二苯乙烯苷抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的机制研究

目的 建立PDGF-BB诱导的原代大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary vascular smooth muscle cells,PASMCs)增殖的细胞模型,并探讨二苯乙烯苷(2,3,5,4-tetrahydroxyl diphenylethylene-2-o-glucoside,TSG)对PASMCs增殖的影响及其机制,为肺血管重构防治寻找新药物。方法 采用酶消化法分离培养大鼠原代PASMCs,通过20ng/ml PDGF-BB诱导PASMCs增殖建立细胞模型,采用1~100μmol/L TSG干预PDGF-BB诱导的PASMCs增殖,通过CCK-8检测PASMCs增殖及TSG的细胞毒作用,BRDU检测DNA的合成,流式细胞仪分析细胞周期,实时定量PCR(RT-PCR)检测CyclinD1、CyclinE、CDK2/4/6 mRNA的表达,Western blot法检测总的和磷酸化AKT/GSK3β的表达。结果 CCK-8检测结果表明TSG抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖及DNA合成具有浓度依赖性,并且实验浓度的TSG对PASMCs无明显毒性不良反应;流式细胞仪分析结果表明TSG能够阻滞细胞周期于G₀/G₁~S期,RT-PCR结果表明TSG能够抑制CyclinD1、CyclinE、CDK2/4/6 mRNA的表达;Western blot法检测结果表明TSG能够抑制AKT/GSK3β活化。结论 TSG通过阻滞细胞周期于G₀/G₁~S抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖。TSG抑制PASMCs增殖与抑制AKT/GSK3β信号通路的活化有关。     

原代大鼠肺动脉平滑肌细胞的提取和鉴定以及缺氧对其增殖的影响

目的提取SD大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）并原代培养,为研究肺血管疾病提供体外模型,研究缺氧对大鼠PASMCs增殖的影响。方法组织贴壁法分离大鼠PASMCs,光镜观察细胞形态、透射电镜、α肌动蛋白（α-SM-actin）细胞免疫化学和细胞免疫荧光法进行鉴定。原代培养的PASMCs分别于常氧和/或低氧下培养2、6、12、24及48 h,用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和增殖细胞核抗原（PCNA）细胞免疫化学法检测细胞增殖情况。结果光镜下PASMCs细胞为长梭形,呈典型的＂峰-谷＂状结构。免疫学检测显示胞浆被染成棕黄色,阳性率达96%以上。透射电镜下细胞呈长梭形,胞浆内有密斑、密体和大量肌丝,细胞器较少。MTT检测结果示各时间点缺氧组PASMCs吸光度（A值）均高于相对应的常氧组;与常氧组比较,低氧组A值在12 h时开始增加（P〈0.05）,24 h时增加最显著（P〈0.01）。与缺氧2 h组比较,A值在缺氧12 h开始增高（P〈0.05）,缺氧24 h增高最显著（P〈0.01）,而缺氧48 h与缺氧24 h基本一致。PCNA免疫学结果与MTT结果基本一致。结论用组织块贴壁法提取PASMCs,简单易行,且能得到纯度高、稳定生长的PASMCs。缺氧可以促进PASMCs的增殖。     

跨膜蛋白16F对阿尔茨海默病细胞模型铁死亡的调控作用

目的 探讨跨膜蛋白16F (TMEM16F)对β淀粉样蛋白（Aβ25-35）诱导的阿尔茨海默病（AD）细胞模型铁死亡的影响。方法 将SH-SY5Y细胞分为对照组、模型组、siRNA阴性对照组（siRNA-nc组）、siRNA-TMEM16F转染组（siRNA-TMEM16F组）。采用CCK-8检测Aβ25-35对SH-SY5Y细胞存活率的影响,Western blotting检测各组TMEM16F、AD相关指标（Aβ、p-Tau）、铁死亡相关蛋白（ACSL4、GPX4、Fpn1）的表达情况,免疫荧光法检测各组ACSL4表达情况,荧光探针法检测各组活性氧（ROS）水平。结果Aβ25-35≥20μmol/L作用≥12 h时对细胞有显著损伤作用。与对照组相比,模型组中TMEM16F、Aβ、p-Tau、ACSL4以及ROS水平显著增高,而GPX4、Fpn1水平显著降低（P <0.05）;沉默TMEM16F后,Aβ、p-Tau、ACSL4及ROS表达受到抑制,而GPX4、Fpn1表达水平上升（P <0.05）。结论 沉默TMEM16F能够抑制Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞发生...     

AMPK激动剂AICAR通过阻滞细胞周期于G0/G1期抑制肺动脉平滑肌细胞增殖

目的 建立PDGF-BB诱导的原代大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary vascular smooth muscle cells,PASMCs)的增殖细胞模型,通过AMPK激动剂AICAR干预,探讨AICAR对PASMCs细胞周期和增殖的影响及其机制,为肺血管重构防治寻找靶点。方法 通过20ng/ml PDGF-BB刺激诱导PASMCs增殖建立细胞模型,采用AICAR(0.5mmol/L)干预PDGF-BB诱导的PASMCs增殖,Western blot法检测总的和磷酸化的AMPK, CCK-8检测PASMCs增殖,流式细胞仪分析细胞周期,实时定量PCR(RT-PCR)检测cyclinD1、cyclinE、CDK2/4/6 mRNA的表达。结果 Western blot法检测表明AICAR可以活化AMPK,CCK-8检测结果表明AICAR能够抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖;流式细胞仪检测结果表明AICAR能够抑制细胞周期于G₀/G₁期,RT-PCR结果表明AICAR可以抑制cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK4和CDK6的mRNA的表达。结论 AICAR通过抑制cyclinD1、cyclinE、CDK2/4/6 的mRNA表达阻滞细胞周期于G₀/G₁~S期,抑制PASMCs增殖。     

Aβ肽损伤Alzheimer病细胞模型的建立及Cox-2的表达

目的: 研究以β淀粉样蛋白(Aβ25～ 35) 损伤原代培养海马神经元建立Alzheimer病细胞模型的方法及Cox-2在模型细胞中的表达。 方法: 以原代培养的SD 大鼠海马神经元为研究对象,以不同浓度Aβ25～ 35造海马神经元损伤模型,通过四唑盐(MTT ) 比色试验检测测定细胞存活率,免疫细胞化学法测定Cox-2的表达。 结果: Aβ25～ 35在终浓度在 5μmol/L, 10μmol/L, 20μmol/L 时神经元形态有明显的变化,细胞存活率明显下降,Cox-2的表达增加,与对照组相比较有显著性差异(P < 0. 01)。结论: Aβ25～ 35诱导了原代培养海马神经元变性、死亡, 使Cox-2的表达增加。Cox-2的异常高表达可能介导了神经元的损伤。     

姜黄素抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖的作用

目的 研究姜黄素对气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖的作用.方法 体外培养大鼠原代ASMCs.CCK-8法检测血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)和PDGF加姜黄素处理的ASMCs A150的光密度值,以观察PDGF诱导的增殖和姜黄素的抗增殖作用.Western blotting 检测ERK1/2蛋白的表达水平.结果 与对照组(1.04±0.12)比较,CCK-8法检测给予PDGF 2 d后,10ng/mL PDGF组(1.16±0.14)和50 ng/mL PDGF组(1.30±0.15)的A150的光密度值均显著增加.P＜0.01.给予姜黄素处理12、24和36 h后,与对照组比较,11.25μmol/L组(21.57%、43.55%和65.99%)、16.88μmol/L组(39.64%、57.44%和77.80%)和25.3μmol/L组(44.50%、53.68%和92.68%)的细胞平均抑制率均增加显著,P＜0.05.姜黄素(25μmol/L)加PDGF(25 ng/mL)处理20、40和60 min后ERK1/2蛋白表达水平均显著降低.结论 姜黄素对增殖的ASMCs有抑制作用,可能与抑制了ERK1/2的信号通路活化有关.     

原花青素对人牙髓干细胞的增殖及成骨分化作用的研究

目的 探讨原花青素(PAC)对人牙髓干细胞(hDP-SCs)增殖及成骨分化能力的影响.方法 改良组织块消化法分离培养hDPSCs,流式细胞术鉴定细胞表型,诱导染色鉴定分化潜能.不同浓度的PAC(0、4、8、16、32 μmol/L)刺激hDPSCs后,通过CCK-8法检测hDPSCs的增殖,细胞骨架染色检测hDPSCs的细胞形态,碱性磷酸酶(ALP)活性检测hDPSCs的ALP活性,荧光定量PCR(q-PCR)检测成骨相关基因核心转录因子2 (Runx-2)、骨形成蛋白2(Bmp-2)和Ⅰ型胶原(Col-1)的mRNA表达水平.结果 体外成功培养hDPSCs并进行鉴定;CCK-8检测和细胞骨架染色结果显示,0～16 μmol/L PAC对hDPSCs形态和增殖没有影响,32μmol/L PAC对hDPSCs增殖有抑制作用;ALP染色和定量检测均显示8 μmol/L PAC组ALP活性较对照组(PAC 0μmol/L)高;q-PCR结果显示,与对照组相比,8μmol/L PAC诱导7d后,成骨相关基因Runx-2、Bmp-2、Col-1的表达均升高.结论 PAC对hDPSCs的成骨分化有促进作用.     

Aβ1-42诱导下大鼠海马细胞胰岛素受体表达的变化

目的 检测大鼠海马细胞在Aβ1-42诱导下胰岛素受体表达水平的变化,从而在受体水平探讨中枢胰岛素信号紊乩及阿尔茨海默病发病的分子机制.方法 体外培养原代海马神经细胞,经不同浓度Aβ1-42处理,流式细胞术检测细胞凋亡,实时定量PCR和Western印迹法检测胰岛素受体的表达.结果 原代培养的细胞在第7天时发育成熟,鉴定为海马神经细胞;经Aβ1-42(0～150μmol/L)处理后,30 μmol/L以上处理组的早期凋亡率(32.4%,36.1%,51.0%,53.6%)较对照组(13.4%)呈浓度依赖型增高.PCR结果显示,30 μmol/L(2.56±0.19)和60 μmol/L(3.44±0.23)处理组的胰岛素受体水平较对照组(设为1)明显增高(P＜0.01),100 μmol/L组(0.74±0.15)则较对照组降低(P＜0.01).Western结果与PCR结果趋势相同,30和60 μmol/L处理组的蛋白水平为1.27±0.13,1.82±0.10(P＜0.01),100 μmol/L组为0.82±0.08(P＜0.05).结论 Aβ1-42诱导大鼠海马细胞胰岛素受体的表达发生改变,致使其出现功能缺陷,提示可能为中枢胰岛素抵抗的原因.     

同源盒基因10调控胰岛素样生长因子结合蛋白3与肠癌细胞5-氟尿嘧啶抵抗的关系研究

目的:研究同源盒基因10(HOXD10)调控胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)与肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-Fu)抵抗的关系。方法:原代肠癌细胞SW480敲减HOXD10,5-Fu耐药株细胞过表达HOXD10及敲减IGFBP3。CCK-8检测细胞增殖活性,细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,实时荧光定量PCR(qPCR)及免疫蛋白印迹(WB)检测HOXD10及IGFBP3表达水平。结果:耐药株在各5-Fu浓度下(5、10、20μg/ml)的增殖活性,与0μg/ml的5-Fu增殖活性比较无统计学差异(均P>0.05);而原代SW480细胞在5μg/ml的增殖活性出现下降(P<0.01)。耐药细胞组HOXD10的相对表达倍数(0.51±0.096)与原代细胞组(1.00±0.091)比较下调,而耐药细胞组的IGFBP3相对表达倍数(4.21±0.32)显著高于原代细胞组(1.00±0.22),WB也证实了耐药细胞组较原代肠癌细胞组有较低的HOXD10和更高的IGFBP3表达水平。在原代细胞组中敲减HOXD10、IGFBP3的表达水平增高;而在耐药细胞组中过表达HOXD1...     

PDGF-BB诱导肺动脉平滑肌细胞表型转换时细胞骨架的变化

目的 研究血小板衍生生长因子（PDGF-BB）诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）表型转换时细胞骨架构象的改变，探讨PASMCs表型转换的机制。 方法 原代培养并鉴定SD大鼠PASMCs，将PASMCs分为对照组（细胞不加诱导剂培养24 h）、实验组（细胞用PDGF-BB 10 ng/mL诱导培养24 h）；实时荧光定量PCR（RT-qPCR）及Western blot检测细胞表型转化标志基因[α-肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌22α蛋白（SM22α）]mRNA及相关蛋白的表达；免疫荧光法检测细胞骨架微丝F-actin及微管α-tubulin、β-tubulin的构象；CCK-8法检测细胞增殖能力及划痕实验观察细胞迁移能力。 结果 与对照组相比，PDGF-BB下调α-SMA及SM22α表达水平；细胞骨架荧光强度明显减弱，F-actin排列紊乱、边缘不规则、呈毛刺样，α-tubulin、β-tubulin形态模糊，表现为共定位；明显增强PASMCs增殖与迁移能力。 结论 PDGF-BB可能通过影响细胞骨架构象诱导PASMCs表型转换，进而改变细胞增殖及迁移能力。     

地尔硫卓通过下调钙激活氯离子通道抑制肝癌细胞增殖和运动

目的观察钙离子通道抑制剂地尔硫卓对肝癌MHCC97H、7402细胞增殖和运动侵袭能力的作用,探讨其相应机制。方 法采用不同浓度地尔硫卓（0、25、50、100、200、400 μmol/L）干预肝癌MHCC97H、7402细胞不同时间（12、24、48 h）后,用MTT 法测定地尔硫卓对肝癌细胞增殖的影响,体外细胞划痕实验检测处理后肝癌细胞运动侵袭能力;通过RT-PCR和免疫细胞化学 检测地尔硫卓对肝癌细胞中TMEM16A mRNA和蛋白表达水平的影响。结果地尔硫卓能够有效抑制肝癌MHCC97H、7402 细胞的增殖和运动侵袭能力,且具有一定的时间和浓度依赖性特点（P<0.05）。其中,100 μmol/L浓度的地尔硫卓作用24 h对 MHCC97H肝癌细胞抑制较明显,TMEM16AmRNA和蛋白表达减少（P<0.05）,而50 μmol/L浓度的地尔硫卓作用48 h对7402 肝癌细胞抑制较明显,TMEM16AmRNA和蛋白表达减少（P<0.05）。结论地尔硫卓能一过性抑制MHCC97H、7402肝癌细胞 侵袭,这种作用可能与其通过调节钙离子通道TMEM16A的mRNA和蛋白表达而发挥肿瘤抑制作用有关。     

TMEM 16A在胃腺癌中的表达及意义

目的探讨Ca2+激活的氯离子通道(CaCC)蛋白TMEM16A在胃癌中的表达和意义。方法收集72例胃癌标本,采用免疫组织化学SP法检测TMEM16A的表达,以癌旁胃粘膜组织和非肿瘤胃粘膜组织作为对照,胃间质瘤组织作为阳性对照。结果TMEM16A表达于胃癌细胞胞膜和胞质内,在72例胃癌中TMEM16A呈不同程度阳性表达,在胃癌组织中TMEM16A表达的总阳性率("阳性"和"强阳性")为80.56%(58/72);而在相应的癌旁组织中TMEM16A表达的总阳性率("阳性"和"强阳性")仅为4.17%(3/72),两者之间差异显著(P<0.005)。结论 TMEM16A高表达于胃癌组织,可作为胃癌的分子诊断和靶向治疗的一个新的候选靶点。     

TMEM16A在口腔癌前病变和鳞癌中的表达及意义

目的检测跨膜蛋白16A(TMEM16A)在口腔癌前病变组织及口腔鳞癌组织中的表达与分布情况,分析其在口腔癌变机制中的作用。方法采用免疫组织化学染色法检测10例正常黏膜组织、10例上皮单纯性增生、30例上皮异常增生和45例口腔鳞癌标本中TMEM16A的表达情况。结果 TMEM16A在正常黏膜组织上皮中为阴性表达,在口腔癌前病变组织出现不同程度的表达,且随着上皮异常增生程度增加,TMEM16A蛋白表达逐渐增强。TMEM16A在口腔鳞癌中表达显著高于口腔癌前病变,在口腔鳞癌I、II、III级中,TMEM16A的表达差异无统计学意义(χ2=1.74,P0.05)。结论 TMEM16A在不同级别口腔癌前病变及鳞癌中表达的差异提示其可能在口腔鳞癌发生早期有重要作用。     

人参皂苷CK对PDGF-BB诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖和表型转换的影响及机制

  目的   探讨人参皂苷CK（ginsenoside compound K, CK）对体外培养肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cells, PASMCs）增殖、表型转换的影响和相关机制。   方法   以体外培养的PASMCs为研究对象,血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor-BB, PDGF-BB）为诱导剂,CK为干预剂。实验分为对照组（不做处理）、模型组（给予20 ng/mL PDGF-BB）和干预组（同时给予20 ng/mL PDGF-BB+5 μmol/L CK）。CCK-8法检测细胞增殖情况〔在上述分组的基础上,将干预组CK浓度设为1、3、5 μmol/L,并增设药物组（分别予以1、3、5 μmol/L CK）〕,流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况,实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞表型转换标志基因α-肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）和平滑肌22α蛋白（smooth muscle 22α, SM22α）mRNA和蛋白的表达,Western blot检测Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路相关蛋白表达。   结果   与模型组比较,CK以剂量依赖性的方式抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖,5 μmol/L CK干预时结果与对照组无明显差异（P>0.05）,故后续实验CK浓度选用5 μmol/L;CK以1、3、5 μmol/L剂量单独与PASMCs孵育,未发现细胞毒性作用（P>0.05）;CK将细胞周期阻滞于G₀/G₁期,促进PASMCs的凋亡,并逆转α-SMA、SM22α的mRNA和蛋白表达（P<0.01）;同时CK下调β-catenin蛋白和细胞周期蛋白D1（cyclinD1）的表达,并上调磷酸化糖原合酶激酶3β（phosphorylated glycogen synthase kinase-3β, pGSK-3β）/糖原合酶激酶3β（glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β）蛋白表达（P<0.01）。   结论   CK抑制异常的PASMCs增殖并逆转了表型转换,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。提示CK可能具有控制肺动脉高压的治疗潜力。     

沉默ADRB2基因对卵巢上皮性癌细胞生物学特性及顺铂敏感性的影响

目的 探讨下调β2型肾上腺素受体(beta-2 adrenergic receptor,ADRB2)基因表达对卵巢上皮性癌细胞顺铂敏感性以及细胞增殖、凋亡的影响及机制。 方法 以人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP为研究对象,采用小RNA干扰技术沉默ADRB2的表达,实验分为4组:ADRB2 shRNA1感染组、ADRB2 shRNA2感染组、阴性对照shRNA感染组、未感染的SKOV3/DDP细胞作为空白对照组。采用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40 μmol/L)顺铂作用后,采用CCK-8法检测4组卵巢癌细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测4组细胞的凋亡率,Western blot法检测4组卵巢癌细胞中caspase-9、Bcl-2及Bax蛋白的表达,采用单因素方差分析进行比较。 结果 不同浓度的顺铂处理后,4组细胞的生长抑制率均逐渐升高,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的顺铂耐药IC50分别为(29±8)μmol/L和(32±11)μmol/L,明显低于阴性对照组[(104±15)μmol/L,P<0.01]和空白对照组[(112±10)μmol/L,P<0.01];4组细胞的凋亡率逐渐增加,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的凋亡率均明显高于阴性对照组(P<0.01)。4组细胞的caspase-9、Bax蛋白的表达水平逐渐增加,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的caspase-9、Bax蛋白水平均明显高于阴性对照组(均P<0.05)。4组细胞的Bcl-2蛋白的表达水平逐渐降低,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的Bcl-2蛋白水平均明显低于阴性对照组(均P<0.05)。 结论 顺铂诱导可使ADRB2基因下调的顺铂耐药卵巢癌细胞的增殖减少、凋亡增加,其可能机制为通过调节caspase-9、Bcl-2和Bax凋亡家族蛋白的表达,从而增加细胞对顺铂的敏感性。      

左旋精氨酸对大鼠心脏移植模型移植物血管病变的抑制作用

目的研究左旋精氨酸对心脏移植物血管病变的抑制作用及其机制.方法采用大鼠异位心脏移植模型.对照组26只,移植后不用左旋精氨酸;实验组21只,移植后按每天800mg/kg将左旋精氨酸加入饮水中.于移植后2个月和3个月检测各组的心脏移植物血管病变评分和血浆一氧化氮含量.结果移植后2个月,实验组的移植物存活率为90.5%,显著高于对照组的61.5%(P<0.05).移植后2个月和3个月,实验组血浆一氧化氮均显著高于对照组,分别为(105.37±10.66)μmol/L vs (68.54±6.83)μmol/L(P<0.05),和(104.53±12.31)μmol/L vs (66.32±10.54)μmol/L(P<0.05);而对照组心脏移植物血管病变评分显著高于实验组,分别为2.4±0.7 vs 1.1±0.6(P<0.05),和3.0±0.8 vs 1.6±0.9(P<0.05).实验组心脏移植物的冠状动脉内膜病变轻微,内皮和内弹力层基本保持完整,平滑肌细胞增殖不明显.结论补充左旋精氨酸可改善心脏移植物血管病变,其机制与一氧化氮合成增加有关.一氧化氮具有保护内皮功能,抑制平滑肌细胞增殖的作用.     

腺苷对人肺腺癌细胞A549增殖和细胞周期的影响

目的：探讨腺苷对人肺腺癌细胞株A549增殖和细胞周期的影响。方法：体外培养肺腺癌细胞株A549,采用RT-PCR方法检测腺苷受体mRNA在A549细胞中的表达情况。以0、1、10、100和1 000μmol/L的腺苷分别作用A549细胞24、48和72 h后,采用MTT方法检测细胞光密度值,分析不同时间、不同浓度的腺苷对A549细胞存活率的影响。以100μmol/L的腺苷作用A549细胞24 h,采用流式细胞术检测其细胞周期。对上述所得数据进行单因素方差分析和独立样本t检验。结果：四种腺苷受体A1、A2A、A2B和A3在A549细胞中均有表达。MTT结果显示,作用时间24 h,各腺苷处理组（1、10、100和1 000μmol/L）细胞存活率分别为91%、84%、80%、73%;作用时间48 h,各腺苷处理组细胞存活率分别为82%、69%、58%、55%;作用时间72 h,各腺苷处理组细胞存活率分别为86%、56%、52%、38%,表明腺苷对A549细胞具有生长抑制效应,抑制率随着腺苷浓度升高而增强。与对照组相比,100μmol/L腺苷作用于A549细胞24 h后,能增加G1期细胞比例（对照组：59.07±0.70;100μmol/L：65.05±0.62,t=-11.04,P〈0.01）,并减少G2期细胞比例（对照组：6.67±0.95;100μmol/L：1.29±0.43,t=8.89,P〈0.01）。结论：腺苷能够抑制人肺腺癌细胞A549的生长,并改变其细胞周期分布。     

钙离子激活的氯离子通道蛋白TMEM16A在女性生殖系统中的研究进展

作为钙离子激活的氯离子通道(CaCCs)分子基础的跨膜蛋白16A(TMEM16A)分布于人体多种组织器官中,对许多生理和病理过程具有重要意义.近年来,对TMEM16A在女性生殖系统中分布和作用的研究逐渐增多,比如参与子宫平滑肌的收缩、影响卵巢颗粒细胞雌激素的合成以及调节卵母细胞的形态等,这些都提示了TMEM16A在女性生殖系统中的生理重要性.现本文将就TMEM16A在女性生殖系统各方面的最新研究进展进行综述.     

阻断ErbB4受体对人胆管细胞癌QBC939细胞系增殖与转移的影响

目的:通过体外培养人胆管癌QBC939细胞系,阻断ErbB4受体,检测肿瘤生物学行为的改变,从而探讨人类第4表皮生长因子(ErbB4)受体介导人胆管细胞癌肿瘤生物学行为的分子机制.方法:体外培养人胆管癌QBC939细胞系细胞,分别加入终浓度为0μmol/L,1μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L,100μmol/L的AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用CCK-8法测量各组胆管癌细胞增殖情况,然后利用SPSS软件计算AG1478对人胆管癌QBC939细胞的半数抑制浓度(IC50值);根据IC50值选择使用0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用划痕实验检测各组胆管癌细胞迁移能力的变化.分别使用0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L浓度AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用Transwell小室法实验检测各组胆管癌细胞侵袭能力的变化.结果:AG1478以浓度依赖方式抑制QBC939细胞增殖,其IC50值为:49.14μmol/L;AG1478抑制ErbB4受体后,胆管癌QBC939细胞的迁移、侵袭能力减弱.结论:在体外抑制ErbB4受体能使胆管癌肿瘤细胞生长、迁移、侵袭能力减弱;ErBb4在胆管癌的发生、发展中具有重要的作用,ErbB4可能成为胆管癌分子治疗的新靶点.     

Effects of calcium-activated chloride channels on proliferation of pulmonary artery smooth muscle cells in rats under chronic hypoxic condition

Objective: To investigate the effects of calcium-activated chloride (C1Ca) channels on proliferation of pulmonary artery smooth muscle cells(PASMCs) in rats under chronic hypoxic condition. Methods:The cultured PASMCs were placed under normoxic and chronic hypoxic conditions:The cells were observed by light and electron microscope; The cell cycles were observed by flow-cytometry; Immunocytochemistry staining was used to detect the expressions of PCNA, c-los and c-jun of PASMCs; Cytoplasmic free Ca2 con-centration ([Ca2 ]) in PASMCs was investigated by fluorescent quantitation using fluorospectrophotometer. Results:The PASMCs were contractile phenotype under normoxic conditions. Observation by transmission electron microscope: In kytoplasm of contractile phenotype cells, myofilament bundles were abundant and the content of cell organs such as Golgi's bodies were rare. The PASMCs were synthetic phenotype under chronic hypoxic condition. There were inereased free ribosomes, dilated rough endoplasmic reticulums, highly developed Golgi complexes, decreased or disappeared thick filaments and dense body in kytoplasm of synthetic phenotype cells. After NFA and IAA-94, the situations were reversed The number of S4,GzM PASMCs were significantly increased in chronic hypoxic condition; The NFA and IAA-94 were shown to significantly decrease them from (28.6±1.0)% to (16.0±1.6)% and the number of G0G1 PASMCs significantly increased from (71.4 ±1.9)% to (83.9±1.6)% (P＜ 0.01). In chronic hypoxic conditions, the expression of proliferating cell nucleus antigen was significantly increased; The NFA and IAA-94 were shown to significantly decrease it from (81±6)% to (27±7)%(P＜0.01). The expression of c-los and c-jun were significantly increased in-chronic hypoxic conditions; The NFA and IAA-94 were shown to significantly decrease them from 0.15 ± 0.02, 0.32 ± 0.05 to 0.05 ± 0.01, 0.12±0.05, respectively (P＜ 0.01); Under chronic hypoxic conditions, [Ca2 ]. Was increased; The NFA and IAA-94 decreased it from (281.8±16.5)nmol/L to (117.7±15.4)nmol/L(P＜0.01). Conclusion:Hypoxia initiated the change of PASMCs from contractile to synthetic phenotype and increased proliferation of PASMCs. NFA and IAA-94 depressed cell proliferation by blocking C1Ca channels in hypoxic condition. These may play an important role in proliferation of PASMCs under chronic hypoxic conditions.