原核增强子样序列的筛选及其应用研究

目的 从大肠埃希菌C600株染色体基因组中筛选原核增强子样序列,构建携带原核增强子样序列的表达载体,探讨其对干扰素基因表达的影响.方法 采用氯霉素乙酰转移酶基因（CAT）作为报告基因,从大肠埃希菌C600株染色体基因组中筛选具有原核增强子样活性的序列,构建携带增强子样序列的表达载体,表达干扰素基因和检测干扰素活性.结果 从大肠埃希菌C600株染色体基因组中筛选到一个原核增强子样序列3A,其正、反向增强活性分别能提高β-半乳糖苷酶活性7.11和2.93倍.证实它的增强活性体现在转录水平;用原核增强子样序列3A的功能区3P3构建的表达载体,其表达的IFN-α2b型干扰素比原表达载体活性高3.7倍.结论 从大肠埃希菌C600株染色体基因组中筛选到一个原核增强子样序列3A,携带有原核增强子样序列的表达载体可提高干扰素基因的表达水平.     

大肠埃希菌的耐药特性及其产超广谱β-内酰胺酶的分析

观察大肠埃希菌的耐药特性及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况，为临床正确选择抗生素提供药敏依据。用微量稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)，用ESBLs表型确证试验检测出产ESBLs的大肠埃希菌。共检出314株大肠埃希菌。对其中298株大肠埃希菌进行了ESBLs检验，检出产ESBLs菌81株，检出率为27．2％；81株产ESBLs菌对多种药物耐药率较高，除亚胺培南、头孢哌酮，舒巴坦、庆大霉素和阿米卡星外，大肠埃希菌产ESBLs株对其他9种抗生素的耐药性明显高于非产ESBLs株。大肠埃希菌产ESBLs率高，应引起临床高度重视，对检测出的大肠埃希菌均应进行ESBLs检测，产ESBLs细菌有较高的交叉耐药性和多重耐药性，对亚胺培南和头孢哌酮，舒巴坦的敏感性好。     

程序死亡蛋白1基因的克隆及原核表达

目的 克隆人程序死亡蛋白(PD-1)基因并构建PD-1蛋白的原核表达质粒,在大肠埃希菌中进行表达.方法 用RT-PCR的方法从慢性乙肝患者外周血淋巴细胞总RNA中逆转录得到PD-1基因的cDNA,构建PD-1基因的原核表达质粒,在大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达并纯化.用SDS-PAGE、DNA测序、氨基酸测序等方法对表达蛋白进行鉴定.结果 克隆到PD-1基因编码区全长序列cDNA,经DNA测序与已报道的序列同源性达99.8%.构建得到PD-1的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达,纯化获得纯度较高的PD-1蛋白.氨基酸测序证明表达蛋白的正确性.结论 成功克隆人PD-1基因,在大肠埃希菌中获得表达,得到纯化的PD-1蛋白,为进一步研究PD-1蛋白的功能及应用打下基础.     

重组人BMP-2的基因克隆及原核表达

目的 构建重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)的原核表达质粒并在大肠埃希菌中诱导表达.方法 采用RT-PCR法,从骨髓细胞总RNA中扩增获得人BMP-2成熟肽cDNA,将其克隆入表达载体pBV220,构建BMP-2的重组原核表达质粒.重组质粒经酶切和测序鉴定后,在大肠埃希菌中诱导表达目的蛋白,表达产物采用Western印迹和ELISA进行鉴定.结果 测序表明,重组基因序列与人BMP-2成熟肽基因完全一致.Western印迹和ELISA检测显示,表达产物的相对分子量(Mr)与预期结果相符,与相应抗体有结合活性.结论 获得了人BMP-2成熟肽的编码基因,并构建了含有该基因的重组质粒pBV220/BMP-2,在大肠埃希菌中可高效表达人BMP-2.     

人β防御素-2稳定表达细胞株的建立及其表达产物对耐药大肠埃希菌抗菌活性研究

目的建立稳定表达人β防御素2(hBD2)的COS-7细胞株,并检测其表达产物对耐药大肠埃希菌的抗菌活性。方法将重组hBD2真核表达载体pCMV-hBD2通过脂质体转染COS-7细胞,筛选稳定表达hBD2单克隆细胞株;经RT-PCR和Western blot检测稳定转染后目的基因在转录水平和蛋白水平的表达;用微量稀释法检测稳定转染后细胞培养上清液对耐药大肠埃希菌的抗菌作用。结果筛选出稳定表达hBD2的COS-7细胞株,检测到目的基因在转录水平和蛋白水平均有表达,且其表达产物使耐药大肠埃希菌存活率降至15%。结论建立了稳定表达hBD2的COS-7细胞株,其表达产物对耐药大肠埃希菌具有一定的抗菌活性。     

水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E的表达及免疫性鉴定

水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白中糖蛋白E(gE)的免疫活性最强,本试验成功构建了VZV糖蛋白E的原核表达载体,所表达的重组蛋白可以有效激活小鼠的免疫反应。1方法构建表达融合蛋白的重组原核表达载体pGEX-VgE,然后用IPTG在大肠埃希菌中诱导表达。经过亲和层析柱纯化后,得到VZV糖蛋     

超广谱β-内酰胺酶代表株的临床分布和药敏

大肠埃希氏菌是临床感染最广泛的细菌,这些菌对很多药物的敏感性很高,容易治疗。近来由于抗菌药物的不断开发及临床大量应用,出现了一些产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的菌株,而大肠埃希氏菌是这类细菌的代表株,因而有必要对它做出一些调查研究。为了解大肠埃希氏菌在重庆地区的耐药特性,以便临床医生合理选用抗生素和有效控制ESBL感染提供依据,将临床分离的大肠埃希氏菌对14种抗生素的耐药性进     

密码子优化提高狂犬病病毒CTN-1株核蛋白在大肠埃希菌中的表达

目的:获取具有生物活性的狂犬病病毒核蛋白在大肠埃希菌表达系统中高效表达。方法:实验使用密码子优化技术重新编码狂犬病病毒CTN-1株核蛋白基因,人工合成全长基因并克隆至pET-43.1a表达载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)株中诱导表达,并使用Western blot检测其反应原性。结果:诱导后SDS-PAGE分析显示...     

Stxl-A亚单位的原核表达、复性及抗原性鉴定

目的 构建志贺毒素1-A亚单位(Stxl-A)原核表达质粒,使其在大肠埃希菌中表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其抗原性及应用价值.方法 以大肠埃希菌0157 DNA为模板扩增Stxl-A基因,重组克隆入原核表达载体pET32a( ),转化大肠埃希菌B121(DE3),异丙基硫代-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,包涵体经镍柱柱上复性和纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定.结果 重组质粒经双酶协鉴定和测序分析后证实构建成功.重组蛋白经十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,其表达量占细菌总蛋白量的15%左右,主要以包涵体形式存在,通过镍柱柱上复性获得纯化的可溶性Stxl-A蛋白,纯度达95%以上,Western印迹检测显示特异性条带.结论 成功构建了pET32a( )/Stxl-A重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Stxl-A蛋白,为进一步制备抗Stxl-A抗体和研究其生物学功能奠定了基础.     

益生菌抑制大肠埃希菌K1株黏附与侵袭的实验研究

目的评价三联活菌片中的益生菌对大肠埃希菌K1株在肠上皮黏附和侵袭的抑制作用。方法将大肠埃希菌K1株与Lovo细胞共孵育,采用黏附性抑制和竞争性排除方法,检测大肠埃希菌K1株黏附侵袭于Lovo细胞的数量,并采用流式细胞术分析益生菌对大肠埃希菌K1株诱导的细胞凋亡的抑制作用。将Sprague Dawley乳鼠随机分为实验组（益生菌和致病菌）与对照组（致病菌）。应用活菌计数法,对各组乳鼠肠道和血液中大肠埃希菌K1株进行定量检测,观察益生菌对大肠埃希菌K1株血行转移的拮抗作用。结果益生菌在体外能显著抑制大肠埃希菌K1株黏附侵袭于Lovo细胞（P〈0.01）,其抑制作用呈剂量依赖性;益生菌能显著降低大肠埃希菌K1株诱导的细胞凋亡（P〈0.01）;益生菌能显著抑制大肠埃希菌K1株的生长与血行转移,患菌血症的乳鼠数量显著降低（P〈0.01）。结论三联活菌片中益生菌能显著抑制大肠埃希菌K1株对肠上皮的黏附损伤和血行转移。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.