氢醌暴露对小鼠骨髓造血干细胞中蛋白激酶B和FoxO1 mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨苯代谢物氢醌(hydroquinone,HQ)对小鼠骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)中蛋白激酶B和Forkhead转录因子1(Forkhead box O1,FoxO1)的m RNA和蛋白表达的影响。方法提取7只健康8周龄SPF级雄性昆明小鼠的骨髓细胞,采用免疫磁珠法(magnetic activated cell sorting,MACS)分选出小鼠骨髓造血干细胞,分别暴露于含终浓度为0(对照)、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L HQ的培养基中培养24 h。检测细胞蛋白激酶B和FoxO1的m RNA及蛋白的表达。结果与对照组比较,各剂量HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞蛋白激酶B m RNA和20、40μmol/L HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞FoxO1 m RNA的表达水平均较高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。与对照组比较,2.5~40μmol/L HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞FoxO1蛋白和5、10μmol/L HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞蛋白激酶B蛋白的表达水平均较高,而20、40μmol/L HQ暴露组小鼠骨髓造血干细胞蛋白激酶B蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。且随着HQ暴露剂量的升高,小鼠骨髓造血干细胞蛋白激酶B m RNA和蛋白的表达水平呈先上升后下降的趋势,FoxO1 m RNA和蛋白的表达水平呈波浪式下降的趋势。结论骨髓造血干细胞的调节可能部分依赖于蛋白激酶B和FoxO1。     

人胚肺成纤维细胞衰老过程中P66Shc启动子区组蛋白修饰变化

目的检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导细胞早衰阶段P66Shc启动子区的组蛋白修饰变化。方法按传代情况将人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞(22 population doubling levels,22PDL)组、中年细胞(35PDL)组、复制性衰老细胞(49PDL)组和氧化应激诱导的早衰细胞(premature senescence,PS)组。检测P66Shc的mRNA表达及其启动子区IP1、IP2组蛋白修饰,包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3(Lys4)甲基化修饰。结果与年轻细胞组比较,中年细胞组、复制性衰老细胞组和早衰组人胚肺成纤维细胞P66Shc mRNA表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。在P66Shc IP1启动子区(-1 641～-1 392 bp),中年细胞组和复制性衰老细胞组以H4乙酰化修饰为主,而早衰细胞组受H3、H4乙酰化和H3(Lys4)甲基化的联合修饰;在P66Shc IP2启动子区(-129～45 bp),中年细胞组和复制性衰老细胞组受H3(Lys4)甲基化修饰,而早衰细胞组受H4乙酰化和H4(Lys4)甲基化联合修饰。结论在细胞衰老过程中,P66Shc启动子区的组蛋白修饰参与其mRNA表达调控,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异。     

Alteration of Histone Modifications for P66Shc Promoter during Cellular Senescence of Human Embryonic Pulmonary Fihroblast Cells

目的 检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导细胞早衰阶段P66Shc启动子区的组蛋白修饰变化.方法 按传代情况将人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞(22 population doubling levels,22PDL)组、中年细胞(35PDL)组、复制性衰老细胞(49PDL)组和氧化应激诱导的早衰细胞(pretnature senescence,PS)组.检测P66Shc的mRNA表达及其启动子区IP1、IP2组蛋白修饰,包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3(Lys4)甲基化修饰.结果 与年轻细胞组比较,中年细胞组、复制性衰老细胞组和早衰组人胚肺成纤维细胞P66Shc mRNA表达水平均升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).在P66Shc IPI启动子区(-1641-1392 bp),中年细胞组和复制性衰老细胞组以H4乙酰化修饰为主,而早衰细胞组受H3、H4乙酰化和H3(Lys4)甲基化的联合修饰;在P66Shc IP2启动子区(-129～45 bp),中年细胞组和复制性衰老细胞组受H3(Lys4)甲基化修饰,而早衰细胞组受H4乙酰化和H4(Lys4)甲基化联合修饰.结论 在细胞衰老过程中,P66Shc启动子区的组蛋白修饰参与其mRNA表达调控,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异.     

细胞衰老过程中P16表观遗传学修饰研究

目的 检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程及细胞早衰阶段中P16的表观遗传学调控作用.方法 在细胞复制性衰老过程(同步培养的22 PDL正常人胚肺成纤维细胞于约50%融合度时进行400μmol/L H2O2处理,每天用H2O2染毒工作液染毒1次,每次2 h,持续4 d)中,将正常人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞组(22 PDL)、中年细胞组(35 PDL)、复制性衰老细胞组(49 PDL);将经400μmol,L H2O2染毒4 d的22 PDL人胚肺成纤维细胞继续培养7 d,设为早衰细胞组.荧光定量PCR检测P16的mRNA表达水平,甲基化特异PCR检测其肩动子区-846～-639 bp的甲基化水平,染色质免疫沉淀结合定量PCR检测其相应启动子区组蛋白修饰情况,包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3(Lvs4)及H4(Lvs20)甲基化修饰.结果 与年轻细胞组相比,中年细胞组P16的mRNA表达降低,复制性衰老细胞组和早衰细胞组P16的mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).在P16启动子区,第一外显子上游-1 000 bp内,其CpG岛片段长度为995 bp,甲基化特异性PCR(MSP)扩增片段位于CpG岛内-84～-639 bp之间,长度为208 bp.中年细胞组、复制性衰老细胞组、早衰细胞组甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0.42、0.34、0.47,未甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0.61、0.96、0.79.在P16 IP1启动子区(-685～-489 bp),复制性衰老细胞组及早衰细胞组以组蛋白H4(Lys20)甲基化修饰为主;在P16 IP2启动子区(-229～-60bp),复制性衰老细胞组受组蛋白H3、H4乙酰化和H4(Lys20)甲基化联合修饰,早衰细胞组以H3、H4乙酰化修饰为主.结论 细胞衰老过程中,P16启动子区的组蛋白修饰联合调控其mRNA表达,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异.     

脐血单个核细胞CD25 mRNA表达的研究

目的观察外周血、脐血CD25 mRNA和CD25表达水平,初步了解CD25在幼稚T细胞表达中的作用.方法以Ficoll-Hypaque分离30名健康产妇外周血单个核细胞(PBMC)及脐血单个核细胞(CBMC);以生物素-链霉亲和素(BSA)法检测PHA诱导前后CD25表达水平;ELISA法测定血清sIL-2R含量;Real-time PCR检测CD25 mRNA含最.结果静息状态和PHA诱导状态CD25(%)、血清中的sIL-2R(pg/ml)及CD25mRNA(logcDNA/logGAPDH)表达水平分别为在孕妇外周血中和在脐血中均有显著差异(P＜0.01),其中在孕妇外周血中分别为3.73±1.03、32.53±4.36、246.50±97.30和1.47±0.14及在脐血中分别为1.30±0.45、8.03±1.24、155.00±83.50和0.47±0.46.结论脐血中的免疫细胞幼稚,未分化成熟,免疫细胞活性及其分泌的细胞因子水平均较低,可作为一种有效、经济、安全的造血干细胞来源.     

人胚肺成纤维细胞衰老过程中胰岛素样生长因子2表观遗传活化作用

目的观察体外培养人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导早衰持续阶段胰岛素样生长因子2(IGF2)表观遗传学修饰。方法荧光定量PCR检测IGF2的mRNA表达,甲基化特异PCR检测其启动子区甲基化改变,染色质免疫沉淀结合定量PCR检测组蛋白修饰,包括组蛋白H3、H4乙酰化,H3(Lys4)及H4(Lys20)甲基化修饰。结果细胞复制性衰老过程中,中年细胞组及复制性衰老细胞组IGF2的mRNA表达升高,早衰持续组升高显著;细胞衰老过程中,仅复制性衰老细胞组在启动子区-658～-456bp具有一定的甲基化水平;复制性衰老细胞组的组蛋白修饰在启动子区-856～-634bp以H4乙酰化,H3甲基化修饰为主;+9～+145bp的修饰,复制性衰老细胞组受组蛋白H3及H4甲基化联合修饰,早衰持续组以H3甲基化修饰为主。结论细胞衰老过程中,IGF2启动子区组蛋白修饰联合调控其mRNA表达,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异。     

SET蛋白对精母细胞株(GC-2 spd)增殖和组蛋白乙酰化的影响

目的:观察SET蛋白对GC-2 spd精母细胞株增殖和组蛋白乙酰化的影响,探讨SET蛋白调节精子形成的作用。方法:体外培养GC-2 spd细胞,通过精母细胞标志物乳酸脱氢酶C(LDHC)和睾丸特异激酶1(TESK1)鉴定。琼脂糖珠免疫共沉淀试剂盒检测SET蛋白与组蛋白H4的结合。分别转染空载腺病毒(Ad H1-si RNA/NS,对照组)和SET干涉腺病毒(Ad H1-si RNA/SET,干涉组),比较细胞增殖情况,荧光显微镜观察GC-2spd细胞中SET蛋白的表达;用实时定量逆转录聚合酶链反应(Real time RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测m RNA以及蛋白的表达。结果:免疫荧光显示精母细胞株GC-2 spd阳性表达LDHC和TESK1;SET蛋白表达于GC-2细胞的胞核和胞质中,免疫共沉淀提示SET蛋白与组蛋白H4结合。转染SET干涉腺病毒后,核内和胞质中SET蛋白表达明显降低(P0.01)。与对照组相比,干涉组细胞增殖明显降低,组蛋白H4乙酰化水平明显增高(P0.05);但组蛋白乙酰化酶(HATs)和去乙酰化酶(HDACs)m RNA表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:精母细胞核内和胞浆中均表达SET蛋白;SET蛋白降调,则抑制GC-2spd细胞增殖。SET蛋白可能通过与组蛋白H4相互作用调节其乙酰化,参与调节精子形成。     

急性淋巴细胞性白血病骨髓单个核细胞CD11a的表达及临床意义

目的探讨淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)的α链CD11 a在急性淋巴细胞性白血病(ALL)的表达情况及其临床意义。方法采用免疫酶标ABC法检测20例初治ALL患者和8例正常对照骨髓单个核细胞CD11 a的表达。结果CD11 a在ALL患者骨髓单个核细胞的表达率(35.23±13.57)%明显低于对照组(87.13±5.38)%(P<0.05),治疗后完全缓解组的表达率(44.64±10.15)%显著高于未缓解组(23.72±6.13)%(P<0.05)。结论ALL患者骨髓单个核细胞的CD11 a表达异常,对ALL的预后判断有一定意义。     

实时荧光定量PCR检测端粒酶逆转录酶mRNA在急性白血病中的表达

目的研究人类端粒酶转录酶(hTERT)在急性白血病的表达和意义。方法应用实时定量PCR(Real-time PCR)技术检测30例急性白血病骨髓单个核细胞及25例正常人骨髓单个核细胞中hTERTmRNA的表达水平,分析其表达水平与急性白血病恶性程度的关系。结果hTERT在急性白血病细胞中的中位表达量为0.00244(0~0.0320),明显高于正常人骨髓单个核细胞中hTERT的中位表达量2.79×10-4(0~0.0078)(P<0.001)。但在ANLL和ALL细胞中对比表达无明显差异(P=0.742)。结论在急性白血病中hTERT明显高于正常对照,hTERT是急性白血病诊断的特异性指标之一。     

医学生外周血单个核细胞CD25、CD25mRNA表达

[目的]探讨正常医学生外周血单个核细胞(PBMC)中CD25、CD25 mRNA表达水平,为了解机体生理状态下细胞免疫功能提供实验依据。[方法]用生物素-链霉亲和素(BSA)法检测150名(男91人,女59人)在校医学生外周血单个核细胞植物血凝素(PHA)诱导前后CD25水平,Real-PCR法法检CD25 mRNA含量。[结果]男生PHA诱导前后CD25水平分别为(4.66±1.23)%、(33.12±7.02)%,CD25 mRNA含量分别为1.516 5±0.275 0、1.6050±0.2502;女生PHA诱导前后CD25水平分别为(4.59±1.34)%、(34.78±7.75)%,CD25 mRNA含量分别为1.4420±0.2428、1.7103±0.2755,两者相比,诱导期女生CD25 mRNA水平偏高,差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]医学生PBMC中CD25、CD25 mRNA表达正常,女生PBMC对PHA具有更高的反应性。     

氢醌作用下L-O2人肝细胞中聚合酶η的表达及其与DNA损伤耐受的关系

目的 研究氢醌(hydmquinone,HQ)对L-O2人肝细胞中跨损伤合成DNA聚合酶η(Pohη)表达及DNA损伤的影响,探讨Polη在DNA损伤耐受过程中的作用及其可能机制.方法 将L-O2人肝细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80和160 μmol/L) 的HQ作用24 h之后,采用噻唑蓝(MTY)比色法测定细胞相对存活率;单细胞凝胶电泳检测DNA损伤情况;实时荧光定量PCR和Western blotting 技术检测Polη在mRNA 和蛋白质水平上的表达.结果 在0～80 μmol/L 的范围内,HQ对L-O2人肝细胞的存活率没有明显的影响;当染毒剂量超过160 μmol/L 时,其存活率则降为(79.20±7.94)%,与对照组(100.00±3.71)%比较,差异有统计学意义(F=17.11,P＜0.01).随着HQ作用浓度的升高,L-O2人肝细胞DNA链的断裂程度也随着逐渐增加.在HQ染毒剂量0～80μmol/L 的范围内,Polη在mRNA水平(相对定量值依次为1.00±0.00、1.20±0.09、2.02±0.19、2.37±0.10、2.67±0.16和4.40±0.18)和蛋白质水平(相对定量值依次为0.22、0.24、0.34、0.44、0.45和1.25)上的表达均有随着剂量的增加而增加的趋势,80 μmol/L 处达到峰值;当HQ的剂量达到160 μmol/L时,Polη的表达则有所降低,mRNA水平和蛋白质水平相对定量值分别为2.32±0.16和1.20,高于对照组.结论 Polη可能参与了HQ所致L-O2 人肝细胞DNA损伤的耐受过程.     

组蛋白去乙酰化酶表达水平在特发性肺纤维化患者诊治中的价值

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶表达水平在特发性肺纤维化患者诊治中的价值。方法选取2019年1月—2020年12月河南省某医院收治的70例特发性肺纤维化患者作为观察组,同时选取同期在本院进行健康体检的70名健康人员作为对照组。比较2组研究对象单个核细胞胞质蛋白与核质蛋白中组蛋白去乙酰化酶表达水平;分析观察组研究对象单个核细胞...     

早期自然流产患者外周血TNF-α及TGF-β1mRNA表达的研究

[目的]探讨自然流产患者外周血单个核细胞内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及转化生长因子-β1(TGF-β1)mR-NA的异常表达,从免疫学角度探讨自然流产的发生因素.[方法]采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测比较30例早期自然流产患者、25例正常妊娠妇女、25例正常未妊娠妇女外周血单个核细胞内TNF-α及TGF-β1mRNA.[结果]自然流产患者、妊娠及未妊娠妇女外周血单个核细胞表达TNF-α mRNA相对含量分别为20.1%±9.4%、68.6%±14.1%、97.0%±11.6%;表达TGF-β1 mRNA相对含量21.5%±9.4%、95.7%±12.9%、87.0%±13.8%,自然流产患者组的表达水平较低(P<0.05).[结论]自然流产过程中能分泌TNF-α的单个核细胞可能聚集于母胎界面,TNF-α可能在母胎界面局部高表达并发挥作用导致流产TGF-β1对妊娠维护起重要作用,而其低表达水平可能与自然流产相关.     

氢醌对A549细胞人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶基因mRNA表达的影响

目的 观察不同浓度氢醌(hydroquinone,HQ)对人肺腺癌A549细胞活性氧(reactiveoxygen species,ROS)、脂质过氧化损伤产物丙二醛(malonaldehyde,MDA)、抗氧化酶活性以及氧化损伤修复酶人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(human 8-oxo-guanine DNA glyeoslase,hOGG1)基因mRNA表达的影响,探讨HQ毒作用的分子机制.方法 不同浓度HQ作用于A549细胞,噻唑兰(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,荧光探针检测细胞内ROS的变化,比色法测定MDA含量和过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,逆转录聚合酶链反应(reverse transeription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术分析hOGG1基因mRNA的表达.结果 随着HQ浓度的增加,各实验结果为:(1)A549细胞的吸光度值(A值)下降,160 μmol/L和320 μmoL/L浓度组[(0.584±0.098)、(0.328±0.066)]与对照组(0.989±0.150)相比差异有统计学意义(q值分别为5.56、9.07,P值均<0.05),且两组细胞存活率均低于80%;(2)A549细胞内ROS生成增多,40 μmol/L和80 μmoL/L浓度组A值[(39.80±4.15)、(101.99μ9.45)]与对照组(5.71±0.50)相比差异有统计学意义(q值分别为10.74、30.32,P值均<0.05);(3)SOD、GSH-Px活性下降,活性值在80 μmol/L时[(22.93±0.56)U/mg prot、(25.60±2.31)U/mg prot]均低于对照组[(25.62±0.28)U/mg prot、(38.97±2.61)U/mg prot],差异有统计学意义(q值分别为12.17、8.78,P值均<0.05);MDA含量升高,在40 μmol/L和80 μmol/L[(1.07±0.01)nmol/mg prot、(1.19±0.08)nmol/mg plot]时高于对照组[(0.77±0.04)nmol/mg prot],差异有统计学意义(q值分别为10.90、15.49,P值均<0.05);SOD(r=-0.95,F=20.00,P=0.04)与GSH-Px(r=-0.99,F=115.48,P=0.01)活力的下降和MDA(r=0.96,F=21.31,P=0.04)含量的升高均与HQ浓度的变化具有剂量-反应关系;(4)RT-PCR结果显示:HQ作用后,A549细胞hOGG1 mRNA的表达呈下降趋势,80 μmoL/L浓度组hOGG1 mRNA的表达(0.478±0.017)与对照组(0.715±0.038)相比降低较明显(q=11.70,P<0.05).结论 HQ可以诱导细胞活性氧增加和hOGG1基因mRNA表达水平下降,提示氧化损伤是HQ毒作用的重要机制.     

慢性苯中毒患者造血抑制与ICBP90表达的相关性

目的 观察慢性苯中毒患者造血抑制期ICBP90的表达及慢性苯中毒患者造血恢复期ICBP90的表达,并探讨慢性苯中毒人群造血抑制与ICBP90的相关性.方法 采集慢性苯中毒患者[包括造血抑制期(13例)、造血恢复期患者(11例)]和健康志愿者(10例)的骨髓,分离单个核细胞,并提取核蛋白.使用免疫印迹法(Western blot)检测核蛋白ICBP90的表达,对慢性苯中毒患者造血抑制和ICBP90表达进行相关性分析.结果 慢性苯中毒造血抑制期患者骨髓单个核细胞中ICBP90表达较正常对照组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).慢性苯中毒造血恢复期患者骨髓单个核细胞中ICBP90表达较正常对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).慢性苯中毒造血恢复期患者骨髓单个核细胞中ICBP90表达较造血抑制期患者明显升高,差异亦有统计学意义(P＜0.01).慢性苯中毒所致造血抑制患者的ICBP90表达与外周血白细胞、血小板均存在相关性(r1=0.555,P=0.006; r2=0.854,P＜0.01).结论 慢性苯中毒患者造血抑制期ICBP90表达下降,慢性苯中毒患者造血恢复期ICBP90表达增高.慢性苯中毒患者造血抑制与ICBP90具有相关性.     

CYP2E1基因启动子区组蛋白高乙酰化作用促进异烟肼诱导的肝细胞凋亡

目的:探讨异烟肼(INH)诱导肝细胞CYP2E1启动子区组蛋白乙酰化对肝细胞凋亡的影响。方法:INH浓度1000μg/mL,Garcinol为5μmol/L,药物作用6h。ELISA检测乙酰化酶HAT与去乙酰化酶HDAC活性。Chip检测H3K56、H4K5水平。RT-PCR检测CYP2E1、JNK、Bax、Bcl2表达。结果:INH组与对照比,HAT活性降低,HDAC及CYP2E1启动子区acH3K56和acH4K5水平升高,JNK、Bax的mRNA增加,Bcl2下降。与INH组比,INH+Garcinol组HAT活性、acH3K56、acH4K5表达及JNK、Bax降低,Bcl2升高。结论:抑制肝细胞CYP2E1基因启动子乙酰化可减少INH诱导的肝细胞凋亡。     

乳腺癌组织中HER2与TOPOⅡα基因表达的检测及相关性分析

目的　检测人表皮生长因子受体Ⅱ (HER2 /neu)与拓扑异构酶 (TOPOⅡα)在乳腺癌组织中的表达 ,探讨二者的相关关系及在乳腺癌临床化疗中的潜在价值。方法　采用RT -PCR和免疫组织化学方法分别检测 2 4例乳腺癌组织和相应的癌旁组织的HER2、TOPOⅡα的转录和蛋白质水平的表达。结果　RT -PCR结果显示 ,乳腺癌组织中HER2和TOPOⅡα阳性率分别是 2 9% ( 7/2 4)和 92 % ( 2 2 / 2 4) ,明显高于癌旁组织 [4 % ( 1/ 2 4)和 2 1% ( 5 / 2 4) ,P <0 0 0 1] ;免疫组化检测癌组织发现HER2和TOPOⅡα的表达率分别为 3 0 % ( 6/ 2 0 )和 94% ( 16/ 17) ,与RT -PCR结果一致 ,且 6例HER2表达阳性的组织中TOPOⅡα表达均为阳性 ,二者的表达相关 ,R =0 5 2 4,P <0 0 0 1。结论　HER2和TOPOⅡα在乳腺癌组织比癌旁组织有明显增加的表达率 ,且两基因的表达相关 ,提示两基因表达的上调在乳腺癌的发生及恶性表型维持中可能起一定作用。     

细胞衰老过程中用6表观遗传学修饰研究

目的检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程及细胞早衰阶段中P16的表观遗传学调控作用。方法在细胞复制性衰老过程（同步培养的22PDL正常人胚肺成纤维细胞于约50％融合度时进行400Ixmol／LH2O2处理，每天用H2O2染毒工作液染毒1次，每次2h，持续4d）中，将正常人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞组（22PDL）、中年细胞组（35PDL）、复制性衰老细胞组（49PDL）；将经400umol／LH2O2染毒4d的22PDL人胚肺成纤维细胞继续培养7d，设为早衰细胞组。荧光定量PCR检测P16的mRNA表达水平，甲基化特异PCR检测其启动子区-846- —639bp的甲基化水平，染色质免疫沉淀结合定量PCR检测其相应启动子区组蛋白修饰情况，包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3（Lys4）及H4（Lys20）甲基化修饰。结果与年轻细胞组相比，中年细胞组P，6的mRNA表达降低，复制性衰老细胞组和早衰细胞组P16的mRNA表达升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。在用6启动子区，第一外显子上游-1000bp内，其CpG岛片段长度为995bp，甲基化特异性PCR（MSP）扩增片段位于CpG岛内-846-639bp之间，长度为208bp。中年细胞组、复制性衰老细胞组、早衰细胞组甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0．42、0．34、0．47，未甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0．61、0．96、0．79。在P16IP1启动子区（-685—489bp），复制性衰老细胞组及早衰细胞组以组蛋白H4（Lys20）甲基化修饰为主；在川6IP2启动子区（-229- -60bp），复制性衰老细胞组受组蛋白H3、H4乙酰化和H4（Lys20）甲基化联合修饰。早衰细胞组以H3、H4乙酰化修饰为主。结论细胞衰老过程中，用6启动子区的组蛋白修饰联合调控其mRNA表达，复制性衰老与早衰的调控机制存在差异。     

氢醌对人L-02肝细胞泛素连接酶Rad18表达的影响

目的 研究氧醌(hydroquinone,HQ)对人L-02肝细胞中泛素连接酶Pad18表达的影响,探讨Rad18在HQ所致肝细胞毒性中的作用及其可能机制.方法 将L-02肝细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80和160 μmol/L)的HQ作用24 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率;用单细胞凝胶电泳检测DNA损伤情况;实时荧光定量PCR技术检测Rad18在mRNA水平上的表达;Western blot方法检测Pad18在蛋白质水平上的表达.结果 在0-80 μmoFL的范嗣内,HQ对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响,当染毒剂量超过160 μmol/L时,细胞存活率(79.20%)明显下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).随着 HQ作用浓度的升高,L-02肝细胞的Olive尾矩也逐渐增加,呈线性正相关关系(r=920,P<0.01).在HQ染毒剂量低于40μmol/L的范围内,Rad18在mRNA和蛋白质水平上的表达均有随着剂量的增加而增加的趋势;当HQ的剂量超过40 μmol/L时,Pad18在mRNA水平上的表达继续增加,而其在蛋白质水平上的表达则无明显变化.结论 HQ可使L-02肝细胞的Rad18表达增加.     

体外培养骨髓单个核细胞分泌促血管生长因子的实验研究

目的分析体外培养的骨髓单个核细胞持续分泌促血管生长因子的能力。方法从大鼠胫骨及股骨采集骨髓,密度梯度离心法分离出骨髓单个核细胞进行体外培养,并连续收集4周培养上清液。酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定培养上清液中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和白介素-1β(IL-1β)等因子水平。结果第1、2、3、4周骨髓单个核细胞体外培养上清液中VEGF分别为(24.40±7.99)pg/m、l(89.28±5.13)pg/m、l(115.24±10.08)pg/m、l(157.00±15.64)pg/m l;bFGF含量分别为(52.72±2.13)pg/m、l(48.10±6.41)pg/m、l(44.71±3.21)pg/m、l(25.61±2.42)pg/m l;IL-1β含量分别为:(31.28±5.44)pg/m、l(71.87±3.01)pg/m、l(55.77±11.94)pg/m、l(41.75±9.14)pg/m。l结论体外培养骨髓单个核细胞可持续分泌VEGF、bFGF、IL-1β等多种促血管生长因子。