改良的考马斯亮兰G—250染色法简便快速测定微量蛋白浓度

应用自制的考马斯亮兰Ｇ－２５０染色蛋白定量试剂进行微量蛋白测定。考马斯亮兰染料能与蛋白质定量结合，通过比色可测得蛋白浓度。蛋白浓度在１００￣１０００ｍｇ／Ｌ范围内。该法的实测值与吸光度间呈良好的线性关系。其敏感性、稳定性、重复性及简便程度均优于经典的双缩脲法、Ｆｏｌｉｎ－酚法蛋白测定法。实验结果显示，改良的考马斯亮兰Ｇ－２５０染色法是一种简便、迅速且可靠的微量蛋白浓度测定法。     

考马斯亮兰G-250法测定胃液蛋白质含量及其临床意义

目的：探讨考马斯亮兰Ｇ２５０法测定胃液蛋白质含量的方法和意义。方法：采用改进的Ｂｒａｄｆｏｒｄ法对２６例正常人、８例胃癌、２４例溃疡及慢性胃炎、４例肠上皮化生以及４例萎缩性胃炎患者胃液进行蛋白质含量测定。结果：Ｇ２５０与胃液蛋白结合后的最大吸收波长为５９５ｎｍ，反应体系中加入２０μｌ１０ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ后明显提高光吸收值（Ｐ＜０．０５），线性范围在０～５００μｇ／ｍｌ间，比文献报道的高，胃液蛋白质与Ｇ２５０结合后３０ｍｉｎ内保持稳定，本法重复性好，回收率达９３．７％。结果还提示：胃癌组的胃液蛋白质含量明显高于正常对照组和其它胃疾病组（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。结论：用Ｇ２５０法测定胃液蛋白质含量是一种可靠、简便、快速、灵敏的方法，结果具有一定的临床意义。     

考马斯亮兰G—250染料测定蛋白质方法的改进

考马斯亮兰G-250(简称G-250)酸性溶液呈红棕色,与蛋白质结合时变为兰色,A_(max)从465nm移至595nm。在一定条件下,蛋白质浓度与A_(595nm)成正比,据此作蛋白质定量。本法有快速、简便、灵敏和抗多种化学试剂干扰等优点,已得到广泛使用。但此法对不同的蛋白质定量有时差异较大,并时有不稳定的染料蛋白复合物沉出,影响测定准确度~4。作行用正交试验法选出了试剂配制的最佳条件,对经典法作了改进。     

一种新的考马斯亮兰R—250固相染料结合法测蛋白质含量的方法

本文介绍了一种用考马斯亮兰Ｒ－２５０固相染料结合法测蛋白质含量的方法。将蛋白样品点在滤纸上，甲醇固定，考马斯亮兰Ｒ－２５０染色，脱色，用洗脱液洗脱下与染料结合的蛋白质，在波长６１０ｎｍ处测其光密度（ｏｐｔｉｃａｌ ｄｅｎｓｉｔｙ．Ｏ．Ｄ）值。方法简便，所用样品少，灵敏度高，检测线性范围在０．１ｇ／Ｌ￣５ｇ／Ｌ之间，重复性较好，批内变异３．５６％￣６．６７％，批间变异１．４８％￣７．０２％。样品稳定     

考马斯亮兰法测定壳聚糖中蛋白的含量

目的:运用考马斯亮兰G250显色剂测定壳聚糖中蛋白含量。方法:蛋白质分子均具有酰胺基团,考马斯亮兰G250染料上的阴离子与蛋白质上的酰胺结合,使溶液变为蓝色,于595nm处测定吸光度可计算出样品中蛋白质的含量。结果:考马斯亮兰G250分光光度法测定壳聚糖样品中蛋白质含量是可行的,相对标准偏差为3.6%～4.9%,回收率为93.2%～108.7%。结论:该法具有简便、快速、灵敏度高、重现性好等特点。     

肝硬化患者尿微量蛋白测定的意义

近年研究认为，检测尿微量蛋白对预测早期肾损害有较大的临床应用价值［１］。本文通过检测硬化失代偿期患者尿β－微球蛋白（β２－ＭＧ）、白蛋白（Ａｌｂ）、免疫球蛋白Ｇ（ＩｇＧ）含量，旨在探讨肝功能受损与尿微量蛋白的关系。１资料与方法１．１病例选择乙型肝炎后肝硬化失代偿期患者８０例，均符合１９９５年第五次全国传染病寄生虫病学术会议制定的诊断标准，其中男６７例，女１３例，年龄２７～６２岁，平均４８．３岁。肝硬化并腹水者３６例，腹水并肝肾综合征２３例，无腹水者２１例。排除肝硬化癌变，感染性炎症患者。对照组２…     

糖尿病患者尿微量蛋白测定的临床价值

糖尿病是常见的代谢性疾病之一 ,糖尿病患者易并发肾损伤 ,高达 40 %的糖尿病患者伴有肾病[1 ] ,由于早期糖尿病肾病经药物治疗存在逆转的希望 ,因此早期发现糖尿病患者肾脏的轻微变化 ,是临床上亟待解决的关键问题。为了探讨糖尿病患者尿中α1 -微球蛋白 (α1 -ＭＧ)、微量白蛋白 (ｍＡｌｂ)、免疫球蛋白Ｇ(ＩｇＧ)及转铁蛋白 (ＴＲＦ)的变化对糖尿病肾病早期诊断的临床价值 ,我们对 3 4例糖尿病患者的尿液进行检测分析。材料与方法1　仪器与试剂　应用美国产ＢｅｃｋｍａｎＡｒｒａｙ3 60特种蛋白分析仪测定尿中微量蛋白 ,所用试剂均由Ｂ…     

慢性肺心病患者尿微量蛋白的测定

目前有关糖尿病、高血压病等疾病的肾脏功能早期损害研究较多 ,而这些疾病引起的肾功能损害往往与肾素 -血管紧张素 -醛固酮系统激活等有关。大量的研究证实心功能不全时肾素 -血管紧张素和交感神经系统的激活是其主要的病理生理改变 ,由此我们推测慢性肺心病患者也可能伴有早期肾损害。为此我们观察了63例慢性肺心病患者尿微量蛋白和肾功能指标的变化 ,旨在探讨慢性肺心病患者肾功能损害情况及可能机制。1对象和方法1.1对象我院2001年10月至2002年4月收治的住院患者 ,根据1997年全国肺心病会议的诊断标准选择慢性肺心病患者63例 ,其中男性4…     

血清铜兰蛋白测定对肝病应用的探讨

血清铜兰蛋白测定对肝病应用的探讨张耀荣，张新暖，石淑娟，李桂英，吴国群附属二院检验科（０５００００）河北医学院基础所微生物研究室关键词血清；铜兰蛋白；测定；临床应用血清铜兰蛋白（ＣＰ），是血液中含有氧化酶活性急性相反应蛋白．具有催化和氧化的能力，在血...     

邻苯三酚红钼络合显色法改良测定微量总蛋白

目的：对手工邻苯三酚红钼络台显色法(PRM)作改良．使其适用于自动分析仪的微量总蛋白测定。方法：改良法改原甘氨酸-盐酸缓冲液为丁二酸-苯甲酸钠缓冲液,并加入l0%甲醇,在贝克曼CX7自动生化分析仪上测定微量蛋白。结果：改良法反应混合物的最佳吸收峰为603nm,邻苯三酚红及钼酸钠的最佳组合为60μmol/L,40μmol/L,批内CV 0．98%、3．15％,批间CV l.05％、3．25%．线性为50～3000mg/L,各种防腐剂基本不干扰测定,试剂稳定,白、球蛋白显色基本一致。结论：改良法与邻苯三酚红钼络台显色法比较．改良法在线性、灵敏度、白、球蛋白显色一致等方面都具优越性,完全适合于在见克曼自动化分析仪及其他自动化分析仪上使用。     

一种快速简便测定奶粉中蛋白质的方法

目的尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法使用三氯乙酸沉淀蛋白质后,运用BCA(二喹啉甲酸)法,在570nm波长处,分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值,基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系,计算出样品中蛋白质的含量。结果待测溶液中蛋白质浓度在0～250μg/ml范围内标准曲线呈线性关系,其回归方程为:Y=301.12X-73.42,相关系数r=0.998,平均回收率为100.2%。结论结合三氯乙酸沉淀的BCA法适用于奶粉中蛋白质的快速检验和掺伪检验。     

肾癌G250抗原蛋白多糖(PG)区蛋白cDNA的克隆和序列测定

目的 克隆肾癌G250抗原蛋白多糖（PG）区cDNA，为制备G250杂交瘤及抗G250的单克隆抗体奠定基础。方法 从肾癌细胞786-0中提取总RNA，以RT-PCR方法扩增出全长360bp的G250抗原PG区cDNA，将其与表达载体pCA13连接，转化大肠杆菌JM109，构建G250抗原PG区cDNA克隆。结果 酶切及序列分析表明，与GenBank报道的G250抗原PG区cDNA序列完全一致。结论 G250抗原PG区cDNA已成功地得到克隆。     

蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用

目的建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法.方法利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A280和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量.结果洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X＝Y/A进行估算,X为待测蛋白含量(mg),Y为洗脱峰面积(mAU×ml),A为1 g/L待测蛋白在层析系统的紫外吸收值(mAU).将其应用于重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3)的纯化,用该方程估算的纯化蛋白含量与用Lowry法测定结果相似.结论该法简便、快速、重复性好,具有一定实用价值.     

一种简单快速分离纯化小型猪胰岛的方法

目的 探索一种简单快速分离纯化小型猪胰岛的方法。 方法 摘取小型猪胰腺,经胰管插管后注入胶原酶V,用自制的半自动消化分离装置消化,胰腺消化物经自制的推进式离心管及单一密度（1.096g/ mL）的ficoll400纯化后行双硫腙（DTZ）染色,倒置显微镜下观察计数胰岛的数量及纯度,胰岛素释放试验检测胰岛细胞的功能。结果 纯化后平均每克小型猪的胰腺可以获得（2 645 ±234）个胰岛细胞当量（IEQ）,平均纯度为（74.2 ±5.1）%。纯化后的胰岛细胞对胰岛素释放刺激反应良好,高糖时的胰岛素释放量为低糖时的3.14倍(P<0.01)。 结论 为小型猪胰岛细胞的研究建立了一种简单快速分离纯化胰岛的方法,纯化后的胰岛细胞功能良好。     

一种改进的简便经济的大鼠胰腺腺泡细胞分离提纯方法

目的:探索一种简单、经济和稳定的胰腺腺泡分离纯化的新方法,并探讨其对细胞功能的影响.方法:16只SD大鼠随机分成改进方法组和内灌注方法组,戊巴比妥腹腔麻醉后,其中8只按改进方法迅速切取并剪碎胰腺组织后置于新鲜配制的细胞分离液中,37℃,CO2孵箱中孵育30 min,过滤获得细胞悬液, Hanks液(不含钙离子)清洗后获得胰腺腺泡细胞,另外8只采用内灌注方法获取胰腺腺泡细胞,然后进行细胞计数、活力测定、纯化鉴定和细胞内钙离子测定.结果:改进方法所获得的胰腺腺泡数量[(5.0±0.7)×106]、纯度[(78±6)%]与内灌注方法所获得的胰腺腺泡数量[(4.7±0.9)×106]、纯度[(79±7)%]比较无统计学意义(P＞0.05),而细胞活力[(93±4)%]显著高于内灌注方法[(84±3)%](P＜0.05),细胞内钙离子浓度(3.62±0.54)显著低于内灌注方法(5.31±0.37)组(P＜0.05).结论:改进方法是一种稳定高效且对细胞活力及功能影响较小的胰腺腺泡细胞分离提纯方法.     

GPCR-G蛋白融合传感器检测GPCR与G蛋白相互作用的灵敏度

目的 以GPR56-G蛋白融合传感器为例,建立一种检测GPCR与G蛋白相互作用的高灵敏方法。方法 将带有NanoLuc荧光素酶(Nluc)的G蛋白α亚基的N端融合到GPCR的C端,构建GPCR和G蛋白α亚基两者的融合蛋白为实验组,受体和G蛋白共表达作为对照组。在受体表达水平相同的条件下,利用生物发光共振能量转移(BRET)方法检测GPR56-Gα₁₂亚基融合蛋白、GPR56和Gα₁₂亚基共表达的组成性活力。利用BRET方法检测GPR56激动剂(P19)对GPR56-Gα₁₂亚基融合蛋白相互作用的影响。结果 BRET比率结果显示,与对照组GPR56和Gα₁₂亚基共表达相比,GPR56-Gα₁₂亚基融合蛋白具有更强的组成性活力(F=424.7,P<0.001);与对照组比较,P19激活实验组的半数有效浓度(EC₅₀)下降,差异有统计学意义(t=13.36,P<0.001),GPR56-Gα₁₂亚基融合蛋白对激动剂(P19)的感...     

肺腺癌及肺鳞癌MRP-mRNA的表达及临床意义

目的：观察３０例肺癌组织及癌旁肺组织ＭＲＰ的表达。方法：ＲＴ－ＰＣＲ方法。结果：４３．３３％的肺癌组织表达ＭＲＰ,且ＭＲＰ的表达与细胞分化程度有关,低分化者ＭＲＰ的表达明显高于中高分化者（Ｐ〈０．０５）。腺癌的表达（６２．５％）高于鳞癌（２１．４３％,Ｐ＝０．０５８）,ＭＲＰ的表达与临床分期无关（Ｐ＝０．５１１）。结论：４３．３３％的肺癌组织表达ＭＲＰ,ＭＲＰ的表达可能与肺癌的耐药有关。     

聚乙二醇化Exendin-4类似物受体亲和力测定方法的建立

基于荧光素酶报告基因法和本实验室前期构建的CHO-GLP-1R-CRE-Luc⁺检测模型细胞株,建立并优化了长效降糖多肽——聚乙二醇化Exendin-4类似物PE与GLP-1受体的亲和力测定方法,并对其进行了方法学验证。结果表明,当药物作用4 h,化学发光底物作用15 min,检测药物在5.7×10^-3~1.5×10³ nmol/L浓度区间内时,该检测方法的专属性和耐用性良好、准确度和精密度较高,符合《生物制品质量控制分析方法验证技术一般原则》的相关要求。本研究为该类GLP-1受体激动剂药物的快速评价与筛选奠定了基础。     

Association of sterol regulatory element binding protein 2 and insulin-like growth factor binding protein 3 genetic polymorphisms with avascular necrosis of the femoral head

Background  Sterol regulatory element binding protein (SREBP)-2 plays a key role in lipid homeostasis by stimulating gene expression of cholesterol biosynthetic pathways. The insulin-like growth factor binding protein (IGFBP) family regulates growth and metabolism, especially bone cell metabolism, and correlates with osteonecrosis. However, association of their gene polymorphisms with risk of avascular necrosis of the femoral head (ANFH) has rarely been reported. We determined whether SREBP-2 and IGFBP-3 gene polymorphisms were associated with increased ANFH risk in the Chinese population.

Methods  Two single nucleotide polymorphisms of SREBP2 gene, rs2267439 and rs2267443, and one of IGFBP-3 gene, rs2453839, were selected and genotyped in 49 ANFH patients and 42 control individuals by direct sequencing assay.

Results  The frequencies of rs2267439 TT and rs2267443 GA of SREBP2 and rs2453839 TT and CT of IGFBP-3 in the ANFH group showed increased and decreased tendencies (against normal control group), respectively. Interaction analysis of genes revealed that the frequency of carrying rs2267439 TT and rs2267443 GA genotypes of SREBF-2 in ANFH patients was significantly higher than in the control group (P <0.05). Association analysis between polymorphisms and clinical phenotype demonstrated that the disease course in ANFH patients with the rs2453839 TT genotype of IGFBP-3 was significantly shorter than that of CT+CC carriers (P <0.01). CT+CC genotype frequency in patients with stage III/IV bilateral hip lesions was significantly higher than in those with stage III/IV unilateral lesions and stage II/III bilateral lesions (P <0.05–0.02).

Conclusions  Our results suggested that interaction of SREBP-2 gene polymorphisms and the relationship between the polymorphisms and clinical phenotype of IGFBP-3 were closely related to increased ANFH risk in the Chinese population. The most significant finding was that the CT+CC genotype carriers of IGFBP-3 rs2453839 were highly associated with the development of ANFH.

     

孕妇血脂多糖结合蛋白水平与胎膜早破的关系

目的:探讨血清脂多糖结合蛋白（LBP）与胎膜早破（PROM）的关系,为早期诊断PROM、亚临床型绒毛膜炎提供新的思路。方法:选取60例PROM患者为研究对象,其中早产PROM（pPROM）组30例,足月PROM（tPROM）组30例;另取同期住院的正常足月妊娠孕妇（正常组）30例作为对照。ELISA法检测3组孕妇分娩前血清LBP水平;分娩后,留取胎膜组织做病理检查。结果:pPROM组、tPROM组和正常组血清LBP水平分别为（125.22±37.51）、（102.87±20.90）、（66.09±31.17）μg/mL,差异有统计学意义（P<0.01）;组间比较发现,pPROM组和tPROM组孕妇血清LBP水平均明显高于正常组（P<0.01）。PROM组孕妇绒毛膜炎程度与血清LBP水平呈正相关关系（P<0.01）;随着破膜时间的越长,血清LBP水平呈增高趋势（P<0.01）。结论:血清LBP水平对PROM的诊断及其是否合并亚临床型绒毛膜羊膜炎有一定的提示价值。