上海地区猪戊型肝炎感染状况及病毒序列分析

[目的] 调查上海地区猪戊型肝炎感染现况,掌握上海市猪感染戊型肝炎病毒的型别,以进一步探讨猪戊型肝炎感染与病人感染的可能关系。[方法]采集上海市3个区的不同季度的3月龄猪血样,用ELISA法检测抗-HEV 特异性抗体水平,并用RT-nPCR方法检测猪粪便中HEV病毒,进行RNA核酸序列分析和基因进化树分析。 [结果] 共检测猪血清标本1 798份,HEV抗体阳性率为89．38％;44份猪粪便样品中17份RT、-nPCR为阳性,HEV RNA阳性率为38．64％,病毒序列经同源性分析,与戊型肝炎病毒I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的同源性分别为78．5％-84．0％、76．5％-80．7％、 77．3％-82．7％、84．6％-90．7％,基因进化树的分析显示,病毒序列与HEVⅣ型的ⅣA形成同一分支。[结论] 上海地区的猪戊型肝炎感染率较高,戊型肝炎病毒型别属基因型Ⅳ型。     

广东省韶关地区戊型肝炎病毒基因型分析

目的了解韶关地区流行的戊型肝炎病毒基因型,并探讨戊型肝炎是否属于人兽共患病。方法通过同源比对HEV四种基因型的戊型肝炎病毒序列,选取其保守序列部分设计两对巢式聚合酶链式反应的简并引物,建立一种可同时扩增戊型肝炎四个基因型病毒RNA的PCR快速检测方法。在广东省韶关地区采集猪粪便标本和非甲非乙型肝炎病人血清,提取病毒RNA,然后进行PCR检测,阳性时对扩增片段进行基因序列测定,并进行基因型分析。结果RT-nPCR检测结果显示99份猪粪便标本中有6份HEVRNA阳性,7份病人血清样本中1份阳性,序列分析显示全部为HEV基因IV型,4份猪标本中的HEV基因序列与GenBank中人HEV的基因序列最相似,同源性为88%~94%,且其中1份猪标本中的HEV与1份病人标本中HEV的序列同源性高达91.5%。结论广东韶关地区HEV流行株为基因IV型,而且猪HEV基因序列与人HEV之间有着高度的相似性,结果证实戊型肝炎是一种人兽共患传染病。     

深圳地区HEV流行基因型及动物宿主带毒状况分析

目的了解深圳地区戊型肝炎病毒(HEV)流行基因型及动物宿主带毒状况。方法通过同源比对HEV四种基因型的戊型肝炎病毒序列,选取其保守序列部分设计两对巢式聚合酶链式反应的简并引物,建立一种可同时扩增戊型肝炎四个基因型病毒RNA的PCR快速检测方法。对深圳市采集的80份猪粪便标本和6份戊型肝炎病人血清,提取病毒RNA,然后进行PCR检测,阳性时对扩增片段进行基因序列测定,并进行基因型分析。结果80份猪粪便标本5份HEV—RNA阳性,6份病人血清样本中4份阳性。序列分析显示全部为HEV基因IV型,5份猪标本中的HEV基因序列与GenBank中人HEV的基因序列最相似,同源性为88%～94%。结论深圳地区HEV流行株为基因IV型,而且猪HEV基因序列与人HEV之间有着高度的相似性,证实猪是HEV的宿主,戊型肝炎是一种人兽共患传染病。     

广西地区动物HEV基因型及亚型分布

目的 了解广西地区猪、鼠、狗、猕猴和鱼5种动物戌型肝炎病毒(HEV)基因型和亚型分布.方法 对广西地区猪、鼠、狗HEV抗体阳性血清170份,鼠肝组织150份,3月龄以下狗粪便标本80份,鱼胆汁标本120份,3月龄以下猪粪便标本129份,龙虎山自然景区猴粪便标本130份,用巢式逆转录聚合酶链反应法(RT-nPCR)检测戊型肝炎病毒核糖核酸(HEV RNA),对RT-nPCR阳性扩增产物进行克隆测序,用Vector NTI Suite 9.0和Treeview软件与目前新分型方法所选参考序列进行核苷酸序列相似性比较和生物进化树分析.结果 广西地区170份猪、鼠和狗血清HEV RNA检测均为阴性.在150份鼠肝组织,120份鱼胆汁标本,80份狗和130份猕猴粪便标本中均未检出HEV RNA;3月龄以下猪粪便标本HEV RNA阳性率10.08(13/129).对13株猪HEV开放读码框架(ORF)1区部分核酸序列进行分析,其与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型HEV的相似性分别为73%～77%,76%～79%,76%～81%,82%～97%;与6个亚型的相似分别为4a:82%～94%;4b:82%～98%;4c:82%～87%;4d:81%～87%;4f:84%～86%;4g:81%～84%,其中2株与N a亚型相似性是高为82%～94%,11株与Ⅳ b亚型相似性最高为82%～98%.结论 广西地区猪HEV均为基因型4,2株属于基因型Ⅳ a,Ⅱ株为Ⅳb.HEV在猪、鼠、狗血清、鼠肝组织、鱼胆汁、狗和猕猴粪便标本中均未检出.     

华东地区猪基因4型戊肝病毒的季节变化及与人同源性的分析

目的 戊型肝炎病毒的人兽共患特征被认可,本研究检测华东地区猪群在不同季节中基因4型戊肝病毒(HEV)的感染情况,了解猪病毒株之间以及与人病毒株的同源性关系.方法2007年9月-2008年6月在华东地区浙江、安徽和江苏的3家屠宰场中共采集猪胆汁标本1200份,应用巢式RT-PCR方法检测HEV RNA,对阳性标本测序并结合同一地区人HEV序列进行同源性分析.结果猪胆汁标本中HEV RNA总检出率为4.5%,各季节猪群的检出率为9-10月平均检出率6%,12-1月4.33%,3-4月4.33%,5-6月3.33%,各地区的平均检出率为江苏6%、安徽5%、浙江2.5%.不同地区猪与猪、猪与人基因4型HEV病毒株的同源性都较高(猪株之间核苷酸序列约为80%～100%,氨基酸序列约为96%～100%;猪与人株之间核苷酸序列约为76%～99%,氨基酸序列约为95%～100%).部分猪HEV与人HEV构成独立的同源性分支,进化起源关系密切.结论 基因4型HEV在华东地区猪群中常年广泛流行,且可能拥有共同的进化与传播起源.猪群携带HEV可能会对人群戊肝的流行趋势产生影响.     

戊肝病毒(HEV)在猪和牛群中的流行病学研究

目的 探讨戊型肝炎病毒（HEV）在猪和牛群中的感染情况。方法 用抗－HEV抗体试剂盒检测猪和牛血清中的抗体；对部分血清用逆转录聚合酶链的方法（RT－PCR）检测HEV RNA，并对PCR阳性产物进行克隆，然后将序列进行分析。结果 281份猪血清中有235份为抗－HEV抗体阳性，阳性率为83.6%；其中56份血清中有3份为HEV RNA阳性，序列分析显示从猪中克隆的3株序列（SB2、SH1和SJ14）之间在ORF2（6007－6354bp）区域的核甙酸序列的同源性为83％－86％，该3株序列在ORF2区与1，2，3，4型的同源性分别为74％－79％、73％－77％，73％－76％和83％－93％；190份牛血清中有12份为抗－HEV抗体阳性，阳性率为6.3%。结论 HEV在猪和牛群中均有流行，但在猪群中的流行率明显高于牛群，猪感染的HEV的基因序列与人群中散发性戊型肝炎病毒的4型同源性最高。     

山东省某地屠宰场猪肝内戊型肝炎病毒感染状况研究

目的研究商品猪肝脏内戊型肝炎（戊肝）病毒（HEV）的检出状况及其基因分型。方法采集35份山东省某个人屠宰场和某城镇大型屠宰场内的猪肝，处理后采用逆转录．巢式聚合酶链反应（nested RT·PCR）方法检测HEV RNA。并与GenBank中登录的HEV全长序列进行同源性分析。结果35份猪肝标本中共有3份检出HEVRNA，阳性率为8．57％。同源性分析显示这3株病毒均为Ⅳ型HEV。结论即将上市的商品猪肝脏内存在HEV感染，其基因型与中国大陆HEV流行株相同，均为基因Ⅳ型。     

华东地区散发性戊型肝炎病毒系统进化分析

目的 了解华东地区散发性戊型肝炎病毒(HEV)的系统进化特征.方法 2005-2008年收集华东地区14家二级或三级医院413份散发戊型肝炎患者血清,应用巢式RT-PCR方法检测HEVRNA并测序.参照GenBank相关序列,分析各序列之间的同源性,并构建进化树.结果 413例患者的男女性别比为1.75:1,40～69岁患者居多(61.5%).413份患者血清有140份分离出HEV RNA,阳性分离率为34%.所有分离的140份病毒株均属于HEV Ⅳ型,与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型参考病毒株的核苷酸同源性分别为77.9%～88.3%、80.8%～90.6%、73.4%～85.2%和91.0%～95.4%.结论 基因Ⅳ型HEV是引起华东地区散发性戊型肝炎的优势病毒株,其起源和进化等问题仍需进一步研究.     

马鞍山地区不同人群戊型肝炎病毒基因型初步分析

目的了解马鞍山地区不同人群中戊型肝炎病毒（HEV）流行株基因型的分布状况。方法对来自一般人群、有偿献血人群、吸毒人群的血清标本进行HEV IgG、IgM抗体检测并将HEV IgM阳性的血清标本进行RT-PCR扩增,PCR阳性标本进行基因测序及序列分析。结果 HEV PCR扩增成功16份,其中HEV IgM抗体阳性病人和正常人群中10份标本阳性,吸毒人群和有偿献血人群中各3份标本PCR阳性,测序结果显示均为HEVⅣ型毒株感染。结论马鞍山地区不同人群中HEV流行株均为基因Ⅳ型,但不同人群内部的流行株存在较大变异。     

Seroepidemiology and genetic characterization of hepatitis E virus in the northeast of china

The aim of this study was to analyze the prevalence of infection and genotype of hepatitis E virus (HEV) in people and animals in the northeast of China (Heilongjiang, Jilin and Liaoning provinces). This seroepidemiological study was conducted using enzyme immunoassays and human sera positive for HEV antigen or anti-HEV IgM, and animal sera positive for HEV antigen or with an S/CO ≤10 for anti-HEV were tested for HEV RNA using real-time RT-PCR and nested RT-PCR. In humans, the overall prevalence of anti-HEV IgG was 31.6% (311/985), 28.6% (147/514) and 21.1% (841/3994) in individuals frequent, infrequent, and very rare contact with swine, respectively. The overall prevalence of anti-HEV was 81.6% (1737/2127) in pigs above 3 months of age, 66.4% (1644/2473) in pigs below 3 months of age, 18.7% (301/1612) in cattle and 12.4% (162/1302) in sheep. 1211 samples were tested for HEV RNA using real-time RT-PCR and 71 were positive. 30 of the 71 samples also were positive for HEV RNA using nested RT-PCR. These 30 isolates shared 81.2–100% sequence identity with each other at the nucleotide level and belonged to HEV genotype 4, regardless whether from human or animals. The results indicate that HEV infection is widely spread in the northeast of China. The prevalence of anti-HEV in individuals with frequent contact with pigs was significantly higher than those without and the HEV sequences isolated from such individuals were related more closely to isolates from pigs. These support strongly the hypothesis of a zoonotic origin of hepatitis E.     

北京市郊区八种动物戊型肝炎病毒抗体流行率调查及病毒基因型研究

目的 调查北京地区与人密切接触的猪、牛、羊、马、驴、犬、鸡、鸭8种动物血清中戊型肝炎病毒(HEV)抗体流行率及该地区猪HEV基因型和亚型.方法 收集8种动物的血清标本及幼猪粪便标本,用双抗原夹心ELISA法检测血清中抗-HEV;用巢式反转录聚合酶链反应法(RT-nPCR)检测HEV RNA;对部分PCR产物进行克隆和测序,并对测序结果进行基因分型.结果 在8种动物中抗-HEV阳性率分别为猪80.43%(481/598),其中成猪(>6月龄)为87.86%(369/420),幼猪(2～3月龄)为62.92%(112/178);牛15.02%(52/346);马14.29%(40/280);驴0(0/26);羊9.88%(33/334);犬0(0/21);鸭3.03%(7/231);鸡2.53%(8/316).RT-nPCR检测3月龄以下猪粪便标本HEVRNA阳性率为66.67%(74/111).HEV RNA阳性的标本测序后可归为6株(分别命名为bjsw1、bjsw2、bjsw3、bjsw4、bjsw5和bjsw6),6株HEV开放读码框2(ORF2)部分核苷酸序列的相似性为94.5%～99.6%,与1、2、3、4型HEV的相似性分别为75.6%～78.6%、75.6%～76.2%、77.1%～80.7%和83.7%～94.5%.6株HEV与人HEV 4d亚型的同源性最高,为90.0%～94.5%.结论 北京市郊区猪、牛、马、羊、鸭、鸡中均存在HEV感染,其中猪抗-HEV流行率最高,驴、犬抗-HEV的流行率最低;6株猪HEV属于基因4型、4d亚型.     

新疆猪戊型肝炎病毒株CHN-XJ-SW33全基因组序列分析

目的测定从新疆南部地区分离的猪戊型肝炎病毒(HEV)株全基因组序列,并在此基础上分析猪HEV与人源HEV的关系。方法设计HEV基因4型通用PCR引物,用逆转录巢式聚合酶链反应法(RT-nPCR)分段扩增猪HEV株CHN-XJ-SW33的全基因组序列;用cDNA末端快速扩增法(RACE)扩增其末端序列;对扩增的目的片段进行克隆测序,并对拼接后的基因组进行序列比对和进化分析。结果除3′poly(A)尾外,CHN-XJ-SW33基因组全长为7 238 nt,由3个开放读码框(ORF1-3)组成,分别编码1 706、674和114个氨基酸。CHN-XJ-SW33全基因组序列与HEV基因1-3型病毒株同源性仅为72.1%~74.9%,而与HEV基因4型病毒株同源性高达82.8%~95.5%,其中与日本人源中国输入型HEV株JKO-ChiSai98C同源性最高,为95.5%。基因进化分析显示,CHN-XJ-SW33属于HEV4a基因亚型。结论猪HEV与人HEV在全基因组核苷酸序列上高度同源,提示基因4型HEV可能由猪传染给人。     

淮安市戊型病毒性肝炎人畜共患性及病毒基因型研究

目的探讨淮安市戊型病毒性肝炎病例与猪之间的联系,为控制HEV在人畜间的传播提供依据。方法在淮安市收集急性戊肝、肝炎未分型病例血液标本193份,同期在屠宰场收集生猪胆囊标本510份,采用Real-time RT-PCR和RT-PCR提取目标核苷酸,测定序列后进行分析。结果所有标本共分离出HEV-4型毒株20株,分4个亚型,HEV-4d型为优势流行毒株亚型;人源与猪源HEV毒株间的同源性为:80.3%～97.7%。结论淮安市戊肝病例与生猪感染的HEV高度同源,生猪是戊肝传播过程中一种重要的动物宿主。