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相似文献
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1.
CD自杀基因联合GM-CSF基因治疗的抗肿瘤作用及免疫机理   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的研究自杀基因与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因联合治疗抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤B16F10细胞3天后,分别在肿瘤局部直接注射表达小鼠GM-CSF的重组腺病毒AdGM-CSF和表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因的腺病毒Ad-CD,然后连续10天腹腔注射5氟胞嘧啶(5FC)(AdCD/5FC/AdGMCSF组)、单用AdCD/5FC组、单用AdGM-CSF组、注射对照病毒AdlacZ/5FC组或PBS组。结果与接受AdCD/5FC、AdGM-CSF、AdlacZ/5FC或PBS治疗的荷瘤小鼠比较,经联合治疗后荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制,荷瘤小鼠的存活期明显延长(P<0.01)。经AdCD/5FC/AdGMCSF联合基因治疗后,肿瘤瘤体内或瘤周有大量树突状细胞、CD8+T细胞浸润,黑色素瘤细胞表达MHC-Ⅰ和B7-1分子明显增加,荷瘤小鼠脾细胞对B16F10黑色素瘤细胞特异性杀伤功能增强。结论联合应用自杀基因和GM-CSF基因转移可以直接杀伤肿瘤细胞,又可提高机体对肿瘤的免疫应答,两者可协同发挥抗肿瘤作用  相似文献   

2.
目的:探讨哮喘豚鼠白介素- 5(IL- 5) 、粒细胞- 巨噬细胞集落刺激因子( GM - CSF) 及CD4 + 和CD8 + T 细胞在哮喘发病中的作用及雷公藤的干预作用。方法:实验分为哮喘组、雷公藤治疗组( 处理组) 和对照组,每组各10 只豚鼠,采用原位杂交方法检测豚鼠外周血淋巴细胞的IL- 5 、GM- CSF m RNA 表达;应用免疫细胞化学方法检测外周血淋巴细胞CD4 + 和CD8 + 的表达。结果:哮喘组外周血淋巴细胞IL- 5 、GM- CSF- m RNA 表达均明显高于处理组和对照组( P< 0-01) ,而处理组和对照组无显著差异。哮喘组外周血淋巴细胞CD4 + 表达明显高于对照组和处理组( P<0-01) ,CD8 + 表达低于对照组和处理组( P< 0-05) 。结论:哮喘豚鼠外周血淋巴细胞IL- 5 、GM - CSF m RNA 表达增高、CD4 + 表达增高,CD8 + 表达降低,而雷公藤甲素可降低外周血淋巴细胞IL- 5 、GM - CSF mRNA 表达,并可提高CD8 + 表达,降低CD4 + 表达。表明雷公藤可能在抗哮喘气道炎症中发挥一定作用  相似文献   

3.
本文采用ELISA方法,研究了重组的人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)对体外培养的正常人外周血单核细胞HLA-DR抗原表达的影响。结果表明GM-CSF能提高单核细胞HLA-DR抗原表达,并且呈剂量依赖关系,最适剂量(500u/ml)时能使DR抗原表达量提高到对照组的2.5倍。GM-CSF对HLA-DR抗原表达的诱导作用并不是通过诱生的IFN-γ的作用而实现的,因为有中和活性的IFN-γ单抗并不能阻断这种效应。GM-CSF能够增强低剂量IFN-γ(5u/ml)对单核细胞HLA-DR抗原的诱导作用,但未观察到对高剂量IFN-γ(100u/ml)的HLA-DR抗原的诱导增强作用。  相似文献   

4.
在hGM-CSF结构与功能研究的基础之上,通过应用PCR介导的缺失与突变和基因重组等技术,构建了表达rhGM-CSF(7~127)的三种原核表达载体pBV220/GM-TGA,pBV220/GM-TAA和pBV220/GM-3′UTR。在三种载体内,hGM-CSF(7~127)cDNA的5′端均缺失6个氨基酸,3′端则分别为天然终止密码TGA,突变终止密码TAA和TGA加3′UTR。SDS-PAGE表明三种载体表达rhGM-CSF(7~127)的水平分别为21%,18.8%和25%。经过用PCgene软件和Zulcer算法分析hGM-CSF(7~127)-3′UTRmRNA的二级结构,表明3′UTR在终止密码TGA附近形成两个茎-环结构,它可能与pBV220/GM-3′UTR载体高表达rhGM-CSF(7~127)有关。表达产物rhGM-CSF(7~127)经弱阴离子DEAE交换层析纯化后,纯度达到92%,比活性为8×107U/mg。  相似文献   

5.
本文采用ELISA方法,研究了重组的人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)对体外培养的正常人外周血单核细胞HLA-DR抗原表达的影响。结果表明GM-CSF能提高单核细胞HLA-DR抗原表达,并且呈剂量依赖关系,最适剂量(500u/ml)时能使DR抗原表达量提高到对照组的2.5倍。GM-CSF对HLA-DR抗原表达的诱导作用并不是通过诱生的IFN-γ的作用而实现的,因为有中和活性的IFN-γ单抗并不能阻断这种效应。GM-CSF能够增强低剂量IFN-γ(5u/ml)对单核细胞HLA-DR抗原的诱导作用,但未观察到对高剂量IFN-γ(100u/ml)的HLA-DR抗原的诱导增强作用。  相似文献   

6.
在hGM-CSF结构与功能研究的基础之上,通过应用PCR介导的缺失与突变和基因重组等技术,构建了rhGM-CSF(7~127)的三种原核表达载体pBV220/GM-TGA,pBV220/GM-TAA和pBV220/GM-3′UTR。在三种载体内,hGM-CSF(7~127)cDNA的5′端块缺失6个氨基酸,3′端则分别为天然终止密码TGA,突变终止密码TAA和TGA加3′UTR。SDS-PAGE表  相似文献   

7.
哮喘豚鼠IL-5、IL-3、GM-CSF mRNA表达及雷公藤内酯醇的影响   总被引:4,自引:1,他引:4  
目的研究IL-5、IL-3、GM-CSF在哮喘发病中的作用及雷公藤的干预。方法将实验豚鼠随机分为:①哮喘组(n=8):用卵蛋白雾化吸入诱导哮喘模型;②处理组(n=8):用雷公藤内酯醇腹腔注射处理哮喘模型;③正常对照组(n=8)。制备IL-5、IL-3和GM-CSFcDNA探针,用斑点印迹杂交法检测以上三组豚鼠支气管肺组织IL-5、IL-3和GM-CSFmRNA的表达。结果哮喘豚鼠支气管肺组织IL-5、IL-3和GM-CSFmRNA表达显著高于对照组(P<0.05~0.001);雷公藤处理组IL-5、IL-3和GM-CSFmRNA表达低于哮喘组(P<0.05~0.001),与对照组无显著差异(P>0.05)。结论哮喘豚鼠肺组织中有明显的IL-5、IL-3和GM-CSFmRNA表达增加。雷公藤内酯醇能抑制体内IL-5、IL-3和GM-CSFmRNA的表达,可能在哮喘抗炎中具有潜在的临床价值。  相似文献   

8.
经RT-PCR克隆小鼠淋巴细胞趋化因子(Lymphotactin,Ltn)的全长编码cDNA,将其置于CMV启动子下游,插入E1区替代的腺病毒载体pAx1cw。Ltn重组腺病毒载体pAx1cw.CImLtn与经EcoT22I酶切的Ad5腺病毒DNA-末端肽复合物共转染293细胞,制备Ltn重组腺病毒,扩增到的病毒滴度为3.6×109pfu/ml。用重组GM-CSF从小鼠骨髓中扩增到的树突状细胞本身并不表达Ltn;体外感染Ltn重组腺病毒后4h即可经RT-PCR检测到Ltn的表达,其24h的细胞培养上清体外对CD4+T细胞和CD8+细胞具有显著的趋化活性,表明所制备的Ltn重组腺病毒能有效介导Ltn在树突状细胞中的表达,为研究Ltn基因修饰的树突状细胞诱导T细胞免疫应答奠定基础。  相似文献   

9.
本实验研究了人重组GM-CSF对U937人单核细胞样细胞系HLA和CD86分子表达的调节作用,将U937细胞在rGM-CSF10μg/L培养1d,HLA-DR分子的表达率为83%,对照组为91%,培养d表达率为51%,对照组为78%,培养5d,表达率为53%,对照组为81%,U937细胞在rGM-CSF10μg/L浓度下培养1d,CD86分子表达率为2%,对照组为1.6%,培养3d,表达率为3.9  相似文献   

10.
目的 报导短程大剂量格拉诺赛(rhG-CSF)动员外周血造血干细胞,进行自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)治疗急性白血病。方法 rhG-CSF,500μg/d皮下注射4天,第5、6天单采外周血单个核细胞(MNC),行CFU-GM培养,CD34^+细胞计数。予MAC方案预处理,回输自体外周血造血干细胞(APBSC)。结果 动员后CFU-GM明显增高,CD34^+细胞增多,骨髓造血功能重建迅速。  相似文献   

11.
用特异性核酸内切酶BamHI剪切质粒pCD/hGM-CSF,制备人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因片段,低融点胶回收后,连接至N2A载体BglⅡ位点,转化大肠杆菌DH5a,经快提质粒进行酶切鉴定和核酸打点杂交筛选出重组质粒N2A/hGM-CSF。利用DEAE-葡聚糖介导该重组质粒转化COS-7细胞,收集48h培养上清液,免疫学和生物学活性检测表明该上清中表达产物具有天然GM-CSF的活性,而用质粒N2A转化COS-7细胞,培养上清中未检测出GM-CSF活性。  相似文献   

12.
目的 观察人GM-CSF(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)对重组痘苗病毒免疫效果的影响。方法 大鼠体内观察。结果 从核酸和蛋白水平均证实重组痘苗病毒RVJSB1175D/GM-CSF可同时表达GM-CSF及HSV-1gD(单纯疱疹病毒gD糖蛋白),但RVJSB1175D/GM-CSF免疫大鼠产生的抗-HSV1gD特异性抗体水平与RVJSB1175D组相比无显著性差异。结论 人GM-CSF在大鼠体内对  相似文献   

13.
用特异性核酸内切酶Bam Hi剪切质粒pCD/hGM-CSF,制备人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因片段,低融点胶回收后,连接至N2A载体Bg1Ⅱ位点,转化大肠杆菌DH5a,经快提质粒进行酶切鉴定和核酸打点杂交筛选出重组质粒N2A/hGM-CSF。利用DEAE-葡聚糖介导该重组质粒转化COS-7细胞,收集48h培养上清液,免疫学和生物学活性检测表明该上清中表达产物具有天然GM-CSF的活性,而用质粒  相似文献   

14.
本文采用细胞ELISA法,研究发现人巨细胞病毒(HCMV)感染对单核细胞HLA-DR的影响。结果表明HCMV感染后1d,单核细胞HLA-DR表达显著增高(P<0.01),以后逐渐降低,d5降至对照水平;IFNγ(500U/ml).TNF(250U/ml)、IL-6(500/ml)、IL-1(500/ml)均能不同程度地刺激单核细胞HLA-DR表达;HCMV感染后,细胞因子刺激HLA-DR表达的水平在感染后d5,较对照组均显著降低(P<0.01);IL-1+IFN-γ及TNF+IFN-γ在刺激单核细胞HLA-DR表达时有协同作用;HCMV感染后,IFN-γ+IL-1及TNF+IFN协同刺激单核细胞HLA-DR表达水平较对照组显著降低(P<0.01)。结果提示:在HCMV感染引起免疫抑制过程中,其引起单核细胞HLA-DR表达降低是一重要机制。  相似文献   

15.
雷公藤对哮喘豚鼠IL-5、GM-CSF基因转录的影响及作用机制   总被引:10,自引:0,他引:10  
探讨雷公藤哮喘IL-5、GM-CSF基因转录的影响及其机制,方法:采用卵蛋白(OA)致敏复制哮喘豚鼠模型,用原位杂交就雷公藤甲素对其肺组织和外周血单个核细胞IL-5、GM-CSFmRNA表达的影响进行检测。并通过凝胶电泳迁移试验(EMSA)检测TP对伴刀豆蛋白或佛波脂(PMA)刺激的人T细胞活化蛋白-1(AP-1)的DNA结合活性的影响。结果:①哮喘豚鼠肺组织和PBMC-IL-5、GM-CSFmR  相似文献   

16.
HCMV感染对单核细胞HLA-DR表达的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
本文采用细胞ELISA法,研究发现人巨细胞病毒(HCMV)感染对单核细胞HLA-DR的影响。结果表明HCMV感染后1d,单核细胞HLA-DR表达显著增高(P<0.01),以后逐渐降低,d5降至对照水平;IFNγ(500U/ml).TNF(250U/ml)、IL-6(500/ml)、IL-1(500/ml)均能不同程度地刺激单核细胞HLA-DR表达;HCMV感染后,细胞因子刺激HLA-DR表达的水平在感染后d5,较对照组均显著降低(P<0.01);IL-1+IFN-γ及TNF+IFN-γ在刺激单核细胞HLA-DR表达时有协同作用;HCMV感染后,IFN-γ+IL-1及TNF+IFN协同刺激单核细胞HLA-DR表达水平较对照组显著降低(P<0.01)。结果提示:在HCMV感染引起免疫抑制过程中,其引起单核细胞HLA-DR表达降低是一重要机制。  相似文献   

17.
目的:本文探索了不同组合的造血生长因子SCF、IL3及IL6对逆转录病毒(RV)介导的LacZ-NeoR双标志基因转染人骨髓造血细胞转染效率、表达水平的影响及其相关机理。方法:采用RV转染人骨髓非粘附造血细胞(NABMC)及经SCF、IL3及IL6不同组合预激48h后的NABMC。经荧光素二-β-D-半乳糖呋喃苷脂(FDG)标记的半乳糖苷酶、G418RCFU-GM及PCR/Sourthern-blot检测NeoR和LacZ基因的表达。结果:早期造血生长因子(HGFs)的预激明显改善了RV介导的LacZ-NeoR基因在人骨髓造血细胞中的转染效率与表达水平,SCF+IL3+IL6>SCF+IL3>IL3+IL6>SCF+IL6。氚标记脱氧胸苷(3H-TdR)自杀及5-溴脱氧尿苷-碘化丙啶(BrdU-PI)双标流式细胞仪(FCM)检测显示,HGFs预激后人骨髓造血细胞及CFU-GM的S期比例显著提高。结论:SCF+IL3+IL6的联合预激可显著改善RV介导的外源基因在人骨髓造血细胞中的转染效率与表达水平,这可能与HGFs预激后明显提高人骨髓造血细胞及CFU-GM的S期比例密切相关  相似文献   

18.
将外源基因直接注入动物体内并获得表达,是近几年发展起来的一种新的基因疗法。该方法操作简便,临床易于接受。天然GM-CSF在体内产生的量极少,本研究将hGM-CSF基因直接注入小鼠体内,以使小鼠体内产生自身所需要的天然hGM-CSF。首先将PCR扩增的hGM-CSFcDNA片段平端插入真核表达质粒pCDS中,构建成重组质粒pCGI;然后采用电击法转染COS-7细胞,ELISA法检测结果显示转染后24,48,71和96小时细胞上清有hGM-CSF的表达分泌。说明重组质粒pCGI能表达分泌hGM-CS…  相似文献   

19.
将小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因经过同源重组得到表达GM-CSF的重组痘苗病毒,用此痘苗病毒转染小鼠黑色素瘤细胞,制备黑色素瘤瘤苗裂解物(GM-CSFVMO),C57BL/6小鼠皮下接种B16-F10细胞3天后在注射部位注射瘤苗裂解物,一周后再注射一次。结果发现GM-CSFVMO能够显著地抑制荷瘤小鼠肿瘤结节的生长并明显延长荷瘤小鼠的存活期。用此瘤苗裂解物免疫小鼠两次,间隔一周,免疫一周后给C57BL/6小鼠皮下接种B16-F10细胞,结果肿瘤结节出现时间明显延长,部分小鼠肿瘤不再生长。经GM-CSFVMO治疗或免疫后小鼠的外周血和脾淋巴细胞对肿瘤细胞杀伤活性明显升高,NK活性变化不明显。本结果提示,诱导机体特异性细胞免疫可能是瘤苗裂解物的抗肿瘤作用机理之一。  相似文献   

20.
哮喘豚鼠IL—5,IL—3,GM—CSF mRNA表达及雷公藤内?…   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的 研究IL-5、IL-3、GM-CSF在哮喘发病中的作用及雷公藤的干预。方法 将实验豚鼠随机分为:①哮喘组(n=8);用卵蛋白雾化吸入诱导哮喘模型;②处理组(n=8):用雷公藤内酯醇腹腔注射处理哮喘模型;③正常对照组(n=8)。制备IL-5、IL-3和GM-CSF cDNA探针,用斑点印迹杂交法检测以上三组豚鼠支气管肺组织IL-5、IL-3和GM-CSF mRNA的表达。结果 哮喘豚鼠支气管肺  相似文献   

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