血管内皮生长因子和其受体Flt-1在青春期大鼠睾丸、附睾及附睾内精子上的表达研究

目的:通过对血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1在大鼠睾丸、附睾及附睾内精子上表达的研究,探讨其在雄性生殖系统中的作用。方法:免疫组化SP法和免疫荧光法检测20只青春期SD大鼠睾丸、附睾及精子上VEGF和Flt-1蛋白的表达情况。结果:VEGF和Flt-1在大鼠睾丸和附睾组织及精子上均有特征性表达。睾丸内VEGF蛋白表达于生精细胞、精子细胞发育中的顶体、Sertoli和Leydig细胞胞质内;Flt-1只见于精子细胞发育中的顶体及Leydig细胞胞质中。附睾中VEGF表达于各段上皮主细胞胞质内,而Flt-1表达于头、尾段上皮主细胞胞质内,体部免疫染色阴性;两者在附睾上皮亮细胞、晕细胞和基细胞中均为阴性表达。免疫荧光染色显示,VEGF和Flt-1共同定位于附睾内精子头部的顶体,尾部的颈、中和主段。结论:VEGF和Flt-1蛋白在大鼠睾丸、附睾及精子中的特异性表达提示,他们可由不同生精上皮细胞、间质细胞和附睾主细胞产生,可能以自分泌或旁分泌的形式单独或共同作用于睾丸和附睾的生殖细胞或Leydig细胞,直接或间接地影响精子的发生、发育和成熟过程,并与精子的活动和受精能力有关。     

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾中CRES蛋白表达的影响

目的:研究青春期大鼠实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对睾丸和附睾中胱蛋白酶抑制剂相关的附睾精子发生(CRES)蛋白表达的影响,探索精索静脉曲张导致不育的机制。方法:建立青春期雄性SD大鼠ELV模型,采用免疫组化及蛋白印迹方法检测CRES蛋白在ELV 2周组(n=8)、4周组(n=8)及其相应的对照组(n均=5)大鼠睾丸和附睾头、体、尾中的表达变化。结果:免疫组化显示,CRES蛋白在ELV实验组和对照组大鼠睾丸和附睾中均有表达。在睾丸中,CRES蛋白主要定位于圆形和长形精子细胞的胞质、精子的顶体以及残余体中,其表达与生精周期密切相关,Ⅰ~Ⅲ和Ⅸ~ⅩⅣ期表达最强,Ⅶ~Ⅷ期表达次之,Ⅳ~Ⅵ期表达减弱。在附睾中,CRES蛋白主要表达于从附睾起始段到尾部的上皮主细胞的胞质中,且以体、尾部表达最强,头部次之,管腔分泌物也呈阳性表达。实验组比对照组CRES蛋白表达增强。W estern印迹显示:实验组和对照组大鼠睾丸和附睾在相对分子质量(Mr)为19 000和14 000处均可见CRES蛋白条带,其中以Mr19 000处表达更为明显。实验组CRES蛋白的表达比对照组明显增强。对免疫组化和W estern印迹结果进行灰度值和积分吸光度值(IA)测定,并经统计学分析显示:ELV 2周组和4周组比其相对应的对照组表达增强且差异有显著性(P<0.05或P<0.01),而ELV各组间未见CRES蛋白表达有明显差异(P>0.05)。结论:CRES蛋白在大鼠睾丸和附睾中均有表达,睾丸中表达呈现生精周期特异性和细胞特异性,附睾中表达呈现附睾上皮区段和细胞特异性;CRES蛋白在青春期ELV大鼠睾丸和附睾中的表达比对照组明显增强。这些结果提示CRES蛋白在精子发生和精子成熟过程中可能起着重要的作用,并且可能与ELV引起的不育或生育力低下有关。     

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾精子结合抗原11 mRNA及其蛋白异构体表达的影响

目的:研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对青春期大鼠睾丸和附睾中精子结合抗原11(SPAG11)mRNA及其蛋白异构体SPAG11E表达的影响,并探讨其与精索静脉曲张导致男性不育的关系。方法:40只SD大鼠随机分为ELV2周组、4周组,假手术对照2周组、4周组,每组10只。ELV组行部分结扎左肾静脉建立青春期SD大鼠ELV模型,假手术对照组仅显露左肾静脉过程,但不结扎。应用RT-PCR和免疫组化法(n=5)检测SPAG11 mR-NA及SPAG11E蛋白在ELV2周组和ELV4周组及各自对照组大鼠双侧睾丸、附睾中的表达变化。结果:RT-PCR结果显示,SPAG11基因376bp的特异扩增产物仅见于大鼠附睾组织中。免疫组化结果显示,SPAG11E蛋白主要与睾丸生精上皮的圆形和长形精子细胞的顶体泡和顶体、睾丸间质细胞的胞质相结合;在附睾管上皮主细胞胞质和顶部静纤毛中表达。对RT-PCR的相对吸光度值和免疫组化的灰度值进行统计学分析显示:①左侧附睾ELV2周和4周组SPAG11 mRNA和SPAG11E蛋白的表达与各自右侧组及各自对照组比较均有显著减弱(P<0.05或P<0.01);左侧附睾ELV4周组SPAG11mRNA与SPAG11E的表达较ELV2周组显著减少(P<0.05或P<0.01);右侧附睾ELV4周组SPAG11E的表达也较ELV2周组显著减少(P<0.01);②两实验组双侧睾丸SPAG11E蛋白的表达与相应对照组比较均未见明显差异(P>0.05),且在ELV2周组和ELV4周组之间该蛋白的表达也无显著性差异(P>0.05)。结论:SPAG11是特异表达于附睾的基因,在大鼠睾丸和附睾中均可见其蛋白异构体SPAG11E免疫阳性反应,其定位及表达水平具有细胞特异性和区域特异性,而且SPAG11 mRNA及SPAG11E蛋白在ELV模型鼠附睾中的表达发生了明显变化,这提示SPAG11不仅可能在大鼠精子发生、成熟过程中发挥重要作用,还可能与精索静脉曲张所致的男性不育相关。     

瘦素及其受体在精索静脉曲张模型大鼠附睾组织的表达及意义

目的:探讨瘦素及其受体在精索静脉曲张模型大鼠附睾组织的表达及其意义。方法:将40只SD大鼠随机分为精索静脉曲张(EV)持续4、8周组(EV4、EV8组,每组12只)和相应的假手术对照组(Control 4、Control 8组,每组8只)。采用左肾静脉部分结扎的方法建立精索静脉曲张模型。采用免疫组织化学法检测大鼠附睾组织中瘦素及瘦素受体表达情况,采用实时定量PCR法检测大鼠附睾组织中瘦素及瘦素受体mRNA表达量。结果:EV4组、EV8组附睾上皮细胞瘦素及瘦素受体表达分别比Control 4组、Control 8组显著增强(P<0.01);而EV4组附睾上皮细胞瘦素及瘦素受体表达与EV8组比较无显著性差异(P>0.05)。EV4组、EV8组附睾上皮细胞瘦素及瘦素受体mRNA的表达分别比Control 4组、Control 8组显著增加(P<0.01);而EV4组瘦素及瘦素受体mRNA的表达与EV8组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:精索静脉曲张大鼠附睾组织中瘦素及瘦素受体的表达明显增加,瘦素可能参与了精索静脉曲张引起男性不育的机制。     

青春期大鼠左侧精索静脉的解剖变异及其在实验性左侧精索静脉曲张模型中的运用

目的:探索青春期大鼠左侧精索静脉(LSV)解剖变异对诱导实验性左侧精索静脉曲张(ELV)的影响。方法:将30只雄性青春期SD大鼠随机分成3组,每组10只。A组缩窄左肾静脉并结扎LSV侧支,B组仅缩窄左肾静脉,C组为假手术组。观察LSV走行,测量其直径。术后30 d分析左肾大体和组织学变化,并再次测量LSV直径。结果:大鼠LSV 90%存在不规律出现的侧支,仅10%无侧支。术后各组左肾未见异常。A、B、C组LSV直径术前和术后分别为(0.16±0.08)mm和(1.47±0.15)mm、(0.15±0.07)mm和(0.31±0.49)mm、(0.16±0.06)mm和(0.17±0.07)mm。A组术后直径较术前明显增粗(P0.01),B组和C组均无统计学差异(P均0.05)。术后LSV直径A组明显大于B组(P0.01)。A组ELV诱导成功率为100%,B组为10%(仅1只LSV无侧支的大鼠造模成功),C组未见曲张。结论:认清LSV解剖回流,并结扎其不规律出现的侧支是建立稳定一致的ELV模型的关键。     

实验性精索静脉曲张大鼠附睾分泌蛋白的鉴定研究

目的　研究精索静脉曲张对附睾合成与分泌蛋白的影响 ,鉴定病理状况下附睾特异改变的蛋白成分。　方法　部分结扎左肾静脉建立实验性左侧精索静脉曲张大鼠动物模型。用 SDS-PAGE和双向电泳分离左附睾尾匀浆上清中的蛋白质组分 ,切下稳定出现改变的蛋白质所在的条带或斑点 ,进行胶内胰蛋白酶消化 ,酶解得到的最终肽混合物进行肽质量指纹谱测定。通过检索互联网上的蛋白质数据库确定该蛋白的可能成分。　结果　与对照动物相比 ,实验性左侧精索静脉曲张大鼠左附睾尾匀浆上清中一分子量约2 0× 1 0 3、等电点约 5.5的蛋白成分明显增加。经质谱分析结合网上数据库检索表明 ,该蛋白是附睾视黄酸结合蛋白。　结论　实验性左侧精索静脉曲张导致大鼠附睾中视黄酸结合蛋白含量升高 ,这一改变对精子在附睾中成熟及精子功能的影响有待进一步研究     

实验性精索静脉曲张大鼠睾丸组织IL-1和NO的变化

目的 :研究精索静脉曲张 (VC)对大鼠睾丸组织中IL 1和NO含量的影响。　方法 :采用部分结扎左肾静脉及左髂总静脉之间的交通支 ,制备Wistar大鼠VC模型。将大鼠随机分为手术结扎组 (VC组 ,n =30 )和假手术组 (n =2 0 ) ,分别测定 2组大鼠睾丸组织中IL 1和NO的含量 ,并加以比较。　结果 :①IL 1、NO含量在左侧睾丸组织中VC组均显著高于假手术组 (P <0 .0 1) ,而在右侧睾丸组织中 2组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;②IL 1与NO呈正相关关系 (r =0 .5 72 ,P <0 .0 1)。　结论 :VC时睾丸组织IL 1和NO的变化 ,可能是造成睾丸损伤、精子发生障碍甚至不育的原因     

雄激素对大鼠阴茎组织血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的　研究雄激素对大鼠阴茎组织中血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体Flk 1 KDR表达的影响。方法　 2个月龄SD雄性大鼠随机分成假手术组 (A组 ) ,去势组 (B组 ) ,去势 +睾酮替代组 (C组 ) ,以及 5α还原酶抑制剂保列治喂饲组 (D组 ) ,2周后取大鼠阴茎组织行VEGF及其受体Flk 1 KDR免疫组织化学染色和VEGFmRNA原位杂交 ,运用计算机图像分析系统 ,比较其表达强度。结果　A组和C组大鼠阴茎组织VEGF免疫组织化学染色均呈高表达灰度值( 99.80± 2 .88和 98.70± 3 .41) ,而B组与D组均呈低表达灰度值 ( 12 7.80± 3 .93和 12 5 .30±3 .76 ) ,(P <0 .0 1) ;VEGFmRNA原位杂交也显示B组 ( 15 9.30± 9.42 )与D组 ( 15 7.30± 9.71)阳性着色均明显少于A组 ( 12 4.6 0± 8.37)和C组 ( 12 5 .30± 7.80 ) ,(P <0 .0 1) ;而B组与D组之间 ,A组和C组之间表达灰度值差异均无显著性 ;VEGF受体Flk 1 KDR在各组表达差异均无显著性。结论　雄激素对大鼠阴茎组织中VEGF以及VEGFmRNA的表达均有上调作用 ,而对VEGF受体Flk 1 KDR的表达无影响 ;调节大鼠阴茎组织VEGF表达的雄激素活性成分可能主要为 5α 双氢睾酮。     

附睾分泌蛋白2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达

目的:探讨附睾分泌蛋白2(HE2/EP2)的一种异构体———HE2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达及其意义。方法:应用免疫组化SP法检测15只青春期SD大鼠睾丸和附睾组织中HE2β1的定位及其表达情况。结果:HE2β1在青春期大鼠睾丸和附睾组织中均有表达。在附睾中,HE2β1主要表达于附睾管上皮主细胞胞质内,而在亮细胞、晕细胞及基细胞内未见阳性表达;其表达水平在附睾头部远段较弱,在体部近、中段及尾部较强,而在附睾始段未见阳性表达。在睾丸生精小管中,部分精原细胞核及支持细胞核均可见明显的棕褐色的阳性颗粒,其他生精细胞以及间质细胞均为阴性。结论:HE2β1在青春期雄性大鼠的睾丸和附睾上皮中均有表达,其定位及表达水平具有区域特异性和细胞特异性,提示其在大鼠精子发生、成熟及附睾上皮天然抗感染机制中发挥重要的作用。     

青春期大鼠实验性精索静脉曲张对附睾细胞线粒体Ca~(2+)和细胞色素C的影响

目的 :探讨外科所致的精索静脉曲张对青春期大鼠附睾细胞线粒体Ca2 + 及细胞色素C的影响。　方法 :对 4 0只青春期雄性Wistar大鼠 ,通过部分结扎左肾静脉或显露左肾静脉建立精索静脉曲张模型 (VG ,2 0只 )和假手术模型 (SOG ,2 0只 ) ,术后 10周 ,取双侧附睾 ,检测附睾头、体部细胞线粒体Ca2 + 、细胞色素C含量。　结果 :与SOG组相比 ,VG组附睾细胞线粒体Ca2 + 含量显著降低 (P <0 .0 0 1) ,细胞色素C含量显著增高 (P <0 .0 5 )。　结论 :外科所致精索静脉曲张大鼠附睾细胞钙稳态失衡、线粒体有损伤 ,这些变化可能是影响其生育能力的机制之一。     

大鼠精索静脉曲张模型附睾中丙二醛、总抗氧化物及唾液酸含量的改变及意义

目的:探讨大鼠左侧精索静脉曲张后同侧附睾组织中丙二醛(MDA)、总抗氧化物(TAC)和附睾管腔中唾液酸(SA)含量的改变及意义。方法:用8只雄性SD大鼠建立左侧精索静脉曲张模型,另取8只SD大鼠作为对照组。硫代巴比妥酸法和铁离子还原法分别检测附睾组织中MDA和TAC含量;5甲-基苯二酚法检测附睾腔液中SA含量。结果:大鼠左侧精索静脉曲张模型建立后的第7 d,同侧附睾组织中MDA和TAC含量,模型组与对照组相比,差异有显著性(P<0.005);附睾管腔液中SA含量,模型组明显低于对照组,差异有显著性(P<0.005)。结论:大鼠左侧精索静脉曲张会导致同侧附睾组织中活性氧增加,TAC含量下降,进而影响到附睾上皮细胞合成和分泌SA的功能。     

大鼠精索静脉曲张后附睾上皮细胞凋亡及管腔α-1,4-葡糖苷酶、唾液酸含量观察

目的:探讨大鼠左侧精索静脉曲张后同侧附睾上皮细胞凋亡与附睾管腔中-α1,4-葡糖苷酶和唾液酸含量改变的关系及意义。方法:16只雄性SD大鼠建立左侧精索静脉曲张模型,分为对照组和实验组,每组8只。缺口末端转移酶标记技术检测附睾上皮细胞凋亡;硝基酚法和5-甲基苯二酚法分别检测附睾管腔液-α1,4-葡糖苷酶和唾液酸含量。结果:大鼠左侧精索静脉曲张模型建立后的第7 d,实验组同侧附睾上皮细胞凋亡指数显著高于对照组(P<0.001);实验组附睾管腔液-α1,4-葡糖苷酶、唾液酸含量显著低于对照组(P<0.05,P<0.005)。结论:大鼠左侧精索静脉曲张可导致同侧附睾上皮细胞凋亡增加,进而影响该侧附睾上皮细胞的合成和分泌功能。     

Angiotensin Converting Enzyme in the Testis and Epididymis of Mammals

Summary: Angiotensin converting enzyme (ACE) activity has been reported in testis and epididymis of seven different animal species. Among all the species, the mouse testis and epididymis showed the highest converting enzyme activity followed by rat testis and epididymis. The lowest activity was detected in buffalo testis and rabbit epididymis. Most of the testicular enzyme was found concentrated in the 107,00 xg sediment while the epididymal enzyme was equally distributed between sediment and supernatant. ACE levels of different regions of the rat testis and epididymis was analyzed. The gradient of ACE was found increasing from caput to cauda. A major fraction of testicular and epididymal ACE activity was found in their respective fluid. ACE appeared only in mature rats, rabbits and mice testis and epididymis. Sexually stimulated rabbits showed significant ACE increase in the testis. In vitro characterization studies were conducted. Zusammenfassung: Angiotensin-Converting-Enzym in den Hoden und Nebenhoden von Säugetieren Es wird berichtet über die Aktivität des Angiotensin-Converting-Enzyms (ACE) in den Hoden und Nebenhoden sieben verschiedener Tierarten. Von alien Arten zeigten die Hoden und Nebenhoden der Maus die höchste Enzymaktivität, gefolgt von den Hoden und Nebenhoden der Ratte. Die niedrigste Aktivität wurde in Büffelhoden und Kaninchennebenhoden gefunden. Der größte Teil des Hodenenzyms was in dem UI-trazentrifugensediment (107.000 × g) konzentriert, wohingegen das Nebenhodenenzym gleichmäßig auf das Sediment und den Überstand verteilt waren. Es wurden die ACE-Konzentrationen verschiedener Anteile des Rattenhodens und -nebenhodens bestimmt. Die ACE-Konzentration nahm dabei vom Kopf zum Schwanz hin zu. Der Hauptanteil der Hoden- und Nebenhoden-ACE-Aktivität wurde in den jeweiligen Flüssigkeitsanteilen gefunden. Das ACE tritt nur in geschlechtsreifen Ratten-, Kaninchen- und Mäusehoden und -nebenhoden auf. Sexuell stimulierte Kaninchen wiesen einen signifikanten ACE-Anstieg in den Hoden auf. Die Untersuchungen zur in-vitro-Bestimmung wurden aufgezeigt.     

Anatomy of the Testis and Epididymis in Cryptorchidism

The types and incidence of deformities in the proximal seminal pathways have been carefully studied in 150 consecutive orchidopexies. 85% of the testicles were found in the subcutaneous tissue, 15% were in the canal or the abdomen. Malunion between the testis and the epididymis was the type of anomaly most frequently encountered. Deformities considered to affect fertility were seen in 70% of the gonads located proximal to the external inguinal ring and in 12% of the subcutaneous testicles. The difference is statistically significant.     

L-肉碱在奥硝唑所致大鼠睾丸和附睾损伤中的保护作用

目的:探讨L-肉碱(LC)在奥硝唑(ORN)所致大鼠附睾和睾丸损伤中的的保护作用。方法:40只雄性SD大鼠(200～230g)随机均分为5组:①A组:给予0.5%的羧甲基纤维素钠(溶剂)灌胃;②B组:每天给予400mg/kgORN灌胃;③C组:每天给予800mg/kgORN灌胃;④D组:每天给予[ORN(400mg/kg)+LC(100mg/kg)]灌胃;⑤E组:每天给予[ORN(800mg/kg)+LC(100mg/kg)]灌胃。上述各组均连续灌胃20d,末次给药24h后,所有大鼠麻醉后处死,分别取睾丸、附睾,进行称重和HE染色,计算睾丸、附睾系数并观察睾丸和附睾病理组织学改变。结果:①与A组相比,B组睾丸、附睾系数明显降低(P<0.05);而C组睾丸、附睾系数为极显著性降低(P<0.01);D组与A组相比无差异,E组与A组相比有极显著性差异(P<0.01);②HE染色显示,与A组相比,B组睾丸生精小管内各级生精细胞排列基本整齐,部分生精小管管腔内有脱落的生精细胞,附睾管腔中精子数目下降,有时可见散在的生精细胞;C组大鼠睾丸生精小管管腔内均可见坏死脱落的生精细胞,附睾管腔中精子数目明显减少,且有较多的非精子细胞成分。D组睾丸生精小管无明显改变,附睾管腔中精子数目也未见明显下降;E组睾丸生精小管管腔内精子数目减少,可见坏死脱落的生精细胞,附睾腔中精子数目明显减少,并伴有较多的非精子细胞成分。结论:奥硝唑(ORN)可导致雄性大鼠附睾和睾丸病理组织学改变,LC对ORN引起大鼠附睾和睾丸损伤具有一定的保护作用。