检测胃癌患者腹腔冲洗液中癌胚抗原mRNA和细胞角蛋白20 mRNA的临床意义

目的探讨采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌患者腹腔冲洗液中癌胚抗原(CEA)mRNA和细胞角蛋白20(CK-20)mRNA的临床价值。方法收集80例胃癌患者和10例胃良性病变患者的腹腔冲洗液或腹水,常规行HE染色细胞学检查,采用巢式RT-PCR方法检测腹腔冲洗液中CEA mRNA和CK-20 mRNA的表达,并以人胃癌细胞株SGC-7901作为阳性对照。结果80例胃癌患者腹腔冲洗液中CEA mRNA的阳性表达率为52.5%(42/80),CK-20 mRNA的阳性表达率为57.5%(46/80),CEA mRNA和CK-20 mRNA的联合检测阳性率为70.0%(56/80),皆高于腹腔冲洗液细胞学(PLC)检查的27.5%(22/80,P<0.05),且22例PLC检查阳性患者的CEA mRNA和CK-20 mRNA检测结果均为阳性。CEA mRNA和CK-20 mRNA的阳性率与淋巴结转移和TNM分期明显相关(P<0.05)。结论巢式RT-PCR检测胃癌患者腹腔冲洗液中CEA和CK-20基因,可以提高腹腔内游离癌细胞(IFCCs)的检测灵敏度和特异度,对于早期诊断胃癌腹膜微转移有一定的临床价值,可为手术方式选择及术中、术后化疗提供依据。     

外周血癌胚抗原mRNA在大肠癌组织中的表达及其临床意义

目的:应用RTPCR技术检测大肠癌患者外周血CEAmRNA,探讨与不同临床病理指标之间的关系,评估复发转移的早期预测意义。方法:应用RTPCR技术,选择特异性CEAmRNA引物,检测29例大肠癌患者外周血CEAmRNA,同期定量检测外周血CEA和CA199糖蛋白。另抽取12例健康志愿者外周血标本作为对照。结果:29例大肠癌患者外周血中CEAmRNA、CEA、CA199阳性率分别为24.14%(7/29)、17.24%(5/29)、13.79%(4/29)。12例对照组外周血中CEAmRNA、CEA、CA199均阴性。有淋巴结转移者外周血CEAmRNA阳性率(35.29%,6/17)高于无淋巴结转移者(8.33%,1/12),但χ2=2.79,P=0.095。TNM分期Ⅳ期中外周血CEAmRNA阳性率66.67%(4/6),Ⅲ期16.67%(2/12),Ⅰ、Ⅱ期9.09%(1/11),差异有统计学意义,χ2=7.65,P=0.022。外周血CEAmRNA表达在患者的年龄、性别、病理类型等差异无统计学意义,P>0.05。结论:CEAmRNA、CEA和CA199在大肠癌患者中的阳性率,以CEAmRNA阳性率最高,随TNM分期进展,阳性率更高,提示预后不良,应加强治疗。     

结直肠癌患者外周血循环中MAGE-A3、MAGE-A6和MAGE-A10基因表达及其临床意义

目的:检测结直肠癌患者外周血循环中黑素瘤抗原编码基因(melanoma antigen encoding gene,MAGE)-A3、MAGE-A6和MAGE-A10的表达情况,并分析其临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RFQ-PCR)检测35例结直肠癌患者和15例正常对照者外周血中MAGE-A3、MAGE-A6和MAGE-A10mRNA的表达水平,并分析其与结直肠癌患者临床病理特征(性别、年龄、肿瘤部位、组织学分级、肿瘤浸润深度、淋巴结转移和Dukes分期)之间的关系。结果:所有外周血样本中均未检测出MAGE-A3mRNA的表达。结直肠癌组MAGE-A6mRNA表达阳性率显著高于正常对照组(P=0.0000),男性患者的表达水平高于女性患者(P=0.0459),淋巴结转移患者的表达水平也高于无转移患者(P=0.0000);结直肠癌组MAGE-A10mRNA表达阳性率也显著高于正常对照组(P=0.0224);淋巴结转移患者的表达水平也高于无转移患者(P=0.0000)。结论:结直肠癌患者外周血循环中MAGE-A6和MAGE-A10mRNA的表达在结直肠癌转移检测中具有重要意义,可能成为结直肠癌微转移诊断、治疗选择和预后判断中的重要临床靶标。     

结直肠癌组织NF-κB和MMP-9表达与腹腔微转移关系的初步探讨

目的:探讨结肠及腹膜返折以上直肠癌组织核转录因子(NF-kB)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达与腹腔微转移的关系.方法:收集结肠癌和腹膜返折以上的直肠癌患者80例腹腔冲洗液,进行CEA、CK20免疫细胞化学染色确定腹腔微转移;采用免疫组织化学法检测原发肿瘤NF-kB、MMP-9蛋白表达情况;以透射电镜观察癌细胞之间的连接特点.结果:1)CEA、CK20联合检测的腹腔微转移率为35.0%(28/80).2)结直肠癌组织中NF-kB、MMP-9表达阳性率均明显高于正常黏膜,P<0.05;NF-kB阳性组和阴性表达组中腹腔微转移的检出率分别为40.7%(24/59)和19.0%(4/21),P<0.05.MMP-9阳性表达和阴性表达组腹腔微转移的检出率分别为39.4%(26/66)和14.3%(2/14),P<0.05;NF-kB与MMP-9之间不仅存在相关关系且为线性关系.3)腹腔微转移阳性患者的肿瘤细胞之间的连接以简单连接和接触连接为主,而阴性组细胞间存在较多的桥粒连接.结论:NF-kB、MMP-9可能参与了结直肠癌腹腔微转移.NF-kB可能通过上调MMP-9表达,而促进癌细胞脱落至腹腔形成微转移.     

结直肠癌患者外周血CK19 mRNA检测的意义

目的:检测结直肠癌患者外周血中上皮性骨架蛋白CK19 mRNA,分析比较其与不同临床病理指标之间的关系,探讨其对临床术后治疗的指导意义。方法:应用RT-PCR方法,选择特异性CK19 mRNA引物,避开假基因CK19b的干扰,检测39例结直肠癌患者外周血中上皮性骨架蛋白CK19 mRNA。用DNA直接测序法排除假基因CK19a的可能。结果:39例外周血CK19 mRNA总检出率为79.5％(31/39),Dukes C、D期(16/16,100.0％)高于Dukes A、B期(15/23,65.2％)(P<0.05)。有淋巴结转移者外周血CK19 mRNA均阳性(16/16),明显高于无淋巴结转移者(65.2％,P<0.05)。而外周血CK19 mRNA的表达与其他临床病理指标无相关性。结论:各期结直肠癌患者外周血均有较高CK19 mRNA表达,随病期进展,阳性率更高。     

检测CK19 mRNA、CEA mRNA诊断非小细胞肺癌外周血微转移

目的 探讨检测细胞角蛋白(cytokeratin 19，CK19)mRNA、癌胚抗原(cancer embryonic antigen，CEA)mRNA诊断非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者外周血微转移的临床意义。方法 应用RT-PCR法检测35例NSCLC患者外周血中的CK19mRNA、CEAmRNA，并以20例良性病变、20例健康人作对照。结果 35例NSCLC患者外周血CK19mRNA、CEAmRNA阳性表达率分别为40％和57％，两者均阳性者40％，两者均阴性者43％；肺良性疾病患者20例，CK19mRNA阳性2例(10％)，无CEAmRNA阳性者；20例健康对照2个指标检测结果均为阴性。随访发现CK-19mRNA阳性、CEAmRNA阳性和二者均阴性患者的远处转移率分别为50％、56％和27％。结论CEAmRNA和CK19mRNA是检测肺癌患者外周血微转移的良好标志物，检测外周血微转移有助于预测肺癌患者预后。     

结直肠癌患者外周血人类端粒酶反转录酶及基质金属蛋白酶-7 mRNA的表达及其相关性研究

 目的　应用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测结直肠癌患者外周血中人类端粒酶反转录酶（hTERT）及基质金属蛋白酶-7（MMP-7）mRNA 的表达情况,探讨其对监测结直肠癌血液微转移的临床意义及二者的相关性。方法　采用TRIzol法提取血液标本中的总RNA,将其反转录成cDNA,然后用RT-PCR技术检测血液标本中MMP-7 mRNA和hTERT mRNA表达,计算样本的△Ct值。结果　在181例结直肠癌患者中,hTERT mRNA表达阳性63例,阴性118例。MMP-7 mRNA 表达阳性61例,阴性120例。不同性别、不同年龄的结直肠癌患者外周血hTERT、MMP-7 mRNA表达阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）。低分化腺癌患者MMP-7 mRNA表达阳性率（43.9 %）较中高分化腺癌（27.8 %）增高（χ2＝4.873,P＜0.05）。Ⅲ、Ⅳ期患者外周血hTERT mRNA表达阳性率（42.5 %）较Ⅰ、Ⅱ期患者（24.0 %）增高（χ2＝6.591,P＜0.05）。Ⅲ、Ⅳ期患者外周血MMP-7 mRNA表达阳性率（39.6 %）较Ⅰ、Ⅱ期患者（25.3 %）增高（χ2＝4.014,P＜0.05）。有远处转移的结直肠癌患者外周血hTERT mRNA表达阳性率（53.3 %）较无远处转移的患者（28.7 %）增高（χ2＝9.059,P＜0.05）。有远处转移的结直肠癌患者外周血MMP-7 mRNA表达阳性率（46.7 %）较无远处转移的患者（29.4 %）增高（χ2＝4.506,P＜0.05）。CEA阳性患者外周血hTERT mRNA表达阳性率（52.6 %）较CEA阴性的患者（30.1 %）明显增高（χ2＝6.735,P＜0.05）。CEA阳性患者外周血MMP-7 mRNA表达阳性率（60.5 %）较CEA阴性的患者（26.6 %）明显增高（χ2＝15.490,P＜0.05）。无远处转移的结直肠癌患者中,以hTERT、MMP-7 mRNA一项高于正常值范围为血液微转移表达阳性。检测后6个月微转移表达阳性组肿瘤复发转移率（36.58 %）与阴性组（7.14 %）比较增高（χ2＝13.027,P＜0.05）;检测后12个月微转移表达阳性组肿瘤复发转移率（68.29 %）与阴性组（12.5 %）比较增高（χ2＝31.948,P＜0.01）。至检测12个月后,微转移表达阳性组41例患者中28例出现复发转移,微转移表达阴性组56例患者中7例出现复发转移。联合检测的敏感度80.00 %,特异度79.03 % 。Spearman相关性分析结果表明,hTERT与MMP-7 mRNA呈正相关（r＝0.341,P＝0.000）。结论　联合检测结直肠癌患者外周血hTERT、MMP-7 mRNA的表达,对早期发现血液微转移及预后具有重要意义。     

结直肠癌患者手术前后胸苷酸磷酸化酶(TP)的表达及临床意义

目的:研究结直肠癌组织和血清中胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase TP)表达与病理及生物特性之间的关系。方法:对50例结直肠癌标本、20例正常结直肠黏膜标本及18例结直肠良性病变组织进行免疫组化S-P法检测,测定TP表达情况;ELISA法测定结直肠癌患者术前、术后血清TP水平及20例健康志愿者血清TP水平。结果:结直肠癌组织中胸苷磷酸化酶表达的阳性率显著高于正常结直肠黏膜、结直肠良性病变(P<0.05);有淋巴结转移的结直肠癌组TP表达阳性率高于无淋巴结转移组(P<0.05);结直肠癌组血清TP水平较健康组为高,差别具有统计学意义(P<0.05);DukesA-B期和DukesC-D期患者之间血清TP水平比较差别具有统计学意义(P<0.05)。术前和术后结直肠癌患者血清TP水平差别具有统计学意义(P<0.05)。结论:结直肠癌Dukes分期较晚及有淋巴结转移者,其瘤组织中TP表达的阳性率高;血清胸苷磷酸化酶的水平与患者的肿瘤病理分期有关,分期越晚表达水平越高;胸苷磷酸化酶在组织中的表达与其血清的水平呈正相关性,血清胸苷磷酸化酶的水平可以反应其组织中的表达水平。     

结直肠癌不同病变阶段K-ras基因突变的研究

目的:研究结直肠癌不同病变阶段K-ras基因变化及其对结直肠癌演变的影响.方法:提取20例结直肠癌患者的原发灶、淋巴结转移灶、远处转移灶、结直肠腺瘤和相应正常结直肠组织的DNA各20 份,经PCR扩增,对产物进行基因序列分析.结果: 正常结直肠组织均表达野生型K-ras基因,结直肠腺瘤、原发灶、淋巴结转移灶和远处转移灶的K-ras突变率分别为20.0%(4/20)、30.0%(6/20)、25.0%(5/20)和30.0%(6/20),有3例远处转移灶出现复合突变.在发生K-ras突变的标本中,结直肠腺瘤、淋巴结转移灶、远处转移灶的突变类型与原发灶的一致性分别为0%(0/4)、40.0%(2/5)和50.0%(3/6).结论:结直肠腺瘤、淋巴结转移灶和远处转移灶不宜作为临床检测K-ras突变的常规标本,但在无法获得原发灶标本时,淋巴结转移灶和远处转移灶的检测结果也有一定的参考价值;结直肠癌发生、发展的过程中,K-ras基因可能在多阶段发生多次不同的突变.     

荧光定量聚合酶链反应检测大肠癌患者外周血癌细胞角蛋白20 mRNA

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测大肠癌患者外周血癌细胞角蛋白20 mRNA(CK20 mRNA)的表达水平及临床价值。方法采用FQ-PCR法测定136例结直肠癌及其肝脏转移患者外周血癌细胞CK20 mRNA的表达水平,系统研究了FQ-PCR法测定CK20 mRNA的重复性、定量范围和扩增效率,分析比较其与传统RT-PCR、免疫组化法检测结果的一致性。结果FQ- PCR法测定CK20 mRNA的批内CV为3.6%,批间CV为5.3%,定量范围为10~3～10~8 copies/ml,扩增效率为87.4%。与传统RT-PCR和免疫组化法相比较,Kappa值分别为0.87和0.83。结直肠癌患者外周血癌细胞CK20 mRNA的表达水平为(3.52×10~4±1.47×10~4)copies/ml,表达阳性率为48.5%;75例对照者均无CK20 mRNA表达。Dukes A、B、C、D期大肠癌患者外周血癌细胞CK20 mRNA的阳性率分别为9.5%、25.0%、48.8%和87.5%,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。肝脏转移者CK20 mRNA阳性率为87.5%,显著高于肝脏无转移者(32.3%,P<0.05)。35例结直肠癌患者术后1、3、5周内CK20 mRNA表达水平呈下降趋势,但术后1、3周与术前比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后5周显著低于术前(P<0.05)。结论FQ-PCR是较灵敏的快速定量检测CK20 mRNA的方法。大肠癌患者外周血癌细胞CK20 mRNA的表达与肿瘤的复发和转移有关,CK20 mRNA检测将有助于大肠癌血源性播散的监测。     

应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CEA mRNA和CK-19 mRNA的研究及意义

目的：检测乳腺癌患者外周血中CEA mRNA和CK-19 mRNA的表达，建立取材于外周血早期诊断乳腺癌微转移的方法。方法：65例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血，分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提，运用果式RT-PCR技术进行CEA mRNA和CK-19 mRNA的检测。结果：以     

实时荧光定量PCR检测大肠癌腹腔微转移及其临床意义

[目的]应用实时荧光定量PCR技术检测大肠癌腹腔内游离癌细胞并探讨其临床意义。[方法]2003年5月至2004年1月，收集在日本爱知癌症中心手术81例大肠癌病例的腹腔冲洗液．每个样本的cDNA均应用两种引物合成（随机引物和寡核苷酸引物），并在罗氏实时荧光定量PCR（LightCyckr）上进行定量分析。每个样本同时进行常规细胞学检查。所有病例术后经过平均为1年的随访。[结果]CEA mRNA和CK-20 mRNA的阳性率和阳性值均与肿瘤的浸润深度（T）、分期以及淋巴结转移相关。在一个合理界定值上，CEA和CK-20检测的敏感度与特异度均为100％，而常规的细胞学检查则为33％和100％。[结论]CEA和CK-20 mRNA定量分析是检测大肠癌腹腔微转移的敏感和特异的方法，CEA和CK-20 mRNA水平的异常与术后的无瘤生存率显著相关。     

大肠癌患者外周血CEAmRNA和CK20mRNA的联合检测及临床意义

目的：探讨大肠癌患者外周血CEAmRNA和CK20mRNA表达情况及临床意义。方法：应用RT—PCR方法检测46例大肠癌患者、22例大肠良性肿瘤患者及30例正常人外周血CEAmRNA和CK20mRNA。结果：在良性肿瘤组及正常人组中，CEAmRNA及CK20mRNA均无表达，而在大肠癌患者中的阳性率分别是54％和61％，二者联合检测阳性（至少一项阳性）率为72％，较单项阳性率高（P〉0．05）。二者表达与患者性别、年龄及肿瘤分化程度无明显相关，而与临床分期及淋巴结转移明显相关。结论：联合检测有助于提高肿瘤微转移检出率，其表达与临床分期及淋巴结转移明显相关，可作预后参考指标。     

大肠癌外周血CEAmRNA的表达及临床意义

目的 :探讨大肠癌外周血中CEAmRNA的表达及临床意义。方法 :以CEAmRNA为靶基因 ,运用逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 4 2例大肠癌术前、术后外周血中CEAmRNA的表达。结果 :2 0例正常人外周血中均无CEAmRNA表达。 2 0例大肠癌组织标本均有CEAmRNA表达。术后外周血中CEAmRNA的阳性率与大肠癌的Dukes分期密切相关 ,术后外周血中CEAmRNA呈阳性的大肠癌日后发生肝转移的概率高于CEAmRNA呈阴性的。结论 :大肠癌外周血CEAmRNA的检测可能成为判断大肠癌恶性程度、转移、复发以及疗效监测的重要指标     

应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CK-19mRNA的临床意义

目的:探索取材于乳腺癌患者外周血诊断微转移的方法。方法:66例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血,分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提,运用RT-PCR技术进行CK-19 mRNA的检测。结果:以RT-PCR终产物出现460bp条带定为阳性。66例乳腺癌患者CK-19mRNA有24例表达,总阳性率为36.36％。37例乳腺良性疾病者CK-19mRNA无一例表达。两组有统计学意义(x2=17.54,P<0.001)。结论:RT-PCR检测CK-19 mRNA可以用于临床诊断乳腺癌患者外周血中微转移。     

大肠癌患者外周血中细胞角蛋白19和癌胚抗原的表达及临床意义

目的:应用巢式逆转录聚合酶链反应（nested RT-PCR）技术检测大肠癌患者外周血中CK19 mRNA、CEA mRNA的表达及临床意义,探讨其作为大肠癌微转移检测分子标记物的可能性。方法:应用巢式RT-PCR技术检测20例健康人、20例大肠腺瘤疾病患者和90例大肠癌患者外周血CK19 mRNA和CEA mRNA的表达。结果:大肠癌组CK19 mRNA和CEA mRNA表达的阳性率为58.89%（53/90）和53.33%（48/90）;20例健康人外周血中无CK19 mRNA和CEA mRNA的表达; 20例大肠腺瘤疾病患者有1例CK19 mRNA的表达,阳性率为5.00%（1/20）,无CEA mRNA的表达。大肠癌患者中CK19 mRNA、CEA mRNA的阳性率与肿瘤分期及肿瘤转移有显著相关性（P＜0.05)。结论:CK19 mRNA和CEA mRNA作为检测大肠癌患者外周血微转移的分子标记物具有良好的敏感度和特异性,同时可作为判断大肠癌患者的预后指标。     

胃癌腹腔微转移的检测及其预后意义

目的　评估用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR )方法检测胃癌腹腔微转移的临床病理意义。方法　采用RT PCR方法检测 5 0例胃癌腹腔冲洗液中角蛋白CK 2 0mRNA的表达情况 ,同时作涂片细胞学检查。结果　RT PCR方法检测腹腔冲洗液中CK 2 0mRNA阳性率 ( 5 4.0 % ,2 7/5 0 )明显高于涂片细胞学检查的阳性率 ( 3 2 .0 % ,16/5 0 )。CK 2 0mRNA阳性率与胃癌浸润深度及组织学类型有关 (P <0 .0 5 )。CK 2 0mRNA阳性、阴性胃癌患者 3年生存率分别是 2 5 .9%和 65 .2 % (P <0 .0 1)。结论　RT PCR方法是检测胃癌腹腔微转移灶的敏感方法 ,有助于指导术后治疗及预后判断     

大肠癌患者外周血CK19和MUC-1 mRNA水平及其临床意义

目的 探讨大肠癌（CRC）患者外周血中角蛋白（CK）19、黏蛋白（MUC）-1 mRNA水平并分析两者与临床病理特征的关系。方法 采用巢式逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测20例健康体检者（健康组）、20例大肠良性腺瘤患者（良性疾病组）及90例CRC患者（CRC组）的外周血CK19和MUC-1 mRNA水平,并分析两者与CRC临床病理参数（Dukes分期、分化程度、远处转移及组织学类型）的关系。结果CRC组CK19 mRNA阳性率为58.9％（53／90）,均高于健康组的0和良性疾病组的5.0％（1／20）,差异有统计学意义（P＜0.05）;CRC组MUC-1 mRNA阳性率为52.2％（47／90）,与健康组的60.0％（12／20）和良性疾病组的50.0％（10／20）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;健康组和良性疾病组CK19 mRNA、MUC-1 mRNA阳性率的差异无统计学意义（P＞0.05）。CRC中CK19 mRNA和MUC-1 mRNA阳性率均与Dukes分期、分化程度及远处转移有关（P＜0.05）,但与组织学类型无关（P＞0.05）。 结论 CRC患者外周血中CK19 mRNA阳性率明显升高,且外周血中CK19mRNA、MUC-1 mRNA与Dukes分期、分化程度及远处转移有关,提示两者可能在CRC发生发展中均有重要意义。