超高效液相色谱-串联质谱法测定人血清美罗培南浓度的研究

<正>美罗培南是一种抗菌谱较广的碳青霉烯类抗生素,对多种革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌等病原体具有很强的抗菌活性,临床上主要用于多重耐药菌感染的治疗^[1-2]。静脉给予美罗培南后,其在体内分布广,大部分药物以原型经肾脏排出,半衰期约为1 h^[3]。美罗培南属于时间依赖性抗生素,具有相对较长的抗生素后效应,且血浆中的抗生素浓度超过致病菌的最低抑制浓度才能达到足够的杀菌效果;     

超高效液相色谱-串联质谱法测定新生儿血浆中氟康唑的浓度

目的建立快速测定新生儿血浆中氟康唑浓度的方法。方法以非那西丁为内标,用乙腈沉淀蛋白处理血浆。色谱柱:Eclipse Plus C18RRHD(2.1 mm×100 mm,1.8μm);流动相:0.1%甲酸-甲醇梯度洗脱;流速:0.3 ml/min;进样量:1μl。采用电化学喷雾离子源正离子模式电离,多反应监测模式检测,定量分析离子对分别为质核比(m/z)307.1→220.0(氟康唑),m/z 180.1→110.0(非那西丁)。结果该方法氟康唑在0.1001～60.0600μg/ml范围内有良好线性关系,定量下限为0.01μg/ml,准确度为82.5%～101.2%,提取回收率为85.0%～109.0%。结论该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高,适用于新生儿血浆中氟康唑浓度的测定。     

超高效液相色谱-质谱联用技术在药代动力学研究中的应用

超高效液相色谱是一种柱效高、发展前景好的液相色谱技术,与HPLC相比,具有鉴别能力强、灵敏度高、分离度好等诸多优势.本文查阅近年来的相关文献资料,对超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS/MS)的发展状况及近年来该技术在药代动力学方面的应用作一综述.     

高效液相色谱-串联质谱同时测定人血浆中8种抗抑郁药的浓度

目的：建立同时测定血浆中米氮平、舍曲林、帕罗西汀、度洛西汀、阿米替林、去甲阿米替林、艾司西酞普兰及劳拉西泮8种抗抑郁类药物浓度的高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）。方法：内标为度洛西汀-d7,使用甲醇将血浆样品进行蛋白沉淀后分析。Waters Cortecs C18(2.1mm×50.0mm,2.7μm)色谱柱, 0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸甲醇溶液梯度洗脱,流速0.5mL/min,电喷雾阳离子源。通过实验对这一方法的专属性、精密度、回收率等进行考察。结果：米氮平、帕罗西汀、艾司西酞普兰在1~200ng?mL-1;舍曲林、去甲阿米替林、度洛西汀、阿米替林及劳拉西泮在2.5~500 ng?mL-1范围内均表现良好的线性关系,回收率在94.70%~101.31%之间,精密度（RSD）小于15%。结论：该方法在临床同时测定服药患者血液中抗抑郁药物的浓度时相较其他方法具有快速、灵敏、准确的特点,且具有专属性强,重复性好,稳定性高的优点。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中厄贝沙坦

目的 建立快速、灵敏的液相色谱-串联质谱法测定人血浆中厄贝沙坦的浓度.方法 50μL血浆样品经乙腈沉淀蛋白处理后,以乙腈-水-甲酸(90:10:0.25)为流动相,Zorbax SB C18柱分离,通过电喷雾离子源四极杆串联质谱,以选择反应监测(SRM)方式进行检测.结果 测定血浆中厄贝沙坦方法的线性范围为2.0～5 000 μg&#183;L-1定量下限为2.0 μg&#183;L-1.日内、日间精密度(RSD)均小于8.3%,准确度(RE)在&#177;4.1%以内.厄贝沙坦和内标替米沙坦的回收率分别为90.9%和90.4%;每个样品测试时间仅为3.6 min.应用此法研究了18名健康受试者单剂量po 150 mg厄贝沙坦片后的药动学特点.结论 该法选择性强,灵敏度高,适用于厄贝沙坦的临床药动学研究.     

液相色谱-串联质谱法测定兔血浆中葛根素的浓度

目的 建立测定兔血浆中葛根素浓度的液相色谱-串联质谱法.方法 血浆加入内标橙皮苷后经固相萃取处理,采用Aglient C18柱(150 mm×2.1 mm,3.5 μm)分离,流动相为甲醇-10 mmol·L-1醋酸铵缓冲液-乙腈(体积比70∶20∶10),流速为0.2 mL·min-1.样品在串联质谱中经ESI源离子化后以多反应离子监测方式测定.结果 葛根素在10～3 000 ng·mL-1线性良好(r=0.9986),检测限为10 ng·mL-1,回收率为99.91%～103.92%,绝对回收率为91.33%～100.40%,日内、日间变异(RSD)均≤15%,色谱峰保留时间为1.67 min.结论 方法灵敏、准确、快速、特异性强,适用于中药葛根素的药动学研究.     

液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中黄体酮的浓度

目的建立测定大鼠血浆中黄体酮的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法。方法血浆样品采用液-液萃取法,经正己烷-二氯甲烷-异丙醇(100∶50∶5,V/V/V)提取后,以甲醇-水(75∶25,V/V)为流动相,以Hypersil ODS柱(50 mm×2.1 mm,5μm)为分析柱,采用ESI源以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测。用于定量分析的离子反应为m/z 315.4→m/z(97.0+109.2)(黄体酮)和m/z 385.4→m/z 267.4(醋酸甲地孕酮,内标)。结果黄体酮血浆浓度测定方法的线性范围为0.5~200 ng/ml,日内、内间精密度(RSD)均<6.7%,准确度(RE)在±6.2%之间。结论该方法分析时间短、操作简便、灵敏度高、专属性强,适用于黄体酮的药动学研究。     

高效液相色谱-荧光法测定丙泊酚的血浆浓度

目的：建立灵敏可靠的高效液相色谱-荧光法进行丙泊酚血浆浓度的测定，考察丙泊酚静脉给药后母婴血浆浓度差异。方法：静脉注射丙泊酚注射液5min后，立即取母血、脐动脉血和脐静脉血，3500rpm离心10min，分离血浆。血浆样本用甲醇沉淀蛋白、高速离心后，取上清液采用高效液相色谱法进行分析，以甲醇-水（80：20，V/V）为流动相，流速1．0ml／min，荧光检测激发波长276nm，发射波长310nm。采用SPSS13．0软件对结果进行统计学分析。结果：丙泊酚血浆浓度在0．1—5．0μg／ml范围内线性关系良好（r=0．9975）；低、中、高三个浓度日内变异RSD为4．49％--10．61％。脐静脉血、脐动脉血和母血中丙泊酚血浆浓度分别为（0．83±025）、（0．78±0．24）和（2．28±0.70）μg/ml。经统计学分析母血和脐血中丙泊酚血浆浓度差异显著（P〈0．01），而脐动脉血和脐静脉血中丙泊酚血浆浓度的差异无统计学意义（D〉0．05）。结论：本测定方法准确简便，灵敏可靠，适用于丙泊酚血浆浓度的分析测定。丙泊酚静脉滴注5min后，新生儿的血浆浓度明显低于母体血浆浓度。     

液相色谱-串联质谱法测定阿德福韦及其前体化合物在大鼠血浆中的浓度

目的 建立测定大鼠血浆中阿德福韦（PMEA）及其前体药物APD2、PMEA-CA的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法。方法 分别采用不同的血浆样品处理方法和色谱条件测定PMEA及其前体化合物。测定PMEA时,血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,用Discovery C₁₈柱分离,以甲醇-0.5％甲酸（20∶80,V/V）为流动相,9-(3-膦酸甲氧基丙基)腺嘌呤为内标,采用ESI源以多反应监测方式对血浆样品中的PMEA进行定量分析。测定APD2和PMEA-CA时,血浆样品经固相萃取后,用Hypersil ODS2柱分离,以甲醇-5 mmol·L^-1乙酸铵（70∶30,V/V）为流动相,格列本脲为内标,采用ESI源以多反应监测方式对血浆中APD2和PMEA-CA进行定量分析。结果 PMEA和PMEA-CA线性范围为25～5 000 μg·L^-1,ADP2的线性范围为10～2 500 μg·L^-1,日内、日间精密度均<5.5 %。结论 本方法专属性强、灵敏度高,适用于PMEA前体药APD2及PMEA-CA的临床前药代动力学研究。     

炎症性肠病的微生物因素及硫唑嘌呤和6-巯基嘌呤治疗

炎症性肠病（IBD）中的溃疡性结肠炎（UC）和Crohn病（CD）近年发病率有上升趋势,其发病机制包括肠道黏膜的原发损害及炎性反应扩大两个阶段。 肠道菌群失调,触发IBD发病 IBD患者肠道菌群失调,肠道内致病菌增多,分泌的肠毒素使肠上皮通透性增高;病菌分泌免疫抑制性蛋白,导致黏膜免疫失调;增多的致病菌直接侵袭、损伤肠上皮细胞,破坏肠黏膜屏障。     

UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中紫草氰苷、格列风内酯浓度

目的 建立使用UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中紫草氰苷、格列风内酯浓度的方法,并研究其药物代谢动力学特征。方法 采用Aglient C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱(0~1 min,5%~20%B;1~2 min,20%~60%B;2~6 min,60%~70%B;6~6.5 min,70%~5%B;6.5~7.5 min,5%B),流速0.3 mL/min,柱温35 ℃。大鼠灌胃给药量为4 g/(kg·d),使用液质联用色谱法测定给药后不同时间点紫草氰苷和格列风内酯的血药浓度,通过DAS2.0软件模拟计算,得出相应的药物代谢动力学参数。结果 在大鼠血浆中,紫草氰苷在0.701 9~140.4 ng/mL,格列风内酯在1.120~240.4 ng/mL内线性关系良好,两者日内、日间精密度和准确度RSD均小于15%,回收率在87.22%~107.75%之间。紫草氰苷和格列风内酯在体内吸收均较迅速,0.5 h达到最高血药浓度,并且消除速率较快,24 h基本消除。结论 经方法学检验,此方法准确、稳定,可用于紫草氰苷和格列风内酯的药物代谢动力学研究。     

UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中古伦宾浓度及药动学研究

目的:建立一种灵敏度高、重复性好的UPLC-MS/MS法用于定量测定大鼠血浆中古伦宾浓度,并观察古伦宾在大鼠体内的药代动力学。方法:血浆样品由甲醇沉淀蛋白法处理后,经Waters BEH C18柱,乙腈-水作为色谱分离流动相,采用电喷雾离子源(ESI+)串联质谱检测,多反应离子监测(MRM)模式进行定量分析。结果:血浆中古伦宾在1.225~2 500 nmol/L内线性关系良好,最低检测限为1.22 nmol/L,日内与日间精密度均小于15%,提取回收率在85%~115%之间,均符合药代动力方法学分析要求。结论:本研究建立的UPLC-MS/MS方法操作简便、灵敏、快速、专属性强,可用于血浆中古伦宾的含量测定及其在大鼠体内的血浆药动学研究。     

高效液相-串联质谱方法测定法罗培南的血浆药物浓度

目的采用高效液相-串联质谱方法测定血浆中法罗培南的药物浓度。方法色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus（100mm×2.1mm,3.5μm）,流动相：乙腈与5mmol/L醋酸铵缓冲液（含0.1%甲酸）体积比为35：65,流速为0.3ml/min,文拉法新为内标。结果法罗培南的血浆浓度在0.1～20μg/ml范围内线性良好,标准曲线方程为Y=0.2700c＋0.00242（r=0.9955,n=8）,定量下限为0.1μg/ml,日内精密度〈5.4%,日间精密度〈7.9%,回收率为99.0%～113%。结论该方法处理操作简单,结果准确,专属性强,灵敏度高,适用于法罗培南人体药动学研究及生物等效性研究。     

高效液相色谱-质谱-质谱联用法测定Beagle狗血浆中石杉碱甲

目的:建立狗血浆中石杉碱甲的液质联用测定法.方法:血浆样品经液液萃取,用高效液相色谱-质谱-质谱联用法检测.色谱柱为Nucleocil ODS柱,50×2.0 mm I.D.,5 μm,流动相为乙腈-甲醇-水-甲酸(20∶40∶40∶0.1,v/v).采用多反应监测,用于定量的离子为m/z 243→210(石杉碱甲)和m/z 257→226(内标N-甲基石杉碱甲).结果:线性范围为0.1～12 ng/ml,最低定量浓度为0.1 ng/ml,可以检测到Beagle狗静注和口服100 μg石杉碱甲后12 h的血药浓度.结论:该方法灵敏度高,简便快速,可用于药代动力学研究.     

毛发中地佐辛、杜冷丁的UPLC-MS/MS检测

建立快速检测毛发中地佐辛和杜冷丁含量的超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS/MS)法.将清洗后的毛发样品经甲醇研磨超声提取后进行UPLC-MS/MS分析.色谱柱为Waters Acquity BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为0.1％甲酸水-甲醇,0.4 mL/min梯度洗脱.质谱采用E...     

UPLC-MS/MS法研究滇乌碱在大鼠体内组织的分布

目的 建立灌胃给药滇乌碱的大鼠中毒模型, 用高效液相色谱-串联质谱 (UPLC-MS/MS) 法测定大鼠血液及各组织中滇乌碱的含量, 研究滇乌碱在大鼠体内的分布情况.方法 将SD大鼠随机分为3组, 分别按2.2 mg/kg, 1.1 mg/kg和0.7 mg/kg剂量灌胃高、中、低剂量组大鼠, 给药2 h后处死, 迅速采取大鼠的心血、胃、小肠、肝脏、胰腺、肾脏、肺脏、脾脏、心脏、膀胱、睾丸和全脑, 液-液萃取法处理后, 用UPLC-MS/MS法测定各生物检材中滇乌碱的含量.结果 滇乌碱大鼠中毒模型给药剂量为1.1 mg/kg, 滇乌碱在大鼠体内分布由高到低的顺序为胃、小肠、肝脏、胰腺、肾脏、肺脏、脾脏、心脏、膀胱、睾丸、心血和大脑.结论 滇乌碱在大鼠体内分布广泛, 尤以胃、小肠和肝脏中含量最高, 该结论为黄草乌中毒的检验材料选取提供依据.     

UPLC-MS/MS法同时测定三叶青中13种黄酮类成分的含量

目的:建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定三叶青中13种黄酮类成分(原花青素B1、原花青素B2、儿茶素、异槲皮苷、芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、槲皮苷、丁香亭-3-O-葡萄糖苷、阿福豆苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素)的含量.方法:超高效液相色谱采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B),梯度洗脱;流速0.25 mL/min;柱温40℃.质谱条件采用电喷雾离子源负离子模式进行检测,多反应监测模式定量测定.结果:在考察的浓度范围内,13种黄酮成分均呈良好的线性关系(r≥0.99753);回收率和RSD分别为95.84％～107.38％和0.84％～2.65％.结论:该方法同时测定了三叶青中13种黄酮类成分的含量,方法可行,重现性好,可为三叶青的质量控制提供参考.     

UPLC-MS/MS法同时测定松葛茶中4种活性成分含量

目的:建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定松葛茶中4种成分的含量方法。方法:采用Waters HSS T3色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm);以甲醇(0.1%甲酸)-水(0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱;流速0.4 mL/min;柱温40℃;质谱条件:采用正负离子切换的多反应监测(MRM)模式进行定量分析。结果:松葛茶中的成分葛根素、槲皮素、山奈酚、原儿茶酸分别在6.65~727、7.23~392、5.89~533、7.41~510 ng/mL范围内线性关系良好(r>0.9982),平均加样回收率为97.05%~98.67%,RSD均小于1.01%(n=6)。结论:该方法专属性强,灵敏度高,可用于松葛茶的质量控制。     

液质联用法测定人血浆中氯雷他定

目的:研究氯雷他定血浆浓度测定方法及其在健康人体内的药动学.方法:18名健康男性志愿者单剂量口服氯雷他定片,在设计的时间点取静脉血,采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)测定血药浓度.药动学参数采用DAS程序计算.结果:单次口服20 mg氯雷他定片后的主要药动学参数AUC0-t、AUC0～∞、Cmax、tmax、t1/2分别为(32.26±21.54)μg/(L·h)、(37.18±22.53)μg/(L·h)、(12.00±7.50)μg/L、(1.56±0.70)h和(11.15±19.66)h.结论:本法适用于快速准确及高灵敏地测定血浆中的氯雷他定,其在研究人体内口服吸收较快,个体间差异较大,约1.5 h达血药浓度蜂值,平均消除半衰期为11 h.     

UPLC-MS/MS测定人血浆中咪达那新的浓度及其生物等效性研究

用UPLC-MS/MS测定人血浆中咪达那新的浓度,并应用于咪达那新片在中国健康受试者中的药代动力学及生物等效性研究。采用Acquity UPLC BEH C₈(2.1 mm×50 mm,1.7 μm)色谱柱,流动相A为2 mmol/L乙酸铵溶液(含0.2%乙酸),B为乙腈,梯度洗脱。采用液液萃取的前处理方法减小血浆样品的基质效应。质谱条件为正离子模式,咪达那新和咪达那新-d10 的检测离子分别为m/z 320.2→238.1和m/z 330.2→248.2。临床试验采用单剂量双周期自身交叉试验设计,24例健康受试者空腹条件下口服咪达那新片参比制剂或受试制剂。使用上述检测方法检测生物样品中咪达那新的含量,后用DAS3.2.8软件进行药代动力学及生物等效研究。咪达那新在10.0~1 000 pg/mL范围内线性良好,低、中、高浓度的样品提取回收率分别为84.0%、88.0%、90.0%,基质效应分别为105%、100%、101%。参比及受试制剂的药代动力学参数c_max分别为524.8和612.6 pg/mL,t_max分别为1.250和1.063 h,AUC_0-∞分别为2 229和2 466 pg/mL·h,参比制剂及受试制剂生物等效。