植物雌激素-木酚素提取方法建立

目的 建立一种亚麻木酚素-开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷(SDG)的实验室提取和检测方法.方法 在SDG的提取过程中对提取步骤的每一个环节进行单因素实验,观察不同提取方法、溶液及浓度、时间及碱解方法对亚麻籽SDG提取率的影响,用高效液相色谱测定SDG的含量.结果 3种不同提取方法的SDG粗提物固体得率分别为索氏提取器法2.37％、加热回流法3.04％、超声波提取法2.89％;3种不同溶剂的SDG粗提物固体得率分别为甲醇2.76％、乙醇3.04％、丙酮3.86％:在加热回流条件下,用50％的丙酮溶液提取的SDG得率最高,为5.33％;最佳提取时间为2h;提取过程中的碱解方法采用Ca( OH)2-H3 PO4系统,SDG粗提物纯度为32.48％.结论 建立的亚麻籽木酚素提取方法比原方法有所改进,提取时间有所缩短.     

样品沉淀方法对线粒体蛋白指纹图谱分析影响

目的 比较不同方法沉淀乳腺癌线粒体蛋白对Au芯片分析的影响,为Au芯片研究亚细胞蛋白奠定基础.方法 提取体外培养乳腺癌细胞MCF-7的线粒体蛋白,分别采用丙酮沉淀,三氯醋酸-丙酮(TCA-丙酮)沉淀,饱和( NH4)2SO4沉淀处理样品,点样Au蛋白芯片,表面增强激光解析蛋白飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析蛋白指纹图谱,Biomaker Wizard Software分析软件收集数据.结果 每种方法均重复试验20次,在质荷比(m/z)2000～100 000范围内检测蛋白点数目,统计结果分别为TCA-丙酮沉淀39个,丙酮沉淀71个,饱和(NH4 )2SO4沉淀14个；选择8.6、10.0、11.3、14.0和15.6kD 5个含量较高的蛋白作为标志,采用q检验进行两两分析,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 对分子量(Mr) ＜11 kD的蛋白,丙酮沉淀处理可以获得较好的蛋白指纹图谱,对Mr＞11kD的蛋白TCA-丙酮沉淀处理结果好,综合使用2种方法分别处理样品上样Au芯片可以获得好的线粒体蛋白分析结果.     

转基因食品DNA提取技术研究

目的：建立从食品中提取DNA的方法。方法：采用CTAB法、酶裂解法、SDS沉淀法3种方法提取转基因相关食品中的：DNA，用核酸蛋白分析仪测定核酸的纯度和浓度、PCR扩增真核生物的18S rDNA基因评价提取核酸的质量。用转基因植物通常含有的CaMV35S启动子作为转基因成分的指示标记。结果：3种方法得到的DNA提取物OD260／OD280比值均接近1．6-1．9，CTAB法获得的DNA量较少，酶提取法所得的DNA提取物的量多，但扩增条带荧光较暗。SDS法能收获较多的DNA，PCR扩增效果好。用SDS法提取的DNA进行35S启动子检测，3份转基因样品均出现强阳性结果，而10份非转基因食品均未产生阳性条带。结论：SDS沉淀法提取DNA，具有经济、简便的特点，所提的DNA量适用于PCR检测。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌耐药质粒提取方法的研究和比较

目的比较几种改良后的质粒提取方法以建立一种简便、稳定的方法,为耐药质粒分子生物学研究提供基础。方法分别采用柱提取法、磁珠法、改良碱裂解法及SDS裂解法对产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠杆菌耐药质粒进行提取,使用琼脂糖凝胶电泳检测后,比较得率和纯度。结果柱提取法及磁珠法提取产物电泳后未见条带;改良碱裂解法及SDS裂解法提取产物电泳后均可见清晰单一条带,分子量10 kb,为单一构象的耐药质粒。结论柱提取法及磁珠法不适合大分子量质粒的提取;改良碱裂解法和SDS裂解法均可得到纯度较高的耐药质粒,但前者产物不易脱盐,而后者得率更高,为最佳方法。     

红花籽粕不同极性部位体外抗氧化活性研究

目的测定红花籽粕不同极性提取物的抗氧化活性。方法利用不同极性的溶剂提取并萃取出红花籽粕的24个萃取物,并采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法和对硝基酚邻酸盐(PNPP)法对抗氧化能力进行测定。结果 95%乙醇提取物氯仿萃取物提取率最高。不同极性提取物对DPPH和ABTS自由基均有一定的清除作用,对蛋白酪氨酸磷酸1B酶(PTP1B)活性有抑制作用。结论红花籽粕具有较好的抗氧化能力,具有开发利用的价值。     

一种用于口腔粘膜细胞DNA高效简便提取的方法研究

目的 应用不同的DNA提取方法,对同种样本(口腔粘膜细胞)进行DNA提取,横向比较,并综合评估新型硅胶法的应用价值.方法 以口腔拭子刮取口腔内壁粘膜细胞,等量分配样品,分别应用新型硅胶法、酚氯仿法及DNA试剂盒法进行DNA提取,从产率,纯度,操作复杂性,成本等多方面综合评定以上各法的优缺点.结果 三种方法均可提取出对象的基因组DNA,但得率有较明显差别.经PCR特异扩增和测序证实为对象基因组.紫外分光OD260/280测定,DNA的纯度有所差别.结论 新型硅胶吸附法提取DNA相对于其它两种方法具有高得率,高纯度,低成本,快速,简便,以及无创采样的优势.适宜于在实验室研究中的应用和推广.     

丙酮—乙醇—水三组分体系提取杜仲叶中总黄酮

采用35%乙醇—35%丙酮—30%水三组分体系浸提杜仲叶中总黄酮。最佳提取条件为:料液比1:12,提取时间4 h。以亚硝酸钠和硝酸铝为显色剂,芦丁作标样,可见分光光度法测定杜仲叶总黄酮含量。实验结果:黄酮提取率为5.54%,比70%乙醇—水体系高(平均提取率为4.13%),与70%丙酮—水体系相近(平均提取率为5.56%)。     

厚朴酚超声提取条件优选

目的 优选厚朴中厚朴酚超声提取条件.方法 采用超声波法提取厚朴中的厚朴酚,研究提取溶剂、提取时间、超声功率、料液比单因素对提取率影响,在单因素试验结果的基础上进行正交设计,对厚朴中厚朴酚的超声提取条件进行优化.结果 乙酸乙酯为最佳提取溶剂,单因素确定最佳提取时间为60～80 min,最佳提取功率为150～200 W,最佳料液比1:15～1:25.单因素分析基础上,正交试验确定各因素对厚朴中厚朴酚的提取率的影响从大到小依次为料液比＞超声功率＞超声时间,最佳提取条件为以乙酸乙酯为提取溶剂,料液比1:25,超声功率175W提取时间70 min,该条件下厚朴中厚朴酚的提取率为88.13%.结论 超声提取厚朴酚是一种操作简单、成本低廉、提取时间短、提取率较高的方法.     

正交优选金银花总黄酮的最佳提取工艺

目的探讨金银花黄酮类化合物的最佳提取工艺。方法考察不同提取方法对提取率的影响;采用正交法考察四个因素对金银花总黄酮得率的影响。结果超声法提取的总黄酮得率高于乙醇回流法,用30倍于样品重的80%乙醇浸泡金银花24 h后继用超声法提取30 min,上大孔树脂柱,以50%乙醇洗脱时收率最高,总黄酮含量达45.59%。结论优选得到的工艺简便、稳定、可行。     

响应面优化黄皮叶中的活性因子超声提取工艺及其抗氧化活性研究

目的优化黄皮叶中活性因子总黄酮的超声提取工艺条件,并测定其抗氧化活性。方法以乙醇体积分数、超声时间及料液比为影响因子,以黄皮叶总黄酮得率为评价指标,在单因素试验基础上,采用响应面法优选黄皮叶总黄酮超声提取工艺,并测定黄皮叶总黄酮体外清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-1-picryl hydrazyl,DPPH)自由基、羟自由基和总抗氧化的活性。结果黄皮叶总黄酮的最佳提取工艺条件为乙醇体积分数18%、超声时间73 min、料液比31∶1(m L/g)。在此条件下,黄皮叶总黄酮得率达到(1.300±0.006)%。黄皮叶总黄酮得率大小的主次因素为乙醇体积分数>超声时间>料液比,其中超声时间与料液比因素之间的交互作用显著。黄皮叶总黄酮体外清除DPPH和羟自由基的IC50值分别为0.282 mg/m L、1.152 mg/m L,用三价铁还原抗氧化能力(ferric-reducing antioxidant power,FRAP)法测得1 mg/m L黄酮的FRAP值为533.3μmol/L。结论该所选工艺合理、可行,可用于黄皮叶总黄酮的超声提取;三种测定方法均说明黄皮叶总黄酮在一定浓度下有抗氧化活性。     

红花多糖提取纯化方法研究

目的:研究红花多糖的提取纯化工艺,确立红花多糖的最佳提取条件。方法:用水提醇沉法提取红花多糖,经过Sevage法除蛋白质,H2O2脱色,无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤。通过对不同的提取次数、液料比及提取时间等实验,以及对粗多糖纯化的研究,确立各因素条件,采用苯酚—硫酸法测定其多糖含量。结果:各因素条件为提取时间1 h,液料比30∶1,提取4次,用Sevage、无水乙醇、丙酮、乙醚纯化。由此得红花中粗多糖的得率为6.5%,纯化后的多糖得率为4.7%。测定提取的粗多糖中多糖含量为70.315%,纯化后的多糖含量为76.048%。结论:方法纯化效果好,测定重现性好,而且成本低,操作简便快捷,适合工业生产。     

番石榴叶提取物对小鼠肝脏抗氧化作用研究

目的研究番石榴叶提取物抗氧化活性。方法干燥的番石榴叶分别用蒸馏水、65%和95%乙醇浸提,浸提液过滤、浓缩、干燥得到3种提取物。测定各提取物对羟自由基清除率和脂质过氧化抑制率。紫外分光光度法分析提取物中总黄酮含量,高效液相色谱(HPLC)和紫外可见吸收光谱法(UV)对黄酮类化合物初步鉴定。结果水、65%和95%乙醇提取物均具有清除羟自由基和抑制脂质过氧化作用,且呈剂量-效应关系,对羟自由基清除作用的半数有效浓度(EC50)分别为0.63、0.47和0.58g/L,对脂质过氧化抑制作用的半数有效浓度(EC50)分别为0.20、0.035和0.18g/L,总黄酮含量分别为3.28、30.71和55.98g/kg。结论番石榴叶水和乙醇提取物具有较强的抗氧化作用,其中黄酮类化合物可能是其功效成分之一。     

《氨基酸杂志》

<正> 《氨基酸杂志》是我国目前唯一的一种专门介绍氨基酸、氨基酸衍生物及多肽的专业性刊物,由武汉大学氨基酸研究室编辑出版。该刊自一九七五年创刊以来,已出版发行了十二期。从一九八二年起将改为季刊发行,每期约十万字左右。 在生产和科研方面,着重介绍利用提取法(包括等电点沉淀法、离子交换树脂法等)、     

两种光接触性变态反应试验方法的比较

目的比较2种光接触性变态反应试验方法的敏感性。方法采用完全弗氏佐剂法和20%十二烷基磺酸钠(SDS)预刺激法对强致敏剂四氯水扬基苯胺(TCSA)和弱致敏剂香豆素、硫氯酚的光敏性进行了对比研究。结果对香豆素、硫氯酚2种弱致敏物质完全弗氏佐剂法的敏感性略强于涂抹SDS预刺激法,对强致敏剂TCSA涂抹SDS预刺激法略强于颈部注射弗氏佐剂。结论在筛选弱致敏物质时,颈部注射完全弗氏佐剂法优于涂抹SDS预刺激法。     

肠道菌群总DNA提取方法的研究

[目的]通过实验得出提取DNA的最佳方法,并对样品处理等实验条件进行优化,为PCR检测中模板DNA的制备提供实验依据。[方法]一.样品处理;二.DNA提取:1.醋酸钠-乙醇沉淀法;2.水煮法;3.水煮法-试剂盒法;4.试剂盒法;5.CTAB法;三.DNA的检测。[结果]实验效果最佳的DNA提取方法是试剂盒法,所得到的结果(包括DNA纯度和浓度)是几种提取方法中最好的;水煮法-试剂盒法结果较试剂盒法相近,但操作较烦琐;醋酸钠-乙醇沉淀法、CTAB法和水煮法得到的DNA中含有较多的蛋白质、RNA等杂质。[结论]试剂盒法是提取DNA最佳方法。     

青稞发酵液化学成分鉴别及其抗缺氧效果

目的鉴别青稞发酵液的化学组成并评价其抗缺氧效果。方法按药典方法测定青稞发酵液的理化指标,分别用纸层析法和试管法定性鉴别其化学成分。将青稞发酵液干燥后用无水乙醇于室温重复提取4次,其乙醇提取物和不溶物干燥后作为试样。将小白鼠随机分为蒸馏水对照组、青稞发酵液组、乙醇提取物组和乙醇不溶物组。腹腔注射0.2 mL药液40 min后,将小鼠单个置于密闭的125 mL广口瓶中进行密闭抗缺氧实验。结果青稞发酵液中的蛋白质、糖类、有机酸、酚性物和油脂等成分均呈阳性,其中含蛋白质29.8 g.L-1,总糖133.0 g.L-1,还原糖117.0 g.L-1,总氨基酸6.4 g.L-1;乙醇提取物组存活时间延长62.5%,青稞发酵液组19.2%,乙醇不溶物组16.7%(P<0.01,P<0.05)。结论青稞发酵液含蛋白质、肽类、氨基酸、糖类、有机酸、酚性物和油脂等成分,其乙醇提取物具有较显著的抗缺氧效果。     

气相色谱法测定茶叶中毒死蜱的样品前处理方法比较

目的比较适用于茶叶中毒死蜱测定的样品前处理方法。方法茶叶经过研磨后准确称取5.00 g,加入30 ml丙酮或乙酸乙酯,涡旋混匀,通过超声、浸泡后超声、振荡3种方式提取,提取液于40℃旋转蒸发至近干;再将提取液用3 ml丙酮∶二氯甲烷(1∶1体积比)分3次溶解(1 ml×3)后通过Carb/NH2柱净化,净化液用氮气吹至近干;最后,使用丙酮定容至1 ml。Rtx-1701石英毛细管色谱柱分离,GC-FPD测定,外标法定量。结果超声、浸泡和振荡提取的回收率分别为87.4%~111.7%、84.6%~106.8%和88.5%~107.8%,相对标准偏差(RSD)分别为5.94%~7.00%、6.18%~6.73%和6.30%~6.98%。结论 3种不同提取方法的回收率均满足实验要求,超声提取省时,浸泡过夜后超声提取节省人力,振荡提取经典,但不适用于大批量样品,实际工作中可根据具体情况选择。     

黑麦草叶蛋白及其水解物营养价值的评价

<正>黑麦草(ryegrass)是近年来我国新引入的一种禾本科牧草,粗蛋白含量高达20%(占干物质),蛋白质的生物学效价达70%以上,是提取叶蛋白的优质原料[1]。然而它带有一种强烈青草味,溶解度低,且蛋白质消化率和生物效价远不及牛奶、鸡蛋等动物蛋白,并具有一定的抗原性[2],使其应用效果和范围受到很大限制。酶水解可提高其溶解性、吸收性、改善其口感和营养价值,     

不同粒径大气颗粒有机提取物致人外周血淋巴细胞的DNA损伤作用

目的研究不同粒径大气颗粒有机提取物对人外周血淋巴细胞DNA损伤作用,为研究呼吸系统疾病与肿瘤的环境病因及防治措施提供依据。方法运用DFJ-1型5段分级采样器采集太原市某居民区的大气颗粒物,并分别用二氯甲烷、丙酮、甲醇索氏提取器提取不同粒径的有机提取物,再用单细胞凝胶电泳法,测定25、50、100和200μg/ml不同粒径大气颗粒物有机提取物对人淋巴细胞DNA的损伤。结果大气颗粒物有机提取率随粒径减小而增加。除粒径≥7.0μm和3.3～7.0μm的颗粒物最低剂量组(25μg/ml)彗星尾长与阴性对照组比较,差异无显著性外(P>0.05),其他粒径(<3.3μm)颗粒物各剂量组彗星尾长与对照组比较,增高均有显著性(P<0.01),并且随着粒径减小,DNA拖尾越长,损伤越严重。结论大气颗粒有机提取物可引起人外周血淋巴细胞DNA链的断裂,并且粒径越小其引起DNA损伤的作用越大。     

桃叶提取物对淡色库蚊的毒杀活性初筛

目的对桃叶提取物的杀蚊活性进行初步筛选,为寻找和开发高效的植物源杀蚊剂奠定基础。方法分别采用浸液法和三角瓶熏蒸法测定了桃叶的乙醇提取物、石油醚提取物及水蒸气蒸馏法提取物对淡色库蚊Ⅲ龄幼虫及雌成蚊的毒杀活性。结果通过实验发现采用水蒸气蒸馏法提取的物质具有较高的生物活性,处理24 h后对淡色库蚊Ⅲ龄幼虫的致死中浓度(LC_(50))为27.33 mg/L,处理5 h后对淡色库蚊雌成蚊的熏杀活性LC_(50)为1.04 mg/L。结论桃叶的水蒸气蒸馏提取物的杀蚊活性最好,石油醚提取物中等,乙醇提取物最差。