Bevacizumab inhibit the growth of hepatocellular carcinoma cells and hepatoma carcinoma xenografts in nude mice

目的 探讨Bevacizumab对肝癌细胞株HepG2及荷肝癌裸鼠移植瘤生长的影响.方法 不同浓度Bevacizumab处理HepG2细胞48 h后,MTT法检测Bevacizumab对细胞增殖的抑制作用,设不加药物的HepG2细胞为对照组.建立荷肝癌细胞株HepG2裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为Bevacizumab组和空白对照组,观察用药前后肿瘤大小,计算抑瘤率;应用免疫组化计算肿瘤微血管密度.结果 Bevacizumab可抑制HepG2细胞增殖;与空白对照组比较,Bevacizumab可延缓移植瘤的生长,MVD值明显降低(P=0.000).结论 Bevacizumab可直接抑制肝癌细胞株HepG2的增殖;Bevacizumab主要通过抑制新生血管的形成而抑制移植瘤的生长.     

重组血管基膜衍生多功能肽抑制人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长和血管生成

目的:研究重组血管基膜衍生多功能肽rVBMDMP对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长和血管生成的抑制作用。方法:体外培养人肝癌HepG2细胞和人胚肝L-02细胞,MTT法测定不同浓度的rVBMDMP对HepG2细胞的选择性抑制增殖作用;人肝癌HepG2裸鼠移植瘤模型治疗实验评价rVBMDMP体内抗人肝癌作用;CD31免疫组化方法分析rVBMDMP处理的HepG2裸鼠移植瘤组织微血管面积(MVA)的比例。结果:rVBMDMP具有选择性抑制体外培养人肝癌HepG2细胞增殖作用,呈剂量依赖性,而对L-02细胞的增殖活性无明显的影响。rVBMDMP对HepG2裸鼠移植瘤生长具有显著抑制作用,呈剂量依赖性。1.0 mg/kg、3.0 mg/kg和10.0 mg/kg的rVBMDMP的肿瘤生长抑制率分别为:12.4%,55.8%和79.7%。其中10.0 mg/kg的rVBMDMP的肿瘤生长抑制率近似于20.0 mg/kg的5-氟尿嘧啶(5-FU,80.1%)。rVBMDMP处理的人肝癌HepG2裸鼠移植瘤组织的CD31染色阳性区域面积百分比随着rVBMDMP浓度的增加明显降低。结论:rVBMDMP对人肝癌HepG2细胞增殖...     

绿茶提取物EGCG对人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤超微结构的影响

目的通过复制人肝癌细胞株HepG2裸鼠皮下移植瘤模型,观察绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）干预对HepG2移植瘤的作用及其超微结构的影响。方法瘤体接种复制HepG2移植瘤模型,荷瘤裸鼠随机分组,实验组给予EGcG干预3用后处死裸鼠,剥离移植瘤,称重、测量长短径,计算抑瘤率;运用透射电镜观察移植瘤超微结构。结果实验组HepG2移植瘤体积、重量均明显小于对照组（P〈0．05）,抑瘤率达31．63％士4．09％;透射电镜观察,实验组HepG2移植瘤组织见不同时期凋亡细胞,部分形成凋亡小体,可见坏死瘤细胞及崩解细胞碎片;对照组呈现细胞形态怪并,核大畸形、电子密度不均,染色质明显,线粒体丰富等恶性肿瘤特有超微结构特点。结论EGCG对人肝癌细胞株HepG2裸鼠皮下移植瘤具有生长抑制作用;对比实验组与对照组移植瘤超微结构特点,推测EGCG可诱导HepG2移植瘤细胞凋亡。     

5-LOX siRNA对人肝癌HepG2细胞裸鼠瘤生长的作用和ERK的影响

目的研究5-脂氧合酶(5-LOX)siRNA转染人肝癌HepG2细胞后对裸鼠移植瘤生长的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路的影响。方法将5-LOX siRNA转染人肝癌HepG2细胞,验证在细胞水平5-LOX表达受抑制。再用转染后的细胞建立裸鼠移植瘤模型。裸鼠分3组:转染组(接种5-LOX siRNA转染的HepG2)、转染空载体组(接种空白质粒转染的细胞)、未转染组(接种未转染的HepG2)。接种21 d后处死裸鼠,测量移植瘤体积。Westernblot和RT-PCR检测瘤体5-LOX、ERK1/2的蛋白和mRNA表达。结果转染组肿瘤平均体积与转染空载体组、未转染组比较明显减小(P<0.01),检测瘤体5-LOX、ERK1/2蛋白水平及mRNA表达量明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论抑制5-LOX表达可显著抑制肝肿瘤生长,测得ERK1/2表达下降,提示其作用机制可能通过抑制ERK信号转导途径抑制肿瘤增殖。     

DADS抑制裸鼠肝癌HePG2细胞移植瘤的实验研究

目的：初步探讨二烯丙基二硫化物(DADS)对肝癌细胞的抑制效应及其相关机制。方法：以HepG2细胞为研究对象,进行裸鼠成瘤实验。观察DADS对裸鼠成瘤的影响并绘制生长曲线。应用免疫组织化学方法和Western 印迹技术检测细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达,应用TUNEL检测细胞凋亡情况。结果：DADS可抑制裸鼠移植瘤的生长。TUNEL实验结果提示DADS可促进HepG2细胞凋亡。DADS也可促进促凋亡蛋白caspase-3表达并抑制抑凋亡蛋白bcl-2表达和PCNA的表达。结论：DADS可抑制肝癌HepG2细胞在裸鼠体内的生长,与促进细胞凋亡和抑制细胞增殖有关。     

Effects of 5-LOX siRNA on growth and ERK signal transduction pathway of HepG2 cell xenografts in nude mice

目的 研究5-脂氧合酶(5-LOX)siRNA转染人肝癌HepG2细胞后对裸鼠移植瘤生长的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路的影响.方法 将5-LOX siRNA转染人肝癌HepG2细胞,验证在细胞水平5-LOX表达受抑制.再用转染后的细胞建立裸鼠移植瘤模型.裸鼠分3组:转染组(接种5-LOX siRNA转染的HepG2)、转染空载体组(接种空白质粒转染的细胞)、未转染组(接种未转染的HepG2).接种21 d后处死裸鼠,测量移植瘤体积.Western blot和RT-PCR检测瘤体5-LOX、ERK1/2的蛋白和mRNA表达.结果 转染组肿瘤平均体积与转染空载体组、未转染组比较明显减小(P<0.01),检测瘤体5-LOX、ERK1/2蛋白水平及mRNA表达量明显下降(P<0.05,P<0.01).结论 抑制5-LOX表达可显著抑制肝肿瘤生长,测得ERK1/2表达下降,提示其作用机制可能通过抑制ERK信号转导途径抑制肿瘤增殖.     

苦参素及Mir-181a对人肝癌细胞耐药株HepG2/ADM裸鼠移植瘤中耐药蛋白P-gp的影响

目的探讨苦参素(oxymatrine,OM)及Mir-181a在体内环境中对人肝癌细胞耐药株HepG2/ADM裸鼠移植瘤中耐药蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响。方法选用人肝癌细胞耐药株HepG2/ADM细胞在裸鼠腋下接种,创建裸鼠皮下移植瘤模型。将42只雌性裸鼠随机分成6组(每组7只):miR-181amimic组、苦参素组、苦参素+miR-181amimic组、阿霉素组、mirna mimic NC组、空白对照组。药物干预18d后,取出瘤体,用公式计算肿瘤体积。HE染色法观察组织的细胞病变情况,免疫组化及Western blot法检测耐药指标P-gp蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测P-gp对应耐药基因ABCB1表达的情况。结果药物干预18d后,与空白对照组相比,miR-181amimic组的P-gp蛋白及ABCB1基因的表达提高,而苦参素组的P-gp蛋白及ABCB1基因的表达降低;与miR-181amimic组相比,苦参素+miR-181amimic组P-gp蛋白及ABCB1基因的表达降低。结论苦参素在体内环境中不仅可以抑制人肝癌耐药移植瘤的生长,还可提高人肝癌耐药细胞对化学药物的敏感性,而miR-181a在体内环境中可以促进人肝癌耐药移植瘤的生长,提高人肝癌耐药细胞的多药耐药性。     

熊胆粉对肝癌移植瘤裸鼠Pim1、Pim2、bcl-xl的影响

目的观察熊胆粉对肝癌移植瘤裸鼠Pim1、Pim2、bcl-xl表达的影响。方法用人肝癌细胞株HepG2制作皮下移植瘤裸鼠模型,随机分为熊胆粉组和对照组,3周后剥取肿瘤,RT-PCR、免疫组织化学检测Pim1、Pim2、bcl-xl的表达。结果熊胆粉组可抑制Pim1、Pim2、bcl-xl的mRNA和蛋白表达,与对照组比较,差异具有统计学意义。结论熊胆粉通过下调Pim1、Pim2、bcl-xl的表达,抑制移植瘤裸鼠肝癌的生长。     

白藜芦醇对裸鼠移植性肝癌的抑制作用

目的:探讨白藜芦醇对裸鼠移植性肝癌的抑制作用。方法:利用HepG2细胞裸鼠移植瘤模型,研究白藜芦醇的体内抑瘤作用以及其对移植瘤微血管密度的影响。结果:白藜芦醇治疗组能不同程度抑制裸鼠肝脏移植瘤的生长,Res腹腔注射2周后,50mg/kgRes处理组瘤体显著小于生理盐水(NS)组和0.1%DMSO组且无明显的毒性反应;Res50mg/kg处理组MVD值(18.5±3.2)与对照组的MVD值(44.2±4.1)相比明显降低,差异有统计学意义。结论:Res可抑制人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长,降低移植瘤MVD,从而抑制肝癌的侵袭转移,对裸鼠的主要脏器无明显毒副作用。     

选择性近红外激光热疗对人肝癌细胞抑制作用的研究

目的观察选择性近红外激光热疗对人肝癌HepG2细胞体外和体内裸鼠成瘤模型的治疗效果。方法采用不同功率（1、2、3、4 W）的近红外激光照射人肝癌HepG2细胞和肝癌裸鼠成瘤模型,观察HepG2细胞形态变化、肿瘤模型组织病理改变、瘤体体积变化等,评估该治疗方法的效果。结果人肝癌HepG2细胞及裸鼠成瘤模型经近红外激光热疗作用后,细胞明显变形、坏死,细胞增殖受到显著抑制,1、2、3、4 W照射组的HepG2细胞抑制率分别为54.15%、64.13%、68.70%和80.72%。裸鼠种植的肿瘤出现明显坏死,其肿瘤体积显著减小,1、2、3、4 W照射组的肿瘤体积抑制率分别为66.34%、81.54%、94.29%和98.26%。结论近红外热疗能抑制肝癌HepG2细胞增殖,使肝癌肿瘤模型体积缩小,是治疗肝癌的一种有效方法。     

Bevacizumab对肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的探讨Bevacizumab对肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响。方法应用免疫细胞化学法检测肝癌细胞株HepG2中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFRs）蛋白的表达；ELISA法检测HepG2细胞培养上清液中VEGF蛋白的表达；Bevacizumab处理HepG2细胞48h后，MTT法检测Bevacizumab对细胞增殖的抑制作用，用流式细胞仪检测并分析细胞凋亡变化。设不加药物的HepG2细胞为对照组。结果HepG2细胞中VEGF和VEGFR蛋白呈阳性表达，其细胞培养上清液中存在VEGF蛋白分泌；Bevacizumab可抑制HepG2细胞增殖；并可诱导HeF，G2细胞的凋亡，凋亡率为（17．04±0．14）％，明显高于对照组（2．85±0．08）％（P〈0．05）。结论Bevacizumab町直接抑制肝癌细胞株HepG2的增殖，并诱导其凋亡；为Bevacizumab除抗血管生成之外的抗肿瘤作用机制提供新的研究依据；为Bevacizumab在肝细胞癌治疗的应用提供理论依据。     

沉默中期因子对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的  探讨中期因子（MDK）在肝细胞肝癌（HCC）中的表达及对肿瘤细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法  选取2015年1月-2016年10月该院收治的50例肝癌患者组织标本，免疫组织化学染色分析组织中MDK的表达。利用沉默核糖核酸（siRNA）沉默人肝细胞癌HepG2细胞内MDK表达，分别采用CCK-8、流式细胞仪及插入式细胞培养皿、穿透小室（Transwell）检测沉默MDK后HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭能力变化。结果  肝癌组织中MDK蛋白的表达水平较癌旁组织提高（χ2=19.643，P =0.000）；在HepG2细胞中，沉默MDK的表达可抑制HepG2细胞增殖（F =22.204，P =0.037）和侵袭（t =5.611，P =0.008）能力，并提高HepG2细胞的凋亡比例（t =5.702，P =0.006）。结论  MDK在肝癌中表达升高，沉默肝癌HepG2细胞内MDK表达能够抑制肝癌细胞生长和侵袭。

     

射频消融联合表阿霉素对兔肝VX2肿瘤微血管密度和细胞增殖的影响

目的探讨射频消融联合表阿霉素对兔肝VX2肿瘤微血管密度和细胞增殖的影响。方法制作兔肝VX2肿瘤模型,采用射频消融、局部注射表阿霉素和两者联合的治疗方式,运用免疫组织化学SABC法检测治疗后肿瘤组织中CD31标记的微血管密度(microvessel density,MVD)和增殖细胞核抗原(PCNA)。结果射频消融联合表阿霉素治疗组MVD和PCNA较单纯射频消融组和单纯药物组明显降低,有显著性差异(P<0.05)。结论射频消融联合表阿霉素治疗能较好的抑制肿瘤血管生成和肿瘤细胞增殖。     

美洛昔康联合奥曲肽增强对肝癌生长的抑制作用

目的美洛昔康和奥曲肽以各自不同的作用机制均能抑制肝癌生长,两者联用其抗肿瘤作用将如何,并不清楚.从不增加不良反应但又能最大限度增加抗肿瘤作用的角度考虑,我们将探讨美洛昔康联合奥曲肽能否协同抑制肝癌细胞生长.方法采用 3H-TdR掺入法探讨美洛昔康和奥曲肽单独或联合应用对人肝癌细胞株HepG2生长的影响,根据中效原理判断两者相互作用的关系;并观察它们对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的影响.结果美洛昔康联合奥曲肽在体外能显著抑制HepG2肝癌细胞的生长,其浓度与 3H-TdR掺入值呈负相关(r=-0.980, P<0.01).美洛昔康联合奥曲肽能显著抑制人肝癌裸鼠原位移植瘤生长,抑瘤率为75.4%,较单药美洛昔康抑瘤率55.1%明显增高(P<0.05 ).各组裸鼠的体内实验中未见明显不良反应.结论体外细胞培养及裸鼠原位移植瘤实验均表明:美洛昔康联合奥曲肽能显著增强抑制肝癌生长的作用,美洛昔康和奥曲肽呈协同作用.     

miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响

目的：研究 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移能力的影响及其可能机制。方法将 miR-98mimics、mimics-NC、miR-98inhibitor、inhibitor-NC 瞬时转入肝癌 HepG2细胞内,应用噻唑盐( MTT)法、流式细胞仪、Tr-answell 小室实验检测 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响,进一步用 Western blot 法检测各组 Bcl-2蛋白的表达水平。结果 MTT 实验表明 miR-98过表达后,肝癌细胞的增殖能力明显低于对照组;Annexin V-FITC / PI 凋亡实验证实上调 miR-98表达后,细胞的凋亡率较对照组升高;Transwell 小室实验表明上调 miR-98可使肝癌细胞的侵袭、迁移能力减弱。而当 miR-98被抑制后,肝癌HepG2细胞的增殖及侵袭、迁移能力则明显增强,凋亡率则下降。 Western blot 实验检测发现 miR-98过表达后,Bcl-2的表达降低。结论 miR-98可能在肝癌的发生、发展中发挥着抑癌基因的作用;miR-98可能通过下调 Bcl-2的表达,促进肝癌 HepG2细胞凋亡。     

蛇床子素在体外对人肝癌细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的：研究蛇床子素在体外对人肝癌HepG2、SMMC-7721、Bel-7402细胞增殖和侵袭的抑制作用。方法：取人肝癌细胞进行复苏,传代,培养。实验分为空白组和给药组,给药组给予不同浓度梯度（50、100、150、200 μmol/L）蛇床子素药液处理。利用MTT法和细胞集落实验测定不同浓度蛇床子素体外抑制人肝癌细胞增殖作用;利用细胞划痕实验和Transwell小室实验测定不同浓度蛇床子素对人肝癌细胞的迁移和侵袭的抑制作用;利用蛋白质印迹（Western blot）法评价蛇床子素对人肝癌细胞中上皮细胞-间充质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin和细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2（MMP-2）表达情况的影响。结果：蛇床子素能在体外抑制人肝癌细胞HepG2、SMMC-7721 和Bel-7402 的增殖,IC50 值分别为147.62、141.57、179.67 μmol/L,呈现一定的浓度依赖性。与空白组相比,给药组在蛇床子素50、75、100 μmol/L浓度条件下可以显著抑制人肝癌细胞增殖（P ＜0.05）。与空白组相比,给药组人肝癌细胞的迁移和侵袭能力显著降低（P ＜0.05）;给药组细胞MMP-2 蛋白的表达量降低（P ＜0.05）,E-cadherin蛋白的表达量增加（P ＜0.05）。结论：蛇床子素在体外对人肝癌细胞增殖和侵袭具有抑制作用,其抑制侵袭作用机制与下调MMP-2 蛋白和激活E-cadherin蛋白的表达有关。     

胺碘酮对人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其临床意义

目的:研究胺碘酮在体外对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响及细胞周期分布的特点,并探讨其可能的作用机制。方法:应用噻唑蓝比色法(MTT)法检测经不同浓度的胺碘酮或5-氟尿嘧啶(5-Fu)作用后,HepG2细胞的吸光度值(A)、增殖抑制率,并应用PI单染流式细胞检测技术测定HepG2细胞周期分布的特点,总结胺碘酮对HepG2细胞增殖及细胞周期分布的影响。结果:HepG2细胞经胺碘酮(浓度0.5-4.5 mg/L)作用48 h后,细胞逐渐变小、折光率减弱,漂浮细胞逐渐增多,细胞生长受到明显抑制,并呈现明显的剂量依赖效应关系和时间依赖效应关系。在抑制率及细胞周期分布特点参数上,胺碘酮组与空白对照组相比有显著的统计学差异(P<0.01),而与5-Fu干预组相比,二者之间无统计学差异(P>0.05)。同时胺碘酮使细胞周期分布发生明显变化,表现为S期细胞比例下降,G0/G1期和G2/M期细胞比例上升;与5-Fu干预组呈现出相似的趋势。结论:胺碘酮能抑制肝癌HepG2细胞的增殖,并呈现出明显的剂量和时间依赖效应关系。胺碘酮可望为肝癌的新的辅助化疗特别是合并心律失常的肝癌患者的化疗提供新的思路。     

溪黄草对肝癌HepG2细胞基因表达谱的影响

目的 采用表达谱芯片研究溪黄草水提取物对人肝癌细胞HepG2相关基因的影响,探讨溪黄草水提取物对肝癌作用的可能机制.方法 体外培养人肝癌细胞HepG2,加入溪黄草水提取物(9.54 mg/mL)作用24 h后,表达谱芯片检测溪黄草作用后HepG2基因的改变,并用RT-PCR和Western blot验证芯片的结果.结果 相差显微镜下观察,发现与阴性对照组相比,溪黄草水提取物作用后HepG2细胞数量明显减少.表达谱芯片结果显示,溪黄草水提取物(9.54 mg/mL)作用24 h后264个基因比阴性对照组上升2倍以上,194个基因比阴性对照组下降2倍以上.基因本体(GO)和KEGG分析表明溪黄草可上调HepG2细胞DUSPs、IGFBPs家族多个基因,下调MCMs家族多个基因.RT-PCR检测发现与阴性对照组相比,溪黄草处理组DUSP1和IGFBP1升高,FXR和ALDH8A1下降(P＜0.01),与表达谱芯片结果一致.Western blot结果发现溪黄草处理组DUSP1蛋白表达也显著高于阴性对照组(P＜0.01).结论 表达谱芯片研究表明溪黄草可通过调控多种基因而抑制肝癌细胞增殖.     

超声微泡造影剂增强重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL感染肝癌细胞的实验观察

目的 探讨携带可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)基因的重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL对肝癌细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用,以及采用超声辐照联合微泡造影剂介导rAAV-sTRAIL转染肝癌细胞的有效性.方法 单纯重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL感染肝癌细胞株HepG2,以及利用超声辐照联合微泡造影剂介导重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL感染HepG2细胞,分别以RT-PCR方法和Westen印迹法检测细胞内sTRAIL基因mRNA及蛋白表达量,噻唑蓝法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL可有效转染HepG2细胞,sTRAIL mRNA表达水平在微泡造影剂组高于单纯病毒组,二者差异有统计学意义(P<0.05);rAAV-srrRAIL可抑制HepG2细胞增殖,其抑制率在微泡造影剂组高于单纯病毒组,二者差异有统计学意义(P<0.05);rAAV-sTRAIL可诱导HepG2细胞凋亡,其凋亡率在微泡造影剂组高于单纯病毒组,二者差异有统计学意义(P<0.05).结论 构建出的重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL在肝癌细胞中能有效表达,sTRAIL基因对肝癌细胞有明显的抑制增殖和促凋亡作用;联合超声微泡造影剂及低强度超声,可有效提高腺相关病毒载体在肝癌细胞中的感染率,从而增强sTRAIL对肝癌细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用.     

HBV影响甲磺酸阿帕替尼治疗肝细胞癌效果的机制研究

目的 研究乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染对阿帕替尼干预下肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、凋亡的影响。 方法 体外培养阿帕替尼干预的人肝癌HepG2和HepG2.215细胞,细胞计数试剂（cell counting Kit-8,CCK-8）法检测细胞增殖抑制作用,细胞划痕实验检测细胞迁移力,流式细胞术检测细胞凋亡率。 结果 阿帕替尼干预后的HepG2细胞组划痕愈合率明显低于HepG2.215细胞,早期凋亡率、晚期细胞凋亡率及总凋亡率均高于HepG2.215细胞组,差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 HBV状态影响甲磺酸阿帕替尼抑制肝癌细胞迁移和诱导细胞凋亡的效果,阿帕替尼在HBV阴性HCC细胞中可能更好地发挥抗肿瘤作用。