腺相关病毒Rep78蛋白抑制乙型肝炎病毒复制的体外研究

目的 研究腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)Rep78蛋白对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用及机制.方法 将土拨鼠肝炎病毒(WHV)全基因组DNA从质粒中酶切回收,线状DNA重新连接呈环状.用脂质体Fugene 6体外转染至HepG2细胞,同时共同转染含有Rep78的质粒AAVdl52-91.5 d后收获细胞DNA,Southern blot检测WHV DNA复制.以含有HBV全长的质粒为模板,PCR法分别扩增出HBV-S、C和X基因全长.以凝胶电泳阻滞实验(EMSA)检测Rep78与HBV-S、C和X的结合.结果 Southern blot结果表明,AAV-Rep78可以明显抑制WHV病毒在HepG2细胞中的复制,并呈剂量依赖关系.EMSA结果显示,Rep78蛋白在体外能够与HBV-S、C和X的DNA结合,其中与HBV-C的结合最强而且有剂量依赖关系.此外,这种Rep78蛋白与HBV-C DNA结合可以被特异性的Rep78抗体阻滞,形成超结合带.结论 AAV-Rep78可以抑制HBV DNA的复制,其机制可能在于Rep78蛋白结合并抑制了HBV-C基因.     

土拨鼠肝炎病毒可复制性克隆的构建和鉴定

HBV慢性感染迄今仍缺乏特效的治疗措施,其中主要原因之一是缺乏完善的体内和体外复制系统。土拨鼠肝炎病毒（WHV）发现于1978年,与HBV同属于正嗜肝病毒。研究发现,WHV在形态学、基因组结构、基因产物、复制过程、流行病学、感染过程及致病、致癌等方面都与HBV非常相似。目前,土拨鼠-WHV模型是人类HBV感染较理想的动物模型,已经用于疫苗开发、治疗性疫苗和抗病毒药物的研究,以及病毒生活周期、致病致癌分子机制的研究。     

乙型肝炎病毒前C区基因突变的研究进展

本文综述了乙型肝炎病毒(HBV)前C区基因突变的研究进展。前C区某些部位,特别是第1896位核苷酸的终止突变,使HBV失去分泌HBeAg的能力,但不影响其复制与传染。前C区突变的发生除与HBV前基因组逆转录过程中缺乏校验酶而发生碱基错配有关外,主要与宿主的免疫压力有关。前C区的突变常伴有其它基因特别是C基因的突变,共同影响突变株的生物学特性及宿主的临床转归,使某些突变株与重症肝炎的发生及干扰素的疗效关系密切,在母婴传播及肝移植中具有特殊意义。     

X基因——抗乙型肝炎病毒治疗的新靶点

X基因是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的四个基因之一.最近的研究表明,他不仅参与HBV感染宿主过程,还影响HBV病毒基因的复制和表达,直接或/和间接通过宿主的免疫反应或其他作用,导致HBV致病的系列病理过程,而且在HBV生命周期中具有非常重要的作用.降低或去除X基因转录,或者封闭X蛋白某些功能以及使X基因表达沉默均能显著抑制病毒复制水平.本文通过对X基因在HBV复制和基因表达中的作用以及针对X基因的干预对HBV复制和基因表达的影响的最新研究成果进行综述,提出X基因是乙肝抗病毒治疗的一个新靶点.     

一个新的负性调控元件对乙型肝炎病毒X启动子启动作用的调节

目的在前期工作已证实HBV基因中的250～453nt为一个新的负性调控元件的基础上,探讨其对HBV X启动子(XP)启动作用的影响。方法构建含250～453nt的HBV X启动子驱动虫荧光素酶表达的质粒pNRE-XP,与表达海肾荧光素酶的质粒RL-TK共转染人肝癌HepG2细胞,用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶表达,RT-PCR检测虫荧光素酶基因mRNA水平的表达,并与相应对照组进行比较。同时,在含HBV全基因组的质粒LJ196上通过缺失突变的方法除去250～453nt片段,将其与反式提供C、P蛋白的质粒LJ96共转染HepG2细胞,RT-PCR检测X基因mRNA表达,并与对照组比较。结果该负性调控元件存在时,HepG2细胞中虫荧光素酶活性明显低于对照组;逆转录聚合酶链反应中虫荧光素酶基因mRNA表达也低于相应的对照组。在LJ196上突变掉250～453nt后,X基因表达量高于对照组。结论该负性调控元件可下调HBV XP的启动作用,在HBV基因组上缺失掉该片段后XP驱动下的基因表达增加。     

HBV基因突变与肝细胞癌发生关系研究进展

HBV感染是引起肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生的主要因素,我国HCC患者中的HBs Ag阳性率为60%~70%,因此HBV防治成为全球医疗热点问题。HBV包含4个开放阅读框(pre S/S、pre C/C、P、X),它们中的各种点突变、缺失、插入及截短突变与HCC发生相关。一些突变和乙型肝炎重症化有关,可作为预测HCC发生的生物学指标;一些突变产生的特定HBV抗原直接或间接调节细胞周期及细胞凋亡等相关蛋白分子,促进细胞增殖及染色体不稳定,增加HCC发生风险。     

乙型肝炎病毒X基因-丙型肝炎病毒C基因共表达对血管内皮细胞生长因子的影响

目的建立乙型肝炎病毒X基因-丙型肝炎病毒C基因（HBV X—HCV C）共表达HepG2细胞模型，并探讨其对血管内皮细胞生长因子表达的影响。方法双酶切质粒pXT1—X，得到完整的HBV X基因片段后，将其插入到质粒PBK—CMV和PBK—HCV C的相应酶切位点，得到重组质粒PBK—X和PBK—X—C；再将质粒PBK—CMV、PBK—X、PBK—HCV C和PBK—X—C分别导入肝癌细胞株HepG2中，G418筛选，逆转录聚合酶链反应、Western blot鉴定HBV X和HCV C蛋白表达，免疫组织化学、Western blot检测血管内皮细胞生长因子蛋白质表达。结果质粒PBK—CMV、PBK—X、PBK—HCV C和PBK—X—C在HepG2细胞中有稳定表达。共表达HBV X—HCV C蛋白的细胞血管内皮细胞生长因子蛋白质表达较转染空载体的细胞及单独表达HBV X、HCV C蛋白的细胞明显升高。结论HBV X—HCV C共表达能显著上调血管内皮细胞生长因子蛋白质表达，提示HBV、HCV可能具有协同致癌作用。     

应用寡核苷酸芯片对乙型肝炎病毒转染HepG2细胞基因表达谱的研究

HBV与肝细胞之间相互作用的分子机制还不清楚，对HBV蛋白调控宿主细胞基因表达情况也了解甚少。本实验选用基因芯片进行HBV基因表达谱改变的研究，筛选HBV感染应答基因，探讨HBV感染的分子致病机制，寻找预防和治疗HBV感染的靶点。     

乙型肝炎病毒C基因变异株的体外构建及其生物学意义

目的了解我国乙型肝炎病毒(HBV)C区变异的生物学意义.方法采用酶切位点消除法定点突变构建HBV C基因变异株(V60、G87、L97)真核细胞表达载体;转染HepG2细胞用ELISA法检测各毒株宿主细胞上清液中HBeAg.结果与野生毒株相比,构建的变异株前C/C区碱基除目的突变点外,其他碱基均同源.在重组质粒转染的宿主细胞中检测到目的DNA片段.L97变异株宿主细胞上清液HBeAg的A值在不同时间点均高于野生株和其他变异株(P＜0.001);G87宿主细胞上清液中HBeAg的A值均为阴性,但浓缩10倍后阳性;V60宿主细胞上清液中HBeAg的A值与野生株差异无显著性.结论HBV前C/C区V60、G87和L97变异株可有不同的HBeAg分泌.     

乙型肝炎病毒X基因-丙型肝炎病毒C基因共表达对肝癌细胞胰岛素样生长因子-2表达的影响

目的 建立HBV X-HCV C共表达蛋白细胞表达模型,并探讨其对细胞胰岛素样生长因子-2(IGF-2)的影响.方法 双酶切质粒pXT1-X,得到完整的HBV X基因片段后,将其插入到质粒PBK-CMV和PBK-HCV C的相应酶切位点,得到重组质粒PBK-X和PBK-X-C;再将质粒PBK-CMV、PBK-X、PBK-HCV C和PBK-X-C分别导人肝癌细胞株HepG2中,G418筛选,RT-PCR、蛋白印迹鉴定HBV X和HCV C蛋白表达.流式细胞仪、蛋白印迹检测IGF-2蛋白表达.结果 质粒PBK-CMV、PBK-X、PBK-HCV C和PBK-X-C在HepG2细胞中有稳定表达.表达共表达蛋白的细胞的胰岛素样生长因子-2活性较转染空载体的细胞及单独表达HBV X-HCVC蛋白的细胞明显升高.结论 HBV X-HCV C共表达蛋白能显著上调胰岛素样生长因子-2活性,提示HBV、HCV可能具有协同致癌作用.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.