单探针和双探针显色原位杂交法检测乳腺癌HER2基因状态的比较分析

目的 通过对比分析单探针和双探针显色原位杂交(CISH)检测乳腺癌HER2基因状态,评估双探针显色原位杂交试剂盒的临床应用价值.方法 收集129例常规石蜡包埋的乳腺癌组织标本,分别使用单探针和双探针CISH技术,对肿瘤标本的HER2基因状态进行检测,并按照2007年美国临床肿瘤协会及美国病理家协会(ASCO/CAP)标准,计数HER2基因拷贝数或HER2/17号染色体的比值;同时运用免疫组织化学法(IHC)检测了HER2蛋白水平,与经CISH基因检测的结果进行了对比分析.结果 在129例切片中,单探针CISH结果显示有7例(5%)为临界状态,而双探针CISH结果则无一例结果为临界.在其余122例标本中,单探针和双探针CISH的结果同为50例(41%)阴性和72例(59%)阳性,其中双探针CISH对单探针CISH的阴性和阳性结果的吻合率分别为88%(44/50)和92%(66/72),统计分析显示两种方法的结果基本一致(κ=0.80,P<0.05).在两种方法检测结果一致和不一致的标本中,出现17号染色体异倍体的比例分别为38%(42/110)和53%(10/19).在109例IHC检测的HER2结果中,分别有34例(31%)被判读为(阳性),18例(17%)被判读为0～+(阴性)和57例(52%)被判读为(临界).结论 双探针CISH相对单探针而言,是检测乳腺癌HER2基因状态的可靠方法.双探针CISH能进一步明确判断单探针CISH结果判断不明确(临界状态)的HER2基因状态的标本,并提示17号染色体的异倍性可能会对个别乳腺癌HER2状态的解读产生一定的影响.     

显色原位杂交检测乳腺癌HER2基因扩增的应用价值

目的评估显色原位杂交（CISH）技术在检测乳腺癌标本中HER2基因扩增的应用价值。方法分别采用免疫组织化学（IHC）EnVision和CISH两种方法,检测165例乳腺癌中HER2蛋白表达及HER2基因扩增的情况。结果（1）IHC检测HER2蛋白表达阴性者107例,表达阳性1＋者24例,CISH均未检测到HER2基因扩增;（2）IHC检测HER2表达3＋者22例,CISH检测中21例呈现HER2基因的高倍扩增,仅1例呈低倍扩增,HER2基因高倍扩增及其蛋白表达之间的符合率为95．5％;（3）IHC检测HER2表达2＋者12例,CISH检测有3例HER2基因呈高倍扩增,6例呈低倍扩增,3例无扩增。结论CISH在检测HER2基因扩增与IHC检测的结果具有较高的一致性和敏感性,可以作为一种检测乳腺癌HER2基因状况的方法。     

显色原位杂交技术在乳腺癌HER-2/neu原癌基因检测上的应用及意义

对于检测常规甲醛固定的乳腺癌石蜡组织切片中HER-2／neu原癌基因的核苷酸序列技术方法而言,荧光原位杂交法（FISH）一直是公认比较敏感和经典的检测方法。而显色原位杂交法（chromogenic in situ hybridization,CISH）作为一种核酸原位分子杂交技术方法,也可用于常规甲醛固定的乳腺癌石蜡组织切片中的HER-2／neu原癌基因的检测。     

双探针显色和荧光原位杂交法检测乳腺癌HER2基因状态和17号染色体的分析

目的 通过与荧光原位杂交(FISH)比较,评估双探针显色原位杂交(双探针CISH)法在诊断女性乳腺浸润性导管癌HER2基因状态中应用的可靠性,同时探讨17号染色体多倍体对原位杂交诊断HER2基因状态时可能产生的影响.方法 收集146例乳腺癌组织的常规石蜡包埋标本,分别用欧盟(CE)认证的FISH(146例)及CISH(73例)HER2/17号染色体着丝粒(CENl7)双探针试剂盒技术,对肿瘤标本的HER2基因状态进行检测,并按照2007年美国临床肿瘤协会及美国病理家协会(ASCO/CAP)标准分别用计算HER2基因拷贝数和(或)计算HER2/CENl7比值的方法对结果进行分析.结果 在同时进行FISH和双探针CISH检测的73例标本中发现,两种技术对HER2阴性和阳性的诊断符合率分别为91.7%(33/36)和97.4%(37/38),两者的总体符合率为95.9%(70/73);在对146例FISH结果的计数分析中,计数HER2基因拷贝数得出不确定诊断的病例量是计数HER2/CENl7得出不确定诊断病例量的1.6倍(13/8);此外,在FISH和CISH结果中按拷贝数计数为阳性的病例与在按比值计数时却为阴性病例的不吻合率分别为4.8%(3/63)和3.O%(1/33);同时在FISH HER2阳性病例(HER2/CENl7)中多倍体发生率为63.5%(40/63,P=0.002),高于阴性者中多倍体的发生率(37.3%,28/75).结论 双探针CISH技术检测乳腺癌HER2基因状态的结果和FISH技术检测的结果非常一致,提示两种技术临床诊断价值相近,并且同步检测并计数HER2和17号染色体有助于明确HER2基因状态.     

小鼠Brd2基因探针的制备及其在荧光原位杂交实验中的应用

目的:为观察溴结构域包含蛋白2(bromodomain containing protein 2,Brd2)基因在小鼠中枢神经系统的表达与分布,本研究制备了两条地高辛标记的Brd2 cRNA探针。方法:提取小鼠脑组织总RNA,设计两对Brd2引物,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,扩增得到两个Brd2的DNA片段,并将它们分别克隆到pCRⅡ-TOPO载体中。利用体外转录方法合成地高辛标记的cRNA探针,最后通过荧光原位杂交实验分析所标记探针的特异性及杂交效果。结果:本实验成功构建了两个Brd2/pCRⅡ-TOPO质粒,获得了特异性的地高辛标记的Brd2cRNA探针,在荧光原位杂交实验中应用两条探针得到了较好的杂交信号。结论:本实验制备的地高辛标记的cRNA探针可特异地检测Brd2 mRNA,为进一步观察Brd2 mRNA在中枢神经系统的分布及功能研究提供了工具。     

荧光原位杂交检测乳腺癌HER2基因状态

目的 探讨荧光原位杂交（FISH）,与免疫组织化学（IHC）染色（3＋）和（2＋）检测HER2基因状态的结果的一致性、导致两者差异的可能原因及FISH检测HER2基因状态的必要性和可行性。方法 采用PathVysion^TM探针试剂盒,以FISH方法,对28例IHC EnVision法染色分别为（3＋）、（2＋）、（1＋）和阴性（-）的乳腺癌石蜡切片标本进行HER2基因状态的检测。结果 HER2表达（3＋）的12例标本中,10例HER2基L大1扩增,其中2例为17号染色体多体,另2例无扩增的病例均为多体;IHC为（2＋）的10例标本中,7例为HER2基因扩增,其中1例为多体,另3例无扩增病例中2例为多体;IHC为（1＋）的3例标本均无HER2基因扩增,其中1例为多体;IHC（-）的3例标本均无基因扩增,其中1例为多体。结论 IHC是初步筛查HER2状态的首选方法;因IHC（2＋）与FISH检测结果差异较大,所以这类患者应做FISH确诊;IHC（3＋）存在假阳性,主要原因可能是由于17号染色体非整倍体,必要时这类患者也应做FISH。     

乳腺癌组织HER2基因扩增的检测方法

目的:评价高分辨率熔体聚合酶链反应(high-resolution melt polymerase chain reaction,HRM-PCR)检测HER2基因扩增的有效性及其与荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测法的一致性.方法:采用HRM-PCR法检测HER2阴性及阳性细胞株,评估检测方法的有效性;检测98例已行FISH和/或IHC的临床样本,并与FISH和IHC结果进行比较.结果:HRM-PCR检测可以有效区分HER2阴性及阳性细胞株(P<0.05),具有较好的可重复性;检测98例临床样本显示,阴性和阳性样本检测结果差异有统计学意义(0.18±0.14 vs 1.42±0.88,P<0.01),与IHC的一致性为80.33%(kappa=0.6,P<0.01),与FISH的一致性为87.88%(kappa=0.7,P<0.01),结论:HRM-PCR是一种可靠有效的检测HER2基因扩增的方法,与FISH和IHC均有较好的一致性.     

双色银染原位杂交与荧光原位杂交检测胃癌患者HER2基因状态

目的 比较双色银染原位杂交(DSISH)与荧光原位杂交(FISH)两种技术在胃癌HER2检测中的优缺点,评价DSISH用于胃癌患者HER2基因扩增状态检测的可行性.方法 收集2009年1月至3月在四川大学华西医院行根治性手术的原发性胃或胃食管交界处腺癌80例,行全自动免疫组织化学(IHC)染色检测HER2蛋白表达,所有标本行FISH和全自动DSISH检测HER2基因状态,比较不同检测方法之间的符合率.结果 DSISH和FISH初检均有5例失败,经重复检测后结果满意.IHC检测3+的13例中DSISH检测12例、FISH检测11例为HEB2基因扩增;IHC检测2+的6例中DSISH、FISH检测均有1例为基因扩增;IHC检测1+的18例中DSISH、FISH检测均有2例为基因扩增;IHC检测为0的43例中DSISH、FISH检测均无基因扩增.80例原位杂交病例中,仅1例检测结果不一致(DSISH有基因扩增而FISH无基因扩增),两种方法的总体符合率为98.8%(79/80,κ=0.958,P＜0.01).结论 DSISH技术用于胃癌HER2基因检测结果与FISH符合率高.DSISH与FISH检测各有优缺点,DSISH更具有可行性和实际应用价值.

Abstract：

Objective To investigate the advantages and disadvantages of dual-color silverenhanced in-situ hybridization(DSISH)and fluorescence in-situ hybridization(FISH)for determination of HER2 gene status in gastric carcinoma and to evaluate tlle feasibility of DSISH.Methods Eighty cases of primary gastric or gastroesophageal junction adenecarcinomag diagnosed and treated surgically from January to March.2009 at the West China Hospital were enrolled in the study.Automated immunohistochemistry (IHC)staining,FISH and automated DSISH were carried out to detect the HER2 status,respectively,and the concordance ofthe three techniques was then evaluated.Results DSISH and FISH failed initially,but repeated detection Was successful in 5 eases.Gene amplification was detected in 12/13 IHC 3+ cases in DSISH and in 11/13 IHC 3+ cases in FISH.In 6 IHC 2+cages, the amplification rate was both 1/6;in 18 IHC 1+cases.the amplifieation rate was both 2/18.No amplification Was observed in 43 IHC 0 cases.Only one of the 80 cases showed discrepancy.and tIlerefore the overall concordance between FISH and DSISH Wag 98.8%(κ=0.958,P＜0.01).Conclusions DSISH represents a novel approach for the determination of HER2 status in gastric carcinoma, and the overall concordance between DSISH and FISH is excellent.Despite their advantages and disadvantages.DSISH is more feasible and practical for routine application in surgical pathology.     

双色银染原位杂交与荧光原位杂交检测胃癌患者HER2基因状态

Objective To investigate the advantages and disadvantages of dual-color silverenhanced in-situ hybridization(DSISH)and fluorescence in-situ hybridization(FISH)for determination of HER2 gene status in gastric carcinoma and to evaluate tlle feasibility of DSISH.Methods Eighty cases of primary gastric or gastroesophageal junction adenecarcinomag diagnosed and treated surgically from January to March.2009 at the West China Hospital were enrolled in the study.Automated immunohistochemistry (IHC)staining,FISH and automated DSISH were carried out to detect the HER2 status,respectively,and the concordance ofthe three techniques was then evaluated.Results DSISH and FISH failed initially,but repeated detection Was successful in 5 eases.Gene amplification was detected in 12/13 IHC 3+ cases in DSISH and in 11/13 IHC 3+ cases in FISH.In 6 IHC 2+cages, the amplification rate was both 1/6;in 18 IHC 1+cases.the amplifieation rate was both 2/18.No amplification Was observed in 43 IHC 0 cases.Only one of the 80 cases showed discrepancy.and tIlerefore the overall concordance between FISH and DSISH Wag 98.8%(κ=0.958,P＜0.01).Conclusions DSISH represents a novel approach for the determination of HER2 status in gastric carcinoma, and the overall concordance between DSISH and FISH is excellent.Despite their advantages and disadvantages.DSISH is more feasible and practical for routine application in surgical pathology.     

用荧光原位杂交技术检测乳腺癌细胞系第6号染色体长臂缺失

目的 研究１０例乳腺癌细胞系的６号染色体第臂缺失。方法 运用荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）技术,并采用３７个分布于６ｑ１２－６ｑ２７的ＹＡＣ探针和６号染色体着丝粒特异性探针,检测了１０例乳腺癌细胞系的６号染色体长臂。结果 在５例细胞系中发现６ｑ１２－６ｑ２７的大段缺失,１例发现有６ｑ２５－ｑ２７的小段缺失。在含有多个细胞亚群的两侧细胞     

胃癌c-erbB-2基因扩增的荧光原位杂交检测

目的：研究胃癌ｃｅｒｂＢ２ 基因扩增。方法：使用荧光原位杂交技术（ＦＩＳＨ） 检测５５ 例胃癌。结果：胃癌肿瘤区ｃｅｒｂＢ２基因扩增阳性率为３６－４％ 。在胃癌移行区内阳性率为１０－９％ ,在正常粘膜区阳性率为３－６ ％ ,相互比较,三个区域之间差异有高度显著性（ Ｐ＜ ０－０１）。在肠型和弥漫型胃癌,ｃｅｒｂＢ２ 基因扩增阳性率为５１－６％ 和１６－７％ ,两者差异有显著性（ Ｐ＜０－０５）。ｃｅｒｂＢ２ 基因扩增阳性与淋巴结内胃癌转移有明显相关性（ Ｐ＜ ０－０５）。结论：ｃｅｒｂＢ２ 基因扩增与胃癌的发生,发展有明显关联,有助于判断胃癌预后。     

显色原位杂交与免疫组织化学法检测子宫颈癌中HER-2/neu

1987年slamon等首次报道HER-2蛋白过表达与乳腺癌及卵巢癌患者的生存期缩短及近期复发有关.抗HER-2人源化抗体在乳腺癌基因治疗中已广泛应用,显色原位杂交(CISH)在乳腺癌HER-2基因检测方面较为成熟,但在子宫颈病变的研究中报道较少.我们分别采用CISH与免疫组织化学(IHC)检测子宫颈鳞痛组织中HER-2基因扩增和蛋白表达状况,探讨CISH在检测子宫颈癌HER-2基凶扩增中的作用.     

地高辛标记cDNA探针组织及细胞mRNA原位杂交技术

地高辛标记ｃＤＮＡ探针组织及细胞ｍＲＮＡ原位杂交技术＊杜卫东周晓虹马学玲吴浩翟为溶张月娥＊国家自然科学基金重点项目和国家教委博士点专项基金资助课题作者单位：上海医科大学病理学教研室２０００３２（第一作者现工作单位：中国科学院上海生理研究所２０００３１...     

原位杂交HPV DNA检测技术应用及体会

原位杂交技术是新近开展的一项新技术,其原理是采用荧光、生物素、地高辛等标记的探针,依据碱基对互补配对原理,与组织切片、细胞制片等标本中的靶序列特异杂交,经信号放大显色后,镜下观察结果.此方法具有很高的灵敏性和特异性.本文就HPV DNA检测技术在常规实验中的操作体会等问题,总结如下.     

应用YAC探针进行荧光原位杂交检测慢性粒细胞白血病BCR基因重排

为检测慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）中ＢＣＲ基因重排，采用酵母人工染色体（ＹＡＣ）ＤＮＡ的Ｉｎ－ｔｅｒ－Ａｌｕ－ＰＣＲ产物为探针进行荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）研究了１０例ＣＭＬ，其中包括初诊患者２例，ＣＭＬ急变并接受化疗２例，α干扰素治疗２例，自体骨髓移植术（ＡＢＭＴ）后３例和Ｐｈ染色体阴性ＣＭＬ１例。同时进行细胞遗传学和ＲＴ－ＰＣＲ检测。结果：９例ＣＭＬ的４６％～１００％的可分析核型显示ｔ（９；２２）易位，其中携带ｔ（９；２２）细胞最少者为１例自体骨髓移植术后８个月的患者，其６４％的分裂相存在ｔ（９；２２），３６％为正常核型；１例Ｐｈ（－）ＣＭＬ未见ＢＣＲ基因易位，而ＲＴ－ＰＣＲ（＋），提示ＡＢＬ基因片段插入２２ｑ１１，造成隐匿性Ｐｈ染色体。结果表明：应用ＹＡＣ探针进行原位杂交的定位明确。ＦＩＳＨ检测微小残留病（ＭＲＤ）比常规细胞遗传学方法更敏感，而且可以完成ＰＣＲ方法不易进行的定量分析。     

聚合酶链反应掺入生物素探针在细胞原位杂交中的应用

在PCR反应体系中，以Bio－11-dUTP部分代替dTTP，做人类白细胞抗原（HLA）－DQA、DQB、DRB及DPB等位点的聚合酶链反应（PCR）。扩增产物有较高的生物素掺入。以此为生物素标记探针应用于细胞原位杂交检查诸位点的mRNA表达水平，取得了满意的结果。此方法简化了基因探针的制备，可应用于任意目的mRNA和DNA的分子杂交。一、材料和方法1．模板DNA的制备：随机取正常人血标本sml，1／10体积的2％乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，经快速法分离染色体DNA「‘’ZHLA－DQA位点的PCR掺入探针的制备：依文献「Zj进行。同时以未掺入…     

实时荧光PCR法检测HER2基因扩增方法的建立

目的探讨应用双标准曲线的实时荧光PCR法检测原癌基因人类表皮生长因子受体2（HER2）基因扩增在临床乳腺癌诊治中的可行性。方法收集500例乳腺癌术后新鲜组织标本,抽提组织DNA进行实时荧光PCR检测,采用双标准曲线法定量,通过计算目的基因浓度和内标基因浓度的比值来判断HER2基因的扩增情况。选择灵敏度和特异度均较高的荧光原位杂交方法作为对照方法。结果检测阳性标本72例,阴性样本419例。该方法检测的灵敏度为85.9%,特异度为98.79%,准确度为96.74。与荧光原位杂交法（FISH）检测结果相比,二者具有较好的一致性。结论双标准曲线的实时荧光PCR法用于检测HER2基因扩增相对准确可靠,有较好的临床应用前景。     

双色荧光原位杂交检测c-erbB-2基因扩增及应用

ｃｅｒｂＢ2(ＨＥＲ2ｎｅｕ)癌基因编码一种跨膜酪氨酸激酶受体蛋白,该蛋白与表皮生长因子受体家族有广泛的同源性。有研究表明,ｃｅｒｂＢ2蛋白与某些实体肿瘤细胞间的信号传递有关。ｃｅｒｂＢ2基因的过度表达可影响细胞受体的激酶活性,从而影响或改变细胞的生长、增殖特性。经研究发现,ｃｅｒｂＢ2原癌基因的过度扩增或蛋白异常表达与乳腺癌、胃癌等实体瘤的发生、发展及预后密切相关,而且具有ｃｅｒｂＢ2基因过度表达的乳腺癌可对一种人源化的重组抗ｃｅｒｂＢ2抗体(Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ)有较好的治疗反应[1,2]。因此,ｃｅｒｂＢ2基因过…