三氧化二砷联合5-FU体外抗人胃癌细胞SGC-7901作用及机制的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）与5-氟尿嘧啶（5-FU）联合应用体外抗人胃癌细胞株SGC-7901的作用及其机制。方法：用不同浓度的As2O3（终浓度依次为0．1，0．5，1．0μmol／L）和（或）5-FU（终浓度50mg／L）处理SGC-7901细胞后．采用流式细胞术观察细胞凋亡和细胞周期变化：免疫细胞化学法（PV法）观察凋亡相关基因Bcl-2表达的变化。结果：与As2O3或5-FU单药作用相比，As2O3与5-FU联合应用可显著提高诱导胃癌细胞凋亡率（q=63．9608，166．1758，51．3343，P〈0．01），与空白组相比，联合用药后S期细胞所占比例下降（q=16．0743，10．8805，12．1482，P〈0．01），G0／G1期细胞比例上升（q=8．7188，9．3309，9．8534，P〈0．01），癌细胞Bcl-2基因表达明显下降（q=10.2801，17．8456，19．0086，P〈0．01）。结论：As2O3与5-FU联合应用具有协同抗胃癌作用，其机制可能与细胞周期阻滞、增强诱导胃癌细胞凋亡以及调控凋亡相关基因的表达有关。     

三氧化二砷诱导人骨髓瘤细胞RPMI 8226凋亡的机制探讨

目的:探讨三氧化二砷（As2O3）诱导人骨髓瘤细胞RPMI 8226凋亡的机制。方法:不同浓度As2O3作用RPMI 8226细胞48h后,用MTT法计算细胞增殖抑制率。流式细胞仪检测1.0、2.0、5.0μmol/L As2O3干预RPMI 8226细胞48h后的凋亡率;透射电镜观察As2O3作用前后RPMI 8226细胞超微结构的变化;RT-PCR、Western Blot法检测As2O3作用前后Bcl-2及Caspase-3表达的变化。结果:不同浓度的As2O3对RPMI 8226细胞均有增殖抑制作用(P<0.05）。1.0、2.0、5.0μmol/L As2O3干预RPMI 8226细胞48h后,细胞凋亡率随As2O3浓度的增加而呈上升趋势,与对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）;As2O3干预RPMI 8226细胞48h后,电镜下可见典型的凋亡小体;RT-PCR、Western Blot结果均显示上述浓度的As2O3干预RPMI 8226细胞48h后,Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调（P<0.05）,Caspase-3 mRNA及蛋白表达上调（P<0.05）。结论:As2O3可能通过激活Caspase-3、下调Bcl-2的表达从而诱导RPMI 8226细胞凋亡。     

三氧化二砷对人AFP阳性胃癌细胞株FU97的作用及其机制

目的研究三氧化二砷（As2O3）抑制AFP阳性胃癌（alpha-fetoprotein-producing gastric carcinoma.APGC）细胞株FU97增殖、诱导凋亡及其机制。方法MTT法检测药物效应;DNA凝胶电泳和流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡;化学发光法、实时荧光定量PCR及ELISA检测AFP、STAT3、VEGF表达变化。结果As2O3可明显抑制FU97细胞增殖,且呈时间和浓度依赖关系;DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征性梯状条带;FCM检测在细胞周期G1期前出现亚二倍体凋亡峰;细胞周期分析显示G2／M期阻滞;化学发光法、免疫细胞化学法、实时荧光定量PCR以及ELISA结果证实As2O3可下调FU97细胞AFP、VEGF、STAT3基因的表达。结论As2O3可抑制FU97细胞的增殖、阻滞细胞周期进程诱导凋亡。同时通过下调AFP、VEGF、STAT3基因的表达阻止APGC的恶性进程。     

三氧化二砷诱导胃癌细胞凋亡及对相关基因表达的影响

目的 研究三氧化二砷（As2O3)诱导胃癌细胞的凋亡作用及对凋亡相关基因p53、c-myc、bcl-2、bcl-xl和bcl-xs表达的影响,探讨其诱导胃 癌凋亡的作用机制。方法 研究As2O3对胃癌细胞SGC－07901和MKN－45的诱导凋亡作用和对凋亡相关基因表达的影响。结果 As2O3作用于细胞可见典型的细胞凋亡。出现典型的亚二倍体“凋亡峰”。10μmol／LAs2O3的诱导胃癌细胞SGC－7901和MKN－45的凋亡率为13．8％和22．5％。细胞凋亡指数在1．42％－9．5％之间。As2O3作用后能明显下调SGC－7901细胞的bcl-2蛋白和mRNA的表达;对SGC－7901细胞的p53、c-myc、bcl-xl和bcl-xs蛋白的表达无影响。As2O3能促进MKN－45细胞的p53蛋白和mRNA的表达,对MKN－45细胞的bcl-2、c-myc、bcl-xl和bcl-xs基因表达无影响。结论 As2O3可通过不同途径诱导胃癌细胞凋亡,通过下调SGC－7901细胞的bcl-2的蛋白表达诱导其凋亡,通过上调p53表达诱导胃癌MKN－45细胞凋亡。     

死亡受体Fas在TRAIL 联合三氧化二砷诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

目的： 探讨Fas在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)与三氧化二砷 (arsenic trioxide,As2O3)联合诱导人胃癌细胞凋亡过程中的作用。方法：采用体外培养人低分化胃腺癌细胞SGC-7901,分别以Fas正义、反义寡核苷酸转染SGC-7901细胞获得Sense、Antisense细胞。以0.5 μg/ml As2O3+0.2 μg/ml TRAIL分别处理未转染细胞、Sense组细胞以及Antisense组细胞,采用MTT法检测24、48、72 h后细胞增殖情况;倒置显微镜观察联合作用48 h后细胞集落形态;DAPI染色法、流式细胞仪技术检测48 h时细胞凋亡率;Western blot法检测48 h细胞中Fas、FADD以及Parp表达情况。结果：与未转染组和Sense组细胞比较,转染Fas反义寡核苷酸后,降低了TRAIL与As2O3联合抑制细胞增殖、促进凋亡的作用 (P<0.05),48 h时效果最为明显;荧光显微镜下可见死亡细胞明显减少;Western blot结果显示细胞中Fas、FADD表达降低,Parp活化程度降低 (均P<0.05)。结论：Fas在TRAIL与As2O3联合抑制人胃癌细胞增殖、促进细胞凋亡过程中起重要作用。     

三氧化二砷对不同种类人卵巢癌细胞株细胞的体外作用

[目的]了解新型抗癌药物三氧化二砷对不同种类人卵巢癌细胞株细胞体外生长的作用。[方法]采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法 ,测定不同浓度三氧化二砷作用不同时间对人卵巢癌细胞株3AO、SKOV3、TYK细胞生长的抑制作用 ;采用流式细胞(FCM)技术 ,观察三氧化二砷作用后3AO细胞的凋亡率及细胞周期的变化 ;通过吖啶橙染色 ,荧光显微镜观察三氧化二砷作用后SKOV3 细胞的形态变化。[结果]三氧化二砷可有效地抑制3AO、SKOV3、TYK细胞的生长 ,具有时间、浓度依赖性 (P<0.05);不同细胞株之间的细胞生长抑制率差异无显著性 (P>0.05) ;在一定浓度范围内 ,三氧化二砷诱导3AO细胞的凋亡率具有时间、浓度依赖性(P<0.05) ;3.0μmol/L是诱导细胞凋亡的最佳浓度 ;三氧化二砷低浓度时阻滞3AO细胞S期细胞通过 ,高浓度时选择性诱导S期细胞凋亡 ;三氧化二砷作用后 ,SKOV3 细胞呈现典型的凋亡细胞形态特征。[结论]三氧化二砷通过诱导S期细胞凋亡而抑制人卵巢癌细胞的生长 ,具有量效性、时效性及周期特异性     

三氧化二砷对人胃癌细胞系MGC803凋亡及耐药基因表达影响的实验研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人胃癌细胞系MGC803的抑制和诱导凋亡作用及对MRP基因表达的影响.方法:选用人胃癌MGC803细胞系,运用体外细胞培养法,MTT法,流式细胞术检测As2O3对人其抑制和诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MRP mRNA的表达.结果:As2O3对人胃癌MGC803 细胞具有抑制作用,其抑制率呈时间-剂量依赖关系.不同浓度的As2O3均可诱导凋亡.1.0μmol/L、2.0μmol/L的As2O3可下调MRP mRNA的表达.结论:As2O3具有抗肿瘤作用,主要是通过诱导细胞凋亡实现的,其机制与下调MRP mRNA 表达有密切关系.     

三氧化二砷对人胃癌细胞系MGC803凋亡及耐药基因表达影响的实验研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对人胃癌细胞系MGC803的抑制和诱导凋亡作用及对MRP基因表达的影响。方法：选用人胃癌MGC803细胞系,运用体外细胞培养法,MTT法,流式细胞术检测As2O3对人其抑制和诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测MRPmRNA的表达。结果：As2O3对人胃癌MGC803细胞具有抑制作用,其抑制率呈时间-剂量依赖关系。不同浓度的As2O3均可诱导凋亡。1．0μmol／L、2．0μmol／L的As2O3可下调MRPmRNA的表达。结论：As2O3具有抗肿瘤作用,主要是通过诱导细胞凋亡实现的,其机制与下调MRPmRNA表达有密切关系。     

三氧化二砷对人胃癌裸鼠腹腔种植 腹水生成的影响

目的：研究三氧化二砷 (As2O3)对人胃癌裸鼠腹腔种植腹水生成的影响及其作用机制。方法： 100只 BALB/C-nu/nu裸鼠腹腔内接种胃癌 MKN-45细胞株后,随机分为 5组,然后分别腹腔内注射生理盐水 (第 1组 )、表阿霉素 (第 2组 )及不同剂量的 As2O3(第 3、 4、 5组 ),观察癌细胞株对各组裸鼠的致瘤率、腹水生成量及生存时间;透射电镜观察 As2O3作用后腹腔内肿瘤细胞的形态学变化。结果：表阿霉素、低剂量 As2O3与生理盐水对照组相比可显著抑制裸鼠腹水的生成,延长生存期 (P<0.01);中高剂量 As2O3除上述作用外还可通过诱导肿瘤细胞凋亡消除腹腔内肿瘤细胞,抑制腹水产生,并使裸鼠寿命明显延长。结论： As2O3可通过诱导胃癌细胞凋亡而抑制或消除人胃癌裸鼠腹腔种植及腹水的生成,不同程度地延长生存期。     

三氧化二砷对人胃癌细胞诱导分化的实验

目的：在三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导凋亡的基础上,探讨低浓度Ａｓ２Ｏ３对胃癌细胞诱导分化的作用。方法：以０．５μｍｏｌ的Ａｓ２Ｏ３处理人胃癌细胞株ＳＧＣ７９０１和ＭＫＮ４５,观察癌细胞增殖情况;经流式细胞仪检测细胞周期;用免疫组化法检测部分基因表达变化。结果：Ａｓ２Ｏ３处理后：①癌细胞增殖减缓,传至１６代后停止增殖;②４８小时后开始,Ｇ１／Ｇ０期细胞比例增加,Ｓ期细胞比例减少;③ｐ５３和ｂｃｌ－Ｘ     

三氧化二砷对裸鼠宫颈癌移植瘤的作用及机制

摘要：目的研究三氧化二砷 (arsenic trioxide,ATO,As2O3)对宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的作用及机制。方法建立裸鼠移植瘤模型,分为低浓度As2O3组［2mg/（kg·d）］,高浓度As2O3组［5mg/（kg·d）］,顺铂（DDP）组［3mg/（kg·d）］及阴性对照组（0.9%氯化钠0.2ml/d）,连续给药10d,观察抑瘤率及药物对裸鼠的影响。透射电子显微镜观察肿瘤的超微结构,免疫组织化学检测p-P38和Caspase-3的表达。结果低浓度As2O3,高浓度As2O3 及DDP的抑瘤率分别为22.95%、54.86%和54.48%,后两者的抑瘤率与阴性对照组的差异有统计学意义（P<0.05),但DDP的不良反应大。p-P38和Caspase-3在As2O3组的表达明显高于阴性对照组（P<0.05)。结论As2O3可通过诱导肿瘤细胞凋亡抑制宫颈癌移植瘤的生长。     

Effects of Arsenic Trioxide Alone and in Combination with Bortezomib in Multiple Myeloma RPMI 8266 Cells

The aim of this study was to detect the efficiency of arsenic trioxide (ATO) alone or together with bortezomibto inhibit proliferation and induce apoptosis in a multiple myeloma (MM) RPMI 8266 cells. Mechanisms of actionwere also investigated. RPMI 8266 cells were treated with ATO alone and in combination with bortezomib for24 hours, and cell viability was assessed by modified MTT. Annexin V-F1TC and PI staining was used to detectthe apoptosis rate and cell cycling was investigated by flow cytometry, along with expression of cell surfacedeath receptor-4(DR4) and death receptor-5 (DR5). Western blotting was applied to detect the expression ofbcl-2, caspase-3, caspase-8, and caspase-9. As a result, the ATO combined with bortezomib group showed moreinhibition of RPMI 8266 cell viability than theATO group. Expression of DR4 and DR5 on the cell surfaces,and the apoptosis rate were increased after treatment by ATO alone or combined with bortezomib. The cellsappeared to arrest in G2/M phase after treatment. Expression of bcl-2 was more significantly decreased in thecombination group, and that of caspase-3, caspase-8 and caspase-9 was significantly increased as well. Therefore,bortezomib can enhance ATO actions to induce apoptosis in RPMI 8266 cells, with decrease in expression ofbcl-2 and increase of caspase-3, caspase-8 and caspase-9 proteins.     

Arsenic Trioxide Inhibits Cell Growth and Invasion via Down-Regulation of Skp2 in Pancreatic Cancer Cells

Arsenic trioxide (ATO) has been found to exert anti-cancer activity in various human malignancies. However,the molecular mechanisms by which ATO inhibits tumorigenesis are not fully elucidated. In the current study,we explored the molecular basis of ATO-mediated tumor growth inhibition in pancreatic cancer cells. We usedmultiple approaches such as MTT assay, wound healing assay, Transwell invasion assay, annexin V-FITC, cellcycle analysis, RT-PCR and Western blotting to achieve our goal. We found that ATO treatment effectivelycaused cell growth inhibition, suppressed clonogenic potential and induced G2-M cell cycle arrest and apoptosisin pancreatic cancer cells. Moreover, we observed a significant down-regulation of Skp2 after treatment withATO. Furthermore, we revealed that ATO regulated Skp2 downstream genes such as FOXO1 and p53. Thesefindings demonstrate that inhibition of Skp2 could be a novel strategy for the treatment of pancreatic cancer byATO.     

微缺氧对三氧化二砷抑制胃癌细胞SGC-7901生长的影响

 目的 常氧和微缺氧条件下三氧化二砷（As₂O₃）注射液对人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制作用的对比研究。方法 运用产气袋法（GasPaK）制造微缺氧条件，实验分为微缺氧组和对照组，用MTT法检测药物效应。流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡。结果 不同浓度As₂O₃对人胃癌细胞株SGC-7901生长有抑制作用，并呈剂量一效应关系。细胞滞留于G2／M及S期。微缺氧条件下As₂O₃对人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制作用下降（P〈0．01）。凋亡细胞百分比下降。结论 As₂O₃对人胃癌细胞生长有抑制作用，但对缺氧胃癌细胞的抑制作用下降，单用As₂O₃治疗胃癌存在一定的局限性。     

Arsenic Trioxide Promotes Paclitaxel Cytotoxicity in Resistant Breast Cancer Cells

A partial response or resistance to chemotherapeutic agents is considered as a main obstacle in treatmentof patients with cancer, including breast cancer. Refining taxane-based treatment procedures using adjuvantor combination treatment is a novel strategy to increase the efficiency of chemotherapy. PPM1D is a moleculeactivated by reactive oxygen species. whose expression is reported to modulate the recruitment of DNA repairmolecules. In this study we examined the impact of arsenic trioxide on efficacy of paclitaxel-induced apoptosisin paclitaxel-resistant MCF-7 cells. We also investigated the expression of PPM1D and TP53 genes in responseto this combination treatment. Resistant cells were developed from the parent MCF-7 cell line by applyingincreasing concentrations of paclitaxel. MTT assays were applied to determine the rate of cell survival. DAPIstaining using fluorescent microscopy was employed to study apoptotic bodies. Real-time RT-PCR analysis wasalso applied to determine PPM1D mRNA levels. Our results revealed that combination of arsenic trioxide andpaclitaxel elevates the efficacy of the latter in induction of apoptosis in MCF-7/PAC resistant cells. Applyingarsenic trioxide also caused significant decreases in PPM1D mRNA levels (p<0.05). Our findings suggest thatarsenic trioxide increases paclitaxel-induced apoptosis by down regulation of PPM1D expression. PPM1Ddependent signaling can be considered as a novel target to improve the efficacy of chemotherapeutic agents inresistant breast cancer cells.     

三氧化二砷对食管癌细胞株Eca109的放射增敏作用及机制

目的探讨三氧化二砷（Arsenic trioxide, As2O3）及As2O3与放射线联合对食管癌Eca109细胞的增殖抑制作用;分析二者联合对Eca109细胞周期和凋亡的影响,为As2O3的临床应用提供理论依据。方法MTT法观察放射线及As2O3单独及二者联合对食管癌Eca109细胞的增殖抑制作用,利用直线相关及直线回归拟合出照射组、As2O3组及联合组的直线,计算增敏比（sensitizing enhancement ratio, SER）;流式细胞术检测As2O3联合放射线对Eca109细胞周期和凋亡的影响;Western blot印记技术观察As2O3联合放射线对锰超氧化物歧化酶（Manganese superoxide dismutase, MnSOD）和细胞色素C（cytochrome C, cyt-C）蛋白表达的影响。结果As2O3能抑制食管癌Eca109细胞的增殖,具有明显的量效和时效关系;As2O3对食管癌Eca109细胞有明显的放射增敏作用;As2O3与放射线联合作用于Eca109细胞后,G2/M期细胞比例及凋亡率明显增加,MnSOD蛋白表达下降,而cyt-C蛋白表达未见明显变化。结论As2O3可能通过G2/M期阻滞,降低MnSOD蛋白的表达,从而诱导细胞凋亡来增强放射线对细胞的杀伤作用。     

缺氧时5-Fu、As2O3联合及序贯治疗对肝癌细胞凋亡的影响

目的探讨缺氧时5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)和三氧化二砷(As2O3)联合及序贯治疗对肝癌细胞凋亡的影响。方法采用MTT法,分析2种药物联合治疗及序贯治疗对肝癌细胞BEL-7402的细胞毒作用,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况。结果与单用5-Fu及序贯用药相比,联合用药毒性明显增强,与单用5-Fu相比序贯用药毒性明显增强。联合用药可增加G1期细胞,减少S期细胞,序贯用药可减少G1期细胞,增加S期细胞,且联合用药组细胞凋亡率较高。结论 As2O3、5-Fu可导致细胞凋亡,两者联合有协同作用,与序贯用药相比,联合用药细胞毒作用更强,细胞凋亡率更高,治疗效果更强,实验结果可为临床提供参考依据。     

三氧化二砷对人胃癌耐药细胞系SGC7901/ADM耐药逆转及凋亡诱导作用的探讨

目的:探讨中药三氧化二砷(As2O3)对人胃癌多药耐药细胞系(SGC7901/ADM)的耐药逆转及凋亡诱导作用.方法:应用免疫细胞化学方法(PV法)测定不同剂量的As2O3用药前后细胞内mdr-1基因产物P-gp的表达变化;同时用流式细胞仪对以上各组细胞进行细胞周期解析和凋亡率的测定.结果:As2O3在0.10～0.75μmol/L浓度范围内能够逆转SGC7901/ADM细胞内P-gp的表达,并将细胞阻滞于G0～G1期、诱导细胞凋亡(P＜0.01),其作用随As2O3剂量增加而增大.结论:在胃癌耐药细胞系SGC7901/ADM中,As2O3具有耐药逆转和凋亡诱导双重作用,并呈剂量依赖性.     

三氧化二砷诱导尤文肉瘤细胞凋亡及对EWS-FLi1融合蛋白的影响

目的:探讨三氧化二砷(Arsenictrioxide,As₂O₃)诱导尤文肉瘤细胞凋亡及对融合蛋白EWS-FLi1表达的影响。方法:应用噻唑蓝(MTT)法、形态学观察、原位末端标记法(TUNEL)、流式细胞术(FCM)观察As₂O₃对体外生长的尤文肉瘤RD-ES细胞系生物行为的影响;应用半定量RT-PCR测定应用As₂O₃前后c-myc基因mRNA水平的变化;应用免疫细胞化学及固定化蛋白印迹法(Westernblot)观察用药前后EWS-FLi1融合蛋白表达水平的变化。结果:As₂O₃对体外生长的RD-ES细胞系具有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡。c-myc基因mRNA表达水平和EWS-FLi1融合蛋白表达量随As₂O₃作用时间延长逐渐降低。结论:常规治疗浓度的As₂O₃对体外生长的尤文肉瘤细胞具有明显的杀伤作用,其作用机制与改变线粒体膜通透性和抑制EWS-Fli1融合蛋白、降低c-myc基因表达有关。