抗人VEGF受体Ⅱ胞外Ⅲ区单克隆抗体的生物学活性研究

目的研究抗KDR单体Ycom1D3抑制VEGF诱导脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖的体外生物学活性。方法采用FACS鉴定Ycom1D3与抗原结合特异性，采用免疫共沉淀测定Ycom1D3阻断VEGF165刺激KDR酪氨酸激酶受体磷酸化作用，并采用[^3H]-Thymidine掺入法、内皮细胞损伤愈合试验和内皮细胞血管腔形成实验进一步确定Ycom1D3抑制VEGF165诱导内皮细胞增殖的中和活性。结果Ycom1D3不但能与HUVEC结合，而且能阻断由VEGF165刺激HUVEC表面KDR酪氨酸激酶受体磷酸化，进而显著抑制VEGF165诱导HUVEC增殖、迁移及体外三维胶原模型上内皮细胞毛细血管样结构的形成。结论Ycom1D3可以通过封闭KDR而抑制VEGF活性，在肿瘤及其它血管新生疾病治疗中具有潜在应用前景。     

抗人VEGF受体Ⅱ胞外Ⅲ区单克隆抗体的制备

目的 制备人血管内皮细胞生长因子受体Ⅱ(Kinase insert domain tontaining receptor,KDR)胞外Ⅲ区的单克隆抗体(McAb)，探讨其抑制VEGF诱导的体外活性。方法 在大肠杆菌中表达重组KDR胞外Ⅲ区融合蛋白。融合蛋白经抗E—tag柱分离纯化后免疫Balb/c小鼠，采用传统杂交瘤技术制备抗KDR胞外Ⅲ区McAb，采用ELISA和Western免疫印迹鉴定其亚类和抗原结合特异性，并测定单克隆抗体对VEGF165刺激脐静脉内皮细胞株ECV304增殖的中和活性。结果 成功筛选出一株能稳定分泌KDR胞外Ⅲ区单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1D3)，其分泌抗体亚类为IgGl。该McAb可明显阻断VEGF165对脐静脉内皮细胞株ECV304的刺激增生作用。结论 抗人血管内皮细胞生长因子受体KDR胞外Ⅲ区McAb可通过封闭KDR而抑制VEGF活性，McAb 1D3具有潜在治疗肿瘤的活性。     

血管内皮细胞生长因子受体KDR胞外配基结合区单抗对内皮细胞增殖及血管形成的抑制

目的　研制能封闭血管内皮生长因子 (VEGF)受体KDR的单克隆抗体 (McAb) ,探讨其抑制VEGF诱导的体内外活性。方法　以原核表达的KDRⅠ～Ⅳ区融合蛋白免疫BALB/c小鼠 ,用杂交瘤技术制备抗KDRⅠ～Ⅳ的McAb ,并用免疫双扩、ELISA和Western免疫印迹鉴定其亚类和抗原结合特异性 ,用VEGF刺激内皮细胞增殖及鸡胚血管形成实验检测该抗体的中和活性。结果　通过筛选和鉴定获得了 2株KDRⅠ～Ⅳ区McAbs(3G9、1E4) ,其分泌抗体亚类分别为IgG1和IgM。 2株McAb均能明显抑制VEGF诱导的内皮细胞 (EC)增殖 ,经纯化的McAb 3G9能明显抑制经VEGF刺激的鸡胚血管形成。结论　KDRⅠ～Ⅳ区McAb可能通过封闭内源性KDR而抑制VEGF活性 ,McAb 3G9具有潜在治疗肿瘤的应用前景。     

硫修饰脂质体包裹VEGF反义寡核苷酸对肺癌血管生成及转移的抑制作用

目的：探讨硫修饰脂质体包裹的VEGF反义寡核苷酸对肺癌血管生成和转移的抑制作用。方法：将硫修饰脂质体包裹的VEGF反义寡核苷酸（ASODN）、正义寡核苷酸（SODN）、错义寡核苷酸（MODN）加入培养的Lewis肺癌细胞中，采用免疫组织化学方法检测肺癌细胞中VEGF蛋白表达，观察经ODN处理的条件培养基对牛主动脉内皮细胞增殖的影响。另外，复制小鼠Lems肺癌模型40只，随机分为对照组、VEGFASODN组、VEGFSODN组及VEGFMSODN组，每组10只，接种肿瘤细胞24小时内，给予脂质体、VEGFASODN、VEGFSODN、VEGFMSODN皮下注射，每周2次，连续4周。检测皮下肿瘤的变化和肺转移率，并用免疫组织化学方法检测肿瘤组织微血管密度（MVD），超声检测肿瘤组织Ps、砌变化。结果：ASODN能够下调肺癌细胞中VEGF蛋白的表达，经ASODN处理的条件培养基能显著抑制牛主动脉内皮细胞的增殖。ASODN组小鼠肿瘤生长及肺转移受到显著抑制，MVD、PS、RI与其它各组相比有明显差异（P〈0．01）。结论：硫修饰脂质体包裹的VEGF反义寡核苷酸能够显著抑制肺癌血管生成，进而抑制肿瘤生长及转移。     

048 VEGF及其受体基因表达的调控机制

血管内皮细胞生长因子(VEGF)其受体flt-1、flk-1／KDR在血管生成中起重要调控作用，本文对VEGF及其受体基因表达调控机制进行综述。     

VEGF及其受体基因表达的调控机制

血管内皮细胞生长因子（VEGF）其受体flt-1,flk-1/KDR在血管生成中起重要调控作用。本文对VEGF及其受体基因表达调控机制进行综述。     

VEGF及其受体基因表达的调控机制

血管内皮细胞生长因子 (VEGF)其受体flt 1、flk 1/KDR在血管生成中起重要调控作用 ,本文对VEGF及其受体基因表达调控机制进行综述。     

血管内皮生长因子及其受体在肝癌细胞中的表达及意义

目的 探讨人肝癌细胞株血管内皮生长因子（VEGF）及其受体的表达,进一步认识VEGF在肝癌血管形成中的作用机制,方法 以人脐静脉血管内皮细胞系ECV304和小鼠成纤维细胞系L929作为对照,采用免疫组化染色及RT-PCR,检测体外培养的人肝细胞肝癌细胞系SMMC7721、HHCC和HepG2中VEGF及其受体的表达。结果 SMMC7721、HHCC和HepG2细胞均有VEGF的表达。同时VEGF受体1（Flt-1)在SMMC7721细胞中也有表达;而HHCC和HepG2细胞则表达VEGF的受体2（KDR）。结论 在肝癌的血管形成中可能存在VEGF的自分泌机制。     

血管内皮细胞生长因子受体2作为恶性血管源性肿瘤和间皮瘤的标记:262例血管内皮源性及1640例非血管源性肿瘤免疫组化研究

血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)是KDR基因编码的、主要表达于血管内皮细胞的Ⅴ型酪氨酸激酶受体,对VEGF通路信号起反应并调节内皮细胞的迁移和增殖。VEFGR2主要表达于肿瘤新生血管的内皮细胞及血管源性肿瘤,也有大量表达于乳腺癌、结肠癌、非小细胞肺癌及尿路     

血管内皮生长因子的生物学及其在临床的初步应用

血管内皮生长因子(VEGF)是内皮细胞特异性的有丝分裂原。它诱导内皮细胞增殖、促进内皮细胞迁移，并抑制内皮细胞凋亡，在调节血管和淋巴管新生中起重要作用。VEGF也是胚胎发育、软骨内骨形成、女性生殖系统、以及肿瘤和眼球内血管新生所必需的。另外，VEGF也可诱导血小板粘附于血管内皮细胞而出现高凝状态。目前，有许多临床实验正在评价VEGF在血管新生依赖性疾病的促血管新生作用和抗血管新生药物用于治疗的效果。     

THE CONTRAST ANALYSIS BETWEEN BA AND REG IN DIAGNOSIS OF PATIENTS WITH VASCULAR HEADACHE

目的:探讨脑电地形图与脑血流图在血管性头痛患者诊断中的应用价值.方法:脑电地形图与脑血流图被检查并对患者阳性率进行了对比.结果:脑电地形图的阳性率是100%,脑血流图的阳性率是43.1%.两者对比P值<0.05.结论:脑电地形图在血管性头痛的诊断中有重要价值.

Abstract：

Objective:To explore value applied of BA and REG in diagnosis of patients with vascular headache.Method:BA and REG were examened in patients with vascular headache and cornpared in positive rate between BA and REG.Result:The positive rate of REG was 43.1% and BA was 100%(P<0.05).Conclusion:The diagnostic value of BA was important in vascular headache.     

Ryanodine modulation of45Ca efflux and tension in rabbit aortic smooth muscle

The effects of ryanodine on isometric tension development, net cellular Ca content and⁴⁵Ca efflux were measured in the isolated rabbit aorta. Pretreatment of the tissue with 10 M ryanodine for 30 min reduced the norepinephrine (NE)-induced tension of the aortic rings bathed in the absence of extracellular Ca²⁺ in parallel with a reduction in the NE-stimulated⁴⁵Ca efflux. Ryanodine alone caused a delayed moderate increase in⁴⁵Ca efflux, slowly increasing the fractional loss from 0.02/min to 0.03/min, without any increase in tension. The increased⁴⁵Ca efflux was accompanied by a decrease in the net cellular Ca content. When ryanodine and NE were administered in sequence during⁴⁵Ca efflux, we found a quantitative correlation between the ryanodine induced loss of⁴⁵Ca and the inhibition of the NE-induced⁴⁵Ca release. We conclude that the inhibition of the NE-induced contraction by 10 M ryanodine is the result of depletion of Ca from intracellular stores rather than inhibitions of Ca²⁺ release.Abbreviations used Ca total calcium - Ca²⁺ free calcium - NE norepinephrine - SR sarcoplasmic reticulum - PSS physiological salt solution     

DM2肾病患者联检血清APN、血浆VEGF、Hcy及尿Alb的临床意义

目的:探讨2型糖尿病(DM2)及合并肾病患者同型半胱氨酸(Hcy)、脂联素(APN)、血管内皮生长因子(VEGF)及尿Alb的变化关系.方法:设正常对照组、无并发症糖尿病组、合并肾病组三组,比较三组间血清APN、血浆VEGF、Hcy及尿Alb的水平.结果:两组糖尿病患者间空腹血糖水平无显著差异;BUN和Cr在三组间无差...     

急性白血病患者治疗前后血清Hcy、IL-8和VEGF检测的临床应用

目的:探讨了急性白血病患者治疗前后血清Hcy、IL-8和VEGF水平的变化及临床意义.方法:应用放射免疫分析和酶联法分别对33例急性白血病患者进行了治疗前后血清Hcy、IL-8和VEGF检测,并与35例正常健康人作比较.结果:急性白血病患者治疗前血清Hcy、IL-8和VEGF水平均非常显著地高于正常人组(P<0.01)...     

颜色辨识状态下ERP时频特征与认知能力的相关性研究

研究不同程度认知能力人群的事件相关电位(ERP)的特征,从中提取出能有效识别血管性痴呆(VD)的电生理指标.选择正常青年组、VD组以及与VD同一年龄段的正常老年组作为被试人群,采用视觉通道诱发的oddball实验模式,对ERP信号运用平滑伪魏格纳分布(SPWVD)进行时频分析.通过不同被试人群的群延迟(GD)和瞬时频率(IF)的对比发现,大脑额、中央和顶区ERP信号的群延迟可反映3组不同被试之间认知能力的差异,为VD患者的早期诊断识别提供一个新的途径.     

酸环境对过敏性紫癜患儿血清IgA1诱导血管内皮细胞ASIC1a表达的影响及机制

目的初步探讨酸性环境对过敏性紫癜(HSP)患儿血清Ig A1诱导血管内皮细胞酸敏感离子通道1a(ASIC1a)表达的影响及ASIC1a的调控作用。方法体外培养的人皮肤微血管内皮细胞经过处理后,荧光定量PCR检测血管内皮细胞ASIC1a、destrin及α-SM mRNA表达;ELISA测定血管内皮细胞细胞因子;同时采用荧光定量PCR和Western blot检测细胞骨架destrin及α-SM蛋白表达。结果酸化环境中HSP患儿血清Ig A1作用血管内皮细胞后,ASIC1a mRNA表达明显上调(P0.01);细胞因子IL-8、NO和TM分泌明显增加(P0.01);ASICs阻滞剂可以显著降低酸化诱导的细胞因子的分泌(P0.01)。细胞外酸化下,HSP患儿血清Ig A1导致细胞骨架蛋白destrin及α-SM mRNA和蛋白表达明显下调(P0.01);而ASICs阻断剂组destrin及α-SM mRNA和蛋白表达明显上调(P0.01)。结论ASIC1a在HSP患儿血管炎的发生中起着重要作用,阻断细胞外ASIC1a能显著改善HSP患儿血管内皮细胞损伤。     

血管成形术后血管外膜α-SMA、PCNA和OPN表达变化及意义

目的探讨大鼠胸主动脉血管成形术后血管平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)和骨桥蛋白(OPN)表达的变化与血管外膜增殖的关系。方法6周龄健康、清洁纯系雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠32只,体质量为(200±20)g;随机将其分为实验组和对照组,实验组大鼠用6 F人冠状动脉快速交换球囊扩张及剥脱胸腹主动脉内膜,对照组大鼠行胸腹主动脉假手术处理,术后第2周取胸主动脉,进行α-SMA、PCNA及OPN免疫组织化学检查;第6周取胸主动脉做组织形态学检查,并进行对比分析。结果对照组胸主动脉见α-SMA外膜和内膜极少量表达及中膜均匀表达;PCNA外膜和内膜极微量表达及外膜OPN阳性表达。实验组胸主动脉外膜和新生内膜α-SMA、PCNA及OPN阳性表达较对照组明显增强,而中膜α-SMA表达明显减弱。实验组胸主动脉外膜厚度和细胞数量及细胞增殖指数较对照组明显增加(P<0.05)。结论血管成形术后,血管外膜成纤维细胞被激活、增殖,向肌成纤维细胞表型转变,外膜OPN表达增多,外膜增厚,参与血管收缩性重塑。     

子痫前期患者胎盘组织PLGF表达及血清HGF和VEGF测定

目的：探讨子痫前期患者血清肝细胞生长因子（HGF）、胎盘生长因子（PLGF）表达水平和血管内皮生长因子（VEGF）水平的变化及意义。方法：分别采用放射免疫分析、酶联免疫分析和免疫组化法测定32例子痫前期孕妇（子痫前期组）和35名正常孕妇（对照组）血清VEGF、HGF和PLGF表达水平。结果：子痫前期患者无论轻度子痫前期组和重度组血清HGF含量均显著低于对照组（P均〈0.01）;但轻度和重度组之间水平无显著性差异（P〉0.05）。胎盘中PLGF表达水平也显示轻度和重度两组均显著低于对照组（P均〈0.01）;且重度组又显著低于轻度组（P〈0.01）。血清VEGF水平轻度组显著低于对照组（P〈0.05）;重度组水平较对照组降低更为显著（P〈0.01）,且重度组显著低于轻度组（P〈0.01）。相关分析显示,HGF含量与PLGF具有显著相关性（r=0.6012,P〈0.01）;而与VEGF水平则无明显相关性（r=0.3010,P〉0.05）。结论：测定结果证实,患者血清三项标志物均参与了子痫前期的病理进程,其测定对于了解病情和预后评估有帮助。     

可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)在紫癜性肾炎发病中的作用探讨

目的:探讨血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)在过敏性紫癜性肾炎(HSPN)发病中的作用,并观察其与白介素-6(IL-6)、免疫球蛋白E(IgE)在HSPN发病中的关系。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测27例过敏性紫癜、35例紫癜性肾炎患儿(其中急性期16例,恢复期10例)及20例健康对照儿童的血清sVCAM-1、IL-6、IgE水平。结果:①紫癜性肾炎组较单纯过敏性紫癜组、正常对照组血清sVCAM-1均明显升高,且急性期高于恢复期及正常对照组,差异均有显著性意义(P均<0.001),肾炎组、单纯组分别与对照组比较,血清IL-6、IgE水平升高,差异有显著性意义(P<0.01),恢复期较正常对照组血清sVCAM-1、IL-6水平无很大变化,差异无显著性意义(P均>0.05)。②紫癜性肾炎组、单纯过敏性紫癜组sVCAM-1水平随血清IL-6、IgE水平升高而增加(相关系数分别为0.35、0.38,P均<0.01)。结论:sVCAM-1参与了过敏性紫癜、紫癜性肾炎的发病过程,且可反映其病情程度。     

A Panel Set for Epitope Analysis of Myeloperoxidase (MPO)-Specific Antineutrophil Cytoplasmic Antibody MPO-ANCA Using Recombinant Hexamer Histidine-Tagged MPO Deletion Mutants

A major target protein of antineutrophil cytoplasmic antibody with a perinuclear staining pattern (P-ANCA) has been identified as myeloperoxidase (MPO). Recombinant deletion mutants of MPO, eight fragments of the heavy-chain subunit, and two fragments of the light chain subunit were expressed in E. coli using a pQE expression vector. The recombinant hexamer histidine-tagged fragments were partially purified as the denatured proteins on a Ni²⁺-charged nitrirotriacetic acid column. The recombinant fragments were reacted with a rabbit polyclonal antibody to human MPO in Western blotting. In addition, the reactivities of the proteins with MPO-ANCA-positive sera of four patients with renal diseases were examined by Western blotting. The profile of the reactivity showed that different sera recognized different sets of fragments of the heavy chain, whereas no serum reacted with the fragments of the light chain. These results indicate that the sera of patients with MPO-ANCA-positive diseases showed varied reactivities with the different fragments. Furthermore, an ELISA system using a set of the fragments completely purified by Sephacryl S-200HR column chromatography was established. The panel set is useful for subclassification of MPO-ANCA-related diseases.