应用原子力显微镜技术对人膀胱癌细胞株T24活细胞的成像研究

目的实现应用原子力显微镜(AFM)技术对人膀胱癌细胞株T24活细胞的成像,在原子级或纳米级水平上观测T24活细胞的超微结构。方法在生理条件下,使用AFM直接观测培养中的人膀胱癌T24细胞,对其超微结构动态成像。结果获得T24活细胞原子级或纳米级分辨率下的实时扫描图像,细胞胞膜和细胞骨架成像清晰。结论AFM技术可以用于对膀胱癌T24活细胞超微结构的成像研究,所获得的图像可反映其在生活状态下的动态变化。     

S100A4细胞核表达与胃癌淋巴结转移相关

目的探讨S100A4蛋白在胃癌组织中的细胞内定位及其表达情况及与胃癌临床病理参数的关系。方法分离10对新鲜胃癌组织及配对的正常胃黏膜的核蛋白及浆蛋白，用蛋白印迹法检测S100A4蛋白在细胞内的定位。用免疫组织化学方法检测131例胃癌患者的胃癌组织和20例转移性淋巴结中S100A4蛋白的表达。结果S100A4蛋白在胃癌组织细胞核的表达阳性率为24．4％（32／131）。细胞浆表达阳性率为38．2％（50／131）。在32例S100A4核表达阳性的胃癌病例中，30例（93．8％）有淋巴结转移。伴淋巴结转移的胃癌组织中，S100A4细胞核表达阳性率（29．1％）显著高于没有淋巴结转移的胃癌组织中的S100A4细胞核表达的阳性率（7．1％）（P=0．016）。结论在胃癌组织中发现细胞核表达S100A4，并与胃癌淋巴结转移有关。     

自体血液回收对患者红细胞膜表面超微结构的影响

目的采用原子力显微镜(AFM)观察自体血液回收对患者红细胞膜表面超微结构的影响。方法择期骨科手术患者10例,术中应用自体血液回收机,切皮前采集外周静脉血2ml,自体血液回收后采集回收血2ml,肝素抗凝。采用AFM观察红细胞膜表面超微结构。结果回收血异型红细胞比例[(20.0±2.2)%]高于静脉血[(2.0±0.8)%](P<0.05)。静脉血和回收血红细胞AFM形貌、红细胞膜表面蛋白颗粒分布均存在差异。回收血红细胞膜表面平均粗糙度、均方根粗糙度高于静脉血(P<0.05)。结论自体血液回收可改变患者红细胞AFM形貌及膜表面超微结构。     

S100A9蛋白在脓毒症中作用的研究进展

背景S100A9及其结合伴侣S100A8,是S100钙结合蛋白家族的重要成员,具有多种生物学功能。目的介绍近年来针对S100A9在脓毒症中作用的研究进展,探讨其对免疫功能调节的作用及机制。内容对S100A9蛋白的特点、受体及介导的信号通路、活化中性粒细胞的趋化和黏附功能,以及在脓毒症中的作用等内容进行概述。趋向过去对S100蛋白的研究侧重于慢性炎症和肿瘤,目前的研究更多地关注S100蛋白与急性炎症的关系。S100A9在脓毒症中的作用机制复杂,研究表明S100A9等蛋白具有抗炎、抗氧化的保护作用。进一步的研究将帮助我们更好地理解S100A9等炎症相关蛋白,以期对脓毒症的临床免疫调节治疗提供了新的思路和方向。     

长链非编码RNA THOR促进宫颈癌细胞C33A增殖

目的研究长链非编码RNATHOR对宫颈癌C33A细胞生长的调控作用。方法 qRTPCR分别检测15对肿瘤组织/癌旁组织和宫颈癌细胞系C33A、siHa、正常宫颈鳞状上皮细胞H8中的LncRNA THOR表达水平。在宫颈癌细胞系C33A中,siRNA沉默LncRNA THOR后利用CCK8和平板克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞学实验检测细胞周期,使用western blot检测细胞周期蛋白变化。结果 qRT-PCR结果显示15例组织中12例肿瘤组织LncRNA THOR表达明显高于癌旁组织,宫颈癌细胞系C33A、siHa中LncRNA THOR表达也明显高于宫颈鳞状上皮细胞H8细胞。在宫颈癌细胞系C33A中沉默LncRNA THOR后,CCK8结果显示细胞增殖受到抑制,平板克隆形成实验表现为细胞克隆明显减少。流式细胞学周期分析发现G0/G1期细胞比值增高。western blot实验显示周期蛋白cyclinD 1和cyclinE1在蛋白水平下降,p27和p21蛋白水平增高。结论 LncRNATHOR在宫颈癌中高表达,沉默LncRNA THOR可以抑制宫颈肿瘤细胞增殖。     

S100A6对胃癌细胞侵袭转移的调控机制研究

目的探讨S100A6过表达对胃癌细胞侵袭转移的调控机制。方法收集1995年1月至2001年12月间经病理确诊的166例胃癌标本及其对应的癌旁组织、肝转移组织和淋巴结转移组织标本,采用免疫组织化学染色法检测标本中S100A6蛋白的表达情况及其与临床病理因素的关系：通过ChIP—Chip方法检测胃癌细胞株KAT03中S100A6可能调控的下游因子;将S100A6基因转染入胃癌细胞株AGS,通过细胞侵袭实验、RTQ—PCR方法分别检测转染组、阴性对照组和空白对照组中细胞的侵袭能力和侵袭转移相关因子CDK5和FLJ12438的mRNA表达。结果S100A6蛋白在癌旁组织细胞质中偶有低表达;而在胃癌、肝及淋巴结转移灶组织的肿瘤细胞质和（或）细胞核中均有高表达,且在侵袭边缘的肿瘤细胞的细胞核中表达较高,其高表达率为分别为67．5％（112／166）、92．9％（26／28）和100％（30／30）。S100A6表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、脉管癌栓、远处转移及TNM分期有关（均P〈0．05）。S100A6可能作用于26个细胞侵袭转移有关基因的启动子部位。SIOOA6转染组的过膜细胞数为31．3±5．5,多于阴性对照组的7．7±1．5和空白对照组的9.3±2．1,差异有统计学意义（均P〈0．05）。CDK5mRNA在转染组中的表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组（均P〈0．05）,而FLJ1243mRNA在转染组中的表达水平与另外两组的差异则无统计学意义（均P〉0．05）。结论S100A6可能通过调控下游侵袭相关因子如CDK5的表达,进而影响胃癌细胞的侵袭转移等恶性生物学行为。     

转移相关基因nm23和P53及S100A4在晚期胃癌中的表达及与侵袭转移的相关性研究

目的探讨转移相关蛋白（nm23和P53及S100A4）在晚期胃癌转移发展过程中的意义。方法应用组织芯片和免疫组织化学方法研究nm23、P53和S100A4在74例胃癌患者的癌、癌旁、淋巴结转移、远处转移（肝脏、胰腺、卵巢等）组织中的表达。结果同癌旁组织相比，癌组织中P53和S100A4表达明显升高（P〈0．01），而nm23的表达明显降低（P〈0．05）；同癌组织相比，淋巴结中nm23的表达明显降低（P〈0．05）。远处转移组织S100A4表达明显升高（P〈0．01）。3者的阳性表达与胃癌的部分恶性生物学行为有关。癌组织中nm23^＋／P53^＋、P53^＋／S100A4^＋和nm23^＋／S100A4^＋的基因表型比例分别为48例（64．9％）、50例（67．6％）和39例（52．7％），其中P53^＋／S100A4^＋、nm23^＋／S100A4^＋和nm23^＋／P53^＋／S100A4^＋均与胃癌的高转移潜能相关。结论nm23和S100A4在肿瘤转移中发挥了重要作用；联合检测nm23、P53和S100A4的表达可用于评定胃癌的转移潜能。     

丹参酮ⅡA抑制人胆管癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究

目的体外实验研究丹参酮ⅡA对人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810的生长抑制及诱导凋亡作用。方法分别采用（0～10μg／ml）的丹参酮ⅡA作用人肝内胆管癌细胞72h后,通过MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、投射电镜检测细胞凋亡;流式细胞术（FCM）定量检测5μg／ml丹参酮ⅡA作用不同时间后的细胞凋亡率。结果丹参酮ⅡA以剂量依赖的方式抑制胆管癌细胞的生长。1～10μg／ml丹参酮ⅡA作用72h后,胆管癌细胞出现细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂以及凋亡小体出现等特征性的形态学改变。5μg／ml浓度作用12、24、36、48、72h后的细胞凋亡率分别为（2．31±0．15）％、（3．02±0．36）％、（3．86±0．44）％,（6．75±0．60）％和（20．62±1．76）％与对照组（1．08±0．14）％比较均具有显著差异。结论在体外丹参酮ⅡA能够诱导人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810凋亡,这可能是丹参酮ⅡA抑制其生长的机制。     

钙结合蛋白S100A2在肝癌中的表达及与肿瘤细胞增殖的关系

目的观察钙结合蛋白S100A2在原发性肝癌中的表达及与肿瘤细胞增殖的关系，探讨两者对肝癌患者预后的影响。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶（SP）法检测62例肝癌标本中S100A2的表达，同时用计算机图象分析技术对其DI值（DNA含量指数）进行检测。结果高／中分化组，无门脉／胆管浸润或淋巴结／远处转移的病例中，S100A2阳性表达率分别为77．27％、76．92％、80．00％；DI值分别为1．68±0．20、1．73±0．23、1．76±0．23；但随着肝癌分化程度的降低，出现门肘胆管浸润或发生淋巴结／远处转移，S100A2阳性表达率降低（50．00％、47．22％、50．00％）（Χ^2=4．39、5．53、5．07，P均〈0．05），而DI值明显升高（1．93±0．29、1．99±0．31、2．01±0．33）（t=3．612、3．794、3．379，P均〈0．01）。并且在短／中期生存患者中，S100A2阳性表达率（50．00％）明显低于长期生存者（100％）（Χ^2=10．05，P〈0．01），而DI值（1．88±0．25）却明显高于长期生存者（1．69±0．21）（t=2．606，P〈0．05）。S100A2的表达与DI值呈明显负相关（t=3．023，P〈0．05）。结论S100A2蛋白表达降低和高的DI值提示肝癌的低分化、高侵袭转移能力及预后不良，两者的联合检测对判断肝癌的恶性程度和预后具有重要的临床意义。     

髋骨性关节炎滑膜组织中钙结合蛋白（S100A12）的表达及意义

目的观察髋骨性关节炎患者血液及滑膜组织中钙结合蛋白S100A12的表达,以探讨它在髋骨性关节炎致病过程中的作用,为揭示髋关节骨性关节炎发病机制提供理论和实验依据。方法收集行髋关节置换的27例髋骨性关节炎患者(OA组)与35例股骨颈骨折患者(对照组);对OA组患者的髋关节X片分析,根据Kellgren-Lawrence(K-L)分级标准对患者进行分级;对两组患者静脉采血,术中取滑膜组织,采用ELISA法定量和免疫组化技术检测S100A12的表达,并采用IPP软件半定量分析免疫组化S100A12的表达量。结果 OA组的血清中S100A12水平(94.20±49.85)ng/m L显著高于对照组含量(25.32±16.87)ng/m L,有统计学差异(P0.01);滑膜组织OA组与对照组S100A12含量分别为(3.73±1.97)ng/mg总蛋白和(1.67±1.21)ng/mg总蛋白(P0.01),差异有统计学意义;免疫组化分析S100A12阳性反应在滑膜微血管内中性粒细胞胞浆中,以及部分滑膜细胞的胞浆内。OA组平均光密度MOD(0.21±0.06)较对照组MOD(0.13±0.05)有显著性差异(P0.01);OA组K-L分级4级患者的血清中S100A12水平(104.81±46.68)ng/m L显著高于3级血清含量(86.85±52.46)ng/m L,有统计学差异(P0.01)。4级患者滑膜组织含量(4.62±1.95)ng/mg总蛋白显著高于3级患者水平(3.13±1.82)ng/mg总蛋白(P0.01)。结论 S100A12在髋骨关节炎患者的滑膜组织表达量显著增加;S100A12的表达与患者髋骨关节炎严重程度相关;S100A12的检测有助于骨性关节炎的诊断,为临床治疗提供参考。     

不同浓度七氟醚对人肺腺癌A549细胞侵袭能力及MMP-2、MMP-9表达的抑制作用

目的观察不同浓度七氟醚对人肺腺癌A549细胞侵袭能力及基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9表达的影响。方法人肺腺癌A549细胞接种于培养板,培养24 h后,随机分为对照组（C组）、1.7%七氟醚组（S₁组）、3.4%七氟醚组（S₂组）、5.1%七氟醚组（S₃组）。S₁、S₂、S₃组的A549细胞分别暴露于1.7%、3.4%、5.1%七氟醚2、4、6 h。C组不接受七氟醚处理。四组处理结束后,继续培养48 h。于48 h时,采用Transwell法检测各组A549细胞处理6 h的侵袭细胞数目,酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组A549细胞处理前、处理2、4、6 h的MMP-2和MMP-9的表达水平。结果与C组比较,S₁、S₂、S₃组的侵袭细胞数目降低[（62±7）vs.（46±4）,（35±5）,（27±6）]（P<0.05）;侵袭细胞数目S₁组>S₂组>S₃组（P<0.05）。与C组比较,S₁、S₂、S₃组的MMP-2、MMP-9水平降低,且S₁组>S₂组>S₃组（P<0.05）。结论 1.7%、3.4%、5.1%七氟醚均有抑制人肺腺癌A549细胞侵袭能力的效应。该效应随七氟醚浓度升高而增强,与抑制MMP-2、MMP-9表达有关。     

S100A8, S100A9, and the S100A8/A9 complex in circulating blood are not associated with prostate cancer risk-A re-evaluation study

BACKGROUND: To evaluate the diagnostic performance of plasma S100A8, S100A9, and the S100A8/A9 complex as novel markers to discriminate between benign and malignant prostatic diseases as recently suggested for S100A9. METHODS: The study included 90 prostate cancer (PCa) patients (pN0M0, n = 50; pN1M0, n = 27; M1, n = 13), 50 controls without PCa, and six patients within 72 hr after radical prostatectomy for repeated measurements. The S100 proteins were analyzed with specific ELISAs. Comparisons were made to the prostate-specific antigen (tPSA) and the ratio of free to tPSA (%fPSA). RESULTS: The plasma concentrations of the S100 proteins in controls had either significantly higher values (S100A8; P = 0.020) or the tendency to higher values compared with the results in PCa patients. Differences between the three PCa groups were almost negligible. No correlation could be found between S100 protein levels and PSA concentration (r(s) = -0.110 to 0.433, P = 0.317-0.433) or prostate volume (r(s) = -0.038 to 0.018, P = 0.676-0.844). Tumor stage and tumor grade had no observed effect on S100 protein concentrations. After prostatectomy, there were discordant elimination kinetics for PSA and the S100 proteins, as the S100 proteins partially increased while PSA continuously decreased. Analyses of receiver-operating curves showed that, compared with PSA, S100A8, S100A9, and S100A8/A9 did not improve the differentiation between patients with and without PCa, while the discrimination ability was significantly lower than that of %fPSA. CONCLUSIONS: Our re-evaluation study showed that S100A8, S100A9, and the complex S100A8/A9 were less indicative than %fPSA and that they are not suitable to replace PSA.     

毛囊干细胞结合电纺纳米丝素纤维构建组织工程尿道膜片的体外研究

目的：探索毛囊干细胞结合电纺纳米丝素纤维,构建组织工程尿道膜片的可行性。方法使用酶消化法分离兔毛囊细胞,利用流式细胞仪分选毛囊干细胞,体外原代培养扩增,计算细胞的最大扩增倍数及克隆形成率;使用流式细胞仪检测细胞K19、p63、CD29的阳性表达率。将毛囊干细胞接种在电纺纳米丝素纤维支架上,构建组织工程尿道。应用组织学、荧光染色法观察组织工程尿道的体外构建情况。结果兔毛囊干细胞与兔毛囊细胞的最大扩增倍数分别为（5.92±0.77）×10^4倍和（6.61±3.62）×10^3倍;兔毛囊干细胞与兔毛囊细胞的克隆形成率分别为（9.07±1.18）%和（3.95±1.01）%。K19、p63、CD29在毛囊干细胞中表达率分别为（89.36±6.69）%、（92.10±5.49）%和（89.98±6.89）%;在兔毛囊细胞中分别为（39.38±2.20）%、（40.78±2.61）%和（40.57±2.79）%;毛囊干细胞在支架上能形成复层上皮样结构,AE1/AE3染色阳性。结论兔毛囊干细胞结合电纺纳米丝素纤维,能成功构建组织工程尿道,可用于体内修复的进一步研究。     

EphA3通过调控VEGF参与肝癌细胞侵袭的机制

目的探讨促红细胞生成素肝细胞受体A3（EphA3）参与肝癌细胞侵袭的作用机制。方法培养人肝细胞HL-7702和肝癌细胞株HepG2和NHCC97H。采用siRNA干扰的方法抑制肝癌细胞中EphA3的表达。设立未处理组（未处理肝癌细胞）,对照组（加入对照siRNA）和siRNA干扰组（加入siRNA干扰EphA3）。用RT-PCR和Westernblot法检测EphA3的表达;用Transwell小室检测不同处理后的HepG2和MHCC97H细胞的侵袭能力;采用Westernblot和ELISA法检测VEGF蛋白表达和活力的变化情况。多组比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD—f检验。结果HL-7702、HepG2和MHCC97H中EphA3mRNA的相对表达量分别为0．94±0．13、1．76±0．16和3．62±0．14;EphA3蛋白的相对表达量分别为0．96±0．12、1．59±0．11和3．82±0．11,非肿瘤细胞与肝癌细胞中EphA3表达比较,差异有统计学意义（t=2．511,6．437;2．321,6．895,P〈0．05）。RT—PCR法检测HepG2细胞系中未处理组、对照组、siRNA干扰组EphA3mRNA的相对表达量分别为0．95±0．11、0．96±0．12和0．31±0．15,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=4．051,P〈0．05）;MHCC97H细胞中EphA3mRNA的相对表达量分别为0．97±0．16、0．95±0．14和0．40±0．11,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=5．237,P〈0．05）;Westernblot法检测3组HepG2细胞中EphA3蛋白的相对表达量分别为0．97±0．16、0．95±0．15和0．32±0．17,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=4．145,P〈0．05）;MHCC97I-I细胞中EphA3蛋白的相对表达量分别为0．95±0．11、0．96±0．12和0．38±0．17,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=4．327,P〈0．05）。采用体外侵袭实验,检测3组穿透的细胞数量,HepG2细胞系细胞数量分别为（111±4）个／10HPF、（109±5）个／10HPF和（51±3）个／IOHPF,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=7．582,P〈0．05）;MHCC97H细胞系细胞数量分别为（402±6）个／10HPF、（397±7）个／10HPF和（152±7）个／10HPF,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=9．479,P〈0．05）。Westernblot法检测HepG2细胞系中3组VEGF蛋白的相对表达量分别为0．98±0．11、0．96±0．13和0．57±0．11,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=3．167,P〈0．05）;Westernblot法检测MHCC97H细胞系中3组VEGF蛋白的相对表达量分别为0．97±0．14、0．98±0．12和0．34±0．15,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=4．278,P〈0．05）。ELISA法检测HepG2细胞系中3组VEGF蛋白的相对活力OD值分别为0．96±0．15、0．94±0．11和0．47±0．13,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=3．981,P〈0．05）;NHCC97H细胞中VEGF蛋白的相对活力OD值分别为n98±0．12、0．97±0．12和0．38±0．14,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=4．059,P〈0．05）。结论EphA3可能是通过调控VEGF蛋白表达和活性来实现肝癌细胞的侵袭,提示EphA3可作为肝癌治疗的新靶点。     

骨髓间充质干细胞促进“创面”愈合的实验研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）促进创面愈合的作用和用于创面修复的可行性。方法：密度梯度离心法分离培养正常人骨髓间充质干细胞（hMSCs），流式细胞仪检测培养第二代细胞CD14、CD29、CD34、CD44、CD45和CD106抗原表达以鉴定MSCs。实验分3组：直接共培养组（n=8）为hMSCs（1×10^5/ml）与人表皮角质形成细胞（HEKa）直接接触共培养；间接共培养组（n=7）为在transwell透明聚碳酸酯膜上层加入hMSCs细胞悬液[（2-3）×10^5个细胞）]，下层接种HEKa，间接共培养；单纯HEKa培养组（n=7）单纯培养HEKa。在倒置显微镜下刮擦生长融合成片的HEKa细胞以制备宽度为100μm的“表皮创面”模型。模型制备后24、48、72h，倒置相差显微镜下计数每高倍视野越过创缘迁移到创面的HEKa数，并用SigmaScan Pro5软件计算创面愈合率，检测HEKa细胞吸收脱氧胸腺嘧啶核苷的放射活性，判定HEKa细胞的分裂增殖活性。结果：流式细胞仪检测第二代hMSCs CD29、CD44和CD106抗原阳性（分别为94.81%、95.38%、97.40%），CD14、CD34、CD45抗原阴性（分别为1.23%、3.05%、2.64%）；直接培养组、间接培养组和单纯HEKa培养组越过创缘进入创面的细胞伤后24h分别有（10.00±0.25）、（5.50±0.20）和（5.20±0.35）个/高倍视野；48h分别有（55.30±0.22）、（27.00±0.34）和（26.50±0.25）个/高倍视野；72h分别有（110.50±0.45）、（42.50±0.50）、（40.20±0.38）个/高倍视野。3组伤后72h创面愈合率分别为（60.00±0.04）%，（35.00±0.01）%、（33.00±0.05）%。脱氧胸腺嘧啶苷掺入培养基法表明hMSCs对体外共培养HEKa细胞的增殖作用分别为（1650±270）cpm/10^5 cell、（1240±210）cpm/10^5 cell、（1180±220）cpm/10^5 cell。上述各指标直接共培养组与单纯HEKa培养组比较，差异有显著性（P〈0.01），而间接培养组与单纯HEKa培养组间差异无显著性（P〉0.05）。     

从膀胱癌患者分离并培养人膀胱平滑肌细胞

目的：建立从膀胱癌患者的分离并培养膀胱平滑肌细胞的实验技术.方法：取一小块无明显肿瘤生长的膀胱组织,分离并培养膀胱平滑肌细胞;动态观察细胞形态变化、生长增殖情况以及平滑肌肌动蛋白（SMA）、结蛋白（Desmin）和广谱细胞角蛋白（AE1/AE3）的表达.结果：接种24 h后即有长梭形细胞贴壁生长,10天后长至80%融合,呈典型的＂峰谷＂样形态;传代后1天为潜伏期,2～6天为指数生长期,然后进入融合平台期,需再次传代.第2代细胞的SMA和Desmin表达阳性率分别高达（99.0±0.8）%和（97.0±2.1）%,不表达AE1/AE3.随着传代次数的增加,细胞去分化,细胞形态变成短梭状或椭圆形;SMA和Desmin的表达开始下降,传至第5代时,SMA和Desmin阳性率分别降至（78.0±3.3）%和（74.0±2.6）%;至第7代时,SMA和Desmin阳性率降至（51.0±3.0）%和（49.0±2.6）%.第7代细胞经血清饥饿培养48 h后,细胞又能再分化,形态转变成长梭状,SMA和Desmin阳性率可分别升至（90.0±3.5）%和（88.0±2.5）%,具有显著性差异.结论：本研究所培养的人膀胱平滑肌细胞具有较高的纯度,血清饥饿能促进去分化的细胞再分化,能为构建组织工程膀胱提供种子细胞.     

NR4A1对小鼠卵巢颗粒细胞脂肪代谢相关调控因子的调节作用

目的观察NR4A1对小鼠卵巢颗粒细胞中脂肪代谢相关调控因子脂联素受体2（Adipo—R2）、解偶联蛋白2（UCP2）、B类清道夫受体（CD36）的调节作用。方法分别构建NR4A1超表达腺病毒载体（AdCMV～NR4A1）及干涉腺病毒载体（AdHl－siRNA／NR4A1）。体外培养小鼠卵巢颗粒细胞,贴壁生长至90％时,分为病毒感染组、胰岛素（100nmol／L）与胰岛素增敏剂（10μmol／L）组和病毒＋胰岛素组。Trizol裂解细胞提取总RNA,实时荧光定量PCR法检测颗粒细胞中Adipo—R2,UCP2,CD36的mRNA表达水平。结果在小鼠卵巢颗粒细胞中超表达NR4A1能够促进Adipo—R2,UCP2,CD36基因的转录（P〈O．05）,RNA干扰NR4AI后则可以抑制以上基因的表达（P〈0．05）;胰岛素可以促进UCP2,CD36基因的表达（P〈O．05）,而对Adipo—R2的作用不明显;另外胰岛素增敏剂曲格列酮也能够促进Adipo—R2,UCP2,CD36的表达（P〈0．05）;RNA干扰NR4A124h后,再向细胞中加入生理剂量（100nmol／L）胰岛素30rain后Adipo—R2,UCP2,CD36的表达水平与单独干涉组比均可逆转升高（P〈O．05）,其中UCP2的表达水平可升高到胰岛素组同样的水平,但Adipo—R2,CD36的逆转升高水平并没有达到仅加入胰岛素时的升高水平（P〈O．05）。结论NR4A1对Adipo—R2,UCP2,CD36具有正向调节作用,同时与胰岛素或胰岛素增敏剂可能有协同调节作用,进而发挥对脂肪代谢的调控。     

ZBTB8A在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨胃癌中ZBTB8A在胃癌组织及细胞中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR（RT—PCR）检测ZBTBSAmRNA在正常胃黏膜细胞系GES-1与胃癌细胞系SGC7901和MGC803中的表达差异,以及在104例原发性胃癌组织及其对应癌旁组织和40例正常胃黏膜组织中的表达差异,并分析ZBTB8A表达与胃癌临床病理特征之间的关系。结果ZBTB8AmRNA在胃癌细胞系SGC7901、MGC803和正常胃黏膜细胞系GES-1中的表达量分别为0．00138±0．00015、0．00158±0．00021和0．00036±0．000055,其在SGC7901和MGC803细胞系中的表达量高于GES．1细胞系,差异有统计学意义（均P〈0．01）。ZBTB8AmRNA在胃癌组织、癌旁组织和正常胃黏膜组织中的表达量分别为0．0152±0．0126、0．0070±0．0061和0．0079±0．0036,其在胃癌组织中的表达量高于后两者（均P〈0．01）,而癌旁组织与正常胃黏膜组织表达的差异无统计学意义（P〉0．05）。ZBTB8A表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分期及分化程度有关（均P〈0．05）,但与患者年龄、性别、肿瘤大体分型和组织分型无关（均P〉0．05）。结论ZBTB8A可能是胃癌潜在的致癌因子,并参与胃腺癌细胞分化、浸润和转移等过程。