野生型p53基因对胰腺癌细胞的抑制作用

目的：观察人类野生型p53（wtp53）基因对人胰腺癌细胞的抑制作用。方法：用逆转录病毒为载体将外源性wtp53基因导入人胰腺癌细胞系PC－2，通过体外及小鼠体内实验研究转入基因的表达及对肿瘤的抑制作用，结果：p53在转染细胞PC－2／p53中表达水平提高，外源性wtp53基因的导入和表达能使PC－2细胞的生长速率减低，软琼脂集落形成能力下降，G0＋G1期细胞比例增加，凋亡指数升高，裸鼠体内成瘤能力明显下降，结论：逆转录病毒载体介导的外源性野生型P53能抑制人胰腺癌细胞生长。     

野生型p53基因对白血病K562细胞的增殖抑制作用

目的:建立携野生型p53基因的K562细胞株,研究该细胞内野生型p53基因的表达并观察其生物学特性。方法:构建重组人p53逆转录病毒载体,导入PA317细胞中进行包装,经过病毒滴度测定,筛选高滴度的产病毒细胞克隆。收集培养上清液中的重组人p53逆转录病毒颗粒,感染K562靶细胞,建立携野生型p53基因的K562细胞株。观察该细胞株的生长方式、形态学和生长速度。SP免疫组化染色法检测p53蛋白表达。进一步用流式细胞仪检测p53蛋白表达率和细胞周期变化;双层软琼脂培养实验检测细胞的增殖潜能改变。以pBabe空载体同时实验,作为各阶段的对照。结果:成功地构建了重组逆转录病毒载体pBabe/p53;获得逆转录病毒生产PA317/p53细胞系,最高病毒滴度为4.64×105CFU/m l;获稳定表达p53基因的K562/p53靶细胞,免疫组化结果证实该细胞内有野生型P53蛋白表达,流式细胞仪检测到野生型P53蛋白表达率为1.32%;与对照K562/pBabe细胞比较,K562/p53靶细胞的生长速度下降;软琼脂集落生成的下降率为27.14±4.49%(P<0.05);增殖指数下降,S期比例下降(P均<0.01)。结论:制备了携p53基因的高滴度逆转录病毒,建立携野生型p53基因的K562/p53细胞株,证实表达的野生型p53蛋白对该细胞有抑制作用。     

腺病毒介导野生型p53基因对人肺腺癌细胞的抑制效应

目的：p53基因突变是人类肿瘤中常见的遗传学改变。将野生型p53基因导入一些肿瘤细胞中被证明能抑制其细胞增殖，因此做为肺癌基因治疗主要目的基因而备受关注。本研究旨在观察野生型p53基因对人肺腺癌细胞和裸鼠移植瘤的抑制效应，并对其抑癌机制进行分析，为今后肺癌基因治疗的临床试验提供科学依据。方法：采用重组体腺病毒Ad-p53基因转染人肺腺癌细胞系GLC－82；以裸鼠皮下移植瘤治疗试验观察Ad-p53基因的抑瘤效应；用流式细胞计数，DNA片断化及TUNEL分析探讨Ad-p53基因的抑癌机制。结果：导入Ad-p53基因后人肺腺癌GLC－82细胞生长能力显著下降，克隆形成能力受到明显抑制；并显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长；肺癌细胞发生凋亡，并出现明显的G1期阻滞现象。结论：腺病毒介导野生型p53基因（Ad-p53)对人肺腺癌细胞和裸鼠皮下移植瘤均有明显抑制效应，主要通过诱导癌细胞凋亡和参与细胞周期调控实现，进而提示Ad-p53基因有可能在人肺癌基因治疗中发挥重要作用。     

抑癌基因联合转染对膀胱癌细胞的生长抑制作用研究

目的；探讨抑癌基因p53和Rb对膀胱癌细胞的生长抑制作用。方法：利用逆转录病毒和电穿孔法将p53,Rb单独或联合导入膀胱癌细胞株T24中，Northern杂交等证实外源目的基因的表达后，观测并比较不同转染后细胞的生长、增殖水平和成瘤性等。结果：获得p53、Rb单独和联合转染的T24细胞，Northern杂交等证实T24细胞中p53失活而Rb正常，转入的外源野生型p53基因和Rb基因均被表达。与未转染的对照组T24细胞相比，转入p53的细胞其生长速率明显降低，细胞增殖受抑制，软琼脂克隆形成能力丧失；而只转染Rb的细胞除软琼脂克隆形成能力有所降低外，细胞生长和增殖未受明显抑制。结论：外源野生型p53能抑制T24生长并降低基成瘤性，增加Rb的表达对细胞生长无明显抑制作用。p53对T24细胞的生长抑制作用与外源Rb基因导入与否无明显关系，Rb表达水平正常的膀胱癌细胞其异常增殖可能与Rb蛋白磷酸化状态的关系更为密切。     

野生型p53基因重组质粒的构建及对人卵巢癌细胞的抑制作用

目的:研究p53基因转染对卵巢癌细胞系SKOV-3生物学行为的影响.方法:用分子克隆技术构建人野生型p53基因与真核细胞表达载体PCNDA3的重组体(PCNDA-p53),并用脂质体介导的转染技术,将其导入不表达p53的人卵巢癌SKOV-3细胞中,经筛选、鉴定后,观察细胞生长速度、集落形成能力和增殖周期的变化.结果:成功地构建了人野生型p53基因与真核细胞表达载体的重组体,转染后获得稳定表达p53的转染克隆.外源性p53基因的表达明显抑制了卵巢癌细胞的生长速度及集落形成能力,使细胞阻滞于G1期.结论:外源性野生型p53基因能抑制卵巢癌细胞的增殖.     

外源性p53基因转导对食管癌细胞株Eca109的生长抑制

本文首扶报道了逆转录病毒载体介导的外源性p53基因导入对食管癌细胞株Eca 109的生长抑制敢应。我们将野生型p53基因全长编码医克隆进逆转录病毒载休pDOR-Neo中，构建了重组病毒pDORp53．转染Eta 109细胞后，获得G418抗性细胞克隆Eca-p53。细胞生物学行为研究显示：生长曲线压低42%；GO／G1期细胞比侧显著增加；细胞增殖指数(PI)降低36.3%；软琼脂中集落形成能力受抑；对裸鼠的致瘤性丧失，结果证明，外源性野生型p53基因转导，对抑制食管癌细胞的恶性行为具有显著的生物学意义。     

逆转录病毒介导的p53基因对食管癌细胞株的生长抑制作用

目的 :观察人类野生型 p5 3(wtp5 3)基因对人食管癌细胞系的抑制作用。　 方法 :用逆转录病毒为载体 ,将外源性wtp5 3基因导入人食管癌细胞系ECA10 9,通过体外及小鼠体内实验研究转入基因的表达及其对肿瘤的抑制作用。　结果 :p5 3在转染细胞ECA10 9/p5 3中表达水平提高。外源性wtp5 3基因的导入和表达能使ECA10 9细胞的生长速度减低 ,软琼脂集落形成能力下降 ,G0 G1期细胞比例增加、S期细胞比例降低 ,调亡指数升高 ,裸鼠体内成瘤能力明显下降。　结论 :逆转录病毒载体介导的外源性wtp5 3基因能够抑制人食管癌细胞生长     

人精子细胞膜透明质酸酶对肾上腺癌细胞SW13增殖影响的研究

目的　探讨人精子细胞膜结合型透明质酸酶 (PH2 0 )对人肾上腺癌细胞SW 13生长的影响。方法将人全长PH2 0cDNA转染到体外培养人肾上腺癌细胞SW 13细胞株中 ,将细胞置入软琼脂培养板中 ,研究集落形成的改变 ;再将同样的细胞种植到 10d龄鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )上 ,研究肿瘤生长大小的变化 ;细胞培养在2 4孔培养板中 ,采用细胞计数方法研究细胞的生长曲线。结果　转PH2 0基因的SW 13细胞在软琼脂培养板中的集落形成能力明显增强 ,CAM上的SW 13增殖程度明显高于对照组 ,转PH2 0基因后SW 13细胞生长曲线上升。结论　PH2 0可促进人肾上腺癌细胞SW 13的增殖 ,提高SW 13细胞的恶性度     

P53基因状态与应用今又生的疗效研究

目的p53是迄今临床发现与肿瘤发病相关性最高的肿瘤抑制基因（TSG）,是肺癌中发生频率最高的遗传改变。本研究的目的观察肺腺癌细胞中p53基因突变对状态对重组人p53腺病毒注射液治疗疗效的影响。方法将重组腺病毒截体所携带的野生型p53基因导入人肺腺癌耐药细胞株GLC-82及A549,通过Western blot法分析外源野生型p53基因在细胞内的表达,MTT法和流式细胞术观察对细胞生长抑制及细胞周期,凋亡的影响。结果通过Western blot证实了外源p53基因能在GLC-82及A549细胞中高效表达。MTT法观察到Ad-p53对肺癌细胞的抑制作用呈时间依赖性、剂量依赖性效应,流式细胞术检测结果显示,Ad-p53与能使细胞阻滞于G0～G1期,S期细胞比例明显减少,引起的A549细胞凋亡半为（15．35±1．31）％,GLC-82细胞凋亡率为（20．88±0．71）％。结论Ad-p53能可以抑制含突变型p53基因及含野生型p53基因的人肺腺癌细胞株的生长,促进其凋亡,作用效应不受内源性p53状况的影响。     

N-ras和C-myc反义寡核苷酸与p53和p16基因联合抑制人肝癌细胞生长的实验研究

目的 :研究反义癌基因与抑癌基因联合抑制肝癌细胞生长的效果。方法 :利用基因重组方法构建携带 p1 6基因、p53基因的融合表达载体 (pc DNA1 6～ 53) ,利用基因合成仪体外合成 N- ras、C- myc反义寡核苷酸 ,并将 N- ras、C- myc反义寡核苷酸与 pc DNA1 6～ 53融合表达载体转染到人肝癌细胞系 SMMC772 1细胞中 ,观察肝癌细胞生长情况及软琼脂集落形成能力。结果 :联合治疗组肝癌细胞增殖速度最慢 ,软琼脂集落形成个数最少 ,只有 2个。结论 :利用相关基因联合治疗效果明显优于利用个别基因的治疗效果。     

Construction of p53 antisense RNA expression vector and its effect on colon cancer cells

Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｐ５３ａｎｔｉｓｅｎｓｅＲＮＡｅｘｐｒｅｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒａｎｄｉｔｓｅｆｅｃｔｏｎｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｓＣａｏＪｉａｎｇ曹江，ＴｅｎｇＬｉｓｏｎｇ滕理送，ＺｈｅｎｇＳｈｕ郑树，ＣａｉＸｉｎｈａｎ蔡心涵ａｎｄＧｅ...     

CXCR2过表达结肠癌细胞株的建立及生物学功能的初步研究

目的 建立人SW1116结肠癌细胞中稳定过表达CXCR2稳定细胞株,分析过表达CXCR2基因对人结肠癌SW1116细胞迁移能力的影响。方法 分离健康人外周血单个核细胞,Trizol提取总RNA并反转录为cDNA,PCR扩增CXCR2的CDS序列,连接至慢病毒穿梭质粒pLVX-IRES-ZsGreen1多克隆位点,进行CXCR2基因的克隆,构建pLVX-IRES-ZsGreen1-CX-CR2重组质粒。重组质粒与包装质粒通过磷酸钙共转染法包装出慢病毒上清并对人SW1116结肠癌细胞进行感染。real-timePCR及Western blot方法分析转染pLVX-IRES-ZsGreen1-CXCR2重组质粒的人SW1116结肠癌细胞中CXCR2表达情况。Tr-answell实验分析过表达CXCR2对结肠癌细胞体外迁移的影响。结果 成功建立稳定表达CXCR2基因的SW1116结肠癌细胞株,并初步阐明CXCR2能够促进结肠癌细胞体外迁移。结论 成功建立过表达CXCR2基因的结肠癌细胞并能促进其体外迁移。     

重组人p53腺病毒联合奥沙利铂对结肠癌细胞的生长抑制作用

目的观察外源p53基因在结肠癌细胞内的表达、对肿瘤细胞生长的影响,及对结肠癌细胞化疗敏感性的作用和机制。方法用重组人p53腺病毒注射液（rAd-p53）及奥沙利铂（OXA）单独及联合作用于结肠癌细胞株SW1116不同时间后,CCK-8法检测其对体外培养细胞的抑制率,免疫组织化学S-P法检测p53蛋白的表达情况,流式细胞仪（FCM）分析其细胞凋亡蛋白caspase3的表达情况。结果rAd-p53及OXA单独作用时,随药物浓度及作用时间的增加,细胞的生长抑制率逐渐增高;二者联合作用24 h,在较低浓度时细胞生长抑制率即明显增高（P值均〈0.05）;OXA（6.25μg/ml）与rAd-p53（5×105、5×106、5×107、5×108、5×109vp/ml）联合作用24 h后,与对照组比较,结肠癌细胞caspase-3蛋白的含量升高,但p53蛋白无明显升高。结论OXA和rAd-p53单药可抑制结肠癌细胞SW1116的生长,二者联合对结肠癌细胞的抑制作用增强;rAd-p53有增强OXA化疗敏感性的作用,其机制与通过线粒体途径激活下游的caspase-3诱导细胞凋亡有关。     

重组人p53腺病毒联合奥沙利铂对结肠癌细胞的生长抑制作用

目的观察外源p53基因在结肠癌细胞内的表达、对肿瘤细胞生长的影响,及对结肠癌细胞化疗敏感性的作用和机制。方法用重组人p53腺病毒注射液（rAd-p53）及奥沙利铂（OXA）单独及联合作用于结肠癌细胞株SW1116不同时间后,CCK-8法检测其对体外培养细胞的抑制率,免疫组织化学S-P法检测p53蛋白的表达情况,流式细胞仪（FCM）分析其细胞凋亡蛋白caspase3的表达情况。结果rAd-p53及OXA单独作用时,随药物浓度及作用时间的增加,细胞的生长抑制率逐渐增高;二者联合作用24 h,在较低浓度时细胞生长抑制率即明显增高（P值均〈0.05）;OXA（6.25μg/ml）与rAd-p53（5×105、5×106、5×107、5×108、5×109vp/ml）联合作用24 h后,与对照组比较,结肠癌细胞caspase-3蛋白的含量升高,但p53蛋白无明显升高。结论OXA和rAd-p53单药可抑制结肠癌细胞SW1116的生长,二者联合对结肠癌细胞的抑制作用增强;rAd-p53有增强OXA化疗敏感性的作用,其机制与通过线粒体途径激活下游的caspase-3诱导细胞凋亡有关。     

奥沙利铂对结肠癌细胞XIAP表达及凋亡的影响

目的 研究奥沙利铂对人结肠癌细胞株SW1116中XIAP表达及凋亡的影响,探讨其诱导凋亡的作用机制。方法 应用流式细胞仪检测XIAP表达及凋亡的情况。结果 奥沙利铂对XIAP表达有明显的抑制作用（P〈0.05）,凋亡率明显高于对照组（P〈0.01）。结论 奥沙利铂具有抑制结肠癌细胞株SW1116中XIAP表达,诱导结肠癌细胞凋亡作用,其机制与抗凋亡相关基因表达减弱有关。     

甲基转移酶1表达质粒对结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其表达的影响

目的 分析DNA甲基转移酶1(Dnmt1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其转录水平和微卫星不稳定性(MSI)的影响。方法 分别构建含有人的正义Dnmt1(HMT)和反义Dnmt1(THM)的真核表达质粒,将其转染入结肠癌SW1116细胞,以Western印迹实验分析各组细胞Dnmt1蛋白的表达情况。定量PCR检测hMLH1、hMSH2基因的表达。甲基化特异性PCR分析hMLH1、hMSH2启动子区甲基化情况,银染法研究其对微卫星不稳定性的影响。结果 转染正义Dnmt1质粒的细胞hMLH1、hMSH2的启动子甲基化水平升高,基因mRNA表达降低。转染反义Dnmt1质粒可使细胞中hMSH2启动子呈非甲基化状态,基因表达增强。未发现转染正义和反义Dnmt1基因的SW1116细胞存在MSI的变化。结论 重组Dnmt1表达质粒可通过调控人结肠癌细胞中错配修复基因的甲基化影响基因的表达。     

腺病毒介导的突变型p27对裸鼠大肠癌的抑制作用

目的:以腺病毒为载体,研究外源性突变型p27(p27mt)基因对大肠癌的体内抑制作用.方法:应用细胞移植法把人大肠癌SW480细胞接种于BALB/c裸鼠皮下,构建大肠癌裸鼠模型,将已成功构建的腺病毒介导的突变型p27(Ad-p27mt)及Lac-Z采用瘤体内直接注射法注射到瘤体内,与对照组比较,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率,并进行细胞凋亡的相关检测.结果:Ad-p27mt基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制,有明显的促凋亡作用,与Lac-Z、对照组比较,有显著性差异(P＜0.01).结论:Ad-p27mt基因对大肠癌裸鼠模型的体内肿瘤有明显的抑制作用.     

野生型p53基因转染对人胃癌细胞系HGC27生长的抑制作用

目的 研究野生型p53基因对人未分化胃癌细胞系HGC27生长的抑制作用。方法 用表达人野生型p53基因全长cDNA的真核载体pcDNA3—p53，转染人未分化胃癌细胞系HGC27，对转染后细胞进行生长曲线、细胞生长抑制率及流式细胞术分析，观察其生物学特性变化。结果 外源野生型p53基因在HGC27细胞内稳定表达，经pcDNA3—p53转染的HGC27细胞生长速度受到明显抑制，流式细胞分析显示G1期增加，S期下降，细胞出现凋亡。结论 野生型p53基因能在HGC27细胞内表达，且能抑制其生长并促进细胞凋亡。     

突变型p27基因治疗裸鼠大肠癌移植瘤的研究

目的:研究外源性突变型p27(p27 m t)基因对大肠癌的体内抑制作用。方法:应用细胞移植法把人大肠癌SW 480细胞接种于BALB/c裸鼠皮下,构建大肠癌裸鼠模型,将腺病毒介导的突变型p27(Ad-p27 m t)及Lac-Z注射到瘤体内,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率,并进行细胞凋亡及MMP-9的相关检测。结果:Ad-p27 m t基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制,MMP-9的表达也明显较低,与Lac-Z、空白对照组比较,有显著性差异(P<0.01)。结论:Ad-p27 m t基因对大肠癌裸鼠的体内肿瘤有明显的抑制作用,并能抑制MMP-9。