八肽胆囊收缩素改善内毒素休克大鼠心肌损伤的实验研究

目的观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)改善内毒素休克(ES)大鼠心肌损伤的变化,探讨CCK-8逆转ES心功能衰竭及顽固性低血压的作用机制.方法实验分4组(1)对照组,静脉注射生理盐水0.2mL;(2)LPS组,静脉注射8mg*kg-1LPS;(3)CCK组,静脉注射40μg*kg-1CCK-8;(4)CCK+LPS组,静脉注射40μg*kg-1CCK-8,10min后再注入LPS(8mg*kg-1).股动脉插管监测平均动脉压(MAP),尾静脉穿刺注射药物.分别测定2h、6h心肌组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量变化,用ELISA法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)含量.结果(1)MAP变化对照组MAP为(14.20±1.38)kPa,静脉注射LPS后MAP快速持续下降,75min降至低谷为(7.16±0.59)kPa;CCK+LPS在CCK注入20min时MAP下降幅度与LPS组无差异,20min后即迅速回升,至120min仍持续在较高水平(10.71±0.45)kPa,仍未恢复至正常水平.(2)SOD活性变化2h、6h对照组SOD为(60.51±2.23)×103U/L和(55.97±4.96)×103U/L,LPS组心肌组织匀浆中SOD活性则明显下降为(48.69±2.30)×103U/L和(34.49±4.69)×103U/L,CCK+LPS组较LPS组SOD活性则明显回升为(56.19±1.83)×103U/L和(41.95±7.44)×103U/L.(3)MDA含量变化2h、6h对照组MDA为(3.43±1.76)μmol/L和(3.68±1.58)μmol/L,LPS组心肌组织匀浆中MDA含量明显上升(19.71±3.02)μmol/L和(36.18±5.26)μmol/L,CCK+LPS组较LPS组MDA含量显著下降为(0.39±2.43)μmol/L和(15.10±2.12)μmol/L.(4)NO含量变化2h、6h对照组NO为(37.96±1.85)mmol/L和(41.98±6.59)mmol/L,LPS组心肌组织匀浆中NO含量明显上升(73.45±8.93)mmol/L和(105.4±3.61)mmol/L,CCK+LPS组较LPS组NO含量显著下降为(60.91±3.15)mmol/L和(70.37±7.68)mmol/L.(5)TNF-α含量变化2h对照组心肌组织匀浆中为(320.81±110.63)ng/L,LPS组TNF-α含量明显上升为(1599.08±227.03)ng/L,CCK+LPS组较LPS组TNF-α含量显著下降为(863.54±123.19)ng/L.(6)IL-1β含量变化6h对照组心肌组织匀浆中为(163.10±80.20)ng/L,LPS组IL-1β含量明显上升为(620.66±144.57)ng/L,CCK+LPS组较LPS组IL-1β含量显著下降为(282.07±92.68)ng/L.结论预先注射CCK-8可以减轻ES大鼠心肌氧化损伤,抑制炎性细胞因子TNF-α及IL-1β产生,影响NOS活性,使NO合成下降,发挥心肌细胞保护作用,恢复心肌收缩力,是其逆转ES心功能衰竭及顽固性低血压的主要机制.     

TGF-β1 对肌成纤维细胞MMP-2激活的影响

目的：观察转化生长因子β1(TGF-β1)对鼠肌成纤维细胞（C2C12细胞）分泌基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其激活的影响,探讨其内在机制。 方法：用不同浓度的TGF-β1（0、1、5、10 μg/L）干预C2C12细胞24 h,200 pmol/L Smad3基因短干扰RNA（siRNA-Smad3）转染C2C12细胞24 h,用ELISA 方法测定MMP-2及其活性型MMP-2。结果：(1) 0、1、5、10 μg/L TGF-β1干预C2C12细胞24 h,ELISA检测总MMP-2的结果（μg/L）分别为177±20、180±15、171±18、179±28,方差分析无显著差异(P>0.05);活性型MMP-2分别为23.09±4.37、14.42±2.30、9.50±1.18、4.48±0.69,比较差异显著(P<0.01)。(2) 5 μg/L TGF-β1干预C2C12细胞4 h、12 h和24 h,总MMP-2 ELISA值分别为160±16(对照组)/157±17（干预组）、174±6/174±16、187±12/189±18, 不同时点干预组总MMP-2 值比较无差异,P>0.05;活性型MMP-2 值分别为：16.92±1.26(对照组) /16.53±2.56（干预组）、22.70±3.03/8.00±2.02、23.15±2.66/9.39±2.60,干预组活性型MMP-2值比较有差异,P<0.01。（3）200 pmol/L siRNA-Smad3转染C2C12细胞24 h,再用5 μg/L TGF-β1干预C2C12细胞24 h, 活性型MMP-2值分别是20.80±1.53（siRNA-control,空白对照组)、9.82±2.18（siRNA-control+5 μg/L TGF-β1,内对照组）、20.09±2.27（siRNA-Smad3+5 μg/L TGF-β1,实验组）;实验组和内对照组比较差异显著（P<0.01),实验组和空白对照组比较无显著差异（P>0.05)。结论：TGF-β1并不影响C2C12细胞分泌MMP2,但显著抑制MMP-2的活化;siRNA-Smad3阻断Smad3信号转导可以消除TGF-β1对MMP-2活化的抑制作用。     

C57BL/6哮喘小鼠细胞内镁含量与肺组织β2受体mRNA表达的相关性研究

目的：探讨细胞内镁含量对C57BL/6哮喘小鼠肺组织β₂受体mRNA表达的影响。方法:健康4－6周龄清洁级雌性C57BL/6小鼠96只，体重(12±2)g，随机数字表法分为A、B、C、D 4组，每组各24只。应用鸡卵蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型。A、B组予低镁饲料喂食，C、D组予正常镁饲料喂食。B、D组腹腔内注射沙丁胺醇诱导β₂受体低调节，A、C组腹腔内注射生理盐水作对照。第1 d、21 d、34 d各组分别随机抽取8只检测血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂受体mRNA及蛋白表达。 结果:1 d血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂AR mRNA及蛋白表达各组间差异无显著（均P>0.05）。21 d、34 d C组血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂AR mRNA及蛋白表达均显著高于A组［21 d：(0.84±0.09)mmol/L vs （0.57±0.10)mmol/L、(2.39±0.14)mmol/L vs （2.11±0.08)mmol/L、(0.75±0.09)mmol/L vs （0.59±0.06)pmol/g、（88.50±8.50)pmol/g vs （60.10±7.70)pmol/g，均P<0.05；34 d：(0.67±0.10)mmol/L vs (0.51±0.09)mmol/L、(2.17±0.08)mmol/L vs (2.05±0.09)mmol/L、(0.61±0.05)pmol/g vs (0.53±0.06)pmol/g、(76.60±7.10)pmol/g vs (58.00±7.60)pmol/g，均P<0.05］；21 d、34 d D组血浆Mg2+、红细胞内Mg2+、肺组织β₂AR mRNA及蛋白表达亦显著高于B组［21 d：(0.95±0.33)mmol/L vs (0.46±0.09)mmol/L、(2.32±0.18)mmol/L vs (1.87±0.14)mmol/L、(0.73±0.10)pmol/g vs (0.43±0.07)pmol/g、(96.90±8.00)pmol/g vs (47.90±4.90)pmol/g，均P<0.05；34 d：(0.71±0.10)mmol/L vs (0.31±0.08)mmol/L、(1.66±0.13)mmol/L vs (1.45±0.16)mmol/L、(0.40±0.07)pmol/g vs (0.33±0.05)pmol/g、(61.50±3.20)pmol/g vs (35.30±7.10)pmol/g，均P<0.05］。结论:细胞内镁缺乏的C57BL/6哮喘小鼠肺组织β₂受体表达减少，在激动剂作用下更易发生β₂受体低调节。     

1测定醛固酮浓度/肾素活性(SAC/PRA)值在原发性醛固酮增多症中的临床意义

目的:探讨测定SAC/PRA值对原发性醛固酮增多症的诊断价值.方法:采用放射免疫分析法测定48例原发性醛固酮增多症患者和30例正常人的血浆肾素(PRA),血管紧张素Ⅱ(AT-Ⅱ)以及血清醛固酮(Aldo),并计算醛固酮浓度/肾素活性(SAC/PRA)比值.结果:正常组PRA、AT-Ⅱ、Aldo测定值分别为0.57±0.08ng/ml/h,36.03±6.11ng/L,0.33±0.04nmol/L;原醛患者PRA、AT-Ⅱ、Aldo测定值分别为0.14±0.08ng/ml/h,21.21±7.55ng/L,1.07±0.34nmol/L.与正常对照组比较,均有极显著性差异(p＜0.001).SAC/PRA(ng/dl/ng*ml-1*h-1)913±409.结论:合理使用SAC/PRA比值有助于原发性醛固酮增多症的诊断.     

β-淀粉样蛋白对原代培养大鼠海马神经细胞钙稳态和线粒体线粒体通透性转运孔道的影响

目的 研究β-淀粉样蛋白(β-amyloid)对原代培养的大鼠脑海马神经细胞内钙稳态和线粒体通透性转运孔(mitochortrial permebility transition pore,MPTP)的影响,探讨其神经毒性作用的机制.方法 原代培养8d后的Wistar大鼠脑海马神经细胞,用老化的Aβ25-35对其进行1,10和20 μmol/L剂量的染毒,培养24和48h后观察海马神经细胞形态、游离钙浓度、Ca2+-ATP酶活性、线粒体膜电位,应用Western blot方法分析MPTP组成蛋白表达情况.结果 随着Aβ25-35剂量的增加和染毒时间的延长,可以观察到原代培养的海马神经细胞呈现出弥漫性肿胀、开始变形、出现空泡、胞体边缘模糊的形态变化;原代培养海马神经细胞内的游离钙离子的浓度也呈逐渐上升趋势,其中Aβ25-35 20 μmol/L组在24h和48 h时,细胞内钙离子浓度分别为(31.04±4.16)和(32.80 ±0.43),均显著高于对照组(20.95±4.04)和(22.23 ±0.49)(P ＜0.05);Ca2+-ATP酶活性随着染毒剂量和染毒时间增加明显降低(P＜0.05),其中Aβ25-3520 μmoL/L组在24h和48h时,细胞内Ca2+-ATP酶活性为(2.14±0.01)和(1.10±0.05) U/mgprol,均显著低于对照组(5.17±0.08)和(4.57±0.06)(P＜0.05);线粒体膜电位Aβ25-35 20μmol/L组在24h和48 h时,细胞内线粒体膜电位分别为(20.34 ±7.05)和(19.05±6.15),均显著低于对照组(38.47 ±0.72)和(40.07±1.26)(P＜0.05);有明显剂量反应关系;MPTP孔道蛋白的WB结果显示蛋白表达量随着染毒剂量增加而增加.结论 Aβ25-35通过破坏细胞的钙稳态激活MPTP孔道影响线粒体功能从而发挥神经毒性作用.     

甘氨酸对急性坏死性胰腺炎鼠血和胰腺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10的影响

目的：探讨甘氨酸对急性坏死性胰腺炎鼠血和胰腺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10的影响。 方法： Wistar大鼠150只，随机分为3组：假手术组(SO)、急性坏死性胰腺炎组(ANP)和急性坏死性胰腺炎＋甘氨酸处理组(ANP+Gly), 以牛磺胆酸钠复制急性坏死性胰腺炎大鼠模型, ANP+Gly组大鼠胰管内给予牛磺胆酸钠前10 min静脉给予甘氨酸1 g/kg。观察血和胰腺组织中ET、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10含量变化，同时观察各组大鼠胰腺组织的病理变化、24 h病死率及平均生存时间。 结果: 在0 h、2 h、4 h、8 h和12 h的血和胰腺组织中ET、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8 和 IL-10水平, ANP组和ANP+Gly组均显著高于SO组(除0 h组及ANP组的IL-10 12 h外) (P<0.01/P<0.05), 且在ANP和ANP+Gly组ET、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8随病程进展而升高(P<0.05)，在ANP组 IL-10水平随病程进展降低(P<0.05)，而在ANP+Gly组IL-10水平随病程进展增高(P<0.05)。在相同时段除ET在ANP组和ANP+Gly组无显著差异外(P>0.05), 除0 h组外, TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平在ANP组显著高于ANP+Gly组(P<0.01)，而 IL-10水平(除0 h和2 h组无差异外)ANP+Gly组显著高于ANP组(P<0.05/0.01)。虽然ANP组和ANP+Gly组大鼠胰腺组织的病理变化无显著差异，但ANP+Gly组大鼠24 h病死率显著低于ANP组(P<0.05)，平均生存时间显著延长于ANP组(P<0.05)。 结论： ET、TNF-α、IL-1β、IL-6 、IL-8 和 IL－10参与了大鼠ANP的病理过程，甘氨酸可减少促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6 和IL-8 的产生，上调抗炎细胞因子IL－10的负调控作用，有助于减轻ANP时炎性细胞因子瀑布样级联反应，降低大鼠24 h病死率及延长平均生存时间。     

孟鲁司特对人鼻黏膜上皮细胞黏蛋白MUC2和MUC5B mRNA表达的影响

目的 探讨白三烯受体拮抗剂孟鲁司特对人鼻黏膜上皮细胞黏蛋白MUC2和MUC5BmRNA表达的影响。方法 应用下鼻甲黏膜组织进行鼻黏膜上皮细胞的原代培养,取第2代培养的鼻黏膜上皮细胞分成对照组、IL-1β组、孟鲁司特+IL-1β组和孟鲁司特组。IL-1β组加入含IL-1β(10 μg/L)的无血清培养基;孟鲁司特+IL-1β组先加入孟鲁司特(0.01 mol/L)孵育8h后,再加入含IL-1β（10μg/L）的无血清培养基;孟鲁司特组加入含孟鲁司特(0.01 mol/L)的无血清培养基;对照组仅加入无血清培养基。培养24h后通过荧光定量PCR检测各组上皮细胞黏蛋白MUC2和MUC5B mRNA的表达。结果对照组MUC2和MUC5B mRNA和孟鲁司特组水平相近[MUC2:(2.93±1.57)×106拷贝/μg、( 1.63±0.47)× 106拷贝/μg;M UC5B:(8.21±3.54)×105拷贝/μg(5.15±2.16)×105拷贝/μg]。而孟鲁司特+IL-1β组MUC2和MUC5B mRNA定量表达均低于IL-1β组[(3.48±1.41)× 106拷贝/μg比(6.63±1.73)× 10拷贝/μg,MUC5B：(1.75±0.69)×106拷贝/μg比(3.40±2.79)×107拷贝/μg,均P＜0.05],但高于对照组和孟鲁司特组（均P＜0.05）。结论 孟鲁司特可降低IL-1β诱导的鼻黏膜上皮细胞黏蛋白MUC2和MUC5BmRNA的表达,但不影响正常状态鼻黏膜上皮细胞黏蛋白mRNA的表达,可能对炎性细胞因子诱导的鼻黏膜上皮细胞黏蛋白mRNA的表达有抑制作用。     

Aβ（31—356）和ApoE4对培养大鼠海马神经元的存活和生长的影响

为探讨β-淀粉样蛋白(Aβ)和载脂蛋白E4(ApoE4)对培养大鼠海马神经元的作用,本文采用了神经细胞培养、MTT比色法、免疫组化及图象分析等技术进行了研究.结果显示(1)MTT法测得Aβ(31-35)(10 μmol/L)+ApoE4(10μg/ml)和Aβ(31-35)(20 μmol/L)+ApoE4(10 μg/ml)的OD值,分别为0.197±0.021和0.191±0.024,明显低于对照组(0.229±0.03,P＜0.05).(2)这两组神经元胞体的最长径分别为(10.07±1.98)μm和(10.01±1.68)μm;最短径分别为(6.40±0.77)μm和(6.28±0.89)μm,明显低于对照组、ApoE4组、Aβ(31-35)组的最长径和最短径(P＜0.05);其突起平均长度分别为(26.36±7.73)um和(23.86±7.29)μm,明显低于对照组(30.88±9.79)μm、ApoE4组(30.60±7.30)μm以及Aβ(31-35)(10 μmol/L)组(28.34±4.40)μm(P＜0.05).(3)Aβ(31-33)(20 μmol/L)组的突起平均长度为(26.81±5.42)μm,也明显低于对照组(30.88±9.79)μm和ApoE4组(30.60±7.30)μm(P＜0.05).本研究结果提示,Aβ(31-35)+ApoE4对神经元的抑制作用较Aβ(31-35)强,ApoE4对Aβ(31-35)的神经毒性效应可能有协同作用.     

2.72 黄芪对胃肠运动的实验研究

目的本文采取离体胃、肠平滑肌条灌流方法和在体动物胃排空、肠推进实验,系统研究了单味中药黄芪水煎剂对胃肠运动的影响并初步探讨其作用机制.方法选用健康Wistar大鼠,按常规方法分别取胃底、胃体纵行肌、胃窦及幽门环行肌、十二指肠、头端空肠、末端空肠、回肠的纵行肌条、近端结肠、远端结肠的纵、环行肌条.将肌条放置在恒温(37℃)Krebs液的灌流肌槽中,记录肌条等长收缩活动,观察黄芪对肌条收缩活动的影响.在体胃排空、肠推进实验选用小白鼠.动物禁食18～24h, 灌胃不同浓度的黄芪,1h后口服营养性半固体糊或灌服10%阿拉伯胶碳末混悬液,20min后脱颈处死,计算胃内残留率及小肠推进百分比.结果 1.黄芪(3×10-3g/mL、10-2g/mL、10-1/mL增高胃底纵行肌条的张力(38.8±9.2%),79.2±13.5,127.7±19.2%,P＜0.001).黄芪(10-2g/mL、10-1g/mL)增高胃体纵行肌条的张力(7.8±3.2%,18.9±6. 6%,P＜0.05)增加幽门环行肌条运动指数(29.5±8.0%,51.3±11.0%,P＜0 .001).但各浓度黄芪对胃窦肌条活动无明显影响.阿托品(10-8mol/L)、六烃季胺( 10-5mol/L)、异博定(10-8mol/L)可不同程度阻断黄芪对胃肌条的兴奋效率.2 .黄芪对离体小肠平滑肌条和近端结肠纵、环行肌条以及远端结肠环行肌条的收缩活动无明显影响,但10-2g/mL、10-1g/mL浓度的黄芪可明显减弱远端结肠纵行肌条的收缩波平均振幅(-18.7±5.4%,-20.8±4.9%,P＜0.01).酚妥位明(10-6mol /L)、LNNA(10-4mol/L)可使黄芪对远端结肠纵行肌条的抑制作用明显减弱,心得安、消炎痛不影响黄芪的作用.3.黄芪(40g/kg)使在体小鼠胃内残留率增加(75.8±6.3%), 与生理盐水对照组(54.2±13.2%)比较P＜0.001.黄芪可对抗阿托品对胃排空的抑制作用(73.7±8.4%到61.9±7.7,P＜0.01).4.黄芪(30g/kg)明显增加在体小鼠小肠推进百分比(60.3±7.8%),与生理盐水对照组(47.9±5.9%)比较P＜0.01.黄芪可对抗阿托品和异丙肾上腺素对小肠推进的抑制作用(39.6±5.5%到49.0±11.3%,P ＜0.01和32.9±10.2%到42.6±9.1%,P＜0.05).结论黄芪对离体胃底、胃体、幽门平滑肌条具有兴奋作用,这种作用可能部分经由胆碱能M、N受体介导,并与胞浆内Ca2+浓度升高有关.黄芪对结肠平滑肌条的抑制作用可能部分经由肾上腺素能α受体介导并与NO有关.黄芪对阿托品所造成的胃排空、肠推进异常有明显的对抗作用,对异丙肾上腺素的肠推进抑制也有对抗作用,提示黄芪对动物在体胃肠运动具有良好的调节作用.     

心房钠尿肽对肺泡Ⅱ型上皮细胞的保护作用

目的：探讨心房钠尿肽(ANP)对脂多糖（LPS）引起肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)损伤的治疗作用。方法：分离培养AT-Ⅱ，以LPS复制大鼠AT-Ⅱ损伤模型，分别给予10-6、10-7、10-8 mol/L等不同剂量的ANP进行治疗，通过观察4 h、12 h、24 h等时点细胞培养上清液中LDH、MDA、AKP、总磷脂(TPL)水平及细胞培养上清液的表面张力(ST)变化，研究ANP对LPS引起的AT-Ⅱ损伤的治疗作用。结果：在不同剂量、不同时点条件下，各ANP组细胞培养上清液LDH、AKP活性及MDA含量均明显低于LPS组，呈明显的剂量依赖性和时间依赖性，以高剂量组(10-6)和12 h时点疗效最佳。以12 h时点为例，细胞培养上清液中AKP活性为：control(43.5±10.4) U/L,LPS (98.1±16.4) U/L,LPS+ANP(10-6) (46.4±10.5) U/L，LPS+ANP(10-7) (60.7±9.5) U/L，LPS+ANP(10-8) (91.3±13.9) U/L。LPS组细胞培养上清液中TPL含量明显低于对照组、ST水平明显高于对照组，不同剂量、不同时点的各ANP组细胞培养上清液中TPL含量均不同程度地高于对应的LPS组，各ANP组细胞培养上清液中的ST水平均低于对应的LPS组。结论：ANP可显著减轻LPS引起的AT-Ⅱ损伤, 促进肺表面活性物质(PS)的合成、分泌，且该作用有明显的剂量依赖性和时间依赖性。     

急性坏死性胰腺炎肠粘膜损害与NK-IR的过度表达相关

目的:研究神经激肽-1受体(NK-1R)和神经激肽-2受体(NK-2R)在急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠末端回肠组织中的表达, 探讨该受体的表达与ANP肠粘膜损害的关系。方法:健康成年Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术对照组(50只)和ANP组(80只)。假手术对照组开腹后只翻动胰腺, ANP组大鼠胰胆管恒速逆行注射5%牛磺胆酸钠, 制成ANP大鼠模型。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测末端回肠组织NK-1R和NK-2R的mRNA水平, 应用Westernblot检测NK-1R的蛋白表达水平。结果:与假手术对照组相比, ANP末端回肠组织中NK-1R和NK-2R的mRNA水平过度表达。NK-1R的表达水平分别与肠粘膜的病理学评分(r=0.77, P＜0.01)和肠粘膜通透性(r=0.68, P＜0.01)呈明显正相关。结论:ANP时, 肠组织中NK-1R和NK-2R的表达水平明显上调, P物质的过度作用加剧ANP时肠粘膜的病理损害, 损害肠粘膜屏障的功能。     

雌激素受体与人结直肠癌微血管密度之间的关系

目的检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)肝转移灶、原发癌灶、癌周正常粘膜组织中雌激素受体(estrogen receptor,ERα)表达情况及微血管密度(microvessel density,MVD),探讨二者之间关系。方法选取结直肠癌患者,伴肝转移32例作为实验组,不伴脏器转移33例作为对照组,使用免疫组化的方法检测结直肠癌原发癌灶、肝转移灶、癌周正常粘膜组织中雌激素受体表达情况及微血管密度。结果实验组癌周正常肠粘膜、肠原发灶、肝转移灶ERα表达分别为(23/32,14/32,5/32),对照组正常肠粘膜、肠原发灶表达分别为(21/33,13/33)。实验组肠原发灶(68.53±24.26)与对照组肠原发灶(62.98±25.71)微血管密度(MVD)均高于实验组正常组织(43.19±41.17)、对照组正常组织(51.32±21.82)和实验组肝转移灶MVD(29.53±9.27)。结论雌激素受体为对抗结直肠癌进展转移的保护性因素,在原发灶中的表达与MVD呈负相关,但在肝转移灶中MVD受ER影响不明显。     

β-淀粉样蛋白对原代培养大鼠海马神经细胞Sorcin、RyR2mRNA基因表达的影响

目的 研究β-淀粉样蛋白(Aβ)对原代培养的大鼠脑海马神经细胞内钙稳态相关蛋白Sorcin、RyR2mRNA的影响.方法 新生1-3天的Wistar大鼠,取其海马组织,原代培养8d后,用已老化过的Aβ25-35对海马神经细胞进行1μmol/L,10μmol/L和20 μmol/L剂量的染毒,培养24和48 h后分别观察海马神经细胞形态、和海马神经细胞内钙调节相关蛋白Sorcin、RyR2mRNA的基因表达水平.结果 随着Aβ25-35剂量的增加和染毒时间的延长,可发现随着Aβ25-35剂量的增加和染毒时间的延长,海马细胞出现细胞凋亡的比例增加,其中Aβ25-35 20 μmol/L染毒48 h培养海马细胞中出现了大量早期凋亡细胞和少量中期凋亡细胞.实时定量PCR结果显示,10 μmol/L Aβ5-35在对原代细胞染毒24和48 h后Sorcin mRNA的相对表达量为(1.42±0.03)和(1.63±0.02),与对照组相比,表达增加(P＜0.05);20μmol/L Aβ25-35在对原代细胞染毒24h和48 h后Sorcin mRNA的相对表达量(2.11±0.05)和(2.23±0.05),与对照组相比,表达增加(P＜0.05);20 μmo]/L Aβ25-35在对原代细胞染毒24和48h后RyR2mRNA的相对表达量为(1.64±0.03)和(1.95±0.03),表达显著高于对照组相(P＜0.05).结论 Aβ具有神经毒性,可抑制海马神经细胞的生长,可通过作用于钙调节相关蛋白的表达,诱发阿尔茨海默氏病(AD)的发生.     

霉酚酸影响T细胞增殖及细胞因子表达的体外实验

目的： 探讨霉酚酸（MPA）或与抗B7-1单克隆抗体联用对T细胞增殖的影响及其机制。 方法： 体外建立T细胞反应系统，BrdU掺入法检测T细胞增殖，RT-PCR及ELISA法检测细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-10的mRNA及蛋白表达水平。 结果： （1）50 μmol/L MPA能明显抑制T细胞增殖，与对照组相比，差异显著（P＜0.01)。（2）MPA可抑制IL-2、IFN-γ表达，增强IL-10表达。IL-2蛋白表达水平在MPA 组明显低于对照组(42.73 ng/L±14.64 ng/L vs 99.70 ng/L±9.15 ng/L，P＜0.01)；IFN-γ蛋白表达水平在MPA组明显低于对照组（7.87 ng/L±4.22 ng/L vs 82.42 ng/L±25.55 ng/L，P＜0.05)；与对照组比较，MPA明显增强IL-10表达水平（770.95 ng/L±126.85 ng/L vs 545.71 ng/L±22.45 ng/L，P＜0.05）；联用抗B7-1单抗能加强此效应（941.90 ng/L±56.61 ng/L vs 770.95 ng/L±126.85 ng/L，P＜0.05)。（3）IL-2、IFN-γ mRNA表达量在MPA组均明显低于对照组（0.74±0.10 vs 1.17±0.15，0.52±0.05 vs 0.75±0.12，P＜0.01）；IL-10 mRNA表达水平在MPA处理组与对照组间差异不明显，但与抗B7-1单抗联用后，其表达水平高于单用MPA组（1.28±0.06 vs 0.84±0.09，P＜0.01）。 结论： MPA可改变细胞因子表达谱，促使Th1亚群向Th2亚群偏移可能是其发挥免疫负调节作用的机制之一；联用抗B7-1单抗可能有一定协同效应。     

CCK-8抑制内毒素休克大鼠细胞因子的生成

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对脂多糖(LPS)引起的大鼠内毒素性休克(ES)的低血压及细胞因子产生的影响.方法使用生理多道记录仪,观察尾静脉注入LPS(8mg/kgiv)复制的大鼠ES模型、LPS注入前10min尾静脉注入CCK-8(40μg/kgiv)、单独注入CCK-8(40μg/kgiv)或生理盐水(对照)的四组大鼠血压的改变,应用ELISA试剂盒检测血清、脾脏和肺脏中前炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)的特异性差别.结果CCK-8逆转LPS引起的大鼠平均动脉血压的下降.与对照组相比,LPS显著增加血清IL-6水平(3566.92±686.95pg/mLvsl28.49±22.06pg/mL,P＜0.01),而TNF-α和IL-1β含量虽然显著增加(276.71±86.43pg/mLvs检测不到和43.19±9.41pg/mLvs检测不到,P＜0.01),但增加幅度低于IL-6.CCK-8显著抑制LPS诱导的血清TNFα、IL-β和IL-6的增加.与对照组相比,LPS显著增加脾脏和肺脏的IL-1β含量(分别为5183.56±84.91pg/mLvs1047.40±21.37pg/mL和4049.91±613.79pg/mLvs检测不到,P＜0.01),TNF-α和IL-6水平亦有增加但其程度低于IL-1β.CCK-8抑制LPS诱导的脾脏和肺脏的这些细胞因子的增加.讨论和结论TNF-α、IL-1β和IL-6是重要的前炎症介质,其内源性产生过量可能是全身性感染合并组织损伤和器官衰竭的原因.CCK-8可能通过某些环节抑制这些炎症细胞因子的过量生成.这些发现提示CCK-8逆转ES可能与其对细胞因子过量产生的抑制作用有关.     

低氧对家兔局部脑血循环及脑组织中血管活性肠肽含量的影响

本实验观察了急性低氧及低氧习服家兔暴露于模拟海拔5000米低氧环境时局部脑血流量变化及脑组织中血管活性肠肽(简称VIP)含量变化。动物分为急性低氧组,低氧习服组和常压对照组。用脑电阻图法测定了家兔大脑皮层、下丘脑和海马三个部位的血流变化,用放射免疫分析法测定了以上部位组织中VIP的含量变化。结果表明,急性低氧可引起局部脑血流量增加,其幅度为42.6%～78.8%(P<0.05),但低氧习服动物三个部位血流量均无显著变化。急性低氧组脑组织VIP含量较对照有明显增加,大脑皮层VIP含量自对照107.9±8.3ng/s组织增至120.8±16.9ns/g组织,下丘脑自12.1±1.1ng/g组织增至21.1±2.9ng/g组织(P<0.05),海马VIP含量自对照的35.7±2.6ng/gTiss增至45.9±1.7ng/g组织(P<0.01),低氧习服组的VIP含量无显著变化。本实验结果提示,急性低氧可引起家兔脑组织中VIP含量增加,这一变化很有可能参与低氧时脑血流量的调节过程。     

增强自噬减轻大鼠造影剂所致急性肾损伤的实验研究

目的 建立造影剂所致急性肾损伤(CI-AKI)大鼠模型,探讨自噬在CI-AKI中的作用及机制.方法 将18只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组(Con组)、CI-AKI组和雷帕霉素+造影剂组(Rapa组).CI-AKI组腹腔注射超大剂量的碘海醇(12.25 g/kg I),Rapa组于碘海醇注射前1周连续腹腔注射雷帕霉素(5 mg/(kg·d)),Con组腹腔注射等剂量的生理盐水.注射后24 h观察大鼠血肌酐水平、肾组织病理、肾组织中LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1表达水平及过氧化氢酶(CAT)含量的变化.结果 与Con组比较,CI-AKI组大鼠血肌酐水平明显升高((239.93±27.00) μmol/L比(51.70±10.59)μmol/L,P＜0.05),肾小管重度损伤,肾组织中自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1表达均增加(均P＜0.05),而CAT含量减少((14.86±0.32)U/mg比(18.72±1.46)U/mg),差异具有统计学意义(P＜0.05).与CI-AKI组比较,雷帕霉素预处理增加了肾组织中LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的表达及CAT含量((17.62±1.86)U/mg比(14.86±0.32)U/mg,P＜0.05),减轻了造影剂所致的肾小管损伤,并降低了血肌酐水平((187.62±47.76) μmol/L比(239.93±27.00) μmol/L),差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 造影剂可诱导自噬激活,增强自噬可减轻造影剂所致氧化应激损伤及肾损伤.     

抗CD86单克隆抗体对哮喘小鼠TH1/TH2细胞因子的影响

目的观察抗CD86单克隆抗体对卵蛋白干粉(OVA)致敏并刺激小鼠TH1和TH2细胞因子比例的变化,为防治哮喘提供实验依据.方法经OVA致敏的雌性Balb/c于激发前腹腔注射抗CD86单克隆抗体及同型对照IgG2α 50 μg,末次激发48 h后收集支气管肺泡灌洗液(BALF),以酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)和干扰素-γ(INF-γ)水平.结果以OVA致敏并激发的哮喘对照组小鼠BALF中IL-4、IL-5水平升高[分别为(64.23±3.91)pg/mL、(379.84±73.02)pg/mL],与PBS对照组[分别为(22±2)pg/mL、(245.75±50.01)pg/mL]比较,差异有显著性(P＜0.05);OVA致敏并激发的哮喘对照组小鼠BALF中INF-γ水平降低[(98.73±16.41)pg/mL],与PBS对照组[(218.35±48.63)pg/mL]比较,差异有显著性(P＜0.05).抗CD86单克隆抗体组小鼠BALF中IL-4、IL-5水平降低[分别为(35.78±4.88)pg/mL、(222.98±58.68)pg/mL],而INF-γ水平升高[(206.92±47.8)pg/mL],与哮喘对照组及同型对照IgG2α组(98.73±16.41)pg/mL、(102.32±15.49)pg/mL比较差异有显著性(P＜0.05).结论抗CD86单克隆抗体通过阻断共刺激信号,纠正TH1/TH2失衡,从而达到抗气道炎症的作用.     

Genistein下调肝癌细胞survivin基因表达和诱导细胞凋亡的实验研究

目的： 探讨三磷酸肌醇(IP3)和survivin蛋白表达变化在genistein诱导肝癌细胞凋亡中的作用。 方法： 以肝癌HepG2细胞培养72 h为对照组，实验各组以60 μmol/L的genistein作用于HepG2细胞不同时间后，应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量，Western blotting分析细胞survivin蛋白表达，流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果： 对照组IP3含量为(29.2±0.6) pmol/106cells， survivin蛋白与内参β-actin蛋白灰度和面积之积的比值V-survivin/ V-β-actin为0.63±0.06；细胞凋亡率为（2.6±0.1）%。Genistein作用于肝癌HepG2细胞12 h、24 h、48 h、72 h后IP3分别为（12.0±1.4）pmol/106cells、（7.5±0.8）pmol/106cells、（5.6±0.5）pmol/106cells、（3.3±0.6）pmol/106cells，与对照组(29.2±0.6)pmol/106cells比，P＜0.01。V-survivin/ V-β-actin分别为0.36±0.13、0.33±0.03、0.23±0.04、0.18±0.04，与对照组(0.63±0.06)比，P＜0.01。细胞凋亡率分别为（2.7±0.2）%、（7.4±0.5）%、（20.5±2.0）%、（30.7±1.6）%，与对照组(2.6±0.1)%比，P＜0.01。 结论： Genistein能减少IP3生成，下调survivin基因表达，诱导肝癌细胞凋亡。     

感染性休克大鼠肺组织内TNFα、IL-1β表达及行气破瘀汤的调节作用

目的感染性休克常并发多器官功能障碍综合征(MODS),病死率高,肺脏是此时最易发生损害的靶器官.在此过程中肺泡巨噬细胞(AM)持续、过度激活,导致局部组织细胞和全身性损伤.本实验观察了感染性休克时AM表达细胞因子TNFα、IL-1β的情况及中药"行气破瘀汤”的调节作用,以期进一步揭示AM激活导致肺损伤的机制,并为中西医结合疗法提供理论依据.方法健康Wistar大鼠90只,体重220-260g,雌雄各半,随机分成3组①对照组(n=28)开腹后钝性剥离阑尾周围组织后关闭腹腔.②模型组(n=30)阑尾根部结扎,阑尾尖端穿孔,关闭腹腔,成功制作感染性休克动物模型.③中药治疗组(n=32)造模后给予行气破瘀汤(败酱草、丹皮、桃仁、冬瓜子、大黄、乳香、没药、山甲、皂刺、香白芷、陈皮)4mL灌胃,每日2次.造模后72h无菌条件下用生理盐水灌洗肺脏,收集肺泡巨噬细胞.巨噬细胞收获后调细胞浓度至1×109/L,分别加入24孔板内,置37℃,5%CO2孵箱内培养48h,收集培养上清液,采用MTT法进行细胞因子活性测定.TNF活性以细胞毒效应百分比数(%)表示.IL-1活性以×103U/L表示.取各组动物新鲜肺组织块,OCT包埋,液氮速冻,制作5μm厚冰冻切片,寡核苷酸探针原位杂交检测TNFα和IL-1的mRNA.结果模型组肺泡巨噬细胞分泌IL-1(108120±10510U/L)、TNF(78.06%±4.65%)的水平显著高于假手术对照组(21500±3310U/L)、7.85%±1.25%,P＜0.01)和中药治疗组(58320±4210U/L,43.52%±2.18%,P＜0.01).肺组织内IL-1β、TNFα的mRNA杂交信号主要位于组织内浸润的巨噬细胞内.模型组的表达量和表达细胞数均明显高于对照组和中药治疗组.结论感染性休克时肺泡巨噬细胞处于一种活化状态.这种活化状态,一方面可增强吞噬和杀菌功能,另一方面释放中性粒细胞趋化因子及各种炎症介质,加重局部的炎症反应,导致组织细胞的损害.中药"行气破瘀汤”具有明确的调节作用.