TOLL样受体4对小鼠脑缺血再灌注损伤中的保护作用

目的探讨TOLL样受体4(TLR4)在脑缺血再灌注中的保护作用。方法C3H/HeJ小鼠16只采用线栓法制作TLR4先天缺损大脑中动脉缺血再灌注模型(C3H/HeJ组),以C3H/HeN小鼠16只作对照(C3H/HeN组),观察缺血6h及再灌注24h时,两组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、脑梗死体积及血清TNF-α水平。光镜及电镜观察两者缺血再灌注脑组织损伤情况。结果与C3H/HeN组比较,再灌注24h时,C3H/HeJ组小鼠的神经功能缺损评分明显减小(P<0.05);脑含水量明显降低,脑梗死体积显著缩小(P<0.01);血清中TNF-α浓度明显降低(P<0.05);脑缺血皮质区的神经细胞超微结构改变轻于C3H/HeN组小鼠。结论C3H/HeJ小鼠脑缺血再灌注损伤明显减轻,TLR4介导了脑缺血再灌注损伤。其机制可能与炎性细胞因子减少有关。     

乙醛脱氢酶?2?基因多态性与对乙酰氨基酚所致肝损伤关系的研究

目的探讨乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性与对乙酰氨基酚(APAP)药物所致肝功能异常的相关性。方法采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建ALDH2基因敲除小鼠模型, 将获得的杂合子型小鼠与异性杂合子交配, 提取子代小鼠鼠尾基因组DNA, 采用聚合酶链反应(PCR)方法进行ALDH2基因型鉴定;进一步采用APAP在野生型和ALDH2基因敲除小鼠中诱导急性药物性肝损伤模型, 采集小鼠血液和肝脏组织行肝功能指标检测及苏木素-伊红染色、F4/80免疫组织化学检测等。组间均数比较采用单因素方差分析、LSD-t检验方法进行两两比较。结果 ALDH2基因敲除小鼠成功繁殖, 子代小鼠基因型分别为野生型(ALDH2+/+)、杂合突变型(ALDH2+/-)、纯合突变型(ALDH2-/-)。APAP造模后的生化和组织学实验结果表明:空白对照组的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBil)水平无明显升高;与空白对照组相比, APAP实验组的ALT、AST、ALP和TBil水平均显著升高(P值均<0.05), 其中突变组的ALT(P ?=?0.004...     

小鼠脑缺血/再灌注损伤皮质区超氧化物歧化酶、丙二醛、活性氧表达与细胞凋亡的关系及姜黄素的干预作用

目的探讨姜黄素对小鼠皮质区缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响及与超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)表达的关系。方法采用线栓法阻塞小鼠大脑中动脉(MCAO),建立小鼠局灶性脑缺血/再灌注实验模型,90只昆明小鼠被随机分为假手术组(S组)、缺血/再灌注组(I组)和姜黄素(缺血前30 min腹腔给予10、20、40 mg/kg)组(C1、C2和C3组),每组18只。各组于缺血2 h分为再灌24、48、72 h等三个亚组。在预定时间点观察小鼠神经功能缺失的评分;TTC染色测定脑梗死体积;TUNEL法检测细胞凋亡变化。测定各组小鼠血浆中SOD活性,MDA、ROS含量。结果 24 h神经功能评分及脑梗死体积I组明显高于S组,C1、C2、C3组神经学评分及脑梗死体积低于I组(P0.05)。SOD活力I组与S组相比较明显下降。C1、C2、C3组与I组相比SOD活力升高(P0.05)。ROS、MDA含量I组与S组相比较明显上升,C1、C2、C3组与I组相比ROS、MDA含量明显下降(P0.05)。结论姜黄素对脑缺血再灌注氧自由基损伤具有保护作用,其抗氧化作用机制可能与调节相关凋亡基因表达减轻细胞凋亡有关。     

神经型一氧化氮合酶在小鼠心肌缺血预处理中的作用

目的 应用神经型一氧化氮合酶(nNOS)基因敲除小鼠和nNOS抑制剂,探讨nNOS对心肌缺血预处理后心肌细胞凋亡的影响.方法 实验分为野生型缺血再灌注组(WT IR)、野生型缺血预处理组(WT IP)、野生型缺血预处理L-VNIO处理组(WT IP+ L-VNIO)、基因敲除鼠缺血再灌注组(KO IR)和基因敲除鼠缺血预处理组(KO IP).采用冠状动脉左前降支结扎法建立小鼠缺血再灌注损伤模型,缺血再灌注组缺血30 min再灌注3h,缺血预处理组分别经缺血5 min再灌注5 min连续三个循环后,再缺血30 min再灌注3h,观察TUNEL染色和Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3的活性变化,并用Western Blot法观察Bax、Bcl-2和Fas蛋白的表达情况.结果 与WT IR组相比,WT IP组小鼠TUNEL阳性细胞数目减少,Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活性降低,Bax和Fas蛋白表达显著降低,Bcl-2表达显著增加(P＜0.05).而在KO IP组,与KO IR组相比,TUNEL阳性细胞数目和Caspase活性显著增加,Bax和Fas表达显著增高,Bcl-2表达显著降低(P＜0.05).结论 nNOS在心肌缺血预处理时发挥抑制心肌细胞凋亡的作用.     

大鼠局灶脑缺血再灌注后雌二醇的保护作用及其对GDNF表达的影响

目的探讨大鼠局灶脑缺血再灌注后雌二醇的保护作用及其对胶质细胞源性神经生长因子（GDNF）表达的影响。方法用线栓法制作脑缺血一再灌注损伤模型。缺血2h再灌注6、12、24、48h后断头取脑，应用TTC染色和免疫组化方法，观察脑梗死体积、神经行为学改变及GDNF的表达。结果与手术对照组相比，雌二醇组神经行为学分值显著降低，脑梗死体积亦显著缩小，在损伤区皮层，雌二醇组GDNF表达明显高于手术对照组，且在再灌注24h最明显。结论脑缺血．再灌注损伤后雌二醇具有明确的保护作用，可以使GDNF表达增加，雌二醇可能通过上调GDNF的表达而发挥其作用。     

前列腺素E2激活YAP正反馈回路促进小鼠结肠炎后结肠再生及癌变的分子机制

目的研究前列腺素(PGE2)激活Yes信号通路相关蛋白(YAP)正反馈回路促进小鼠结肠炎后结肠再生及癌变的分子机制。方法将DLD1结肠癌细胞株或基因稳定敲除细胞株,在有/无信号通路特异性抑制剂的条件下,采用重组PGE2或PBS孵育,采用免疫印迹法、免疫荧光法、定量PCR、转录和增殖法进行比较分析。采用DSS法诱导C57/BL6小鼠结肠炎模型(对照鼠),同时构建羟基前列腺素脱氢酶基因敲除鼠(15-PGFH-KO)、YAP基因敲除鼠(YAP-KO)、和双基因敲除(DKO)小鼠,采用吲哚美辛抑制PGE2合成信号通路,检测下游基因表达及结肠再生和癌变功能。结果 PGE2处理结肠癌细胞株导致YAP mRNA转录及蛋白表达水平升高,15-PGDH-KO组鼠结肠组织中PGE2的表达水平较对照敲除细胞(WT)组增长了2.5倍,吲哚美辛处理后15-PGDH-KO组鼠YAP的表达水平及下游靶基因水平均较WT鼠显著升高。吲哚美辛处理显著降低PG过氧化物合成酶(COX)-2及PGE受体4基因(EP4)的转录水平,转染YAP持续激活突变体(5SA)可显著增加COX-2和EP4的蛋白表达水平和转录水平,敲除YAP后上述现象消失。对照鼠口服葡聚糖硫酸钠(DSS)导致结肠炎,注射PGE2促进小鼠发生结肠再生;YAP敲除鼠并未发生结肠再生,同时口服DSS后迅速死亡;15-PGFH敲除鼠结肠组织再生比对照鼠更快,且体重恢复更快、结肠长度和结肠炎组织学得分更高。上述现象可以被注射吲哚美辛逆转。YAP敲除鼠或15-PGFH敲除鼠诱导结肠炎后未发现自发性肿瘤,YAP/15-PGDH双基因敲除鼠出现息肉并最终发展成原位癌。口服吲哚美辛可有效防止双敲除鼠自发性肿瘤的形成。结论 PGE2可增加YAP的表达水平和转录活性,从而促进COX-2及EP4的表达水平增加,这一信号回路可促进扩散的结肠癌细胞系增殖和结肠炎小鼠结肠组织再生,持续性激活进一步可导致息肉和小鼠结肠肿瘤的形成。     

白黎芦醇对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨白黎芦醇对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法随机选取64只SD大鼠分为假手术组、脑缺血再灌注组、低剂量组及高剂量组,于缺血2 h再灌注24 h进行神经功能缺损评分,并测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量、脑梗死体积及脑含水量。结果四组的神经功能缺损评分、脑梗死体积及脑组织含水量由高到低排列为脑缺血再灌注组、低剂量组、高剂量组、假手术组(P<0.05);四组的大脑皮质、海马及血清中的MDA含量由高到低排列为脑缺血再灌注组、低剂量组、高剂量组、假手术组,SOD含量由低到高排列为脑缺血再灌注组、低剂量组、高剂量组、假手术组(P<0.05)。结论 白藜芦醇对脑组织再灌注损伤具有保护作用,可能的机制是清除自由基从而减少氧化损伤。     

托吡酯对脑缺血再灌注后脑保护作用的研究

目的 探讨托吡酯对大鼠高血压急性脑缺血再灌注后的脑保护作用。 方法 将25只大鼠制成高血压模型,喂养2个月。随机分为3组:即托吡酯治疗组(9只)、缺血再灌注组(9只)和假手术组(7只)。将大鼠用线栓法制成大脑中动脉闭塞模型,缺血时间为2 h,将线栓拔除即形成缺血-再灌注模型。假手术组末置入线栓。再灌注后6 h,将大鼠快速断头取脑,经TTC染色,用计算机病理图像分析仪测量鼠脑梗死体积及鼠脑总体积,并将两者的比值作为脑梗死体积比。结果 托吡酯治疗组的脑梗死体积比为0.1087±0.0426,明显小于缺血-再灌注组脑梗死体积比0.286 3±0.064 7(P<0.05)。假手术组未见梗死灶。结论 托吡酯使大鼠高血压脑缺血-再灌注后的脑梗死体积减小,对脑缺血-再灌注损伤的脑组织有保护作用。     

小檗碱对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织Bcl-2、Caspase-3表达的影响

目的 探讨小檗碱对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能评分及脑梗死体积,以及Bcl--2、Caspase-3表达的影响.方法 线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,大鼠随机分为模型组、小檗碱低、高剂量组(50,150 mg·kg-1·d-1)、假手术组(持续给药7 d,每日1次灌胃给药),脑缺血2 h再灌注24 h;分别在再灌注后3和24 h进行神经行为评分;并再灌注24 h后断头取脑.采用连续切片免疫组化技术检测脑组织中Bcl-2、Caspase-3表达的部位及数量.结果 小檗碱组神经功能评分明显低于手术对照组.脑梗死体积较模型组显著缩小.小檗碱组大鼠额顶部皮质Bcl-2、Caspase-3免疫阳性细胞数与模型组相比差异明显(P<0.05);同时小檗碱高剂量组大鼠额顶部皮质Bcl-2、Caspase-3免疫阳性细胞数与低剂量组比较差异显著(P<0.05).结论 小檗碱能明显减轻脑缺血再灌注损伤所造成的行为障碍,缩小梗死体积.可能通过上调皮质Bcl-2的表达、抑制Caspase-3的表达发挥脑保护作用.     

银杏叶对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡、bcl-2和Bax表达的影响

目的分析银杏叶对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡、bcl-2和Bax表达的影响。方法选取40只健康合格的雌性SD大鼠,分为假手术组、模型组、低剂量组、高剂量组。脑缺血再灌注24 h,分别对4组大鼠的脑梗死体积百分比、凋亡细胞数、bcl-2、Bax及bcl-2/Bax进行测定。结果模型组大鼠的脑梗死无论在体积百分比、凋亡细胞数都明显高于假手术组,差异具有统计学意义(P0.05);低剂量组、高剂量组梗死体积的百分比和凋亡细胞数明显少于模型组,且高剂量组大鼠脑梗死体积百分比、凋亡细胞数较低剂量组的大鼠降低显著(P0.05);4组大鼠脑缺血再灌注24 h后,模型组bcl-2、Bax显著高于假手术组(P0.05),低剂量组大鼠bcl-2、bcl-2/Bax高于模型组大鼠而Bax低于模型组大鼠,高剂量组大鼠bcl-2、bcl-2/Bax高于模型组大鼠,而Bax低于模型组大鼠,且bcl-2/Bax高于低剂量组(P0.05)。结论银杏叶对脑缺血再灌注具有抑制神经细胞凋亡、减少脑梗死体积作用,且高剂量效果显著,增加脑缺血再灌注24 h后bcl-2的表达,降低Bax表达,对脑缺血再灌注损伤起到保护作用,但是对于bcl-2和Bax表达与剂量无关。     

Suppression of prostaglandin E2 by malaria parasite products and antipyretics promotes overproduction of tumor necrosis factor-alpha: association with the pathogenesis of childhood malarial anemia

Cytokines and effector molecules are important immunoregulatory molecules in human malaria. Tumor necrosis factor (TNF)-alpha limits malaria parasitemia but also promotes pathogenesis at high concentrations, whereas prostaglandin E2 (PGE2) inhibits TNF-alpha production and is reduced in childhood malaria, at least in part, through suppression of cyclooxygenase (COX)-2 following the ingestion of Plasmodium falciparum hemozoin (pfHz; malarial pigment) by peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). Although molecular interactions between TNF-alpha and PGE2 are largely unexplored in human malaria, results presented here show that pfHz-induced suppression of PBMC COX-2 gene products induces overproduction of TNF-alpha. Moreover, addition of exogenous PGE2 to pfHz-treated PBMCs dose-dependently decreased TNF-alpha production, whereas experimental COX inhibitors and antipyretics used during human malaria generated increased TNF-alpha production. Healthy, malaria-exposed children had elevated levels of circulating bicyclo-PGE2/TNF-alpha, compared with children with malarial anemia (P<.01), with systemic bicyclo-PGE2 and TNF-alpha significantly associated with hemoglobin concentrations (r=0.745; P<.01). The results of the present study illustrate that pfHz-induced suppression of PGE2 promotes overproduction of TNF-alpha, which is associated with enhanced malarial anemia.     

Microsomal prostaglandin E synthase-1 is a critical factor of stroke-reperfusion injury

Although augmented prostaglandin E(2) (PGE(2)) synthesis and accumulation have been demonstrated in the lesion sites of rodent transient focal ischemia models, the role of PGE(2) in neuronal survival has been controversial, showing both protective and toxic effects. Here we demonstrate the induction of microsomal PGE synthase 1 (mPGES-1), an inducible terminal enzyme for PGE(2) synthesis, in neurons, microglia, and endothelial cells in the cerebral cortex after transient focal ischemia. In mPGES-1 knockout (KO) mice, in which the postischemic PGE(2) production in the cortex was completely absent, the infarction, edema, apoptotic cell death, and caspase-3 activation in the cortex after ischemia were all reduced compared with those in wild-type (WT) mice. Furthermore, the behavioral neurological dysfunctions observed after ischemia in WT mice were significantly ameliorated in KO mice. The ameliorated symptoms observed in KO mice after ischemia were reversed to almost the same severity as WT mice by intracerebroventricular injection of PGE(2) into KO mice. Our observations suggest that mPGES-1 may be a critical determinant of postischemic neurological dysfunctions and a valuable therapeutic target for treatment of human stroke.     

Reduced SERCA2a converts sub-lethal myocardial injury to infarction and affects postischemic functional recovery

The goal of the present study was to assess how reduced SERCA2a expression affects in vivo myocardial ischemia/reperfusion (I/R) injury. We specifically wanted to determine to what extent hearts with reduced SERCA2a levels are susceptible to in vivo I/R injury. Therefore, we examined the effects of different ischemic periods on post-ischemic myocardial injury in wild-type (WT) and SERCA2a heterozygous knockout (SERCA2a^+/−) mice expressing lower levels of SERCA2a pump in vivo. Following 20-min ischemia and 48-hour reperfusion, SERCA2a^+/− mice developed significant myocardial infarction (MI) compared to negligible infarction in WT mice (14 ± 3% vs. 3 ± 1%, P < 0.01); whereas following 30-min ischemia, the infarction was significantly larger in SERCA2a^+/− mice compared to WT mice (49 ± 5% vs. 37 ± 3%, P < 0.05). Further, echocardiographic analysis revealed worsened postischemic contractile function in SERCA2a^+/− mice compared to WT mice. Thus, these findings demonstrate that maintaining optimal SERCA2a function is critical for myocardial protection from I/R injury and postischemic functional recovery.     

Caveolin-1 deficiency increases cerebral ischemic injury

Caveolins (Cav), the principal structural proteins of the caveolar domains, have been implicated in the pathogenesis of ischemic injury. Indeed, changes in caveolin expression and localization have been reported in renal and myocardial ischemia. Genetic ablation of the Cav-1 gene in mice was further shown to increase the extent of ischemic injury in a model of hindlimb ischemia. However, the role of Cav-1 in the pathogenesis of cerebral ischemia remains unknown. Immunoblot and immunofluorescence analyses of rat brains subjected to middle cerebral artery occlusion revealed marked increases in endothelial Cav-1 and Cav-2 protein levels. To directly assess the functional role of caveolins in the pathogenesis of cerebral ischemic injury, we next investigated the effects of cerebral ischemia in caveolin knockout (KO) mice. Interestingly, Cav-1 KO mice showed a marked increase of cerebral volume of infarction, as compared with wild-type and Cav-2 KO mice. Immunofluorescence analyses showed an increased number of proliferating endothelial cells in wild-type ischemic brains, as compared with Cav-1 KO ischemic brains. Immunoblot analyses of wild-type ischemic brains showed an increase in endothelial nitric oxide synthase protein levels. Conversely, the protein levels of endothelial nitric oxide synthase remained unchanged in Cav-1 KO ischemic brains. TUNEL analysis also showed increased apoptotic cell death in Cav-1 KO ischemic brains, as compared with wild-type ischemic brains. Our findings indicate cerebral ischemia induces a marked increase in endothelial Cav-1 and Cav-2 protein levels. Importantly, genetic ablation of the Cav-1 gene in mice results in increased cerebral volume of infarction. Mechanistically, Cav-1 KO ischemic brains showed impaired angiogenesis and increased apoptotic cell death.     

急性心肌梗塞发生中肿瘤坏死因子的作用探讨

本文观察了22例AMI患者及免心便模型血浆中TNF的含量变化，以研究TNF对心肌梗塞坏死面积的影响。结果发现：（1）AMI患者心肌梗塞早期血浆TNFα迅速升高，高峰在胸痛发作后4小时，显著高于正常对照组（P＜0．001），以后逐渐下降，48小时与正常对照组比较无差异（P＞0．05）。（2）在免心梗模型中，用TNF单克隆抗体中和血浆中的TNF后，坏死区占缺血区和坏死区占左心室的体积百分比ATM组显著低于AMI组（P＜0．01）。提示：TNFα在AMI发生中起重要作用，TNFα单克隆抗体可显著减少心肌梗塞范围。     

辛伐他汀对大鼠局灶性脑缺血的线粒体保护作用

目的：探讨辛伐他汀对局部脑缺血损伤大鼠的保护作用及其线粒体机制。方法：96只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和辛伐他汀处理组，每组32只。建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，观察大鼠神经功能、梗死体积、脑组织线粒体超微结构的改变；检测线粒体细胞色素c氧化酶（COX）、琥珀酸脱氢酶（SDH）活性，Ca^2＋含量，以及血清降钙素基因相关肽（CGRP）含量。结果：与假手术组相比较，缺血再灌注组各项指标均有显著改变；与缺血再灌注组比较，辛伐他汀能明显提高脑缺血大鼠的神经功能评分（P〈0．01），缩小梗死体积（P〈0．01），改善脑组织线粒体结构，并提高脑组织线粒体SDH活性（P〈0．05），提高COX活性（P〈0．01），降低脑组织线粒体Ca^2＋的含量（P〈0．01），提高血清CGRP水平（P〈0．05）。结论：辛伐他汀可能通过其抗氧化效应，提高脑组织线粒体SDH、COX活性及血清CGRP水平，减轻钙超载，缩小梗死体积，改善神经功能，从而对大鼠局灶性脑缺血起保护作用。     

粉防己碱对大鼠顿抑心肌脂质过氧化的作用

本实验探讨了粉防已碱(Tetrandrine,Tet)对心肌顿抑(MS)时心肌丙二醛(MDA)含量的影响.结果:对照组MDA为116.3±11.2nmol/g蛋白,心肌缺血15min时MDA含量仅轻度升高(P>0.05),而缺血15min+再灌注2h(MS)时则增加 2.4倍(P<0.01).心肌缺血前20min分别腹腔内给予Tet 64.2和96.3μmol/kg能显著减轻MS时MDA含量的升高,改善心功能.左室dp/dt_(max)与心肌MDA含量呈明显负相关(r=-0.89,P<0.01).结果表明:心肌脂质过氧化增强与MS的发生有关,Tet通过减轻心肌脂质过氧化对MS具有保护作用.     

心电图运动试验对急性心肌梗塞后患者残余心肌缺血的评价

５２例急性心肌梗塞后２～１２周患者进行次极量蹬车心电图运动试验，心肌缺血发生率为４４．２％。与冠状动脉造影对比，多支病变者阳性率高于单支病变（Ｐ＜０．０１）；与运动２０１铊心肌显像对比，前者阳性率较低（Ｐ＜０．０１）；心电图运动试验中非梗塞区心肌缺血组阳性率高于梗塞周围缺血组（Ｐ＜０．０２５）；ＳＴ段抬高组左室射血分数低于ＳＴ段正常或压低组（Ｐ＜０．０１）。心电图运动试验对诊断梗塞后残余心肌缺血，特别是非梗塞区心肌缺血有一定价值，运动中ＳＴ段抬高可能预示较差的心功能。