪观察丹参酮ⅡA对C6细胞周期的影响，应用琼脂糖凝胶电泳观察C6细胞DNA的变化，应用RT-PCR观察相关基因c-myc表达的变化。 结果： 丹参酮ⅡA对C6细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性。细胞周期分析显示：用1.0 mg/L丹参酮ⅡA作用C6细胞，在作用72 h出现凋亡峰，凋亡细胞占细胞总数7.7%；用2.0 mg/L丹参酮ⅡA作用C6细胞，在作用72 h出现凋亡峰，凋亡细胞占细胞总数21.6%。琼脂糖凝胶电泳结果显示：一定剂量丹参酮ⅡA作用后，C6细胞具有明显的凋亡特征，细胞核DNA呈梯状降解。RT-PCR结果显示：随着丹参酮ⅡA作用剂量的增加，c-myc基因的表达被明显抑制。 结论： 丹参酮ⅡA对大鼠胶质瘤细胞系C6的增殖具有明显的抑制作用及诱导凋亡的作用，并对原癌基因c-myc的表达具有抑制作用。     

人参皂苷Rh2对大鼠C6胶质瘤细胞的抑制作用

目的研究不同浓度的人参皂苷Rh2对细胞增殖、迁移以及侵袭的作用。方法使用不同浓度的人参皂苷Rh2对体外培养的大鼠胶质瘤细胞系C6进行处理,采用CCK-8(cell counting kit-8)法、细胞划痕实验、Transwell小室模型分别检测其对C6细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果人参皂苷Rh2对C6胶质瘤细胞的增殖有抑制作用,且在一定药物浓度范围内呈剂量-时间依赖性;对C6细胞迁移能力在药物浓度大于32μg/ml时有明显的抑制效果;对C6细胞侵袭的抑制作用也呈剂量依赖性,且在16μg/ml浓度即有明显效果。结论人参皂苷Rh2显著抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,对脑胶质瘤的治疗有重要意义。     

人参皂苷诱导大鼠C6脑胶质瘤细胞的分化

目的:观察人参皂苷对胶质瘤细胞的诱导分化作用,探讨人参皂苷抗胶质瘤作用机制.方法:采用MTT、软琼脂克隆形成率、形态学与神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光等方法鉴定分化程度.结果:10μg/ml人参皂苷即可明显诱导大鼠C6胶质瘤细胞株的细胞分化,表现为增殖抑制,克隆形成能力丧失,细胞突起增长,GFAP表达量升高.结论:一定剂量的人参皂苷可以诱导大鼠脑胶质瘤细胞分化达到抗肿瘤的效果.     

地塞米松对C6胶质瘤细胞细胞周期的影响

目的:研究地塞米松(Dex)对C6胶质瘤细胞细胞周期和增殖的影响。方法:在培养的C6胶质瘤细胞中加入不同浓度(0 mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L和10-3mol/L)的Dex,作用不同的时间(6、12和24 h)后取材,运用细胞计数和流式细胞仪检测C6胶质瘤细胞的增殖情况、细胞周期及凋亡。结果:10-3mol/L的Dex诱发了C6胶质瘤细胞的凋亡。24 h时,4个组的C6胶质瘤细胞凋亡率依次为0.37、0.52、0.39和8.24;4个组的C6胶质瘤细胞个数依次为4.37×106、4.29×106、3.57×106和3.44×106,后3组与第1组有明显的差异;4个组的C6胶质瘤细胞增殖指数依次为17.58、6.79、6.29和22.48,前3组随浓度增加而增加,第4组例外。结论:Dex对C6胶质瘤细胞的细胞周期进程有明显的抑制作用。10-4mol/L以下的浓度抑制其由G1期向S期的转换,10-3mol/L剂量的Dex可能抑制C6胶质瘤细胞由G2期向M期的转换或阻滞细胞在S期。大剂量的Dex(10-3mol/L)可引起C6胶质瘤细胞凋亡。     

角质细胞生长因子对1C6细胞和4C18细胞的促增殖作用

目的观察角质细胞生长因子(KGF)对胸腺上皮来源1C6细胞和4C18细胞的促增殖作用。方法鼠胸腺上皮髓质和皮质来源的1C6细胞、4C18细胞和鼠腹腔巨噬细胞来源的RAW细胞,分别经含不同浓度(25、50、100、200、400、800ng/ml)的KGF和不含KGF的完全培养液(对照组)作用24、48和72h,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖率,并绘制细胞增殖率曲线。结果 MTT法检测显示,在低浓度(200ng/ml)时,1C6细胞增殖率随KGF浓度增加不断升高;KGF浓度为200ng/ml时,1C6细胞增殖率达最高值;在高浓度(200ng/ml)时,1C6细胞增殖率随KGF浓度的增加逐渐下降;与对照组比较,浓度为100、200、400ng/ml的KGF分别作用24、48和72h对1C6细胞均具有明显的促增殖作用(均P0.05)。在低浓度(100ng/ml)时,4C18细胞增殖率随KGF浓度增加不断升高;KGF浓度为100ng/ml时,4C18细胞增殖率达最高值;在高浓度(100ng/ml)时,4C18细胞增殖率随KGF浓度的增加逐渐下降;与对照组比较,浓度为50、100、200、400ng/ml的KGF分别作用24、48和72h对4C18细胞均具有明显的促增殖作用(均P0.05)。但不同浓度的KGF对RAW细胞均未见促增殖作用。结论 KGF对胸腺上皮来源的1C6细胞和4C18细胞均具有明显的促增殖作用。     

槲皮素对脑胶质瘤C6细胞增殖的调控作用

目的观察槲皮素对胶质瘤C6细胞增殖的影响及其对脑胶质瘤大鼠脑组织DR5表达的影响,探讨槲皮素对脑胶质瘤C6细胞增殖的调控作用。方法将体外培养的脑胶质瘤C6细胞按照槲皮素浓度分成25、50、75及100μmo l/L 5个处理组和对照组(二甲亚砜),采用MTT比色法检测槲皮素对胶质瘤C6细胞增殖的影响,Western blotting法检测100μmo l/L处理24h后的细胞和对照组细胞死亡因子受体5(DR5)的蛋白表达。选取雌性Wistar大鼠30只,随机分为3组:假手术组、模型组和槲皮素治疗组,每组10只。建立大鼠C6胶质瘤模型,于接种后17d处死各组大鼠,采用免疫组织化学法和Western bloting法检测肿瘤组织DR5蛋白表达水平的变化。结果槲皮素药物浓度增加或作用时间的延长,均能显著增强对C6细胞的增殖抑制作用。100μmo l/L槲皮素处理24h后,C6细胞DR5表达显著升高,P0.01。在体研究时发现,槲皮素能够上调脑胶质瘤大鼠脑组织DR5蛋白表达的平均光密度值,P0.01。结论槲皮素对C6细胞增殖抑制作用具有浓度、时间依赖性,上调DR5表达可能是其作用机制之一。     

大鼠C6脑胶质瘤模型的基因表达谱分析

目的:筛选和分析大鼠胶质瘤模型与正常星型胶质细胞中的差异表达基因。方法:构建大鼠C6颅内胶质瘤模型,利用Illumina Hi Seq 4000技术对大鼠胶质瘤模型的胶质细胞和正常星形胶质细胞进行转录组测序并对测序结果进行功能注释。以q值0. 05为标准筛选差异表达基因,并通过GO和KEGG数据库分析其功能和参与的信号通路。结果:较之正常星形胶质细胞,大鼠胶质瘤模型组细胞共筛选得到9221个差异表达基因,其中4604个基因表达上调,4617个基因表达下调; GO富集结果表明:这些差异表达基因共映射到575个GO term,与各类结合相关的分子如蛋白结合、离子结合、小分子结合、核苷酸结合等功能富集显著; KEGG富集结果表明:差异表达基因共参与22条通路,富集最多的是癌症发生通路、MAPK通路、胞吞通路和黏着斑通路。结论:成功获取大鼠胶质瘤模型细胞与正常胶质细胞的基因表达谱,差异表达基因富集在癌症发生通路、MAPK通路、胞吞作用通路和黏着斑等生物学通路,这些信号通路可能在胶质瘤发生发展过程中发挥重要作用,对其进一步分析将为临床治疗胶质瘤提供新的靶点。     

IL-12家族亚基基因在大鼠C6胶质瘤细胞表达研究

目的:对大鼠C6胶质瘤细胞应用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,q PCR)法观察白细胞介素-12(Interleukin-12,IL-12)家族亚基基因的表达,为今后IL-12家族在脑胶质瘤方面研究奠定基础。方法:提取大鼠C6胶质瘤细胞RNA,反转录成c DNA,应用q PCR法观察IL-12家族亚基基因在大鼠C6胶质瘤细胞mRNA表达影响并进行比较分析。结果:在大鼠C6胶质瘤细胞中,IL-23a,IL-12a的表达丰度为高,EBI3,IL-27的表达丰度为中,IL-12b的表达丰度为低。结论:IL-12家族与胶质瘤发生、发展密切相关,其中IL-12、IL-23是最有潜力治疗脑胶质瘤的细胞因子,其研究进展将为脑胶质瘤的免疫治疗带来新思路。     

黏液瘤病毒体外对胶质瘤细胞杀灭作用的研究

目的 了解C6细胞在体外对黏液瘤病毒的易感性,并测定黏液瘤病毒对体外C6胶质瘤细胞的杀灭作用.方法 以黏液瘤病毒感染体外培养的C6胶质瘤细胞,以灭活病毒作为阴性对照,5-FU作为阳性对照,DEMD液做空白对照,应用Western-Blot法、倒置显微镜及MTT法观察各组细胞的形态、成活率.结果 病毒感染组及5-FU组24 h后细胞成活率明显低于空白对照组及阴性对照组,同时病毒感染组细胞出现明显细胞病变.结论 C6胶质瘤细胞在体外对黏液瘤病毒易感,黏液瘤病毒在体外对C6胶质瘤细胞有杀灭作用.     

逆转录病毒介导IL-18基因在大鼠胶质瘤细胞C6中的表达

目的 :建立表达IL 18基因的大鼠胶质瘤细胞C6 /IL 18,并探讨外源性IL 18基因对C6细胞生长的影响。方法 :应用逆转录病毒载体 ,将IL 18基因导入C6细胞。经G4 18筛选后 ,获得表达IL 18分子的细胞克隆C6 /IL 18。用RT PCR法检测目的基因mRNA的表达 ;用流式细胞和免疫细胞化学染色法检测目的蛋白的表达。用ELISA法检测C6 /IL 18细胞培养上清诱导脾细胞分泌IFN γ的能力 ,以确定IL 18的生物学活性。用MTT比色法检测细胞体外增殖的状况 ,用流式细胞技术检测细胞的增殖活性 ,并建立大鼠胶质瘤模型 ,观察C6 /IL 18细胞体内致瘤性的改变。结果 :外源IL 18基因于mRNA水平和蛋白水平可获得稳定表达 ,并可诱生大鼠脾细胞分泌IFN γ。同时 ,该细胞系的体外增殖率及体内致瘤性 ,均较亲代C6胶质瘤细胞明显下降。结论 :外源性IL 18基因能部分地抑制C6细胞的体外增殖率和体内致瘤性。建立了可进一步用于相关肿瘤基因免疫和基因治疗研究的大鼠胶质瘤细胞系C6 /IL 18。     

黏液瘤病毒体外对胶质瘤细胞杀灭作用的研究

目的了解C6细胞在体外对黏液瘤病毒的易感性,并测定黏液瘤病毒对体外C6胶质瘤细胞的杀灭作用。方法以黏液瘤病毒感染体外培养的C6胶质瘤细胞,以灭活病毒作为阴性对照,5-Fu作为阳性对照,DEMD液做空白对照,应用Western—Blot法、倒置显微镜及MTT法观察各组细胞的形态、成活率。结果病毒感染组及5-Fu组24h后细胞成活率明显低于空白对照组及阴性对照组,同时病毒感染组细胞出现明显细胞病变。结论C6胶质瘤细胞在体外对黏液瘤病毒易感,黏液瘤病毒在体外对C6胶质瘤细胞有杀灭作用。     

Survivin-siRNA对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用

目的:探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株DU145的促凋亡作用。方法:构建针对survivin的siRNA表达载体pSi-sur,与脂质体和scramble-siRNA(pSi-scrambled)对照组分别转染前列腺癌细胞DU145后,利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平;吖啶橙染色、Annexin V-FITC流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:转染72 h后,实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体组的0.28±0.07(n=3),蛋白表达水平是脂质体组的0.34±0.05(n=3),与对照组比较,差异显著(P0.05);吖啶橙染色、Annexin V-FITC和TUNEL法均观察到实验组细胞呈现明显的凋亡现象。结论:利用survivin-siRNA可明显抑制前列腺癌细胞DU145 survivin基因和蛋白表达,并诱导细胞凋亡,结果为进一步进行动物体内研究奠定了基础。     

促甲状腺素及白细胞介素-6对大鼠甲状腺细胞钙离子的作用

本文利用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）对促甲状腺素（TSH）及白细胞介素-6（IL6）诱导的FRTL－5细胞内Ca2 变化进行了研究。方法：培养的FRTL－5细胞以FLuo－3染色,用LSCM在488nm扫描并加入不同浓度的TSH及IL－6检测细胞内Ca2 的变化。结果：TSH（1－5U／L）可使细胞内Ca2 的水平上升,且与TSH的浓度有一定关系。IL－6（1～100μg／L）对FRTL－5细胞内基础Ca 浓度无直接作用。     

胸腺嘧啶激酶/丙氧鸟苷体外杀伤携带胸腺嘧啶激酶基因的C6胶质瘤细胞时细胞凋亡的检测

目的检测胸腺嘧啶激酶基因转染C6胶质瘤细胞后用丙氧鸟苷处理时细胞凋亡的发生。方法用脂质体介导的基因转染将单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶基因转入C6胶质瘤细胞中,用G418筛选,建立稳定表达胸腺嘧啶激酶的C6细胞株;加入丙氧鸟苷作用不同时间,用原位末端标记、透射电镜和DNA凝胶电泳法检测。结果用丙氧鸟苷作用72h发现有大量原位末端标记阳性的细胞,阳性信号呈块状或半月形位于核膜内侧;透射电镜发现肿瘤细胞核内染色质呈块状或帽状位于核膜内侧,非染色质部分呈空泡状,细胞质有的固缩,细胞器基本保持完整;有的则高度肿胀,细胞内亚单位遭到破坏;DNA凝胶电泳发现用丙氧鸟苷作用72h细胞基因组DNA呈梯状带。结论实验结果提示胸腺嘧啶激酶/丙氧鸟苷系统作用于表达胸腺嘧啶激酶的C6细胞时该细胞主要是以凋亡的方式死亡的。     

细胞色素C对HL-60细胞促凋亡作用及其对bcl-2、bcl-xl基因表达的影响

目的：探讨细胞色素C在体外作用于HL-60细胞时细胞发生的变化及其相关凋亡基因bcl-2、bcl-xl表达变化的机制。方法:用不同浓度的细胞色素C作用于HL-60细胞24 h，然后用MTT检测细胞色素C对HL-60细胞抑制率；用普通光镜、荧光显微镜检测HL-60细胞形态的变化；用流式细胞仪、DNA凝胶电泳对HL-60细胞凋亡的检测；用RT-PCR检测bcl-2、bcl-xl mRNA表达的变化。结果:细胞抑制率随着细胞色素C浓度的增加而增加；当细胞色素C浓度在0-37.5 mg/L作用HL-60细胞24 h，随着细胞色素C浓度的增加，HL-60细胞发生的凋亡逐渐增加，可见典型的凋亡细胞和明显的DNA梯度条带；同时，在该浓度范围内，bcl-2、bcl-xl mRNA表达逐渐减少；当细胞色素C浓度大于37.5 mg/L时，细胞凋亡率并不增加，而是下降，但是坏死细胞明显增加。结论：一定浓度细胞色素C能诱导HL-60细胞发生凋亡，并且细胞凋亡率、bcl-2、bcl-xl基因表达的变化与细胞色素C浓度呈一定的量效依赖关系，细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡可能与抑制bcl-2、bcl-xl基因的表达有一定的关系。     

阿司匹林对胶质瘤细胞C6抑制及一氧化氮生成的影响

为观察阿司匹林对胶质瘤细胞C6生长抑制、NOS表达及NO生成、CEA含量的影响，采用MTT法测定不同浓度阿司匹林对胶质瘤细胞C6的生长抑制率，免疫细胞化学染色检测NOS表达，Griess法测定NO浓度，微粒子捕捉免疫法分析CEA含量变化。结果发现阿司匹林抑制胶质瘤细胞C6的生长增殖，并能诱导iNOS的表达，增加培养基中NO浓度，减少CEA的生成。阿司匹林对胶质瘤细胞C6的抑制作用可能是阿司匹林的直接毒性或通过诱导iNOS的表达，增加NO含量产生大量超氧阴离子的结果，监测CEA含量的变化可能是判断胶质瘤发生、发展及预后的有效指标。     

鼠神经干细胞对胶质瘤C6细胞侵袭能力的影响

目的探讨鼠神经干细胞对鼠胶质瘤C6细胞侵袭能力的影响及机制。方法取新生1～2天SD大鼠大脑皮层组织,于无血清培养基中分离培养神经干细胞并进行NES免疫细胞化学染色,并将神经干细胞和鼠胶质瘤C6细胞于体外共培养,利用2D、3D生长实验和Transwell实验分别检测与鼠神经干细胞共培养鼠胶质瘤C6细胞(实验组)和单独培养鼠胶质瘤C6细胞(对照组)的侵袭能力。结果 2D实验中C6细胞的对照组和实验组的平均直径分别为(18.53±1.32)μm和(13.44±1.45)μm,差异有统计学意义(P<0.01)。3D实验中C6细胞的对照组和实验组的平均直径分别为(20.34±1.25)μm和(15.52±1.43)μm,差异有统计学意义(P<0.01)。Transwell侵袭实验发现胶质瘤C6细胞组中对照组和实验组平均视野侵袭细胞为(36.45±1.36)个和(22.73±1.66)个,差异有统计学意义(P<0.01)。结论与神经干细胞共同培养后C6细胞的侵袭能力明显降低。