痰涂片阳性肺结核病106例复治疗效评价

目的观察初治失败肺结核患者采用2H3R3Z3E3/6H3R3E3或3H3R3Z3E3/5H3R3E3化疗方案的治疗效果,探讨肺结核初治失败患者对上述治疗方案的反应。方法为对我院2002-2005年登记在册、转归报表、管理卡中初治失败的106例肺结核患者,采用2H3R3Z3E3/6H3R3E3或3H3R3Z3E3/5H3R3E3化疗方案（初治涂阳方案）进行治疗,其间第2、5、8、12个月各查痰1次,连续2次痰菌阴性为治愈,否则为治疗失败。治疗结束后对结果进行统计学分析,对上述化疗方案的副作用进行分析。结果全部106例患者中治愈84例（79.3%）,失败16例（15.1%）,死亡6例（5.7%）。结论对初治失败患者采用2H3R3Z3E3/6H3R3E3或3H3R3Z3E3/5H3R3E3初治涂阳化疗方案的治疗有一定疗效。     

携带LMO3基因逆转录病毒载体的构建及其在NIH/3 T3细胞中的表达

目的：构建单纯LIM蛋白3（LMO3）的逆转录表达载体,并观察其在 NIH/3T3细胞中的表达情况。方法重组载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定后,脂质体法转染到pA317包装细胞,G418筛选稳定的病毒产生细胞株。重组逆转录病毒体外感染NIH/3T3,并对其进行病毒滴度检测,NIH/3T3细胞分为3组：以pLXSN-LMO3转染为实验组,以pLXSN转染为阴性对照组,正常细胞为空白对照组。采用免疫荧光组化染色和蛋白印迹（ Western blot）法鉴定NIH/3T3细胞中LMO3的表达。结果重组逆转录病毒载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定构建正确,其病毒滴度平均可达4.04×106 cfu/ml,各组NIH/3T3细胞免疫荧光组化染色及Western blot检测均有LMO3蛋白表达,其中实验组高表达LMO3,与阴性对照组、空白对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论成功构建了携带LMO3基因逆转录病毒载体,并能在NIH/3T3细胞中高表达LMO3蛋白,为下一步开展基因治疗奠定了基础。     

PTPMeg2抑制NIH3T3/STAT3CA细胞模型STAT3转录活性的研究

目的探讨磷酸酶PTPMeg2对NIH3T3/STAT3CA细胞模型的增殖及STAT3转录活性的影响。方法构建STAT3异常突变的细胞模型NIH3T3/STAT3CA,MTT法和裸鼠异体移植瘤实验分别用于观察PTPMeg2对NIH3T3/STAT3CA细胞体外和体内增殖的影响,免疫共沉淀实验用于PTPMeg2与STAT3CA相互作用的研究,双荧光素酶报告基因法用于转录活性的研究。结果 PTPMeg2对NIH3T3/STAT3CA细胞在体外和体内都具有增殖抑制作用,与对照组比较均具有明显的统计学意义。PTPMeg2对NIH3T3/STAT3CA细胞的转录活性具有抑制作用,而PTPMeg2的突变体(PTPMeg2C515S)和ShPTPMeg2则无效。结论 PTPMeg2对NIH3T3/STAT3CA细胞具有增殖抑制作用,其作用机制可能与抑制STAT3的转录活性有关。     

Smad3 WT、Smad3 EPSM、Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株的建立与功能研究

目的建立Smad3 WT、Smad3 EPSM及Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株,探究单纯转染3种质粒及选择性上调p Smad3C、p Smad3L对HepG2细胞功能的影响。方法采用脂质体转染试剂盒将Smad3 WT(野生型Smad3基因)、Smad3 EPSM(Smad3L区磷酸化位点突变)、Smad3 3S-A(Smad3C区磷酸化位点突变)3种质粒转染至HepG2细胞中,经G418筛选阳性细胞,Western blot法鉴定3种质粒稳转细胞株的转染效率。MTT法检测细胞增殖情况。流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果 Western blot结果显示,转染相应质粒的HepG2细胞高表达目的蛋白,提示稳转细胞株构建成功。MTT结果显示,在缺乏TGF-β_1刺激情况下,转染3种质粒后对HepG2细胞增殖几乎没有影响,TGF-β_1能够诱导稳转细胞株的细胞增殖,且转染Smad3 EPSM质粒的HepG2细胞,较未转染、转染Smad3 WT或Smad3 3S-A质粒的HepG2细胞对TGF-β_1诱导的细胞增殖反应减弱。细胞周期分析显示,TGF-β_1刺激下,转染Smad3 EPSM质粒组G_0/G_1期细胞数明显增多,而转染Smad3 3S-A质粒组G_2/M期细胞数增加明显。细胞凋亡检测显示,TGF-β_1刺激下,较未转染和转染Smad3 WT质粒组,转染Smad3 EPSM质粒组细胞凋亡率明显增加,而转染Smad3 3S-A质粒组细胞凋亡率明显降低。结论成功建立Smad3 WT、Smad3 EPSM及Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株,为进一步探讨开发能够经由调控p Smad3C、p Smad3L的药物提供一定的基础。     

4-,6-或7-位取代苯基亚胺次甲基香豆素的合成及其抗癌活性

目的设计合成一系列香豆素西佛碱化合物并进行抗癌筛选。方法合成了21个取代的4-,6-或7-位苯基亚胺次甲基香豆素,其结构经MS,HNMR和元素分析确证,并对其进行体外抗癌筛选。结果12个化合物(3c,3d,3e,3f,3g,3h,3j,3k,3m,3o,3p,3q)分别对KB,HCT-8,Bel7402细胞株有效。结论该类化合物有一定抗癌活性,值得进一步研究。     

三种细胞生长状况的观察

为了探讨肿瘤发生的机制,我们用 C-myc 和 V-src 基因转化 NIH_3T_3细胞,得到恶性转化的 NIH_3T_3细胞,将 NIH_3T_3纲胞接种子裸鼠,得到小鼠纤继肉瘤细胞,本文比较了这三种细胞的生长状况,结果如下。1 材料和方法 NIH_3T_3细胞,恶性转化的 NIH_3T_3细胞及小鼠纤维肉瘤细胞,使用相同的含10%小牛血清的 DMEM 培养基培养.分别用0.02%EDTA—0.25%胰酶混合液(5:1)消化2min,按4.5/瓶(2.5×4cm)进行传代.每瓶含1.5万/ml 的细胞悬液3ml,每隔24h 使用白细胞计数板各计数3瓶细胞,每瓶细胞计数3次,每次计数     

携带LMO3基因逆转录病毒载体的构建及其在NIH/3T3细胞中的表达

目的构建单纯LIM蛋白3(LMO3)的逆转录表达载体,并观察其在NIH/3T3细胞中的表达情况。方法重组载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定后,脂质体法转染到pA317包装细胞,G418筛选稳定的病毒产生细胞株。重组逆转录病毒体外感染NIH/3T3,并对其进行病毒滴度检测,NIH/3T3细胞分为3组:以pLXSN-LMO3转染为实验组,以pLXSN转染为阴性对照组,正常细胞为空白对照组。采用免疫荧光组化染色和蛋白印迹(Western blot)法鉴定NIH/3T3细胞中LMO3的表达。结果重组逆转录病毒载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定构建正确,其病毒滴度平均可达4.04×106cfu/ml,各组NIH/3T3细胞免疫荧光组化染色及Western blot检测均有LMO3蛋白表达,其中实验组高表达LMO3,与阴性对照组、空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了携带LMO3基因逆转录病毒载体,并能在NIH/3T3细胞中高表达LMO3蛋白,为下一步开展基因治疗奠定了基础。     

TGF-β/Smad3信号参与介导TRB3的促肿瘤作用

目的研究TRB3介导的促肿瘤作用与TGF-β/Smad3信号通路的关系。方法利用PCR扩增具有组成活性的Smad3突变体Smad3D,并将其构建至pcDNA3.1/Myc-His(-)B真核表达载体中。在稳定沉默TRB3的HepG2细胞中转染Smad3D-Myc表达质粒,利用G418筛选稳定表达Smad3D-Myc的细胞株。利用双荧光素酶报告基因系统检测3TP-lux转录活性。利用Transwell实验观察细胞侵袭能力变化。结果成功构建Smad3D突变体真核表达质粒。成功建立稳定沉默TRB3,同时稳定表达Smad3D突变体的HepG2细胞株。过表达Smad3D能明显增强3TP-lux转录活性,并在一定程度上逆转沉默TRB3后对肿瘤侵袭的抑制作用。结论 TGF-β/Smad3信号通路参与了TRB3促进肿瘤的作用。     

过表达 C3aR人足细胞的构建及鉴定

目的：构建过表达C3a受体（C3aR）的肾小球足细胞株,为探讨C3aR在肾小球足细胞中的确切生理和病理意义提供细胞模型。方法设计合成人C3aR 表达单元,将其克隆到慢病毒表达载体pLenti6．3-MCS-IRES2-EGFP的多克隆位点,构建成C3aR表达载体pLenti6．3-C3aR-IRES2-EGFP;将pLenti6．3-C3aR-IRES2-EGFP和包装质粒共转染293 T细胞,包装成C3aR表达重组慢病毒LV-C3aR;以LV-C3aR感染人肾小球足细胞系HPC,根据LV-C3aR上带有杀稻瘟菌素抗性基因的特点,以杀稻瘟菌素筛选稳定转染细胞克隆;利用荧光定量PCR和细胞免疫化学分析方法对稳定转染细胞克隆的C3aR表达水平进行分析,从中鉴定出稳定过表达C3aR的人肾小球足细胞株。结果成功构建了C3aR表达载体pLenti6．3-C3aR-IRES2-EGFP;得到了高滴度的C3aR表达重组慢病毒LV-C3aR;成功构建了过表达C3aR的人肾小球足细胞株HPC-C3aR。结论成功构建C3 aR表达载体和过表达C3 aR的人肾小球足细胞株,为进一步研究C3 aR过表达在人肾小球足细胞中的病理意义提供了很好的细胞模型,也为进一步开展C3 aR在其他细胞中的生理、病理意义创造了条件。     

大鼠Adrb3基因重组慢病毒干扰载体的构建及其对血管平滑肌细胞Adrb3表达的影响

目的 构建大鼠Adrb3 （rAdrb3） 基因慢病毒干扰载体, 筛选高效率rAdrb3基因干扰序列, 观察其对大鼠血管平滑肌细胞 （VSMC） Adrb3基因表达的影响, 为进一步研究Adrb3在心力衰竭中的作用机制提供实验工具。方法 设计2条rAdrb3基因shRNA寡核苷酸序列, 构建慢病毒干扰质粒并进行测序鉴定。三质粒法共转染293T细胞包装慢病毒, 测定慢病毒滴度。大鼠VSMC设置正常对照组 （Normal组）, 空载慢病毒组 （Lv-rAdrb3-shRNA-control组）,携带rAdrb3基因慢病毒干扰载体1组 （Lv-rAdrb3-shRNA-1组）, 携带rAdrb3基因慢病毒干扰载体2组 （Lv-rAdrb3- shRNA-2组）, 感染5 d后, 收集细胞。提取细胞总RNA和蛋白, Real-time PCR检测rAdrb3 mRNA表达, Western blot 检测rAdrb3蛋白表达。结果 构建2个携带rAdrb3基因慢病毒干扰载体, 滴度均为2×108 TU/mL。慢病毒感染大鼠 VSMC 72 h后, 感染效率可达80%。与Normal组比较, Lv-rAdrb3-shRNA-1、 Lv-rAdrb3-shRNA-2组Adrb3 mRNA水平沉默效率为87.18%、 65.27% （P＜0.05）; 与Normal组比较, Lv-rAdrb3-shRNA-1、 Lv-rAdrb3-shRNA-2组rAdrb3蛋白水平沉默效率为85.57%、 70.04% （P＜0.05）。结论 成功构建并筛选出有效携带rAdrb3基因慢病毒干扰载体, 可显著抑制大鼠VSMC Adrb3的表达。     

3-DG生物活性及其与临床疾病关系研究进展

3-脱氧葡糖醛酮（3-Deoxyglucosone,3-DG）是～种高反应性毒性2一羰基醛化合物,能通过非酶糖基化（Maillard反应）、果糖胺-3-激酶（Fructoseamine-3-kinase,F3K）途径及多元醇通路形成,同时能脱毒代谢成3-脱氧果糖和3-脱氧葡萄糖醛酸（2-keto-3-deoxyglucosonicacid,3-DGA）。近年来研究报导,3-DG在衰老、糖尿病、尿毒症等许多临床疾病的发生、发展中起着重要作用。本文从3-DG的生成代谢过程、生物活性及其与临床疾病的关系等方面作一综述。     

2H_3R_3Z_3E_3/4H_3R_3方案治疗初始涂阳肺结核556例效果分析

目的观察分析2H3R3Z3E3/4H3R3方案治疗初始涂阳肺结核的效果,为肺结核病防治工作提供参考依据。方法回顾性分析556例初始涂阳肺结核病患者的资料,均采用"世界银行贷款+中国结核病控制项目"的2H3R3Z3E3/4H3R3方案治疗,观察不同年龄阶段(中青年组、中年组、老年组)治疗效果及安全性。结果所有患者均于本科完成疗程,治疗满6个月,转阴503例(90.5%);对比各年龄阶段的治疗效果,同个时间点的转阴率比较,老年组的转阴率均低于其他各组,差异有显著性(P<0.05);老年组不良反应发生率显著高于其他两组,差异均有显著性(P<0.05)。结论本科用2H3R3Z3E3/4H3R3方案治疗初治凃阳肺结核治愈率复合国家>85%的要求,老年患者的治疗效果及安全性低于非老年患者,因此对疑似肺结核的老年人应提倡早登记、早确诊、早治疗,用2H3R3Z3E3/4H3R3方案治疗期间应加强观察病情以便调整用药剂量或用药方案。     

老年涂阳肺结核2H3R3Z3S3/4H3R3全程督导化疗

目的:探讨老年涂阳肺结核抗结核药物的治疗效果.方法:老年组51例,用全程督导2H3R3Z3S3/4H3R3方案治疗,设青年组106例作对照观察.结果:老年组痰菌阴转率93.3%,青年组97.1%.随访2 a,复发率老年组11.1%,青年组0.9%,两组比较差异无显著性(P＞0.05).结论:老年涂阳肺结核2H3R3Z3S3/4H3R3全程督导化疗疗效满意.     

电鳐乙酰胆碱酯酶单链抗体基因的克隆及表达(英文)

目的　欲用计算机模拟及分子对接技术揭示抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体 3F3抑酶的分子基础 ,但 3F3分子远大于乙酰胆碱酯酶 (AChE) ,难以操作 ,故拟用其单链抗体为工具进行研究。本研究旨在设计、克隆并表达抗AChE单链抗体Sc3F3基因 ,推演重组单链抗体的氨基酸顺序 ,并证明纯化的重组单链抗体有抑制AChE的作用。方法　使用分泌抗电鳐AChE单克隆抗体 3F3(3F3Ab)的杂交瘤细胞提取总RNA。用RT PCR技术扩增重链可变区 (VH)cDNA及轻链可变区 (VL)cDNA基因 ,通过连接肽(Gly4 Ser) 3 基因将VH 基因和VL 基因连接 ,制成单链抗体基因 (ScFv)。将ScFv基因插入载体pCANTAB 5E用于表达。在大肠杆菌中表达的 3F3单链抗体(Sc3F3)用SephadexG75凝胶过滤和QAE SephadexA 5 0离子交换层析纯化。AChE与抗体的免疫反应性用ELISA法测定。AChE活性用微量羟胺比色法测定。结果　测序结果证明所克隆的ScFv基因是功能重排基因 ,长度为 72 3bp。重、轻链基因长度分别为 35 7bp和 32 1bp。ScFv基因 (含连接肽基因 )所编码的纯化的重组Sc3F3的分子量为 31.6ku。Sc3F3与AChE反应良好 ,但对AChE活性的抑制明显弱于 3F3Ab。Sc3F3的抑制效力约为 3F3Ab的 1/10。结论　在计算机模拟及分子对接研究中使用本研究设计的单链抗体Sc3F3应是可靠的     

蛇床子素诱导小鼠成纤维细胞凋亡及其机制研究

目的:研究蛇床子素诱导小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)凋亡及其机制.方法:体外培养NIH3T3,不同浓度的蛇床子素作用于NIH3T3,应用溴化四氮唑蓝(MTT)比色法和生长曲线法检测蛇床子素对NIH3T3增殖活性的影响.Hoechst 33342荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核的变化.琼脂糖电泳分析法观察NIH3T3的DNA降解断裂的情况.结果:蛇床子素能明显抑制NIH3T3的生长,浓度为2.5×10-4mol/L时,细胞生长受到显著抑制,2.5×10-4mol/L蛇床子素作用24 h即可明显诱导NIH3T3的凋亡.结论:蛇床子素可明显抑制NIH3T3的生长并可以诱导其凋亡.     

CYP3A5 6986A>G基因多态性与中国肾移植术后患者环孢素A血药浓度相关性的Meta分析

目的:系统评价CYP3A5 6986A>G基因多态性与中国肾移植术后患者环孢素A(CsA)血药浓度的相关性。方法:计算机检索Cochrane图书馆、PubMed、Embase、中国生物医学文献数据库、中国期刊全文数据库、维普数据库、万方数据库等,收集肾移植术后使用CsA免疫抑制治疗并进行血药浓度监测的中国患者的病例对照研究或队列研究。筛选文献、提取资料后,采用纽卡斯渥太华量表评分对纳入文献质量进行评价,采用Rev Man 5.3软件进行Meta分析。结果:共纳入8篇文献,均为队列研究,共计890例患者。Meta分析结果显示,CYP3A5*1/*1型患者CsA剂量校正后的谷浓度(C0/D)显著低于CYP3A5*1/*3型[MD=-6.97,95%CI(-13.18,-0.76),P=0.03];亚组分析结果显示,肾移植术后CsA检测时间≤1个月时[MD=-8.50,95%CI(-12.57,-4.43),P<0.000 1]、检测时间>1~<6个月时[MD=-14.02,95%CI(-26.28,-1.76),P=0.02]CYP3A5*1/*1型患者CsA的C0/D均显著低于CYP3A5*1/*3型患者。CYP3A5*1/*3型患者CsA的C0/D显著低于CYP3A5*3/*3型患者[MD=-6.04,95%CI(-8.99,-3.09),P<0.000 1];亚组分析结果显示,肾移植术后CsA检测时间≤1个月时CYP3A5*1/*3型患者CsA的C0/D显著低于CYP3A5*3/*3型[MD=-6.94,95%CI(-10.21,-3.68),P<0.000 1]。CYP3A5*1/*1型患者CsA的C0/D显著低于CYP3A5*3/*3型[MD=-12.64,95%CI(-21.09,-4.20),P=0.003];亚组分析结果显示,肾移植术后CsA检测时间≤1个月时[MD=-16.69,95%CI(-24.03,-9.36),P<0.000 01]、检测时间>1~<6个月时[MD=-16.78,95%CI(-28.63,-4.93),P=0.006]CYP3A5*1/*1型患者Cs A的C0/D显著低于CYP3A5*3/*3型。CYP3A5*1/*1型与CYP3A5*1/*3型、CYP3A5*1/*3型与CYP3A5*3/*3型、CYP3A5*1/*1型与CYP3A5*3/*3型患者CsA剂量校正后的峰浓度比较,差异均无统计学意义。结论:CYP3A5 6986A>G基因多态性与中国肾移植术后患者CsA的C0/D具有一定的相关性,且在肾移植术后CsA检测时间≤1个月时的大小顺序为CYP3A5*1/*1型1~<6个月时为CYP3A5*1/*1型相似文献   

蚯蚓蛋白对NIH3T3细胞的促进增殖作用研究

目的探讨蚯蚓蛋白(EFP)对NIH3T3细胞的促进增殖作用。方法 MTT法测定EFP对大鼠成纤维细胞(NIH3T3)的促进增殖作用;细胞划痕法测定EFP促进NIH3T3细胞划痕创面愈合作用;测定NIH3T3细胞培养液中胶原降解产物羟脯氨酸的含量。结果 EFP具有促进NIH3T3细胞的增殖作用,促进划痕创面愈合作用,增加了NIH3T3细胞培养液中羟脯氨酸的含量。结论 EFP具有促进NIH3T3细胞增殖和划痕创面愈合作用。     

3种不同预备方式瓷贴面修复上下前牙97例临床效果评估

目的 评价3种不同预备方式全瓷贴面修复上下前牙的疗效.方法 对我科3年来97例患者共178颗上前牙瓷贴面进行3个月至3年的修复情况观察,采用改良Ryge标准评估修复疗效.结果 开窗型预备3年成功率9复9％,失败3颗;对接型预备3年成功率92.1％,失败4颗;包绕型预备3年成功率92.3％,失败3颗.3种不同预备方式的修复疗效无明显变化.结论 从中短期看,3种预备的瓷贴面修复体均能取得较好的疗效.     

间歇法化疗471例涂阳肺结核病例效果分析

目的:探讨不住院化疗为主,以间歇法治疗痰涂片阳性肺结核病人的化疗效果.方法:采用2H3R3Z3E3/H3R3和2H3R3Z3E3S3/6H3R3E3的两期全程间歇短程化疗方案和全程督导的管理办法.结果:初治涂阳病人2、3个月末的痰菌阴转率分别为98.9%和100%,治愈率93.6%;复治涂阳病人2、3个月末的痰菌阴转率分别为97.3%和100%,治愈率85.5%.结论:两期全程间歇短程化疗方案具有疗效高、不良反应较少、经济、实用、操作方便的优点.     

活动性肺结核合并哮喘患者使用激素的临床研究

目的 探讨活动性肺结核合并哮喘患者激素的使用价值.方法 两组患者均符合肺结核合并哮喘的诊断标准.治疗组45例采用2H3R3Z3E3/4H3R3 BDP或琥珀酸氢化可的松 氨茶碱、β2-受体激动剂;对照组37例采用2H3R3Z3E3/4H3R3 氨茶碱、β2-受体激动剂.比较两组抗痨效果及哮喘病的复发率.结果 两组2、5、6个月的痰检显示无显著意义;完成治疗后,治疗组复发率低,对照组复发率高,两者有显著意义.结论 活动性肺结核合并哮喘的患者在抗痨治疗的同时,吸入糖皮质激素治疗可以减少复发率,安全、有效.