长链非编码RNA H19抑制地塞米松致成骨细胞凋亡的作用

背景：激素性股骨头坏死的发病机制尚不清楚,成骨细胞凋亡与其关系密切。目的：探讨长链非编码RNA H19(long Non-Coding RNA H19,lncRNA H19)在地塞米松促进成骨细胞凋亡中的作用。方法：培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,分为对照组(不处理)和地塞米松组(1μmol/L地塞米松处理24 h),采用Western blot检测各组细胞Bax、Bcl-2和细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2/ERK1/2)蛋白的表达,流式细胞术和细胞活力染色检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测lncRNAH19的表达。转染lncRNA H19阴性对照(ad-NC)和lncRNA H19过表达质粒(ad-lncRNA H19)并给予地塞米松干预24 h后,采用细胞活力染色、Western blot和流式细胞术检测MC3T3-E1细胞凋亡情况;使用MAPK-ERK通路抑制剂PD98059处理MC3T3-E1细胞24 h,Western blot检测各组细胞Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果与结论：(1)与对照组相比,地塞米松组MC3T3-E1细胞凋亡率升高,lncRNA H19相对...     

黄芩素诱导乳腺癌细胞自噬

目的:考察黄芩素诱导乳腺癌细胞的自噬作用,并初步探讨其机制。方法:采用MTT实验考察黄芩素对乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞活力的影响,确定给药剂量。Western blot检测黄芩素(25、50和100μmol/L)及联合自噬抑制剂3-MA作用下,MCF-7细胞和4T1细胞中自噬特征蛋白LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ的表达水平,流式细胞术Annexin V/PI双染法观察3-MA对黄芩素诱导MCF-7细胞和4T1细胞凋亡的影响,确认黄芩素诱导自噬的作用。通过Western blot考察自噬信号通路相关蛋白p-mTOR、mTOR、p-AKT和AKT的蛋白水平,结合AKT-mTOR激活剂EGF明确AKT-mTOR通路在黄芩素诱导乳腺癌自噬中的作用。结果:50μmol/L及其以上剂量的黄芩素可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞的活力,其作用具有显著的时效和量效性。Western blot结果表明,50和100μmol/L黄芩素作用下MCF-7细胞和4T1细胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例显著增强,3-MA加入后又明显降低。流式细胞术结果显示,相比黄芩素单用组,联合自噬抑制剂可促进MCF-7细胞的坏死和凋亡。通路蛋白研究表明mTOR和AKT总量不变,其活化蛋白水平在黄芩素作用下显著降低,而加入EGF后又再次增加。结论:黄芩素可通过抑制AKT-mTOR通路诱导乳腺癌MCF-7细胞和4T1细胞自噬。     

NR2F2促进小鼠MC3T3-E1前成骨细胞增殖

目的探讨NR2F2基因对小鼠前成骨细胞增殖的影响。方法用实时定量PCR检测mRNA表达量,MTS法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,ELISA-Brdu法检测细胞DNA合成速度。结果在小鼠MC3T3-E1前成骨细胞增殖速度加快时,NR2F2基因的表达增高至对照的4.57±0.30倍(P<0.01)。过表达NR2F2基因促使MC3T3-E1细胞增殖速度加快,细胞数量增加(P<0.01),细胞周期中S期细胞比例明显升高,为对照组的2倍,G2/M期比例也有增加(P<0.05)。过表达NR2F2基因使MC3T3-E1细胞的Brdu掺入率增高,DNA的合成加速(P<0.01)。结论 NR2F2使S期细胞比例增加,促进小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的增殖速度。     

大麻素2型受体激活对钛颗粒诱导成骨细胞凋亡的干预作用

BACKGROUND: Impaired osteogenesis caused by osteoblast apoptosis is a main reason of aseptic loosening. Type-2 cannabinoid receptor activation can promote osteoblast proliferation and reduce apoptosis. OBJECTIVE: To investigate the inhibitory effect of HU-308 (type-2 cannabinoid receptor agonist) on the osteoblastic MC3T3-E1 cells co-cultured with titanium particles and its relative mechanism. METHODS: Mouse MC3T3-E1 cells were cultured in vitro and divided into five groups: cells were cultured in the normal medium as blank control group, cultured in the medium with 2.5 g/L titanium particles as titanium group, cultured in the medium containing 2.5 g/L titanium particles plus 10^-9, 10^-8 and 10-⁷ mol/L HU-308 as low-, medium- and high-concentration groups, respectively. Forty-eight hours later, cell proliferation, apoptosis, levels of reactive oxygen species and mitochondrial membrane potential as well as Caspase-3 activity were assessed. RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the black control group, the cell proliferation activity and the level of mitochondrial membrane potential were significantly reduced and the apoptosis rate, the level of reactive oxygen species and Caspase-3 activity were significantly increased in the titanium group (P < 0.01 or P < 0.05). Compared with the titanium group, the cell proliferation activity and the level of mitochondrial membrane potential significantly increased in the high-concentration group, and the apoptosis rate and Caspase-3 activity significantly decreased in the medium- and high-concentration groups (P < 0.05). These findings demonstrate that HU-308 can effectively improve the impaired osteogenesis induced by titanium particles, probably through modulating reactive oxygen species and elevating mitochondrial membrane potential and Caspase-3 activity.      

MC3T3-E1细胞成骨模型的应用及研究进展

骨形成与骨重建涉及各种细胞的协同作用。通过各种体外培养模型,在了解成骨过程的生物学方面取得了显著进展。当前,骨组织工程研究火热,但由于原代人成骨细胞十分有限,这些细胞模型越来越多地被应用。MC3T3-E1细胞是前骨细胞,该细胞在研究骨骼疾病和骨缺损的细胞治疗及组织工程方面具有较大潜力。本文全面回顾了MC3T3-E1细胞成骨模型的培养、鉴定及应用等方面内容。此外,还进一步讨论了该模型的优缺点并提出了几点展望。     

Tmed2促进体外小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖

 摘要：目的 研究Tmed2基因对小鼠前成骨细胞增殖的影响。 方法 1.分别在小鼠MC3T3-E1细胞中过表达和抑制Tmed2,检测细胞增殖情况。2. 用雌激素处理细胞后,检测细胞的增殖及Tmed2基因的表达量。荧光实时定量PCR检测mRNA水平,MTS法检测细胞活力和增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测蛋白水平。结果 过表达Tmed2使MC3T3-E1细胞的增殖速度加快,细胞周期中S期细胞比例明显增加,且Cyclin A 的表达升高。而抑制Tmed2基因表达使MC3T3-E1细胞的增殖速度减慢。雌激素处理使细胞增殖速度加快的同时,Tmed2基因的表达显著增高。结论 Tmed2通过上调Cyclin A 的表达,使S期细胞比例增加,加快小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的增殖。此外,Tmed2的表达受雌激素的调控,可能参与雌激素促进MC3T3-E1细胞增殖的作用。     

Txndc5介导雌激素诱导的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖加快

 目的 研究Txndc5基因在小鼠前成骨细胞增殖中的作用。 方法 用雌激素诱导小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1,或在MC3T3-E1细胞中分别用质粒载体过表达Txndc5和用siRNA抑制Txndc5的表达后,Western blot检测Txndc5和细胞周期蛋白水平,荧光实时定量PCR检测Cyclin A的mRNA水平,MTS法和细胞计数法检测细胞增殖速度,流式细胞术检测细胞周期。 结果 雌激素诱导MC3T3-E1增殖加快时,Txndc5的蛋白水平亦上升。抑制Txndc5的表达阻止雌激素的促细胞增殖作用。过表达Txndc5使MC3T3-E1细胞增殖速度加快,S期细胞比例增加,同步化细胞进入细胞周期18h时,过表达Txndc5组Cyclin A 的表达升高,且S期细胞比例为18.69%±4.08%,而对照组仅为8.15%±3.68%。抑制Txndc5的表达则使MC3T3-E1细胞增殖速度减慢,S期细胞比例减少,Cyclin A 的表达下降。抑制Cyclin A的表达减弱Txndc5的促细胞增殖作用。结论 Txndc5通过上调Cyclin A 的表达介导雌激素的促前成骨细胞增殖作用。     

圣草酚通过激活Nrf2/HO-1通路减轻大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的:探讨圣草酚(eriodictyol)在大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用及机制.方法:50只幼龄Wistar大鼠分为健康对照组、模型(HIBD)组、HIBD+eriodictyol 1 mg/kg组和HIBD+eriodictyol 2 mg/kg组和HIBD+eriodictyol 4 mg/kg组,每组...     

miR-210-3p通过自噬调控MC3T3-E1细胞成骨分化的机制研究

目的:探讨微小RNA-210-3p(microRNA-210-3p, miR-210-3p)通过自噬对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化的影响。方法:(1)采用脂质体转染法构建miR-210-3p过表达或沉默的MC3T3-E1细胞模型,设置阴性对照(negative control, NC) mimic组、miR-210-3p mimic组、NC inhibitor组和miR-210-3p inhibitor组,Western blot、RT-qPCR和免疫荧光法检测MC3T3-E1细胞成骨分化相关指标及自噬相关指标的变化,茜素红染色法观察矿化结节形成情况。(2)用雷帕霉素(rapamycin, RAPA)和3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)分别构建自噬激活和抑制模型,设置control组、RAPA组和3-MA组,Western blot、RT-qPCR和免疫荧光法检测自噬激活或抑制后MC3T3-E1细胞成骨分化相关指标的变化,茜素红染色法观察矿化结节形成情况。(3)设置NC mimic组、NC mimic+RAPA组和miR-210-3p mimic+R...     

骨碎补总黄酮联合纳米骨材料促进MC3T3-E1细胞的增殖分化

文题释义： 骨碎补总黄酮：是由水龙骨科植物槲蕨的干燥根茎中提取的有效成分,骨碎补总黄酮能够促进成骨细胞增殖,抑制破骨细胞成熟分化。 Wnt/β-catenin信号通路：是一类高度保守的信号通路,广泛存在于多细胞真核生物中,是皮肤发育过程中出现最早的分子信号,调控毛囊的生长发育和毛囊干细胞的迁移分化。β-catenin作为细胞内信号传导蛋白,是Wnt信号通路激活的一种重要的上皮细胞表面黏附分子,能够进入细胞核内传递Wnt信号,进一步激活靶基因开始转录,启动细胞增殖周期。 背景：前期研究发现,骨碎补总黄酮可促进纳米骨材料表面MC3T3-E1细胞的成骨分化,其作用机制有待进一步研究。 目的：探究骨碎补总黄酮联合纳米骨材料对MC3T3-E1细胞发挥作用的机制。 方法：将MC3T3-E1细胞与纳米骨材料共培养,选取100 mg/L和250 mg/L骨碎补总黄酮进行药物干预,以10 μg/L转化生长因子β刺激为阳性对照组。分组如下：①正常组;②DKK1组：Wnt通路抑制剂DKK1      (0.1 mg/L)阻断Wnt/β-catenin信号通路;③DKK1+转化生长因子β组;④DKK1+100 mg/L骨碎补总黄酮组;⑤DKK1+250 mg/L骨碎补总黄酮组;⑥DKK1+纳米骨+转化生长因子β组;⑦DKK1+纳米骨+100 mg/L骨碎补总黄酮组;⑧DKK1+纳米骨+250 mg/L骨碎补总黄酮组。在干预24,48 h后收获细胞,免疫荧光双染法观察Wnt/β-catenin通路中Wnt与LRP结合情况,Real-time PCR和Western blot检测β-catenin、LRP5、Gsk-3β、Cyclin D1、RUNX2的表达。 结果与结论：①激光共聚焦扫描显微镜下显示DKK1+转化生长因子β组、DKK1+250 mg/L骨碎补总黄酮组、DKK1+纳米骨+转化生长因子β组、DKK1+纳米骨+250 mg/L骨碎补总黄酮组棕黄色染色较明显,表明Wnt与LRP结合较其他组更好;②Real-time PCR和Western blot结果显示,骨碎补总黄酮可促进β-catenin、LRP5、RUNX2的表达,下调GSK-3β的表达,说明骨碎补总黄酮通过激活经典Wnt/β-catenin 信号通路促进成骨细胞增殖分化,且骨碎补总黄酮诱导的基因活化呈剂量依赖性。 ORCID: 0000-0002-2031-8644(李晋玉) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

木犀草素通过减少心肌细胞凋亡和自噬减轻缺血再灌注大鼠心肌损伤

目的 ：观察木犀草素（Lut）对大鼠心肌缺血再灌注（IR）损伤的作用,并探讨其可能机制。方法 ：雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组（Sham组）、IR组和木犀草素组（Lut组）。缺血再灌注120 min后,检测血浆白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）和心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达水平。二氢乙锭（DHE）检测活性氧（ROS）,末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测心肌细胞凋亡,电镜观察自噬小体。免疫印迹检测Bax、Bcl-2、裂解caspase-9、AKT、p-AKT、STAT3、p-STAT3、LC3、p62、mTOR和p-mTOR的蛋白表达。结果：木犀草素可显著降低IR后血浆IL-1β、IL-6、MDA、CK-MB和cTnT水平,上调SOD和GSH-Px水平。此外,木犀草素可降低IR诱导的ROS累积、心肌细胞凋亡和自噬,并在IR过程中激活了AKT、STAT3和mTOR信号通路。结论 ：木犀草素可能通过抑制氧化损...     

β-蜕皮甾酮促进小鼠前成骨细胞体外增殖及诱导成骨分化

文题释义：β-蜕皮甾酮：又称蜕皮激素、20-羟基蜕皮甾酮,分子式C₂₇H₄₄O₇,为黄棕色至白色粉末,味苦;主要存在于昆虫、蚕、露水草、牛膝、川牛膝等动植物体内,具有调节血糖血脂、促进胶原蛋白合成、抗疲劳、促进细胞生长和刺激真皮细胞分裂等作用,目前广泛应用于化妆品、医疗以及养殖业等领域。骨形态发生蛋白质2：是从脊椎动物骨骼基质中分离提纯的蛋白质,具有内肽酶活性、表皮生长因子模体,同源二聚体之间以二硫键相连,属于转化生长因子β家族,能诱导骨与软骨形成。骨桥蛋白：存在于矿化和活性沉积区,是一种含有Arg-Gly-Asp(RGD)结构的酸性糖蛋白,它与诱导成骨细胞成熟表型表达和矿化骨基质形成的活性蛋白密切相关。在成矿阶段,骨连接素、纤连蛋白与骨桥蛋白的表达高度相关。Ⅰ型胶原是钙盐沉积和细胞附着的支架,可促进细胞附着并刺激细胞分化。背景：β-蜕皮甾酮作为“植物类雌激素”不仅具有刺激蛋白质合成,促进碳水化合物和脂质代谢,缓解高血糖、高脂血症,以及保护内皮细胞免于凋亡并诱导其增殖的多种生物活性,而且有学者报道其在治疗骨质疏松症、骨折和其他骨骼炎症性疾病方面也有着重要的作用。 目的：观察β-蜕皮甾酮对小鼠前成骨细胞(MC3T3-E1细胞)体外增殖的影响,以及在安全剂量下,β-蜕皮甾酮是否对该细胞具有诱导成骨分化的作用。方法：取第4代MC3T3-E1细胞在成骨诱导分化培养基中培养7,10,14,21,28 d后,检测细胞不同时间段成骨分化蛋白(碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原蛋白、骨桥蛋白以及钙化结节)的表达量,以鉴定该细胞是否具有成骨分化的能力;然后将MC3T3-E1细胞接种于含不同终浓度β-蜕皮甾酮(0.01,0.1,1,10,100 µmol/L)的诱导培养基中,分别于第1,2,3,4,5,6,7天利用CCK8法检测细胞的增殖活性;最后设置对照组(普通诱导培养基组)和实验组(普通诱导培养基+β-蜕皮甾酮),在相同条件下进行培养,并测定不同时间段各组细胞成骨标志蛋白的表达量。结果与结论：①MC3T3-E1细胞在成骨诱导培养基刺激下,第10天碱性磷酸酶染色以及Ⅰ型胶原蛋白荧光染色表达较高,同时碱性磷酸酶活性检测也验证了这一结果(P < 0.05);诱导培养第14天骨桥蛋白免疫细胞化学染色也有明显表达;茜红素染色显示成骨诱导后的细胞较对照组结节数量明显增加,第28天比第21天的钙结节形成数目更多、直径更大、颜色更深;②CCK 8法测得β-蜕皮甾酮对MC3T3-E1细胞作用5 d后增殖活性达到最佳,促增殖活性最佳剂量为0.01 µ mol/L、0.1 µmol/L,2种浓度之间差异无显著性意义(P > 0.05);③实验组细胞经β-蜕皮甾酮诱导培养第10天较对照组细胞碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原蛋白表达更高;第14天实验组细胞内骨桥蛋白、骨钙素表达更高;第28天2组钙结节染色无明显差异;④结果说明,β-蜕皮甾酮能促进MC3T3-E1细胞体外增殖,且在安全剂量下能提高MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化的能力。ORCID: 0000-0001-5641-6353(严才平) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

转化生长因子β和骨形成蛋白2联合诱导小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞的增殖与分化

背景:生长因子是骨组织形成、改建、修复的关键要素之一,多种生长因子联合诱导骨干细胞成骨分化相较于单一生长因子具有一定的优势,但是何种类型的联合、什么样的浓度组合才能发挥最佳的诱导作用?目前该方向研究较少.目的:探索转化生长因子β和骨形成蛋白2联合诱导对小鼠MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响.方法:将不同质量浓度的转化...     

血红素加氧酶-1的抗肿瘤细胞凋亡作用研究进展

血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)是血红素分解的关键酶,其促进血红素分解释放胆绿素、CO和亚铁离子。HO-1在机体内发挥多种生物学功能,主要有减轻炎症反应、降低氧化损伤、抑制细胞凋亡以及调节细胞增殖。随着研究的不断深入,HO-1与肿瘤的相关性研究逐渐增多,表明其与肿瘤关系密切,参与调控肿瘤细胞凋亡、增殖等过程。本文主要就HO-1蛋白与肿瘤细胞凋亡的相关性作一综述。     

Rip2诱导人胰腺癌细胞自噬和凋亡的交互作用及机制研究

目的:探讨受体相互作用蛋白2(Rip2)诱导人胰腺癌细胞自噬和凋亡的交互作用及其机制。方法:用jetPRIME将pEGFP-C2空质粒和pEGFP-Rip2重组质粒分别转染至人胰腺癌Panc-1细胞。用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用于过表达Rip2的细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达;比色法检测caspase-8、-9、-3的活性。此外,用caspases抑制剂Z-VAD-FMK作用于过表达Rip2的细胞,Western blot检测自噬相关蛋白及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达;透射电子显微镜观察自噬体的数量及形态。结果:(1)pEGFP-Rip2组细胞凋亡率显著高于对照组和pEGFP-C2组(P<0. 05),而pEGFP-Rip2+3-MA组细胞凋亡率进一步升高(P<0. 05);与pEGFP-Rip2组比较,pEGFP-Rip2+3-MA组细胞Fas、Bax和胞浆细胞色素c(Cyt-c)蛋白表达水平显著升高(P<0. 05),Bcl-2蛋白表达水平则显著下降(P<0. 05);pEGFP-...     

圣草酚通过调节Nrf2通路促进氧化应激诱导的肝癌细胞的凋亡

目的:探究圣草酚对氧化应激诱导的肝癌细胞凋亡的作用机制.方法:CCK-8测定圣草酚对细胞的毒性.将Huh7细胞分为对照组、H2O2组、圣草酚组、H2O2+圣草酚组,分别用0.5 mmol/L H2O2或78 μmol/L圣草酚处理细胞48h;2,7-二氯荧光素双乙酸酯(DCFH-DA)探针测定ROS的含量;试剂盒检测S...     

血管紧张素Ⅱ 1型受体自身抗体通过上调自噬诱导INS-1胰岛β细胞凋亡

目的:本研究旨在探究血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(AT1-AA)能否引起胰岛β细胞的凋亡,自噬是否参与其中以及其所发挥的作用。方法:10-6mol/L AT1-AA处理INS-1细胞24 h后,用流式细胞术、Western blot及Hoechst 33258染色检测细胞的凋亡水平;Western blot检测自噬相关蛋白LC3和beclin 1的蛋白水平。使用血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂替米沙坦以及经典的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理细胞1 h之后再加入AT1-AA处理24 h,检测细胞凋亡、自噬及存活率的变化情况。结果:10-6mol/L AT1-AA处理INS-1细胞24 h可明显降低细胞存活率(P0.05)。与阴性Ig G对照组相比,AT1-AA分别处理细胞12 h、24 h和36 h后细胞凋亡水平明显增高(P0.05);此外,LC3及beclin 1的蛋白水平也随处理时间的延长逐渐升高,且凋亡和自噬水平的升高均可被替米沙坦所阻滞。使用自噬抑制剂3-MA预处理之后,细胞的凋亡率较单独给予AT1-AA处理组明显降低(P0.05)。结论:AT1-AA可通过血管紧张素Ⅱ1型受体上调自噬来诱导INS-1胰岛β细胞凋亡。     

人牙周膜干细胞来源外泌体干预成骨细胞MC3T3-E1的增殖和分化

背景:人牙周膜干细胞具有较强的成骨分化能力,人牙周膜干细胞来源外泌体作为牙周膜干细胞分泌的主要成分,对成骨细胞MC3T3-E1增殖和成骨分化的影响尚不明确。目的:探讨人牙周膜干细胞来源外泌体对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响。方法:采用酶消化法分离及培养人牙周膜干细胞,超速离心法提取人牙周膜干细胞来源外泌体,通过透射电镜、粒径分析及Western blot方法对人牙周膜干细胞来源外泌体进行鉴定;CCK8法检测不同质量浓度人牙周膜干细胞来源外泌体对MC3T3-E1细胞增殖的影响,茜素红染色观察100 mg/L人牙周膜干细胞来源外泌体对MC3T3-E1细胞成骨矿化的影响,Western blot检测100 mg/L人牙周膜干细胞来源外泌体干预前后MC3T3-E1细胞内MEK和ERK的磷酸化水平。结果与结论:①透射电镜观察可见外泌体为脂质双分子层形成的囊泡结构,粒径检测显示外泌体直径分布在50-120 nm,集中在79.86 nm,Western blot检测结果显示提取的外泌体中含有CD81,CD63,TSG101的表达;②与对照组相比,人牙周膜干细胞来源外泌体对MC3T3-E1细胞的增殖具有促进作用,且作用呈剂量依赖性;③与对照组相比,人牙周膜干细胞来源外泌体组MC3T3-E1细胞能够形成更多的钙结节;与对照组相比,人牙周膜干细胞来源外泌体组MC3T3-E1细胞内p-MEK及p-ERK蛋白表达量升高;④结果表明,人牙周膜干细胞来源外泌体可以显著促进MC3T3-E1增殖和成骨分化,推测可能与其激活MEK/ERK信号通路有关。     

上调骨形态发生蛋白2促进成骨细胞增殖分化的硅酸钙类材料Biodentine北大核心

背景:Biodentine是一种具有生物相容性的新型硅酸钙口腔修复材料,它不仅可以增加牙髓细胞中生长因子的分泌,也可以诱导牙本质的矿化,但是其在骨修复方面的研究较少。目的:通过构建干扰骨形态发生蛋白2的小鼠成骨前体细胞株,研究Biodentine对于干扰骨形态发生蛋白2小鼠成骨前体细胞株的增殖及分化能力的影响。方法:将0.1,1,10,100 g/L的Biodentine浸提液作用于小鼠成骨前体细胞24 h,通过CCK-8与碱性磷酸酶活性实验筛选最佳的作用质量浓度10 g/L,用于以下实验。将Biodentine浸提液作用于小鼠成骨前体细胞1,3,5,7 d,以未干预组为对照,通过CCK-8与碱性磷酸酶活性实验观察作用前后细胞的增殖及成骨分化。构建干扰骨形态发生蛋白2的小鼠成骨前体细胞株,通过CCK-8与碱性磷酸酶活性实验观察干扰前后细胞的增殖及成骨分化。构建干扰骨形态发生蛋白2的小鼠成骨前体细胞株,Biodentine组加入10 g/L的Biodentine浸提液,设置单纯干扰组为对照,作用24,48 h后,通过CCK-8与碱性磷酸酶活性实验观察细胞的增殖及成骨分化;作用24 h后,Real-time PCR、Western blot检测碱性磷酸酶mRNA与蛋白的表达。结果与结论:(1)10 g/L的Biodentine浸提液在1,3,5,7 d可促进小鼠成骨前体细胞的增殖与成骨分化;(2)干扰骨形态发生蛋白2可抑制小鼠成骨前体细胞的增殖与成骨分化;(3)Biodentine组作用24,48 h后的细胞增殖与成骨分化能力高于干扰组(P <0.05),作用24 h后的碱性磷酸酶mRNA与蛋白表达高于干扰组(P <0.05);(4)结果表明,10 g/L的Biodentine可以通过骨形态发生蛋白2增强成骨细胞的增殖及成骨分化。     

AZD5363诱导肝癌细胞凋亡与自噬的实验研究

目的:研究新型Akt抑制剂AZD5363对人肝癌HepG2和Huh7细胞活力、凋亡和自噬的影响,并探讨其抗肿瘤活性的分子机制。方法:采用不同浓度AZD5363作用于体外培养的HepG2和Huh7细胞,MTT法检测细胞活力;TUNEL标记法检测肝癌细胞凋亡的变化;Western blot实验分析细胞凋亡相关蛋白多腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose) polymerase,PARP]及自噬标志蛋白LC3-II的表达水平;细胞转染GFP-LC3绿色荧光蛋白融合表达质粒检测细胞自噬。结果:AZD5363能够剂量依赖性地抑制HepG2和Huh7细胞活力,并通过促进PARP的切割而诱导肝癌细胞发生凋亡;肝癌细胞给予AZD5363后,细胞内GFP-LC3融合蛋白斑点增多,同时LC3-II的表达水平增加(P 0.05);当用氯喹阻断自噬后,AZD5363对肝癌细胞凋亡的诱导作用明显增强。结论:AZD5363可促进HepG2和Huh7细胞发生凋亡和保护性自噬。抑制自噬促进了AZD5363诱导的肝癌细胞凋亡。