大鼠脑挫伤后脑组织NF-κB表达与损伤时间的关系

目的 观察大鼠实验性脑挫伤后不同时间内脑组织核转录因子(NF-κB)表达的变化,探讨NF-κB表达与脑损伤经过时间的关系.方法 参照Feeney's法建立大鼠脑挫伤模型,在伤后1 h、4 h、12 h、48 h、72 h、7 d、14 d,运用免疫组化SABC法观察NF-κB表达量的变化.结果 阳性反应细胞集中在挫伤区和脑实质内海马区.NF-κB表达阳性细胞在损伤后1 h出现,4 h～12h即达到高峰,随后阳性反应细胞逐渐减少,7 d仍高于对照组,14 d基本恢复至接近对照组水平,各实验组与对照组比较有统计学意义(P<0.05).结论 NF-κB在脑挫伤后的表达经历了一个先快速增加后又下降到接近正常水平的过程,其表达的时序性变化可望成为法医学脑挫伤的早期鉴定及推断脑损伤时间的指标之一.     

HIF-1α及其抑制剂对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时神经细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α) 及其抑制剂2-甲氧基雌二醇(2ME2)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时神经细胞凋亡的影响.方法 将120只新生7 d龄Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组,n=8)、缺氧缺血模型组(HIBD组,n=56)、2ME2干预组(2ME2组,n=56),后两组采用Rice法建立模型后,根据断头取脑的时间不同又分为3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h和7 d7个亚组.应用HE染色观察脑组织的病理变化,免疫组化技术检测HIF-1α、Bax、Bcl-2的表达,TUNEL法计数脑细胞凋亡.结果 HE染色显示2ME2干预后脑组织的损伤减轻;免疫组化显示:HIF-1α在HIBD组于模型制备后3 h升高,12 h达高峰,之后下降,2ME2组表达趋势和HIBD组相同,表达水平显著下降.与HIBD组比较,2ME2组各时间点的Bcl-2表达显著升高,Bax表达显著降低,TUNEL标记的阳性细胞数明显减少.结论 在新生大鼠缺氧缺血急性期使用2ME2抑制HIF-1α的表达,引起Bax/ Bcl-2表达量比值降低,凋亡细胞数目减少,改善脑损伤.     

促红细胞生成素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织HIF-1α及存活素表达的影响

目的 研究促红细胞生成素(EPO)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及凋亡相关蛋白存活素(Survivin)表达的影响,探讨其抗凋亡的可能机制.方法 将120只7 d Wistar大鼠随机分为3组:假手术组(n=8)、HIBD组(n=56)、rhEPO治疗组(n=56).后两者根据处死时间分为:3 h组,6 h组,12 h组,24 h组,48 h组,3 d组,7 d组,每组8只.采用免疫组化法测定HIF-1α、Survivin的表达,用TUNEL法对细胞凋亡指数(AI)进行检测.结果 HIF-1α的表达在缺氧缺血后3 h即增强,12 h达高峰,后逐渐降低(P＜0.01);Survivin在缺氧缺血后12 h开始增高,7 d明显升高,与假手术组相比,除3 h、6 h组,其余差异有统计学意义(P＜0.01),细胞AI 值在缺氧缺血后6 h增加,7 d明显增高,除3 h组,其余差异有统计学意义(P＜0.01);与HIBD组相比,rhEPO治疗组12 h、24 h、48 h、3 d的HIF-1α表达明显减少(P＜0.05),12 h、24 h、48 h、3 d的Survivin表达明显增高(P＜0.05),细胞AI值24 h、48 h、3 d、7 d明显降低(P＜0.05).结论 EPO可通过降低HIF-1α的表达和提高Survivin的表达,从而减少HIBD后的细胞凋亡,发挥其神经保护作用.     

重组腺病毒介导的缺氧诱导因子-1α对脑缺氧后神经元中缺氧诱导因子-1α的调控

目的探讨重组腺病毒介导的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)转染对缺氧后的大鼠大脑皮层神经元中HIF-1α的调控作用及可能机制。方法 (1)制备大鼠大脑皮层神经元原代培养模型及缺氧模型。重组腺病毒缺氧诱导因子-1α(AdHIF-1α)转染和重组腺病毒空载体(Ad)转染正常及缺氧细胞;将其分为正常对照组(Normal)、缺氧组(Hypoxia)、AdHIF-1α基因转染组、Ad组。(2)荧光显微镜下观察AdHIF-1α/Ad转染情况;采用蛋白印迹(Western blot)法分别在12 h、24 h、48 h及72 h观察各实验组HIF-1α蛋白的表达。结果用Ad/AdHIF-lα转染缺氧的神经元后, 在荧光显微镜下观察转染48 h时荧光表达最明显。Western blot检测经AdHIF-1α基因转染组各时间点HIF-1α的表达明显增加, 12 h有阳性表达, 24 h表达有所增加, 48 h达高峰, 持续到72 h开始下降, 与缺氧组相比差异均有统计学意义(P<0.01, P<0.05), Ad组与缺氧组相比无统计学意义。结论重组腺病毒介导的HIF-1α基因转染能明显提高缺...     

颅脑损伤大鼠脑组织中HIF-1α的表达变化及其意义

目的观察颅脑外伤大鼠脑组织中低氧诱导因子-1α（H1F-1α）的表达变化,探讨其与脑水肿、微血管密度（MVD）的关系。方法将90只大鼠随机分为两组,观察组制作脑外伤动物模型,对照组仅切开头皮和颅骨开窗。采用称重法测定脑组织含水量,免疫组化法检测脑组织中的HIF-1α,用CD34标记血管内皮细胞并计数MVD。结果大鼠脑组织中HIF-1α脑损伤早期表达滞后于脑水肿,后期与脑水肿变化基本一致,均在创伤后3h明显升高,伤后1d达高峰,伤后7d下降,14d恢复正常。MVD在伤后30min即下降,持续至伤后3d开始恢复,14d基本恢复正常。大鼠损伤脑组织中HIF-1α表达与脑组织含水量呈正相关（r=0．922,P〈0．05）,而HIF-α与MVD无关（r=0．004,P〉0．05）。结论HIF-1α在脑外伤后高表达,与脑水肿相关,与MVD无关。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤HIF-1α表达与去铁胺的作用机制

目的 研究缺氧缺血性脑损伤(hypoxia-ischemia brain damage,HIBD)时低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达与去铁胺(deferoxamine,DFO)的作用.方法 将120只7日龄Wistar大鼠随机分为3组.假手术组(n=8)、HIBD组及DFO组,后两组根据处死时间分为3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、3 d、7 d亚组(每组8只).应用免疫组织化学法检测HIF-1α、Caspase-3的表达,应用原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞.结果 HIBD组HIF-1α,3 h轻微增高,12 h达高峰,后逐渐降低,其各时间点表达高于假手术组(P＜0.05);DFO组则6 h达高峰,后逐渐降低,与HIBD组比较各时间点HIF-1α表达均增多(P＜0.05).HIBD组脑组织Caspase-3,3 h开始表达,6 h明显升高,12 h和24 h仍在较高水平,7 d后降低,且各时间点表达高于假手术组(P＜0.05);DFO组各时间点Caspcse-3表达低于HIBD组(P＜0.05).结论 在新生鼠HIBD后,DFO可通过升高HIF-1α的表达而发挥抗凋亡作用,发挥其脑保护作用.     

丹酚酸B调节大鼠脑缺血再灌注损伤后缺氧诱导因子1α表达的时序性特征研究

目的研究局灶性脑缺血再灌注大鼠缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的时序特征及丹酚酸B的调节效应。方法选择雄性Wistar大鼠54只,随机分为假手术组6只,模型组(6、24、48、72 h,每时间点6只),丹酚酸B组(6、24、48、72 h,每时间点6只)。制作大鼠脑中动脉闭塞模型,在不同时间点进行神经行为学评分,Western blot法检测脑组织HIF-1α表达并进行比较。结果与模型组比较,丹酚酸B组大鼠在6、24、48 h评分差值明显升高(P<0.05,P<0.01)。模型组6 h时HIF-1α蛋白表达明显升高,24 h出现降低趋势,48 h开始再次升高,并持续至72h。与模型组比较,丹酚酸B组24 h HIF-1α表达明显降低,72 h HIF-1α表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中HIF-1α蛋白表达具有2个时相、丹酚酸B可明显改善模型大鼠的神经行为缺损症状,具有神经保护作用,其对HIF-1α蛋白表达的调节方式为时序性双向调节,即减低第一时相蛋白表达和增高第二时相蛋白表达。     

大鼠预缺氧模型的制备

目的 制备简单易行的大鼠预缺氧模型,并观察其对脑组织低氧诱导因子-1(HIF-1)α蛋白及mRNA表达的影响.方法 雄性SD大鼠12只,随机分为缺氧组和对照组.缺氧组在固定体积的容器中缓慢输入混合气体,调节氧气和氮气的流入速度,使测氧仪监测到的O2浓度始终保持在12%,然后放入大鼠,每天4 h;对照组大鼠在相同容器中通入空气,每天4 h.7 d后进行免疫组化和RT-PCR测定脑组织HIF-1α蛋白及mRNA表达.结果 缺氧组较对照组脑组织中HIF-1α蛋白和mRNA表达增多(P<0.01).结论 此模型简单易行,达到预缺氧的要求.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤HIF-1α表达与细胞凋亡的关系及干预研究

目的 观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后及2-甲氧基雌二醇(2ME2)干预后对脑组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达趋势的变化与细胞凋亡的关系,探讨2ME2对HIBD的影响及可能的作用.方法 将7 d龄Wistar大鼠120只,随机分为假手术组、HIBD组及2ME2干预组.其中后两组又根据HIBD后处死动物的时间不同随机分为7个亚组.采用免疫组化的方法 对各组新生大鼠脑组织HIF-1α和Caspase-3的表达进行检测及用TUNEL法测定细胞凋亡指数(AI).结果 HIF-1α正常情况下低水平表达,HIBD后12 h达高峰,后逐渐降低;Caspase-3表达于HIBD后6 h明显升高,2 d时达高峰;细胞凋亡指数于HIBD后3 h升高,随着观察时间的推移,逐渐增多.2ME2干预后各时间点HIF-1α和Caspase-3的表达水平及细胞凋亡指数均较HIBD组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HIBD后HIF-1α表达增高,诱导细胞凋亡,促进了HIBD的进展;2ME2干预后,抑制了HIF-1α的表达,从而发挥脑保护作用.     

缺氧对肝癌HepG2细胞内PPARα和HIF-1α表达的影响及机制探讨

目的 观察不同程度缺氧条件下,肝癌HepG2细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达,及反义封闭HIF-1α后对PPARα表达的影响.方法 HepG2细胞分为正常对照组(A组)、缺氧24 h组(B组)、缺氧48 h组(C组)、缺氧72 h组(D组).观察各组的PPARα、HIF-1α蛋白和mRNA表达变化.再设计对照组(E组)、HIF-1α反义寡核苷酸组(F组)、HIF-1α正义寡核苷酸组(G组)、HIF-1α错义寡核苷酸组(H组),观察各组HIF-1α对PPARα的表达影响.结果 正常对照组,PPARα和HIF-1α少量表达.随着缺氧时间延长,PPARα和HIF-1α的表达呈现逐渐升高,在缺氧24 h时,mRNA和蛋白开始增高,48 h增高明显,72 h达高峰.反义封闭HIF-1α后,PPARα表达明显下降.结论 PPARα及HIF-1α的表达随肿瘤细胞缺氧信号的加强而增加,PPARα受HIF-1α的调控.     

2ME2对全脑缺血大鼠HIF-1α的影响

目的探讨2-甲氧基雌二醇（2ME2）对全脑缺血大鼠模型海马缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的影响。方法成年雄性SD大鼠120只．随机分为假手术组、缺血组和2ME2组。后两组又分别分为6h、12h、24h、48h、72h、5d和7d亚组。采用改良的Pulsineli法制作全脑缺血大鼠模型。应用Nissl染色检测大鼠海马神经元数。免疫组化方法检测HIF—1α蛋白表达。结果与缺血组比较．2ME2组海马CA1区神经元计数增加,HIF—1α蛋白表达降低,48h～7d亚组与缺血组相应时间点比较有统计学差异。结论严重全脑缺血损伤急性期应用2ME2可抑制HIF-1α的过度表达．具有神经保护作用。     

大鼠脑缺血及缺氧预处理对HIF-1α表达的影响

目的探讨脑缺血及脑缺氧预处理后HIF-1α表达的变化及其意义。方法建立大鼠局灶性脑缺血及脑缺氧预处理模型。随机分为正常对照组、缺氧预处理组（8%O2、92%N2,3h）、局灶性缺血组、缺氧预处理＋局灶性脑缺血组。其中后两组又根据缺血时间不同分为6h、1、3、7d。应用普通病理、免疫组化和原位杂交技术,观察大鼠脑缺血及缺氧预处理后HIF-1α表达变化。结果脑组织中HIF-1α蛋白及 mRNA表达可见于存活和坏死的神经细胞、血管内皮细胞、胶质细胞。脑缺血缺氧诱导了HIF-1α的表达,以缺血周边区表达最为明显（P〈0.05）。结论缺氧预处理后HIF-1α在周边区表达增强,其表达可见于神经细胞、血管内皮细胞及胶质细胞,提示HIF-1α的激活转录是缺氧预处理的脑保护机制之一。     

不同时间点脑出血大鼠脑组织中缺氧诱导因子1α和线粒体细胞色素C的表达

目的探讨不同时间点脑出血大鼠脑组织中缺氧诱导因子(HIF)-1α和线粒体细胞色素(Cyt)-C的表达。方法 120只健康Wistar老年雄性大鼠随机分为假手术组和脑出血模型组。应用自体血尾状核定位注射方法建立大鼠自体血脑出血模型。均于术后12、24、48、72 h、5和7 d处死。采用酶联免疫法和实时多聚酶链反应(RT-PCR)检测脑组织HIF-1α、Cyt-C蛋白及mRNA水平。结果与假手术组比较,脑出血模型组在不同时间点脑组织中HIF-1α、Cyt-C蛋白和mRNA水平均明显升高(P<0.001),72 h达高峰,随后逐渐下调。脑出血模型组术后12、24、48 h、5、7 d与72 h HIF-1α、Cyt-C的蛋白及mRNA表达有统计学差异(P<0.01),48 h与5 d无统计学差异(P>0.05)。结论脑出血后脑组织中HIF-1α、Cyt-C的蛋白及mRNA水平增高可促进神经细胞凋亡、导致神经功能障碍及加重继发性脑损伤,阻断二者的表达为脑出血的治疗提供新的靶点。     

心肌梗死大鼠心肌组织中AQP1、HIF-1α的表达变化及其与心肌水肿的关系

目的观察大鼠心肌梗死模型中心肌梗死组织中水通道蛋白1(AQP1)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达水平,并探讨其与心肌水肿的相关性。方法将48只SD大鼠随机分为心肌梗死组和假手术组,每组24只。采用结扎左冠状动脉前降支法建立大鼠心肌梗死模型,假手术组仅开胸不结扎。于造模后12、24、48、72 h分批处死大鼠,取左心室心肌组织,采用酶联免疫法检测AQP1、HIF-1α的蛋白表达水平,采用Real-time PCR检测AQP1、HIF-1αmRNA表达,采用干湿重法检测心肌组织含水量。结果心肌梗死组大鼠心肌组织中AQP1、HIF-1αmRNA以及蛋白水平较假手术组明显升高,差异有统计学意义(P均0.05)。心肌梗死组大鼠心肌组织AQP1、HIF-1αmRNA以及蛋白水平在术后72 h内呈时间梯度升高,各时间点差异具有统计学意义(P均0.05)。心肌梗死组大鼠术后12、24、48、72 h心肌组织含水量逐渐升高,与假手术组比较也升高,差异有统计学意义(P均0.05)。心肌梗死大鼠心肌组织中AQP1 mRNA以及蛋白水平与心肌含水量呈正相关(r=0.507,P=0.010;r=0.585,P=0.008),HIF-1αmRNA以及蛋白水平与心肌含水量呈正相关(r=0.408,P=0.025;r=0.486,P=0.017)。结论心肌梗死大鼠心肌组织中AQP1、HIF-1α呈高表达,且与心肌水肿严重程度明显相关。     

昆明山海棠对胶原性关节炎大鼠HIF-1α表达的影响及其作用机制

目的 探讨昆明山海棠(THH)对低氧诱导因子(HIF-1α)在胶原性关节炎(CIA)大鼠模型中表达的影响及其作用机制.方法 建立CIA大鼠模型,然后用THH灌胃给药治疗30 d,观察关节炎指数(AI),30 d后HE染色观察关节的病理改变,RT-PCR以及免疫组化法检测HIF-1α的表达.结果 给药30 d后,THH组HE染色显示滑膜增殖以及炎症反应明显减轻,免疫组化以及PT-PCR显示HIF-1α表达明显降低(P＜0.05).结论 THH对CIA大鼠有显著疗效,其作用机制与调节外周血以及滑膜组织内的HIF-1α的表达有关.     

脑溢安对脑出血大鼠脑内BDNF mRNA表达的影响

目的 观察脑出血模型大鼠脑内脑源性神经营养因子mRNA（BDNF mRNA）的分布以及中药脑溢安对其影响.方法 通过微量注射器向苍白球内注入Ⅶ型胶原酶0.4 U制作脑出血模型,用原位杂交法观察脑出血后2、6、12 h及1、4、7 d共6个时间点BDNF mRNA的表达变化,以阳性细胞计数作为观察指标.结果 正常组、假手术组大鼠脑内皮质、海马、纹状体等处有BDNF mRNA的表达.脑出血后2 h上述部位BDNFmRNA的表达增高,但血肿中心区域未见表达信号,6 h后上述部位表达信号继续增强,1 d后达高峰,4 d后表达开始减弱,7 d后其表达水平继续下降但仍高于正常,14 d后BDNF mRNA阳性细胞数量及表达水平降至基础水平.两者的阳性细胞主要表达于神经元,其中在6 h、1 d、4 d 3个时间点上,两组阳性细胞计数比较有显著性差异（P＜0.01）.结论 脑溢安可促进脑出血后BDNFmRNA的表达.     

缺氧诱导因子α亚型基因在急性心肌梗死大鼠缺血心肌表达的变化

目的 通过观察急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌缺氧诱导因子 (hypoia-inducible factor,HIF) 3个α亚型mRNA表达的动态变化,探讨其在早期缺血心肌中的作用.方法 将大鼠随机分为对照组和AMI组.用HE染色观察心肌形态学变化, RT-PCR检测术后1、2、4、6、12 h缺血心肌HIF 3个α亚型mRNA表达情况.结果 HIF-1α、2α、3α mRNA在正常心肌中均有表达.术后1 h,缺血心肌HIF-1α mRNA表达明显上调(P<0.05),2 h达高峰(P<0.01),4 h开始下降(P＜0.05),6 h降至正常水平,12 h维持在正常水平;HIF-2α、3α mRNA在急性缺血心肌表达无明显变化.结论 早期急性心肌缺血可诱导HIF-1α基因表达改变,与HIF-2α、3α基因表达无关.     

二氯化钴预处理对脑梗死大鼠基质细胞衍生因子1α和趋化因子受体4表达的影响

目的探讨缺氧缺血环境中基质细胞衍生因子(SDF-1α)和趋化因子受体4(CXCR4)生物轴对脑保护作用及二氯化钴预处理的影响。方法选择成年雄性SD大鼠168只,随机分为干预组84只,模型组84只。按缺血后再灌注时间分为再灌注6、24h、3、5、7、14d6个时间点。采用改良Longa方法制备局灶性脑缺血模型,通过免疫组织化学法及Western blot法观察2组大鼠脑组织皮质区脑缺血后再灌注各个时间点SDF-1α及CXCR4表达变化。结果干预组于脑缺血再灌注6h皮质区SDF-1α、CXCR4阳性细胞表达明显增加,7d表达至最高水平,随后表达逐渐减少,14d仍有阳性表达。干预组各时间点皮质区SDF-1α、CXCR4阳性细胞表达明显高于模型组(P0.05)。模型组及干预组大鼠皮质区脑组织6h时SDF-1α、CXCR4蛋白表达即明显增加,7d达高峰,14d仍有阳性表达;干预组各时间点CXCR4蛋白表达明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论二氯化钴可能通过上调SDF-1α、CXCR4表达水平,诱导脑缺氧耐受,促进间充质干细胞向缺血组织迁移,发挥脑保护作用。     

盐酸戊乙奎醚对百草枯中毒大鼠血清TGF-β1、HIF-α1表达的影响

目的探讨盐酸戊乙奎醚对百草枯中毒大鼠血清及肺组织转化生长因子(TGF)-β1、缺氧诱导因子(HIF)-1α表达的影响。方法选择百枯草中毒大鼠80只,随机分成两组各40只。对照组给予生理盐水灌胃干预。观察组:盐酸戊乙奎醚大鼠尾静脉注射。观察不同时点两组大鼠血清及肺组织TGF-β1、HIF-1α的水平与表达情况。结果观察组大鼠血清TGF-β1、HIF-1α含量都低于对照组(P0.01)。实验后7、14 d,观察组大鼠的血清及肺组织TGF-β1、HIF-1α水平都低于对照组(P0.01)。结论盐酸戊乙奎醚通过调节百草枯中毒大鼠血清及肺组织TGF-β1、HIF-1α的表达来减慢肺纤维化的产生、改善大鼠缺氧状况、进一步减轻肺损伤。     

大鼠脑缺血-再灌注损伤后Nogo—A及IGF-1的表达和意义

目的 探讨大鼠脑缺血-再灌注(I-R)损伤后髓鞘相关蛋白(Nogo-A)和胰岛素样生长因子-I (IGF-1)的表达和意义.方法 成年健康雄性Wistar大鼠72只,随机分为Nogo-A组和IGF-1组,每组各36只.应用线栓法制备大鼠大脑中动脉I-R动物模型,免疫组织化学方法检测Nogo-A与IGF-1在神经元凋亡中的表达.结果 假手术组TUNEL凋亡神经细胞较少,脑I-R 2 h海马区、皮质区及纹状体区细胞凋亡逐渐增加,7 d细胞凋亡达高峰,14 d降低.脑I-R 2 h～14 d,Nogo-A表达明显增加,皮质区和纹状体区再灌注12 h和48 h出现两个表达高峰,海马区再灌注24 h出现一个高峰.脑I-R 2 h ～14 d神经细胞IGF-1表达明显增加,24 h达最高峰,14 d仍维持高值水平.结论 Nogo-A与IGF-1参与抑制并促进神经元轴突再生的表达.