肾移植受者外周血淋巴细胞免疫活化基因的表达及其临床意义

目的 探讨肾移植受者外周血淋巴细胞免疫活化基因的表达特征,及其对排斥反应发生的诊断价值。方法 采用逆转录聚合酶链反应技术,对６１例肾移植受者外周血淋巴细胞ＣＤ２８通路共刺激后的免疫活化基因表达状况进行敢检测,并结合临床资料作了全面分析。     

MLC上清液中细胞因子的检测与肾移植急性排斥反应的研究

目的 探讨混合淋巴细胞培养（MLC）中细胞因子水平与急性排斥反应的关系。方法 随机选取24例接受同种异体肾移植术的患为检测对象。在其接受手术当日，分离其外周血单个核细胞（PBMC）与供单个核细胞进行混合白细胞培养（反应组），同时以单纯自身PBMC进行培养（对照组）。在培养第1、3、5d测MLC上清中IL－2、IL－6和TNF－α水平，并观察其分泌动态变化。结果 发生急性排斥反应的患，在3次时间点上，细胞因子水平均高于肾功能良好组，差异达到显水平。反应组较对照组细胞因子水平有增加，急排的病人增加量高于肾功能良好的受，差异达到显水平。排斥组与肾功能良好组3种细胞因子的分泌规律基本一致，但峰值都增高。结论 检测MLC中细胞因子水平可以作为合理选择供受、预测急性排斥的方法。并启发利用抗细胞因子抗体逆转急性排斥反应。     

肾移植术后急性排斥反应期外周血中miRNA表达

目的:研究肾移植术后急性排斥反应期外周血中miRNAs的表达.方法:选取10个肾移植术后确诊发生急性排斥反应期的病例为观察组,均经肾穿刺病理证实,每个病例在急性排斥反应发生时抽取外周血;同期选取10例肾移植术后恢复良好、病情稳定患者抽取外周血作为对照组;Trizd法分离总RNA,采用miRCU-RYTMArray microarraykit试剂盒进行miRNA芯片杂交,经SAM软件选取差异表达有统计学意义的miRNA.结果:与对照组比较,在急性排斥反应患者外周血检测发现,miRNA芯片检测出4个miRNA(miR142-5p,miR146b-5b,miR155,miR223)表达上调,2个miRNA(miR125b,miR324-3b)表达下调.结论:外周血miRNAs表达水平改变可作为判断急性排斥反应发生的检测指标.     

抗胸腺淋巴细胞球蛋白对尸肾移植排斥反应的预防及治疗作用

排斥反应是导致移植肾丧失功能的主要原因之一。抗胸腺淋巴细胞球蛋白（ＡＴＧ）是一种多克隆抗体制剂,具有明显的抗排斥的作用。本文对我肾移植中心１０９例次应用ＡＴＧ预防及治疗排斥反应的效果、并发症以及长期随访情况,作进一步的总结和分析,以探讨ＡＴＧ在尸肾移植中的预防及治疗的价值与前景。１　材料和方法我院自１９７８年６月至１９９７年１２月共行同种异体肾移植１５００／１５７７例次,其中１０９例次肾移植患者应用德国费森尤斯公司生产的ＡＴＧ。１０９例次患者中,男性８３例次,女性２６例次,年龄２１～６５岁,平均…     

淋巴细胞免疫活化基因表达与移植肾排斥反应的关系

目的：分析肾移植受得外周血淋巴细胞免疫活化基因表达，与移植肾排斥反应之间的相互关系。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，检测６１例肾移植受者外周血淋巴细胞ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＦａｓＬ和颗普酶Ｂ４种免疫活化基因表达状况，并结合临床资料全面分析，结果：发现ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＦａｓＬ和颗粒酶Ｂ的ｍＲＮＡ表达阳性率分别为４１％、５４．１％、６０．７％、６７．２％，以４种基因同时表达诊断标准，诊断敏感性和特异     

肾移植受者外周血T淋巴细胞亚群变化与机体免疫状态之间的关系

目的：对肾移植受者外周血T淋巴亚群的动态监测,以了解其变化与受者免疫状态之间的关系。进一步探讨预测判断与机体变化的关系。方法：测定采用鼠抗人T淋巴细胞亚群单克隆抗体OKT系列,用EPICS-C型流式细胞仪测定。结果：在临床诊断排斥反应前后,CD4/CD8的比值均明显升高,随着排斥的逆转CD4/CD8的比值逐极易发生感染。结论：动态监测受者T淋巴细胞亚群变化。有助于对受者急性排斥反应的发现,对免疫抑制药物治疗的效果及机体感染可能性作出判断。     

miR-663在肾移植急性排斥反应中的调控作用

目的比较肾移植急性排斥（acute rejection, AR）病人及非AR病人血清miR-663表达水平,在细胞水平上探讨miR-663参与肾移植AR的调控作用,为临床早期诊治AR提供新思路。方法Real time PCR 检测肾移植AR病人及非AR病人血清miR-663表达水平。设置miR-663 mimic组、miR-663 inhibitor组、阴性对照组及空白对照组;MTT及Annexin V-FITC分别检测过表达miR-663和抑制miR-663表达对人肾小球内皮细胞（HRGEC）生存率和凋亡率的影响;ELISA检测过表达miR-663和抑制miR-663表达对IL-6、IFN-γ、CCL-2及TNF-α表达水平的影响;Transwell 实验检测过表达miR-663和抑制miR-663表达对巨噬细胞趋化性的影响。结果AR组患者血清miR-663表达水平明显较非AR组的肾移植患者升高（4.73±0.28 vs 1.06±0.04;P<0.01）。MTT显示过表达miR-663可以降低HRGEC的生存率并且明显增加其凋亡率,而抑制miR-663则可以降低HRGEC凋亡。过表达miR-663可以明显提高相关炎症因子的表达,同时明显增加巨噬细胞的趋化性。结论miR-663在肾移植AR过程中发挥着重要作用,可做为早期诊断AR的外周血标志物,并有望成为治疗肾移植AR的一个潜在分子靶点。     

CTLA-4单核苷酸多态性对肾移植受者近期急性排斥反应发生的影响

目的了解和评价细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte associated antigen -4, CTLA-4)蛋白的基因多态性位点-1722T/C、-1661A/G、-318C/T、+49A/G、+6230G/A对肾移植近期急性排斥反应的影响.方法采用测序法对上海市器官移植中心167例首次尸体肾移植受者进行CTLA-4-1722T/C、-1661A/G、-318C/T、+49A/G、+6230G/A位点检测.结果①肾移植术后6个月内,167例肾移植受者45例发生急性排斥反应,发生率为26.9%,第1次排斥反应发生时间为术后5~140天,所有急性排斥反应经过抗排斥治疗均能逆转.②排斥组和非排斥组比较CTLA-4各个位点分布不同,有统计学意义的基因型为-1722TT.③各个位点的等位基因检测中,有统计学意义的等位基因为-1722T.结论 CTLA-4中基因型-1722TT等位基因-1722T与肾移植受者近期急性排斥反应有关,可能为急性排斥反应的危险因素.     

外周血CTL活化基因在大鼠肾移植急性排斥的表达及意义

目的：探讨大鼠同种异体肾移植外周血淋巴细胞（peripheral blood lymphocyte，PBL）穿孔素、颗粒酶B和FasL mRNA表达与急性排斥反应（acute reiection，AR）的关系。方法：采用TdT介导的脱氧核苷酸原位末端标记法（TUNEL）检测移植肾脏中的凋亡细胞。另外同时检测血清肌酐水平。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测移植肾和PBL中穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA表达。并以同基因肾移植为对照。结果：病理学检查结果显示实验组大鼠在术后第5、7、9～11天分别发生轻、中、重度排斥。对照组无明显排斥现象。实验组于手术后第5、7、9～11天细胞凋亡数明显高于对照组（P〈0．01）：肾小管上皮细胞凋亡程度与血清肌酐水平、病理学检查结果一致。RT-PCR结果显示实验组于术后3～5天起，肾组织和PBL中穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA表达水平即显著升高，于术后7-9天达到高峰。与对照组相比差异有显著性（P〈0．01）。外周血和肾组织中FasL、穿孔素和颗粒酶BmRNA的表达水平平均在急性排斥反应发生前3～5天开始明显上升，其变化趋势早于血清肌酐。结论：定量RT-PCR测定外周血淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA表达可以较敏感预测肾移植急性排斥反应的发生，具有临床诊断参考价值。     

肾移植患者外周血淋巴细胞穿孔素的表达

目的：探讨外周血淋巴细胞(PBL)免疫标记物穿孔素在移植肾急性排斥反应(AR)诊断方面的价值。方法：选肾移植手术后近期稳定患者30例,AR18例,肾移植手术后长期稳定患者10例和健康对照组20例,应用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离PBL,免疫细胞化学ABC法检测PBL中穿孔素表达。结果：AR患者PBL穿孔素表达阳性率明显高于肾功能近期与长期稳定组(60．95％ vs 16．66％)．并且穿孔素表达出现的时间可比AR的临床表现出现早2—3d,AR时应用甲基强的松龙冲击治疗可显著降低PBL穿孔素阳性细胞数。结论：穿孔素是一种有价值的AR标志物,对PBL中穿孔素表达的动态检查有助于早期诊断肾移植术后可能发生的AR。     

外周血淋巴细胞穿孔素、颗粒酶B在大鼠肾移植急性排斥的表达及意义

目的:探讨大鼠同种异体肾移植外周血淋巴细胞(peripheralbloodlymphocyte,PBL)穿孔素、颗粒酶B的表达与急性排斥反应(acuterejection,AR)的关系。方法:实验组:异基因移植组(SD→Wister),对照组:同基因移植组(Wister→Wister)。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植肾和PBL穿孔素、颗粒酶B的表达,并以同基因肾移植为对照。结果:病理学检查结果显示实验组大鼠在术后第5、7、9、11天分别发生轻、中、重度排斥,对照组无明显排斥现象。RT-PCR结果显示急性排斥反应发生在肾移植术后3天,即急性排斥早期均表达穿孔素、颗粒酶B基因mRNA,4天后表达明显增强,并贯穿整个排斥反应全过程,而同基因对照组术后11天内均不表达两基因。外周血和肾组织中穿孔素、颗粒酶BmRNA的表达水平平均在急性排斥反应发生前3￣5天开始明显上升,其变化趋势早于血清肌酐。结论:穿孔素、颗粒酶B是一种有价值的AR标志物。定量RT-PCR测定外周血淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶BmRNA表达可以较敏感预测肾移植急性排斥反应的发生,这一非侵入性检查方法可以为急性排斥反应的监测和诊断提供客观依据。     

致敏受者肾移植急性排斥反应的影响因素

目的 探讨致敏受者肾移植急性排斥反应的影响因素。方法 对102例术前致敏患者临床资料进行回顾性分析,探讨群体反应抗体(PRA)水平、氨基酸残基配型、术后PRA水平升高及细胞因子基因型对急性排斥反应发生率的影响。结果和结论 102例致敏肾移植受者术后随访期间发生急性排斥反应33例次,其中PRA水平、氨基酸残基相配程度、术后PRA水平升高、TNF-α高产量基因型和IL-10高产量基因型对移植肾的急性排斥发生率均有显著性影响。术前综合评估这些因素,有利于制订合理的免疫抑制方案。     

致敏受者细胞因子基因多态性与肾移植急性排斥反应的关系

目的研究致敏受者细胞因子基因多态性与肾移植急性排斥反应的关系。方法应用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)对97例术前群体反应性抗体阳性肾移植受者的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、白介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)的基因型进行测定,并探讨细胞因子基因型对急性排斥反应发生率的影响。结果97例致敏肾移植受者术后3个月内共有23例发生了急性排斥反应,其中TNF-α和IL-10高产量基因型组受者的急性排斥反应发生率分别高达51.9%和55.5%,显著高于相应的低产量基因型受者的12.9%和13.3%(P<0.01)。联合TNF-α和IL-10发现,高TNF-α产量基因型和高、中IL-10基因型受者的急性排斥反应发生率为62.5%,显著高于两者均为低产量基因型者的8.5%(P<0.01)。未发现TGF-β1、IL-6、IFN-γ细胞因子基因多态性与急性排斥反应的关系。结论TNF-α和IL-10基因多态性对致敏受者肾移植术后的急性排斥反应发生率有明显影响,测定TNF-α和IL-10基因型有利于制订合理的免疫抑制方案。     

血清可溶性细胞间粘附分子-1在肾移植术后急性排斥监测中的意义

目的了解血清可溶性细胞间粘附分子１（ｃＩＣＡＭ１）在肾移植术后急性排斥监测中的意义。方法采用双抗体夹心酶联免疫法,观察８７例肾移植及发生２９例急性排斥、８例环孢素（ＣｓＡ）肾中毒患者ｃＩＣＡＭ１的变化。结果移植术后ｃＩＣＡＭ１水平短暂升高后即随移植肾功好转而下降,至术后两周达正常水平。急性排斥时ｃＩＣＡＭ１显著高于移植肾功稳定组及ＣｓＡ肾中毒组（Ｐ＜０．００１）。抗排斥治疗有效后,ｃＩＣＡＭ１又逐渐降至正常水平。结论肾移植术后动态监测ｃＩＣＡＭ１的变化,不仅可早期诊断急性排斥并观察其治疗效果,而且有助于急性排斥与ＣｓＡ肾中毒的鉴别。     

Use of PCR and PCR-SSP for detection of urinary donor-origin DNA in renal transplant recipients with acute rejection

Objective To analyze the urine of renal recipients for the pressence of donor DNA in an attempt to establish an alternative diagnostic means of acute rejection.Methods Sixty-four renal transplant recipients were examined.Thirty-seven were normal after transplantation,while 22 others developed acute rejection,based on serum creatinine levels and/or needle biopsy findings of the graft.Five developed drug-induced renal dysfunction.In female recipients with a male graft,we examined urine for the presence of Ychromosome(SRY and DYZ-1) and in recipients receiving and HLA mismatched graft,we looked for HLA-DR gene(DRB1)using PCR.Results Among the 14 female recipients with male grafte demonstrating stable renal function,only one was positive for SRY and DYZ-1 on the Y chromosome.However,sry AND DYZ-1 were found in the urine of four female patients with acute rejection,but these DNA fragments were not detected in 3 of the 4 after anti-rejection therapy.The last patient was referred to hemodialysis.Of 23 recipients of a graft from HLA mismatch donors with stable renal function,DRB1 was negative in 21(91%).Of 18 patients with acute rejection,DRB1 was positive in 16(89%)and negative in 2.these ENA fragments were no longer found in 13 patients after anti-rejection therapy.In all patients with drug induced renal dysfunction,donor-derived DNA was negative.Conclusions Presence of door specific DNA in the urine of the recipient is strongly associated with acute rejection.Analysis of dna DNA derived from donor cells in urine was an effective and accurate method for the diagnosis of acute rejection of a renal transplant.     

巴曲酶对急性缺血性脑卒中患者外周血中黏附分子表达的影响

目的：观察巴曲酶对急性缺血性脑卒中患者外周血白细胞黏附分子和血清中可溶性黏附分子表达水平的影响。方法：治疗组18例，予巴曲酶3d（20BU）并予其他常规治疗；对照组18例，除未予巴曲酶外，余用药同巴曲酶治疗组。采用流式细胞术和酶联免疫吸附法测定患者卒中后不同时间外周血中性粒细胞和单核细胞CD11b、CD18、CD62L、CD54的表达以及血清中可溶性ICAM－1、VCAM－1的水平。结果：与对照组比，巴曲酶治疗组卒中患者在发病24h后中性粒细胞CD11b的表达下降（P＜0.05），单核细胞CD11b、中性粒细胞和单核细胞CD18、CD62L、CD54的表达及血清中可溶性ICAM－1、VCAM－1的水平均无显著性变化。结论：巴曲酶对急性缺血性脑卒中患者外周血黏附分子的表达的影响有限，提示降低外周血黏附分子的表达可是巴曲酶治疗缺血性脑卒中的主要作用机制。