自制"表活显"对白细胞的靶向性机制研究

目的研究自制"表活显"(self-made surfactant fluorocarbon-filled microbubbles,SFCMB)结合磷脂酰丝氨酸(phospha-tidylserine,PS)后对白细胞的靶向性作用机制.方法流式细胞仪测定白细胞激活前和激活后与SFCMB-PS的结合情况,补体和β2整合素中的Mac-1缺乏时激活的白细胞与SFCMB-PS的结合情况.结果未激活的白细胞与微泡的结合率为(5.27±0.75)%,激活的白细胞与微泡的结合率为(39.67±6.83)%,结合率明显提高(P＜0.01);补体和β2整合素中的Mac-1缺乏时,两者的结合明显受到抑制,结合率降到(12.27±1.66)%(P＜0.01)和(10.90±2.40)%(P＜0.01).结论SFCMB-PS是通过β2整合素中的Mac-1和补体介导途径与激活的白细胞结合并进入细胞内的.     

犬缺血再灌注心肌靶向超声造影图像的组织定征量化研究

目的用超声组织定征量化分析白细胞靶向超声造影剂对犬心肌缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I-R)损伤声像图。方法将自制超声微泡造影剂"表活显"(self-madesurfactantfluorocarbon-filledmicrobubbles,SFCMB)与磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)结合,制备成白细胞靶向超声微泡造影剂(SFCMB-PS),在实时心脏超声造影条件下,用SFCMB-PS对9只犬心肌I-R模型进行延迟心肌显像。实验结束后,在心肌I-R损伤处取组织块立即进行髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性测定。超声组织定征定量分析缺血再灌注损伤心肌。结果I-R损伤心肌声像图的回声强度[(22.56±4.62)GS]明显增高,与正常心肌[(16.57±3.82)GS]和缺血心肌[(5.00±2.58)GS]比较,差异均有统计学意义(P<0.01),而且其与MPO活性有良好的相关关系(r=0.776,P<0.05)。结论超声组织定征定量分析缺血再灌注心肌靶向超声显像能够较准确、客观地反映再灌注损伤的严重程度。     

蛋白微泡声学造影剂在缺血再灌注心肌中排空现象及其机制的探讨

目的　探讨蛋白外壳含氟烷微泡声学造影剂在缺血再灌注 (I/R)心肌中的排空现象及其机制。方法　建立开胸犬I/R模型 ,再灌注前后采用氟烷微泡声学造影剂及间歇谐波技术行心肌声学造影 ,测定造影剂在心肌内的排空时间。光镜及电镜观察离体白细胞与蛋白微泡的粘附过程 ,流式细胞仪测定白细胞与微泡混合后 ,整合素对荧光强度的影响。结果　蛋白微泡声学造影剂流经I/R心肌时出现显著的延迟排空现象。蛋白微泡与佛波醇 (PMA )激活的白细胞接触后 5min大量结合到白细胞表面 ,未激活的白细胞表面少有微泡粘附 ( 2 0 .3± 2 .7对 4.5± 1.4,P <0 .0 1)。15min时微泡被吞噬入细胞内 ,并保持形态完整至 3 0min。两者的结合可被Mac 1mAb大部分阻止 ( P <0 .0 1) ,VLA 4mAb轻度阻止 ( P <0 .0 5 )。结论　蛋白微泡声学造影剂在I/R心肌延迟排空的可能机制是蛋白微泡经 β2 整合素Mac 1和VLA 4介导与I/R后激活的白细胞结合 ,并进入细胞内从而在炎症部位停留。     

靶向超声微泡造影剂对犬缺血再灌注心肌的延迟显像研究

目的用自制的靶向超声微泡造影剂,实现无创性地评价犬心肌缺血再灌注(I-R)的范围及严重程度.方法将本研究所自行研制的表面活性剂类超声造影剂--"表活显"表面,结合上磷脂酰丝氨酸(PS),制备成具有靶向性的造影剂(MB-PS),用MB-PS对犬I-R模型在实时心脏超声造影条件下进行延迟心肌显像,实验结束后,心肌经0.5%伊文思蓝(Evens)和1%氯化三苯四氮唑(TTC)染色,确定缺血及坏死心肌范围,并与延迟心脏超声造影显像结果比较其一致性.结果细胞流式术(FC)证明了PS结合在造影剂微泡的表面,延迟心肌显像表明缺血再灌注区的造影剂回声较正常区的回声明显增强,与病理染色结果基本一致.结论缺血损伤再灌注后,心肌缺血部位的造影剂回声较其余部位正常心肌的造影剂回声明显增强,正是因为 MB-PS聚集并停留在缺血-再灌注区,才使得超声可以发现微泡的回声,从而得以无创性地评价炎症发生的部位及其严重程度.     

白细胞靶向超声造影显像无创评价犬心肌缺血再灌注损伤

目的 用白细胞靶向超声造影剂无创评价犬心肌缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I-R）损伤的范围及严重程度。 方法 将自制“表活显”（self-made surfactant fluorocarbon-filled microbubbles，SFCMB）与磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine，PS）结合，制备成白细胞靶向超声造影剂（SFCMB-PS），在实时心脏超声造影（myocardial contrast echocardiography，MCE）条件下，用SFCMB-PS对9只犬心肌I-R模型进行延迟心肌显像。实验结束后，在心肌I-R损伤处取组织块立即进行髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）活性测定。 结果 延迟心肌显像可见缺血心肌部位有明显充盈缺损，而再灌注后心肌的造影剂回声明显增强。定量分析结果表明I-R损伤心肌部位声像图的灰阶强度与MPO活性有明显的相关关系（r=0．776，P〈0．05）。 结论 用白细胞靶向超声造影剂评价心肌I-R损伤有明显的临床价值。     

双靶向超声微泡造影剂评价小鼠缺血再灌注心肌

目的 制备同时携载P选择素和ICAM-1抗体的靶向超声微泡造影剂,以评估小鼠缺血再灌注损伤心肌声学造影显像效果.方法 采用生物素-亲和素方法制备靶向微泡,于激光共聚焦显微镜下观察微泡形态,流式细胞仪检测连接效率.将24只健康昆明小鼠随机分成3组:结合双抗体选择素微泡组(MBd组)10只、结合P选择素单抗组(MBp组)10只,空白微泡组(MBc组)4只.结扎冠状动脉左前降支近左主干分支,制作心肌缺血再灌注模型,60 min后经尾静脉分别注射MBd、MBp及MBc,采集心肌对比造影图像.所有图像均采用Sonomath超声影像分析仪处理.结果 MBd组和MBp组对缺氧内皮细胞的黏附力以及对缺血再灌注区心肌显像增强程度显著高于MBc组(P均＜0.05),MBd组对缺血再灌注区心肌显像延迟时间高于MBp组(P＜0.05).结论 双靶向微泡联合超声造影是检测和评估小鼠缺血再灌注心肌的无创性手段.     

利用白细胞靶向超声造影无创检测心肌缺血再灌注损伤

心肌缺血再灌注发生后 ,白细胞可大量渗入心肌层使心肌细胞受损甚至坏死。本研究用于检测如下假说 :利用白细胞靶向声学造影剂进行心脏超声造影检查 ,可以对心肌缺血再灌注后心肌炎的发生范围及其程度进行良好评价。方法 :将磷脂酰丝氨酸 (ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ ,ＰＳ)结合于脂质微泡外壳制成可与白细胞靶向结合的新型造影剂 (ＭＢ -ＰＳ)。将9只 3 0～ 3 5ｋｇ的实验犬开胸 ,先静脉注射Ｏｐｔｉｓｏｎ行心脏超声造影检查评估各动物心肌血流灌注情况 ,再将其中 6只犬的冠状动脉左前降支或左旋支钳夹 90ｍｉｎ ,钳夹期间 ,再…     

超声组织定征视频法监控兔缺血再灌注肾靶向声学造影实验研究

目的定量评价自制靶向超声造影剂对兔缺血再灌注肾显像的靶向增强效果。方法将磷脂酰丝氨酸(phos-phatidylserine,PS)加在自制表面活性剂类超声造影剂微泡壁上,用有和无PS造影剂分别对6只肾缺血再灌注损伤兔进行声学造影,谐波显像观察肾实质回声的变化,用国产“DFY-2型超声图像定量分析诊断仪”对兔肾实质灰阶(GS)值进行动态定量分析。结果造影后,有和无PS组GS峰值分别高于造影前(P<0.001和P<0.05);有PS组GS峰值高于无PS组(P<0.001)。结论超声组织定征视频法可定量评价兔缺血再灌注肾靶向声学造影的增强效果。     

携抗ICAM-1靶向微泡定向转染Ang-1基因治疗急性心肌梗死

研究背景 基因治疗为难治性心肌缺血提供了新方法,但通过静脉途径导入体循环的外源性基因缺乏组织特异性,难以在靶组织局部停留,疗效较低。目的 利用缺血时心肌内皮细胞黏附分子-1(ICAM-1)表达增高的特点,探讨心肌梗死时利用抗ICAM-1靶向微泡能否提高血管生成素-1基因在体内的转染效率。方法 体外实验检测抗ICAM-1靶向微泡与经人白细胞介素-1β刺激后的ECV304细胞结合的程度。体内实验分三组:①对照组:hAng-1基因+超声照射;②非靶向微泡组:携hAng-1基因微泡+超声照射;③靶向微泡组:携hAng-1基因的抗ICAM-1靶向微泡+超声照射。制作兔急性心肌梗死模型,分别用上述三种方法从静脉导入hAng-1基因,各组动物均于梗死模型建立后当天和基因转染2周后进行常规超声检查和心肌造影;2周后心肌造影检测转染区心肌灌注状况,RT-PCR检测hAng-1基因的mRNA 表达以评价转染疗效。结果 携抗ICAM-1抗体的微泡在体外能大量靶向结合到产生炎性反应的ECV304内皮细胞周边。应用靶向微泡转染后缺血心肌2周后,左心室内径减小,左心室射血分数升高,但与非靶向微泡组无显著性差异,而心肌造影显示心肌内造影剂填充量较非靶向微泡组增多,RT-PCR定量灰度分析hAng-1mRNA高于非靶向微泡组(1.04±0.08vs0.53±0.04,P<0.01)。结论 微泡与抗ICAM-1抗体连接后形成靶向微泡载体,可明显提高hAng-1基因在体内的转染效率,增加心肌梗死后局部的血管新生效应。     

靶向微泡造影剂促进兔心肌梗死骨髓干细胞移植后血管新生及心肌力学改变

目的 应用斑点追踪技术评价靶向微泡造影剂注射后兔心肌梗死区域骨髓干细胞移植疗效。 方法 制备靶向微泡超声造影剂(携CD34单克隆抗体)。将36只新西兰大白兔随机分为对照组(单纯移植组)、普通造影剂组(移植+C组)及靶向造影剂组(移植+T组),分别于急性心肌梗死(AMI)前、AMI后3天、干细胞移植术后4周行心肌超声造影(MCE),采用彩色编码参数量化(PQ)技术对比各组干细胞移植前后梗死区域心肌灌注参数,同时对3组动物心肌梗死干细胞移植区域心肌的径向应变率(SrR)、圆周应变率(SrC)、旋转率(RotR)、收缩期S峰值及心肌扭转角度(Rot)进行斑点追踪分析,并于移植4周后检测微血管密度。 结果 干细胞移植后各心肌节段的A、β和A×β值均较本组内移植前改善,移植+T组改善最为明显(P均<0.05)。各组左心室前壁的SrR、SrC、RotR及Rot均较本组内移植前增高(P均<0.01),并与左心室射血分数相关。 结论 靶向微泡造影剂对兔骨髓干细胞移植后微血管新生具有一定作用。     

Numerical comparison of X-ray differential phase contrast and attenuation contrast

We present a numerical tool to compare directly the contrast-to-noise-ratio (CNR) of the attenuation- and differential phase-contrast signals available from grating-based X-ray imaging for single radiographs. The attenuation projection is differentiated to bring it into a modality comparable to the differential phase projection using a Gaussian derivative filter. A Relative Contrast Gain (RCG) is then defined as the ratio of the CNR of image values in a region of interest (ROI) in the differential phase projection to the CNR of image values in the same ROI in the differential attenuation projection. We apply the method on experimental data of human breast tissue acquired using a grating interferometer to compare the two contrast modes for two regions of interest differing in the type of tissue. Our results indicate that the proposed method can be used as a local estimate of the spatial distribution of the ratio δ/β, i.e., real and imaginary part of the complex refractive index, across a sample.     

Prolonged contrast of kidney tumors using an oily x-ray contrast medium

In 194 patients with tumourous kidney disease an angiographic investigation with the oily x-ray contrast medium Iodolipol was carried out. A selective tropism of oily-x-ray contrast media was found that was only retained in zones of malignant disease. The application of the preparation caused no complications. The oily x-ray contrast medium persisted in the tumours over several weeks or months. After embolization of the renal artery a moderate size reduction of malignant tumours in the first 10-14 d was seen. The ability of Iodolipol for a lasting retainment in malignant tumour tissue allows a follow-up of the involution of the pathologic focus after arterial embolization of the tumour vessels.     

Deriving high contrast fluorescence microscopy images through low contrast noisy image stacks

Contrast in fluorescence microscopy images allows for the differentiation between different structures by their difference in intensities. However, factors such as point-spread function and noise may reduce it, affecting its interpretability. We identified that fluctuation of emitters in a stack of images can be exploited to achieve increased contrast when compared to the average and Richardson-Lucy deconvolution. We tested our methods on four increasingly challenging samples including tissue, in which case results were comparable to the ones obtained by structured illumination microscopy in terms of contrast.     

阳性亲淋巴对比剂增强MR淋巴造影对淋巴结成像的实验验证

目的研究大分子阳性亲淋巴对比剂二氨基乙基乙二醇醚-DTPA酰胺共聚物钆配合物（Gd-poly-DTPA-EOEA）增强MR淋巴造影对肿瘤转移、炎性增生淋巴结显像的鉴别诊断价值。方法本研究共14只新西兰大白兔,其中7只于后肢注射完全型免疫佐剂,建立腘窝淋巴结的炎性增生组模型,另7只于后肢肌肉内接种VX2瘤,建议腘窝淋巴结肿瘤转移模型,对侧正常腘窝淋巴结作为对照。实验兔在接种前后行2次MR淋巴造影检查。图像3D重建后,选取兔腘窝淋巴结中直径最大者测量其各观察时间点的信噪比。采用成组设计t检验比较每一观察时间点的正常对照侧、炎性增生侧、肿瘤转移侧淋巴结之间的信噪比差异,并与病理检查结果相对照。结果1只兔接种肿瘤未成功,其他接种均良好。全部模型兔均完成二次MR淋巴造影检查。在MR淋巴造影图像上,炎性增生组在各扫描时间点,炎性侧与对照侧腘窝淋巴结信噪比之间差异均无统计学意义（P>0.05）。肿瘤转移组在各扫描时间点,肿瘤侧与对照侧腘窝淋巴结信噪比之间差异均有统计学意义（P<0.01）。进一步比较炎性侧和肿瘤侧腘窝淋巴结,在各扫描时间点,炎性侧与肿瘤侧腘窝淋巴结信噪比差异有统计学意义（P<0.01）。结论基于大分子阳性亲淋巴对比剂Gd-poly-DTPA-EOEA增强的MR淋巴造影是特异性地鉴别良、恶性淋巴结的敏感检查方法。