布鲁菌干扰MΦ泛素依赖型自噬通路的研究

目的 探讨布鲁菌减毒株S1330对于小鼠巨噬细胞(MΦ)泛素依赖型自噬通路的影响.方法 应用布鲁菌S1330株作用于小鼠MΦ构建体外感染模型.观察MΦ内的吞噬过程、泛素化水平及自噬水平.实验设立巨噬细胞正常组、感染组、自噬诱导对照组、自噬诱导感染组,应用吉姆萨染色法、免疫荧光法、Western blot法分别观察不同时间点、不同组MΦ内泛素化蛋白含量及自噬水平变化.结果 布鲁菌感染MΦ0.5 h胞内出现泛素化菌体蛋白,随着感染时间的延长,胞内泛素化蛋白聚集持续增多,12 h MΦ死亡;与之相对应的自噬体标记物LC3B蛋白表达严重不足,而自噬诱导的感染组MΦ内泛素化的菌体蛋白比例减少.结论 布鲁菌S1330株感染MΦ启动胞内泛素化机制,却干扰泛素依赖型自噬通路的成熟,使泛素化菌体蛋白大量聚集不能有效清除,最终导致了MΦ功能障碍而死亡.     

应用MTT法检测小鼠腹腔Mφ的激活效应

<正>我室将MTT法用于检测短小棒状扦菌(CP)对小鼠腹腔Mφ的激活效应,获得较满意结果.1 材料和方法1.1 材料 短小棒状杆菌(CorynebacteriumParvum,CP,H-84),.河南医科大学微生物学教研室惠赠,每毫昇含福尔马林灭活菌苗2mg.1.2 CP使用方法 选NIH小鼠,雌性,体重20g±2g.腹腔注射CP50mg/kg体重(约0.5ml/只),对照组注射等体积生理盐水.注射后不同时间分别杀鼠,常规制备腹腔Mφ.1.3 腹腔Mφ功能测定参照文献[1～4] 采用MTT法,测定A值,检测波长570nm,参考波长630nm.     

链球菌组蛋白样蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1的影响

目的　研究链球菌HlpA对小鼠腹腔巨噬细胞 (MΦ)产生IL 1的作用。方法　用RINm5F细胞产氮量测定IL 1活性。结果　链球菌HlpA(0～ 10 0 μg mL)在体外以剂量和时间依赖方式促进MΦ产生IL 1(P <0 .0 0 1)。LTA和HlpA的混合物对IL 1的产生呈协同增强作用 (P <0 .0 0 1) ;肝素则起抑制作用 (P <0 .0 0 1)。结论　纯化的链球菌HlpA在体外刺激小鼠腹腔MΦ产生IL 1;HlpA和LTA对MΦ的IL 1产生呈协同增强作用。     

鼠疟原虫感染过程中IFN-γ对MΦ合成NO诱导作用的体外实验研究

为探讨疟原虫感染过程中IFN γ对巨噬细胞合成NO的诱导作用 ,我们应用Griess反应检测了约氏疟原虫感染小鼠脾细胞和MΦ培养上清中NO的分泌情况。结果显示 ,去除淋巴细胞则脾细胞中的MΦ合成NO水平显著下降 ;外源性IFN γ的加入可明显地提高MΦ合成NO的水平。这表明 ,在约氏疟原虫感染过程中 ,淋巴细胞的存在能促进MΦ合成NO ;IFN γ是促进MΦ合成NO的一种主要细胞因子     

巨噬细胞PDHA1基因敲除对非酒精性脂肪性肝病小鼠肝细胞凋亡的影响

目的：探讨巨噬细胞丙酮酸脱氢酶E1 α1亚基(pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1, PDHA1在同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)中对肝细胞凋亡的作用。方法：随机选取6周龄体重相近的PDHA1基因正常野生型小鼠和巨噬细胞特异性PDHA1基因敲除(PDHA1^{iΔMΦ/iΔMΦ})小鼠各12只，均分别给予普通饮食和高Hcy饮食喂养12周后用于后续实验。应用琼脂糖凝胶电泳技术对PDHA1^{iΔMΦ/iΔMΦ}小鼠进行基因鉴定；Western blot检测两种基因型小鼠骨髓巨噬细胞PDHA1蛋白表达；使用全自动生化分析仪检测小鼠血清Hcy和丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)水平；试剂盒检测肝组织上清液甘油三酯(triglyceride, TG)和ALT水平；苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察小鼠肝组织结构改变；q...     

卡介苗对照射小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)吞噬消化功能的影响

本文研究了射线对小鼠Mφ的损伤作用和卡介苗等菌苗对它的防护效果。结果如下:(1)照射后不同病期(假愈期,极期,恢复期),Mφ吞噬消化功能均受到抑制,以极期抑制最严重,小鼠死亡也达最高峰,随着病情好转而Mφ吞噬消化功能也相应出现升高;(2)随着照射剂量的增大,照射30天后小鼠的活存率与腹腔Mφ吞噬消化指数相应降低,并呈显著相关,r=0.88,回归直线方程为y=1.091+1.0137x,说明该指标能反映机体非特异免疫力强弱 ;(3)卡介苗不论防治或单独治疗均能提高照射小鼠活存率,与该菌苗激活照射小鼠腹腔Mφ吞噬消化功能有关。     

双歧杆菌的脂磷壁酸对小鼠腹腔MΦ的激活作用

目的 探讨青春型双歧杆菌的脂磷壁酸（LTA）对MΦ功能的影响。方法 将LTA注射于小鼠腹腔，分别采用中性红吞噬试验，MTT法，小鼠胸腺细胞增殖法和ELISA法，检测MΦ的吞噬能力，能量代谢水平，IL－1的活性及IL－6含量。结果 LTA注射组小鼠腹腔MΦ的吞噬能力，能量代谢水平，IL－1活性及IL－6含量均显著高于对照组（P＜0．01）。结论 双歧杆菌的LTA能激活MΦ，提高其吞噬能力和能量代谢水平，同时可分泌多种的具有杀瘤作用的活性因子。     

榄香烯复合瘤苗对小鼠腹腔巨噬细胞功能影响的分析

目的 :本室已证明榄香烯复合瘤苗对多种小鼠肿瘤 (如Ｌ61 5白血病、Ｈ2 2 肝癌等 )有明显的主动免疫保护作用。巨噬细胞在抗肿瘤免疫中不仅作为抗原递呈细胞 ,而且也是参与肿瘤杀伤的效应细胞。本实验检测了榄香烯复合瘤苗对小鼠腹腔巨噬细胞 (ＰＥＭΦ)的吞噬、杀瘤及一氧化氮 (ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ ,ＮＯ)产生等功能的影响 ,以期从这一方面研究瘤苗免疫的机制。方法 :ＭＴＴ法检测不同浓度的榄香烯及榄香烯复合瘤苗体外刺激正常小鼠ＰＥＭΦ的活性变化 ;通过ＰＥＭΦ的吞噬功能 (血红蛋白释放法 )、对肿瘤靶细胞(ＨＣａ-Ｆ、Ｌ92 9)的…     

秃疮花注射液对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

本文从体内外研究了秃疮花 (DLF )提取物对小鼠腹腔巨噬细胞 (PMΦ )免疫功能的影响。结果显示 ,DLF可诱发PMΦ产生强烈的呼吸爆发作用 ,并能提高PMΦ的吞噬功能和溶菌酶水平 ,且具有剂量效应关系。在体外试验时 ,剂量为 5 0～10 0mg/mlDLF能有效促进PMΦ的活化 ,提高其吞噬能力和溶菌酶活力 (P <0 0 5 ) ,其中 10 0mg/mlDLF诱发PMΦ产生超氧阴离子 (O2 )的效应最为显著 (P <0 0 1) ;体内试验时发现 ,0 5～ 2g/kgDLF对PMΦ的活化作用及其吞噬能力有显著作用 ,其中 1g/kgDLF对诱导PMΦ产生O2 (P <0 0 1)、提高PMΦ吞噬能力 (P <0 0 0 1)和溶菌酶水平 (P <0 0 5 )均有显著性效果。以上结果表明 ,DLF可诱导PMΦ活化并提高其免疫功能 ,从而提示DLF的临床治疗作用可能与此有关     

淫羊藿多糖对Mφ吞噬功能和Lc自发细胞毒作用的影响

本文观察了淫羊藿多糖对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和脾脏淋巴细胞自发细胞毒作用的影响。淫羊藿多糖(40mg/kg/d×5d,po)组小鼠巨噬细胞吞噬功能比对照增强约1倍;淋巴细胞自发细胞毒作用增强50％(P<0.01)。结果表明淫羊藿多糖对巨噬细胞和淋巴细胞免疫功能具有增强作用。     

一氧化氮与活化的小鼠腹腔巨噬细胞细胞毒作用关系的研究

本文选用Raji和K562两种细胞株作靶细胞,以LPS和IFN-γ作为巨噬细胞(MΦ)的激活剂,研究了一氧化氮(NO)在活化的小鼠腹腔巨噬细胞(PEMΦ)细胞毒中的作用以及靶细胞对MΦ合成NO的影响.结果表明,PEMΦ被激活后,合成NO量大为增加,并对Raji和K562两种靶细胞表现出很高的细胞毒效应;加入NO合酶抑制剂L-NMMA,PEMΦ对Raji的杀伤作用受到显著抑制,而对K562的细胞毒作用则不受影响.此外,在实验条件下,Raji细胞的存在可促进PEMΦ产生NO,而K562细胞则有削弱PEMΦ合成NO的倾向.     

α黑素细胞刺激素保护内毒素休克小鼠的免疫学机制研究

为研究α黑素细胞刺激素 (α MSH)对内毒素休克小鼠发挥保护作用的免疫学机制 ,将BALB/c小鼠经腹腔注射 (ip)LPS5 0 μg/kg和D 半乳糖胺 (D Gal) 90 0mg/kg建立内毒素休克模型后 ,在不同时间给予α MSHip后观察小鼠的存活率 ;用MTT法测定小鼠血清中IL 1、TNF α、IL 6的含量 ;用Griess试剂测定血清中NO的含量。腹腔巨噬细胞 (MΦ)膜表面免疫相关分子以流式细胞仪检测。结果是给予LPS前 1h、同时和后 1hα MSH 2 5mg/kgip可以明显提高内毒素休克小鼠的存活率 ,其中以给予LPS 1h后注射α MSH疗效最佳 ,能显著降低血清中IL 1、TNF α含量 (P <0 0 0 1) ,增加IL 6的产生 (P <0 0 5 ) ,抑制LPS引起的腹腔MΦ高表达CD14、CD40、CD5 4及CD86分子。因此 ,α MSH降低TNF α、IL 1及NO的含量 ,抑制MΦ膜表面CD14、CD5 4、CD40及CD86的表达 ,在其抗内毒素休克效应中起重要作用。     

冬虫夏草多糖对小鼠抗肿瘤作用的实验研究

用荷瘤BALB/c小鼠为模型,研究了冬虫夏草多糖的抑瘤作用,对荷瘤宿主MΦ吞噬功能、外周血淋巴细胞酸性非特异酯酶阳性(ANAE~+)细胞及迟发性变态反应(DTH)的影响。结果表明,冬虫夏草多糖能抑制小鼠S180肿瘤生长,增加外周血ANAE~+细胞百分率,增强DTH及MΦ吞噬活性。     

肺炎衣原体热休克蛋白10的表达及对炎症因子的诱生作用

目的在大肠杆菌中表达肺炎衣原体(Cpn)热休克蛋白10(Hsp10),并观察该蛋白诱生巨噬细胞(MΦ)分泌TNF-α和IL-6等促炎因子的作用。方法将Hsp10基因克隆于pQE30载体,在大肠杆菌(E.coli)M15中表达重组蛋白rHsp10,经亲和层析获得纯化rHsp10。以不同浓度的rHsp10作用于小鼠MΦRAW264.7,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞因子TNF-α和IL-6。结果成功构建了pQF30/Hsp10基因,并在大肠杆菌M15中得到高效表达,该蛋白能诱导小鼠MΦ以时间、剂量依赖方式分泌TNF-α和IL-6。结论表达并纯化的rHsp10蛋白能诱导MΦ分泌TNF-α和IL-6等促炎因子。     

HIV和Mφ细胞

AIDS 病因病毒(HIV)主要感染T 淋巴细胞和巨噬细胞(Mφ),其宿主广泛。HIV 可在体外感染CD4~+细胞并能增殖。细胞因病毒感染而变性死亡。AIDS 最大特点是CD4~+淋巴细胞减少,T4/T8比例降低。因此它是预测AIDS 的唯一方法。在体外可有上述变化,但在体内除非是AIDS 的晚期,淋巴细胞数、分类、比例及功能是较为稳定的。中枢神经系统,淋巴结及肺组织中,感染HIV 的细胞较血液中高1万倍。且这些感染     

受体外周血IgG、MΦ、NK、CD4、CD8及MLR的变化与异种移植物存活的关系

目的探讨受体外周血IgG、MΦ、NK、CD4、CD8及MLR的变化与异种移植物存活的关系。方法选用小鼠移植于大鼠耳后心肌组织模型，按实验所设Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组在术前12、8、4、0d及10、6、2、0d分别将小鼠脾细胞1×10     

二甲双胍促进Kupffer细胞向M2型极化治疗肝纤维化的机制研究

目的探讨二甲双胍(metformin)治疗肝纤维化的免疫学新机制。方法将小鼠随机分成3组:对照组(control,Ctrl)、模型组(carbon tetrachloride,CCl₄)、二甲双胍组(metformin,Met)。纯橄榄油溶液腹腔注射小鼠制备对照组;CCl₄橄榄油溶液腹腔注射小鼠制备模型组;在CCl₄橄榄油溶液腹腔注射第5周,对小鼠连续腹腔注射二甲双胍溶液7 d,制备二甲双胍组。在造模第8周时取材,采用HE染色与Masson染色观察小鼠肝脏组织病理学变化;运用酶联免疫吸附反应(ELISA)检测小鼠血清炎症因子水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠肝脏Kupffer细胞(Kupffer cell,KC)炎症因子表达;Western blot法检测小鼠肝脏KC转录因子蛋白水平与磷酸化程度。结果二甲双胍能够显著减少小鼠肝脏纤维蛋白沉积,减少炎症细胞浸润,降低血清炎症因子水平,减少肝脏KC细胞炎症因子表达,抑制肝脏KC细胞STAT3与NF-κB信号通路,增强STAT6信号通路。结论二甲双胍促进KC细胞...     

创伤对小鼠抗体分泌细胞的抑制作用及其纠正实验观察

<正> 本实验利用空斑形成细胞(简称PFC)测定法检测SRBC免疫小鼠脾细胞的抗体分泌细胞数,观察创伤对B细胞系统的抑制作用及抗体生成素对该抑制作用的纠正效应。 重18～22g的雄性昆明小鼠随机分为创伤组、创伤治疗(简称洽疗)组和对照组,每组10只,在实     

Toll样受体2(TLR2)基因敲除减轻小鼠胰岛素抵抗并促进巨噬细胞M2极化

目的研究Toll样受体2(TLR2)基因缺失对小鼠胰岛素抵抗和巨噬细胞极化的影响。方法出生28 d雄性TLR2基因敲除(TLR2~(-/-))和野生型(WT)的C57BL/6小鼠各12只,采用PCR验证每只小鼠的基因型。基础饲养3个月后,进行葡萄糖耐量实验(GTT)和胰岛素抵抗实验(ITT);从外周血中分离单个核细胞,以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)/γ干扰素(IFN-γ)和M-CSF/白细胞介素4(IL-4)/IL-13分别诱导培养为M1型和M2型巨噬细胞,流式细胞术检测CD11b、 F4/80、 CD11c、 CD206、早期生长反应蛋白2(EGR2),确定巨噬细胞表型。ELISA检测M1型巨噬细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 IL-6的含量; M2型巨噬细胞培养上清液中IL-10的含量。结果 PCR验证结果显示TLR2~(-/-)和WT小鼠的基因型正确;行GTT后比较, TLR2~(-/-)小鼠血糖调节能力比WT小鼠强,在30 min时最明显;行ITT后比较, WT小鼠比TLR2~(-/-)小鼠调节血糖的能力和胰岛素敏感性均降低,在15 min差异明显;与WT小鼠相比, TLR2~(-/-)小鼠M1型巨噬细胞的比率降低, M2型巨噬细胞比率增加;与WT小鼠相比, TLR2~(-/-)小鼠M1型巨噬细胞培养上清液IL-6、 TNF-α含量降低, TLR2~(-/-)小鼠M2型巨噬细胞培养上清液IL-10含量增加。结论 TLR2信号影响巨噬细胞的极化,使巨噬细胞倾向于M1表型,从而分泌促炎因子使机体处于低度炎症的状态,导致葡萄糖耐量和胰岛素敏感性的降低。     

醛糖还原酶基因敲除促进视神经损伤后巨噬细胞向M2方向极化并促进视神经功能恢复

目的观察小鼠视神经夹伤(ONC)后醛糖还原酶(AR)对视神经损伤后功能恢复的影响及可能机制。方法分别采用C57BL/6-AR+/+(B6野生型)、C57BL/6-AR-/-(AR基因敲除)、Thy1-YFP/AR+/+和Thy1-YFP/AR-/-小鼠,建立ONC模型。行视觉电生理F-VEP检查,观察ONC后AR基因敲除对小鼠视神经转导功能的影响;通过视网膜组织冰冻切片,观察AR基因敲除对Thy1-YFP转基因小鼠ONC后存活视网膜神经节细胞数目的影响;玻璃体内注射Alexa Fluor488标记的霍乱毒素B(CTB)顺行标记,观察AR基因敲除对小鼠ONC后神经纤维生长的影响;Western blot法检测野生型小鼠ONC后AR基因的表达变化,及AR基因敲除对M1、M2型巨噬细胞特异性分子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)表达的影响。结果AR基因敲除可促进小鼠ONC后视神经转导功能的恢复,增加存活的视神经节细胞数量;AR基因敲除可促进小鼠ONC后视神经纤维生长;AR基因敲除可促使小鼠ONC后巨噬细胞向M2方向极化。结论 AR可能通过调节视神经损伤后巨噬细胞极化影响视神经功能恢复。