UVA对成纤维细胞和HaCaT细胞形态及诱导型一氧化氮合酶产生水平的影响

目的 比较5 J/cm²长波紫外线(UVA)照射对人皮肤成纤维细胞和HaCaT细胞形态、数目和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)产生的影响.方法 5 J/cm² UVA分别照射人成纤维细胞和HaCaT细胞后24 h,48 h和72 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态和数目变化,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和细胞免疫组化方法检测两种细胞iNOS mRNA和蛋白表达的情况.结果 人成纤维细胞在照射后3个时间点细胞均出现皱缩,24 h细胞数目即明显低于照射前(P<0.05),iNOS mRNA和蛋白在照射后24 h有高峰表达;HaCaT细胞在3个时间点细胞形态未见明显改变,细胞数目在照射后48 h才明显低于照射前(P<0.05),且iNOS mRNA和蛋白在照射后48 h有高峰表达.结论 5 J/cm² UVA照射后人成纤维细胞比HaCaT细胞更易受到损伤,iNOS高峰表达出现更早,且持续时间更长.     

长波紫外线照射对HaCaT细胞iNOS/NO表达的影响

目的 探讨不同剂量长波紫外线 （UVA） 照射HaCaT细胞后不同时间点诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）的表达情况。方法 1 J/cm2、5 J/cm2和10 J/cm2 UVA照射HaCaT细胞后继续培养24 h、48 h和72 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;分别用RT-PCR、Western印迹和Griess法检测HaCaT细胞iNOS mRNA、蛋白及NO的表达。结果 所有UVA剂量组HaCaT细胞iNOSmRNA在光照后24 h有表达,48 h达高峰,72 h后下降,各时间点间表达量差异有统计学意义（P < 0.05）;1 J/cm2 UVA照射后3个时间点均未见iNOS蛋白表达,而5 J/cm2和10 J/cm2 UVA照射后iNOS蛋白在24 h增加,48 h达高峰且显著高于24 h（P < 0.05）,照射后72 h无iNOS蛋白表达。所有UVA剂量组HaCaT细胞NO表达量在24 h升高,48 h显著升高,72 h平稳升高,3个时间点NO表达量均比正常对照组明显增加（P < 0.05）。对照组HaCaT细胞无iNOS mRNA和蛋白表达,NO表达量低。结论 HaCaT细胞iNOS和NO的表达变化与UVA照射存在时间和剂量关系。     

长波紫外线照射和基因甲基化状态对HaCaT细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:研究长波紫外线(UVA)照射和基因甲基化状态改变对HaCaT细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法:5 J/cm<'2>UVA照射HaCaT细胞后24 h、48 h和72 h及1μmol/L 5-氮杂胞苷(5-azaC)处理HaCaT细胞24 h、72 h和120 h后,采用反转录(RT)-PCR、Western blot方法和巢式聚合酶链反应(nested polymearse chain reaction,N-PCR)分别检测iNOS mRNA、蛋白和cDNA的表达情况.结果:HaCaT细胞正常对照组无iNOS mRNA、蛋白和cDNA的表达;5 J/cm<'2> UVA照射后,HaCaT细胞的iNOS mRNA、蛋白和cDNA表达在24 h时出现,48 h达高峰,且明显高于24 h(P<0.05),72 h无表达:5-azaC处理HacaT细胞24 h后,仅有iNOS cDNA表达,72 h和120 h有iNOS mRNA、蛋白和cDNA表达,且120 h表达量强于72 h(P<0.05).结论:HaCaT细胞iNOS表达与UVA照射存在一定的时间关系,iNOS基因甲基化状态的改变可以影响其表达.     

长波紫外线对皮肤成纤维细胞表达和分泌组织蛋白酶G的影响

目的 研究长波紫外线（UVA）照射对皮肤成纤维细胞组织蛋白酶G（CatG）表达和分泌的影响。 方法 原代培养的皮肤成纤维细胞来自儿童包皮,10代以内的细胞行后续实验。①以10 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,24、48、72 h后提取照射组和对照组细胞蛋白和mRNA,并收集细胞上清液;②分别以10、20、30 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,24 h后收集细胞和上清液。用RT-PCR 和Western印迹分别检测各组细胞CatG mRNA及蛋白的表达,ELISA检测细胞上清液CatG的含量。 结果 10 J/cm2 UVA照射后24、48、72 h,照射组细胞CatG mRNA表达分别为0.376 ± 0.014、0.308 ± 0.022和0.296 ± 0.032,对照组分别为0.183 ± 0.003、0.185 ± 0.005、0.182 ± 0.004;照射组细胞CatG蛋白灰度值分别为1.80 ± 0.12、1.41 ± 0.17和1.27 ± 0.09,对照组分别为0.96 ± 0.06、0.95 ± 0.22、1.00 ± 0.14;照射组细胞CatG mRNA、蛋白表达及细胞上清液CatG含量较相应的对照组升高（均P < 0.05）,且以照射后24 h表达最高。10、20、30 J/cm2 UVA照射后24 h,皮肤成纤维细胞CatG mRNA表达分别为对照组的1.90、2.51、3.04倍,细胞CatG蛋白表达分别为对照组的1.88、3.97、4.72倍,细胞上清液CatG含量分别为对照组的1.36、1.50、1.66倍,均随UVA剂量的升高而增加,其差异有统计学意义（均P < 0.01）。 结论 急性UVA照射促进皮肤成纤维细胞表达和分泌CatG。     

长波紫外线照射对人皮肤成纤维细胞表达一氧化氮合成酶和一氧化氮的影响

目的 通过检测UVA照射后人皮肤成纤维细胞的细胞形态及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS) 和一氧化氮(NO)表达,初步探讨UVA引起成纤维细胞光损伤的发病机制.方法 以1J/cm2,5J/cm2和10J/cm2 UVA分别照射人成纤维细胞后24h,用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR )和化学细胞免疫方法检测iNOSmRNA和蛋白表达情况,Griess 法检测NO的含量,MTT试验检测细胞增殖能力,倒置显微镜和HE染色观察细胞形态变化.结果 10J/cm2UVA照射人成纤维细胞后24h出现皱缩最为明显,其细胞增殖能力(MTT)(OD值,0.2472±0.0328)与其他三组比较明显减退(P均<0.05),且iNOSmRNA(1.0568±0.0778)和iNOS蛋白表达强于1J/cm2和5J/cm2(P均<0.05),同时NO的含量(51.11±2.2760)nmol/mL高于1J/cm2的(32.44±3.1620)nmol/mL和5J/cm2的(41.32±2.4460)nmol/mL(P均<0.05).结论 人成纤维细胞iNOS和NO的表达与UVA照射呈剂量依赖.成纤维细胞的光损伤与iNOS和NO产生有关.     

白藜芦醇对UVA照射人角质形成细胞株的保护作用及机制探讨

目的 研究白藜芦醇对UVA照射后人角质形成细胞的保护作用及其机制。方法 5 J/cm2 UVA照射人角质形成细胞株HaCaT细胞后,立即予以0.01、0.1 mmol/L白藜芦醇干预,噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性,半定量RT-PCR和Western印迹方法检测细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA和蛋白的表达,电镜观察细胞形态学方面的改变。结果 UVA照射组HaCaT细胞的增殖活性（A490为0.542 ± 0.004）较未照射对照组（A490为0.889 ± 0.083）明显下降,iNOS mRNA和蛋白的表达水平（1.532 ± 0.041和1.331 ± 0.046）较未照射对照组显著增加,电镜下可见典型的凋亡细胞。HaCaT细胞经UVA照射加0.01、0.1 mmol/L白藜芦醇处理后,细胞的增殖活性升高,A490为分别为0.753 ± 0.435和0.892 ± 0.173,iNOS mRNA和蛋白的表达水平分别为0.853 ± 0.038/0.809 ± 0.018和0.392 ± 0.033/0.412 ± 0.026,与单独UVA照射组相比,差异均有统计学意义（P < 0.05）,而且0.1 mmol/L白藜芦醇组作用效果更明显。另外,电镜观察UVA + 白藜芦醇组未见凋亡细胞及明显的细胞坏死征象。结论 白藜芦醇对UVA照射损伤的HaCaT细胞有保护作用,其机制可能与白藜芦醇抑制UVA诱导的iNOS表达有关。     

UVA照射对皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K表达的影响

目的 探讨皮肤成纤维细胞中组织蛋白酶K(Cathepsin K,CatK)的表达随UVA照射后时间及其剂量的变化.方法 原代培养的皮肤成纤维细胞来自儿童包皮,10代以内的细胞行后续实验.先以10 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,在照射后24、48、72 h提取照射组和对照组细胞蛋白和mRNA.再以10 J/cm2、20 J/cm2、30 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,在照射后48 h收集细胞.用RT-PCR和Western印迹法分别检测各组间CatK mRNA、蛋白的表达的差异.结果 10 J/cm2 UVA照射后1、2、3d,照射组CatKmRNA表达分别为0.351±0.038(对照组0.177±0.006)、0.510±0.017(对照组0.176±0.002)、0.313±0.012(对照组0.173±0.002).照射组CatK蛋白灰度值分别为1.76±0.27(对照组0.82±0.45)、2.97±0.36(对照组1.58±0.15)、2.23±0.14(对照组1.29±0.32),照射组CatKmRNA、蛋白表达均较对照组升高(P＜0.05),且以照射后第2天表达最高.10、20、30 J/cm2UVA照射后,48 h皮肤成纤维细胞中CatK mRNA表达分别为对照组的2.34、2.91、3.18倍,CatK蛋白表达分别为对照组的1.77、2.82、3.64倍,均随UVA剂量的升高而增加,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CatK在UVA照射后皮肤成纤维细胞中的表达升高.     

组织蛋白酶B在急性光损伤皮肤成纤维细胞中的表达及意义北大核心CSCD

目的 探讨组织蛋白酶B（CatB）在急性光损伤人皮肤成纤维细胞（HDF）中的表达变化及意义.方法 体外培养原代HDF,选取第4～8代细胞进行实验.实验设长波紫外线（UVA）照射组和不照射的对照组.CCK8法分别检测5、10、15、20和25 J/cm2 UVA照射后HDF的增殖率.用10 J/cm2 UVA单次照射致HDF急性光损伤,Western印迹及实时定量逆转录（RT）-PCR分别检测急性光损伤组HDF及对照组HDF照射后24、48、72 h CatB蛋白及mRNA表达;另外分别用10、15、20、25 J/cm2 UVA照射HDF,Western印迹及实时定量RT-PCR分别检测急性光损伤组及对照组HDF照射后48 h CatB蛋白及基因表达.数据采用SPSS 13.0统计软件行方差分析,两组间比较采用最小显著差异法（LSD）.结果 UVA照射导致HDF增殖率下降;当UVA剂量≤10 J/cm2时,细胞存活率均保持在85％以上,各照光组分别与对照组24、48、72 h时比较,均P＜0.05.Western印迹结果显示,急性光损伤组（10 J/cm2 UVA照射）CatB蛋白灰度值在照射后24 h（0.76±0.14）、48 h（1.34±0.38）、72 h（0.82±0.09）均较对照组（分别为0.35±0.01、0.45±0.12、0.61±0.06）升高（均P＜0.05）.实时定量RT-PCR显示,在急性光损伤组CatB的mRNA表达在照射后24 h（0.149±0.009）、48 h（0.173±0.009）、72 h（0.185±0.158）也较对照组（分别为0.089±0.015、0.091±0.010、0.111±0.017）上调（均P＜0.05）.10、15、20、25 J/cm2 UVA照射HDF后48 h,CatB的蛋白灰度值分别为0.99±0.07、1.49±0.14、1.89±0.08、2.07±0.06,均较对照组（0.60±0.05）升高（均P＜0.05）,CatB的mRNA表达也较对照组升高.结论 UVA致急性光损伤的皮肤成纤维细胞中CatB蛋白及mRNA表达均上调.     

紫外线对HaCaT细胞结合珠蛋白mRNA表达的影响

目的 观察紫外线照射对人角质形成细胞系HaCaT细胞表达结合珠蛋白的影响。方法 用逆转录-聚合酶链反应法检测长波紫外线UVA、中波紫外线UVB照射后HaCaT细胞各时相结合珠蛋白mRNA表达水平。结果 UVA12J/cm²照射后HaCaT细胞结合珠蛋白mRNA表达明显升高。照射后20min结合珠蛋白mRNA表达已开始升高,6h达第一高峰,48h出现第二高峰。照射后2h、4h、6h、24h、48h组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)UVB30mJ/cm²照射HaCaT细胞后结合珠蛋白mRNA表达也出现时相变化:4h达第一高峰,48h出现第二高峰。照射后20min、2h、4h、6h、12h、48h、72h组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 紫外线UVA、311nmUVB上调HaCaT细胞结合珠蛋白mRNA表达,随照射时间,结合珠蛋白mRNA表达呈时相变化。     

UVA辐射对HaCaT细胞分泌和表达趋化因子CXCL11/I-TAC的影响

目的 探讨UVA对IFN-γ和TNF-α诱导的HaCaT细胞分泌和表达CXCL11/I-TAC的影响。方法 用ELISA检测不同剂量UVA（2、4、8 J/cm2）照射后培养24 h的HaCaT细胞上清中CXCL11/I-TAC分泌水平。用实时荧光定量PCR检测CXCL11/I-TAC mRNA表达水平。结果 正常培养的HaCaT细胞仅分泌和表达微量的CXCL11/I-TAC蛋白或mRNA。当用10 μg/L的IFN-γ和TNF-α联合刺激后,HaCaT细胞分泌或表达的CXCL11/ I-TAC显著升高。UVA在2、4、8 J/cm2呈剂量依赖性抑制CXCL11/I-TAC的分泌或表达。结论 UVA照射抑制角质形成细胞分泌和表达CXCL11/I-TAC,从而在一定程度上降低了对Th1/Tc1细胞的趋化。     

MAPK信号通路调控长波紫外线诱导的皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K表达

【摘要】 目的 研究MAPK信号通路调控长波紫外线（UVA）诱导皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K（CatK）的表达。 方法 原代培养的皮肤成纤维细胞取自儿童包皮。Western印迹检测10 J/cm2 UVA照射前及照射后0.75、1.5、3和6 h皮肤成纤维细胞中磷酸化JNK（p-JNK）、JNK、磷酸化P38（p-P38）、P38蛋白的表达。800 nmol/L SP600125（SP）、10 μmol/L SB203580（SB）分别孵育皮肤成纤维细胞,实验分为无UVA照射的对照组、SP组、SB组及10 J/cm2 UVA照射的对照（UVA）组、UVA-SP组、UVA-SB组。先以Western印迹检测各组UVA照射后1.5 h磷酸化c-Jun（p-c-Jun） 和磷酸化MAPKAPK2（p-MAPKAPK2）表达,再以RT-PCR 和Western印迹检测各组照射后48 h CatK mRNA、蛋白的表达。 结果 皮肤成纤维细胞在UVA照射后0.75、1.5 h,p-JNK表达的灰度值分别为4.77 ± 0.19和4.68 ± 0.09,p-P38分别为2.44 ± 0.13、2.30 ± 0.04,均较照射前（p-JNK为3.2 ± 0.27,p-P38为1.61 ± 0.08）显著升高（均P ＜ 0.05）;而在照射后3、6 h的表达与照射前相比差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。p-c-Jun在UVA-SP组表达（2.55 ± 0.48）、p-MAPKAPK2在UVA-SB组表达（1.16 ± 0.12）均显著低于UVA组（分别为4.85 ± 0.96和2.46 ± 0.09）,均P ＜ 0.05。UVA-SP组、UVA-SB组CatK mRNA、蛋白的表达分别降为UVA组的38.9%、28.7%和55.7%、49.6%（P ＜ 0.05）,UVA-SP组CatK mRNA、蛋白的表达也均显著低于UVA-SB组（P ＜ 0.05）。 结论 JNK和P38信号通路在调控UVA上调的皮肤成纤维细胞CatK表达中起重要作用。     

他克莫司对UVA照射后HaCaT细胞增殖的影响

目的探讨不同浓度他克莫司(TM)对不同强度长波紫外线(UVA)照射HaCaT细胞24h和48h后细胞增殖活性的影响。方法将培养的HaCaT细胞分别行2,4和8J/cm2的UVA照射,且照射前1h分别加入50,500和5000pg/mL的TM,对照组分别加入50,500和5000pg/mL的TM,但不行UVA照射。各剂量组分别照射24h和48h后在倒置相差显微镜下观察细胞的形态变化,MTT法检测细胞的增殖活性。结果HaCaT细胞经UVA照射24h后,细胞连接松散,细胞折光性较未照射组差,部分细胞死亡、脱壁;与未经UVA照射组相比,细胞增殖受到抑制(P<0.05),加入TM组无明显变化(P>0.05);照射48h后细胞虽有大量增殖,但体积较小;与未经UVA照射组相比,细胞增殖明显(P<0.05),加入TM组细胞增殖受到抑制(P<0.05)。结论TM可抑制UVA照射HaCaT细胞引起的过度增殖,对UVA照射后的HaCaT细胞有保护作用。     

晚期糖基化终末产物对UVA照射皮肤成纤维细胞组织蛋白酶D表达及其活性的影响

目的：研究晚期糖基化终末产物（AGE）对长波紫外线（UVA）照射皮肤成纤维细胞组织蛋白酶D （CatD）表达和活性的影响。方法原代培养来自儿童包皮成纤维细胞。CCK?8法筛选对成纤维细胞无细胞毒性的AGE?牛血清白蛋白（BSA）浓度。分别以50、100、200 mg/L AGE?BSA孵育细胞24 h，以未处理细胞作为对照组，采用RT?PCR、Western印迹及荧光法检测AGE?BSA对细胞CatD表达和活性影响。将部分成纤维细胞分为6组，即对照组（正常皮肤成纤维细胞，不接受任何处理）、AGE?BSA组、BSA组、UVA组、UVA?AGE?BSA组、UVA?BSA组。AGE?BSA组加入最大无细胞毒性浓度AGE?BSA孵育24 h，BSA组加入相同浓度BSA孵育24 h，后3组除分别接受上述处理外再接受10 J/cm2 UVA照射。处理结束后，收集细胞mRNA和蛋白，采用RT?PCR、Western印迹及荧光法检测细胞CatD表达和活性。结果50、100、200 mg/L AGE?BSA对皮肤成纤维细胞增殖活性无显著影响。50 mg/L组、100 mg/L组、200 mg/L组细胞CatD mRNA水平分别为0.267±0.007、0.348±0.007、0.418±0.006，CatD蛋白水平分别为1.403±0.181、2.233±0.090、2.477±0.111，CatD活性分别为1.760±0.080、2.330±0.060、2.890±0.080，较相应对照组CatD mRNA（0.161±0.006）、CatD蛋白（0.903±0.200）以及CatD活性水平（1.100±0.090）均显著升高，均P<0.05。AGE?BSA呈剂量依赖性地刺激细胞CatD表达和活性。对照组、UVA组和UVA?AGE?BSA组细胞中CatD mRNA表达水平分别为0.155±0.005、0.480±0.005、0.394±0.008，蛋白表达水平分别为0.920±0.235、2.583±0.199、2.070±0.125，CatD活性分别为1.110±0.040、2.970±0.110、2.560±0.060；UVA组CatD mRNA水平、蛋白表达水平、酶活性均明显高于对照组（P<0.05），但UVA?AGE?BSA组3种指标水平均显著低于UVA组（P<0.05）。结论 AGE可升高未接受UVA照射的皮肤成纤维细胞CatD表达和活性，但AGE却抑制UVA照射上调的CatD表达和酶活性。     

表没食子儿茶酚没食子酸酯对UVA抑制真皮成纤维细胞胶原合成影响的研究

目的：探讨不同剂量长波紫外线（UVA）对体外培养的人真皮成纤维细胞胶原合成的影响,观察表没食子儿茶酚没食子酸酯（EGCG）对此影响的防护作用。方法：应用逆转录（RT）-PCR和光度检测法测定不同剂量UVA辐照及EGCG处理后,成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达水平及培养液中可溶性胶原羟脯氨酸含量的变化;并检测了UVA（10J／cm^2）辐照后6、24、48h羟脯氨酸含量的变化。结果：不同剂量UVA（1、5、10J／cm^2）辐照降低成纤维细胞的Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达及培养液中羟脯氨酸的含量;UVA（10J／cm^2）辐照后6h羟脯氨酸量最低,而后逐渐增高,于48h恢复至正常水平。EGCG以剂量依赖方式提高UVA（10J／cm^2）辐照后成纤维细胞的Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达及培养液中羟脯氨酸的含量,EGCG浓度为0．100g／L时差异均有显著性（P〈0．05）。结论：UVA辐照可抑制体外培养真皮成纤维细胞的胶原合成,而EGCG可减轻这种抑制作用。     

长波紫外线照射对培养人表皮黑素细胞与真皮成纤维细胞抗氧化活性影响

目的对比观察了长波紫外线（uvA）照射对培养人表皮黑素细胞与真皮成纤维细胞过氧化氢酶（CAT）蛋白表达以及DNA氧化产物8一羟基一脱氧鸟苷（8-oxo—dG）生成的影响,旨在认识除生成黑素以外黑素细胞具有的抗氧化机制。方法建立人成纤维细胞及人黑素细胞原代和传代培养。培养细胞给予不同剂量（0,3,5,25J,cm2）UVA照射,孵育3h后,用间接免疫荧光的方法检测CAT和8-oxo—dG的水平。结果3J／cm。UVA照射后,成纤维细胞CAT蛋白表达与假照射组对比明显增加（尺0．001）,8-oxo—dG荧光强度差别无统计学意义（降0．918）;黑素细胞中CAT蛋白表达与假照射组对比明显减少（P〈0．001）,8-oxo—dG荧光强度显著增加（P=0．002）。结论表皮黑素细胞对氧化应激存在固有的敏感性,且暴露UVA介导的氧化应激后黑素细胞缺乏适应性上调CAT表达,这些机制可能关系到白癜风皮损黑素细胞氧化损伤的发生。     

强脉冲光对皮肤成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达水平的影响

目的：研究强脉冲光（IPL）照射对体外培养的汉族人皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达水平的影响。方法：分离培养人原代成纤维细胞,采用波长为570～950nm、能量密度为15J／cm^2的IPL照射培养细胞。在照射结束后1、12、24及48h收集细胞总RNA,应用反转录（RT）-PCR法测定各时间点成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达水平。结果：在IPL照射后12、24及48h,成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达水平均明显上调（P〈0．05）,且表达水平随孵育时间的延长呈增加的趋势。结论：IPL可直接促进成纤维细胞中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA的转录,该研究部分阐明了IPL除皱的机制。     

连续长波紫外线照射对人皮肤成纤维细胞胞吞、降解弹性蛋白的影响

目的 研究连续长波紫外线（UVA）照射对人皮肤成纤维细胞胞吞和胞内降解细胞外弹性蛋白能力的影响,探讨光老化皮肤弹性蛋白堆积的机制。 方法 将人皮肤成纤维细胞分为空白对照组和连续UVA照射组,连续UVA照射组予连续7 d每天9.9 J/cm2 UVA照射以构建人皮肤成纤维细胞慢性光损伤模型。用流式细胞仪和衰老相关β半乳糖苷酶染色法分别检测细胞周期和细胞老化程度以验证模型。用荧光示踪技术和共轭淬灭技术,比较两组细胞对培养基中弹性蛋白的胞吞情况和对胞吞进入细胞的弹性蛋白的降解情况差异。 结果 与空白对照组相比,连续UVA照射组G1期细胞比例和衰老细胞比例明显增高,人皮肤成纤维细胞慢性光损伤模型构建成功。空白对照组人皮肤成纤维细胞在与弹性蛋白共孵育24、48、72 h后对弹性蛋白的胞吞率依次为（10.0 ± 1.4）%、（27.8 ± 4.2）%、（39.9 ± 4.1）%,连续UVA照射组人皮肤成纤维细胞在对应时间点的胞吞率依次为（9.9 ± 1.6）%、（28.3 ± 5.1）%、（42.0 ± 5.7）%,在相同时间点两组细胞对弹性蛋白的胞吞率差异均无统计学意义（均P > 0.05）。空白对照组人皮肤成纤维细胞在与弹性蛋白共孵育24、48、72 h后,胞内降解内吞入胞的弹性蛋白的细胞百分率依次为（7.7 ± 0.9）%、（22.8 ± 1.8）%、（33.9 ± 3.1）%,而连续UVA照射组人皮肤成纤维细胞在对应时间点依次为（4.2 ± 1.1）%、（16.5 ± 2.4）%、（26.7 ± 2.6）%,均较对照组显著降低（均P < 0.05）。 结论 连续7 d每日9.9 J/cm2 UVA照射对人皮肤成纤维细胞胞吞弹性蛋白的能力没有明显影响,却使细胞对胞吞的弹性蛋白的胞内降解能力下降。     

阿魏酸保护人成纤维细胞光源性氧化损伤的研究

目的观察阿魏酸是否可以保护人成纤维细胞,抑制长波紫外线（UVA）辐射对其所致的氧化损伤。方法加入200μg/mL阿魏酸孵育培养的成纤维细胞4h后,以5、10J／cm^2的UVA照射细胞,照光后继续培养24h。以四甲基偶氮唑蓝还原法（MTT）法检测细胞活性,比色法检测细胞上清液中的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）和丙二醛（MDA）含量变化。结果接受UVA照射后,成纤维细胞出现不同程度的增殖活性下降,活性下降程度与辐射强度成正比：阿魏酸干预处理可使细胞活性明显恢复。UVA照射组的SOD和GSH—Px水平明显下降、而MDA则明显上升：经阿魏酸预处理的细胞上清液中SOD和GSH—Px活性显著增加,而MDA水平明显下降（P〈0．05）。结论阿魏酸可明显保护人成纤维细胞免于UVA损伤,其具体机制可能与抑制氧化损伤和增强细胞抗氧化能力有关。     

葡萄籽原花青素及UVA照射对HaCaT细胞增殖活性的影响

目的 观察葡萄籽原花青素（GSPE）和长波紫外线（UVA）对人角质形成细胞（HaCaT细胞）增殖的影响,以探讨GSPE有无光保护作用。方法 MTT法分别测定不同浓度GSPE以及不同剂量UVA对HaCaT细胞增殖活性的影响。结果 GSPE浓度为5-200μg/m L时,对HaCaT细胞增殖影响不明显,浓度为500μg/m L及以上时抑制细胞生长,且有统计学意义;UVA剂量超过10 J/cm2有抑制作用且随剂量增高抑制作用越明显,且有统计学意义,25 J/cm2时其抑制率达37.65%;浓度为50、100μg/mL的GSPE对25 J/cm2 UVA照射后的HaCaT细胞的增殖有明显促进作用。结论25 J/cm2的UVA对HaCaT细胞的增殖有明显抑制作用,而合适浓度的GSPE对HaCaT细胞增殖活性有光保护作用。     

长波紫外线对人皮肤成纤维细胞自噬水平的影响

目的 探讨长波紫外线（UVA）对人皮肤成纤维细胞（HSF）自噬水平的影响。 方法 HSF慢性UVA照射分组：未照射组、5 J/cm2组、10 J/cm2组和20 J/cm2组,每天照射1次连续4 d;HSF急性照射分组：未照射组、5 J/cm2组、10 J/cm2组、30 J/cm2组和60 J/cm2组,单次照射。采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐分析法（MTT）检测细胞增殖活力。单丹酰戊二胺染色法（MDC）检测细胞自噬体。Western印迹法检测细胞LC3蛋白LC3-I向LC3-II转化分析（LC3-II/LC3-I）。 结果 与未照射组HSF比较,5、10、20 J/cm2慢性UVA照射组细胞增殖活力降低（F = 155.5,P < 0.05）。与未照射组HSF比较,5、10、30、60 J/cm2急性UVA照射后1、6和12 h,细胞增殖活力均降低（F值分别为1 335、1 649、2 774、均P < 0.05）。MDC法标记细胞自噬囊泡,与未照射组比较,5、10、20 J/cm2慢性照射均可上调细胞自噬水平（F = 748.62,P < 0.05）,而5、10、30、60 J/cm2急性照射后1、6和12 h对细胞自噬水平无明显影响（F值分别为0.014、0.004、0.002,均P ＞ 0.05）。5、10和20 J/cm2慢性照射组LC3-I向LC3-II转化（LC3-II/LC3-I）均增加（t 值分别为9.002、21.772、18.33,均P < 0.05）,细胞自噬水平上调。与未照射组比较,5、10、30、60 J/cm2急性照射后1、6和12 h,细胞LC3-I向LC3-II转化均无明显变化（F值分别为0.13、0.27、0.06,均P ＞ 0.05）,对细胞自噬水平无明显影响。 结论 慢性UVA照射可上调HSF自噬水平,急性UVA照射HSF自噬无明显变化。