海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞脑内移植改善帕金森病模型鼠的旋转行为

背景:细胞组织的微囊化移植是近年来帕金森病治疗的研究热点之一,目前发展较成熟、应用较多的是海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠微胶囊,但其易于囊周纤维化、易破碎等缺点,使其临床应用受到了限制。应用国内研制的新型微胶囊材料海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊将PC12细胞微囊化后移植入帕金森病模型鼠纹状体内,观察其作用。目的:观察海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞脑内移植治疗,改善帕金森病模型大鼠旋转行为的作用。设计:随机对照动物实验。单位:吉林大学第二医院和中国科学院大连化学物理研究所。材料:成年雄性Wistar大鼠40只,体质量(220±10)g;海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊;PC12细胞。方法:实验于2002-05/12在吉林大学第二医院动物实验室和中国科学院大连化学物理研究所完成。①应用国产新型材料壳聚糖制成的海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞。②将成功建立的23只帕金森病大鼠模型随机分为3组,微囊化PC12细胞组10只、裸PC12细胞组7只、空微胶囊组6只。分别将海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞、裸PC12细胞、空微胶囊移植入帕金森病模型鼠损伤侧纹状体内。③以阿朴吗啡检测移植前后大鼠旋转行为的差异。观察黑质及纹状体内微包囊的形态并检测微胶囊内细胞的活性。主要观察指标:①移植前后大鼠的旋转行为。②黑质和纹状体的病理形态。③回收的微包囊的完整性及囊内PC12细胞的活性。结果:①微囊化PC12细胞移植组在移植4周时旋转行为显著低于移植前和空微囊移植组犤(6.9±2.8),(11.7±5.5),(10.5±1.6)r/min,P<0.05犦,症状改善至少持续3个月;裸PC12细胞移植组大鼠的旋转行为与移植前相比也有改善犤(5.6±1.1),(9.5±1.5)r/min,P<0.05犦,但仅持续了2个月,且部分大鼠颅内有致死性肿瘤形成。空微囊移植组移植前后大鼠的旋转行为无明显差异。②回收微胶囊内的PC12细胞再培养生长良好,并且具有生物活性。结论:微囊化PC12细胞脑内移植能够改善阿朴吗啡诱发的帕金森病模型鼠的旋转症状,海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠新型微胶囊具有免疫隔离和抑制肿瘤形成的作用,有着广泛的临床应用前景。     

微囊化PC12细胞移植治疗帕金森病：微胶囊材料的生物学特征

背景：帕金森病系中脑黑质多巴胺能神经元变性，使纹状体内多巴胺减少而出现一系列临床症状。将分泌多巴胺的细胞或转染多巴胺合成限速酶基因的细胞进行脑内移植，能一定程度地逆转或改善症状，但存在免疫排斥的问题。目的：探讨在不使用免疫抑制剂的情况下，应用免疫隔离的方法进行细胞移植治疗帕金森病大鼠，观察微胶囊的生物相容性及其机械强度。设计：随机对照实验。单位：中国科学院大连化学物理研究所生物技术部生物医用材料工程组，吉林大学第二医院神经内科。材料：实验于2003—08／2004-02在吉林大学第二临床学院动物实验中心完成。选择雄性Wistar大鼠40只。PC12细胞由中国科学院上海细胞生物学研究所提供。方法：在纹状体内注射6-羟多巴胺盐溶液制备帕金森病动物模型。其中制备模型成功大鼠25只，随机分为微囊化细胞移植组12只：将25μL的微囊化细胞悬液（相当于2．5&;#215;10^4个细胞）分两点定位注射到动物模型右侧（损毁侧）纹状体内。非微囊化细胞移植组7只：植入25μL裸PCI2细胞悬液（相当于5&;#215;10^4个细胞）。空微胶囊移植组6只：植入25μL的空微胶囊悬液。各组大鼠在移植后第7天注射阿朴吗啡（0．05mg／kg），然后记录每只大鼠的旋转行为，1次／周，共12周。术后12周处死大鼠，取脑组织进行病理学观察，回收微胶囊观察生物相容性和免疫隔离作用。主要观察指标：①微胶囊在大鼠纹状体内的生物相容性。②微胶囊的免疫隔离作用。③各组大鼠移植前后平均旋转圈数。结果：进入结果分析25只，其余均为模型制备不成功而脱落。①微胶囊的生物相容性：回收的海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微胶囊，形态完整，表面光滑，无炎细胞浸润。②微胶囊的免疫隔离作用：微胶囊内的PC12细胞继续增殖，部分形成了细胞团。③各组大鼠移植前后平均旋转圈数：移植前各组大鼠的单侧旋转记录无明显不同（P〉0．05）。微囊化细胞移植组移植2周后平均旋转圈数明显低于移植前，甚至停止旋转，症状的改善保持至移植后12周。非微囊化细胞移植组的平均旋转圈数也明显低于移植前，但8，12周又有上升趋势，与移植前无明显变化（P〉0．05）。空微胶囊移植组移植前后的旋转圈数基本一致。结论：①海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微胶囊有良好的生物柑容性和机械强度，在移植部位不引发炎症反应，并保持形态的完整性。②海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微胶囊有免疫保护作用，包封的PC12细胞移植到帕金森病大鼠的脑内可以长期存活，继续保持正常的生理功能，通过合成和释放多巴胺，改善帕金森病大鼠的症状。     

微囊化PC12细胞移植治疗帕金森病微胶囊材料的生物学特征

背景帕金森病系中脑黑质多巴胺能神经元变性,使纹状体内多巴胺减少而出现一系列临床症状.将分泌多巴胺的细胞或转染多巴胺合成限速酶基因的细胞进行脑内移植,能一定程度地逆转或改善症状,但存在免疫排斥的问题.目的探讨在不使用免疫抑制剂的情况下,应用免疫隔离的方法进行细胞移植治疗帕金森病大鼠,观察微胶囊的生物相容性及其机械强度.设计随机对照实验.单位中国科学院大连化学物理研究所生物技术部生物医用材料工程组,吉林大学第二医院神经内科.材料实验于2003-08/2004-02在吉林大学第二临床学院动物实验中心完成.选择雄性Wistar大鼠40只.PC12细胞由中国科学院上海细胞生物学研究所提供.方法在纹状体内注射6-羟多巴胺盐溶液制备帕金森病动物模型.其中制备模型成功大鼠25只,随机分为微囊化细胞移植组12只将25μL的微囊化细胞悬液(相当于2.5×104个细胞)分两点定位注射到动物模型右侧(损毁侧)纹状体内.非微囊化细胞移植组7只植入25μL裸PC12细胞悬液(相当于5×104个细胞).空微胶囊移植组6只植入25μL的空微胶囊悬液.各组大鼠在移植后第7天注射阿朴吗啡(0.05 mg/kg),然后记录每只大鼠的旋转行为,1次/周,共12周.术后12周处死大鼠,取脑组织进行病理学观察,回收微胶囊观察生物相容性和免疫隔离作用.主要观察指标①微胶囊在大鼠纹状体内的生物相容性.②微胶囊的免疫隔离作用.③各组大鼠移植前后平均旋转圈数.结果进入结果分析25只,其余均为模型制备不成功而脱落.①微胶囊的生物相容性回收的海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微胶囊,形态完整,表面光滑,无炎细胞浸润.②微胶囊的免疫隔离作用微胶囊内的PC12细胞继续增殖,部分形成了细胞团.③各组大鼠移植前后平均旋转圈数移植前各组大鼠的单侧旋转记录无明显不同(P＞0.05).微囊化细胞移植组移植2周后平均旋转圈数明显低于移植前,甚至停止旋转,症状的改善保持至移植后12周.非微囊化细胞移植组的平均旋转圈数也明显低于移植前,但8,12周又有上升趋势,与移植前无明显变化(P＞0.05).空微胶囊移植组移植前后的旋转圈数基本一致.结论①海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微胶囊有良好的生物相容性和机械强度,在移植部位不引发炎症反应,并保持形态的完整性.②海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微胶囊有免疫保护作用,包封的PC12细胞移植到帕金森病大鼠的脑内可以长期存活,继续保持正常的生理功能,通过合成和释放多巴胺,改善帕金森病大鼠的症状.     

偏侧帕金森病样大鼠脑内微囊化牛嗜铬细胞移植实验

目的：观察偏侧帕金森病样大鼠微囊化牛嗜铬细胞脑移植后多巴胺及其代谢产物含量的变化,探讨大鼠异常旋转行为改善的可能途径.方法：实验于1999-01/12在解放军总医院老年医学研究所完成.选择6-羟基多巴立体定向损毁右侧黑质诱发的偏侧帕金森病样雌性SD大鼠30只,随机分为2组,微囊组20只,对照组10只.微囊组大鼠水合氯醛麻醉后于右侧纹状体立体定向植入约200个以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠为材料含牛嗜铬细胞的微胶囊,对照组大鼠未做脑内移植手术.观察移植术前后阿朴吗啡（0.5 mg/kg）诱发的大鼠旋转行为.利用微透析技术采取帕金森病样大鼠脑纹状体区细胞外微透析液,用高效液相电化学层析法测定对照组大鼠在6-羟基多巴损毁右侧脑黑质后16周时及两组大鼠在牛嗜铬细胞移植后12周时脑纹状体区细胞外液中单胺类物质含量的变化.结果：纳入偏侧帕金森病样大鼠30只,实验过程中微囊组麻醉意外、脑出血、肢体癫痫样抽搐死亡4只,对照组脑出血、不明原因死亡2只.进入结果分析微囊组和对照组分别为16和8只大鼠.①微囊组移植后1周开始阿朴吗啡诱发的异常旋转次数明显减少,作用持续6个月以上（F=37.89,P＜0.01）.②对照组帕金森病样大鼠右侧脑黑质损毁后16周时右侧脑纹状体区细胞外液中3,4-二羟基苯乙酸和高香草酸水平较左侧明显降低（t=7.012,4.394,P＜0.01）,右侧脑上述物质含量仅为左侧脑的8%和12%.③移植后12周,微囊组帕金森病样大鼠右侧脑纹状体区细胞外液中3,4-二羟基苯乙酸、高香草酸和5-羟基吲哚乙酸水平较对照组显著升高（t=4.273,4.402,6.445,P＜0.01）,分别提高了3.1,5.3和2.7倍.结论：帕金森病样大鼠黑质损毁侧纹状体区多巴胺类物质含量明显降低,移植微囊化牛嗜铬细胞后含量升高,使帕金森病样大鼠的运动功能障碍明显改善.     

偏侧帕金森病样大鼠脑内微囊化牛嗜铬细胞移植实验

目的:观察偏侧帕金森病样大鼠微囊化牛嗜铬细胞脑移植后多巴胺及其代谢产物含量的变化,探讨大鼠异常旋转行为改善的可能途径。方法:实验于1999-01／12在解放军总医院老年医学研究所完成。选择 6-羟基多巴立体定向损毁右侧黑质诱发的偏侧帕金森病样雌性SD大鼠30只,随机分为2组,微囊组20只,对照组10只。微囊组大鼠水合氯醛麻醉后于右侧纹状体立体定向植入约200个以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠为材料含牛嗜铬细胞的微胶囊,对照组大鼠未做脑内移植手术。观察移植术前后阿朴吗啡(0．5 mg／kg)诱发的大鼠旋转行为。利用微透析技术采取帕金森病样大鼠脑纹状体区细胞外微透析液,用高效液相电化学层析法测定对照组大鼠在6-羟基多巴损毁右侧脑黑质后 16周时及两组大鼠在牛嗜铬细胞移植后12周时脑纹状体区细胞外液中单胺类物质含量的变化。结果:纳入偏侧帕金森病样大鼠30只,实验过程中微囊组麻醉意外、脑出血、肢体癫痫样抽搐死亡4只,对照组脑出血、不明原因死亡2 只。进入结果分析微囊组和对照维分别为16和8只大鼠。①微囊组移植后1周开始阿朴吗啡诱发的异常旋转次数明显减少,作用持续6个月以上(F=37．89,P<0．01)。②对照组帕金森病样大鼠右侧脑黑质损毁后16周时右侧脑纹状体区细胞外液中3,4-二羟基苯乙酸和高香草酸水平较左侧明显降低(t=7．012,4．394,P<0．01),右侧脑上述物质含量仅为左侧脑的8％和12％。③移植后12周,微囊组帕金森病样大鼠右侧脑纹状体区细胞外液中3,4-二羟基苯乙酸、高香草酸和5-羟基吲哚乙酸水平较对照组显著升高(t=4．273,4.402,6．445,P<0．01),分别提高了 3．1,5.3和2．7倍。结论:帕金森病样大鼠黑质损毁侧纹状体区多巴胺类物质含量明显降低, 移植微囊化牛嗜铬细胞后含量升高,使帕金森病样大鼠的运动功能障碍明显改善。     

移植的神经干细胞在帕金森病模型小鼠脑内的存活与分化

目的 观察移植的神经干细胞在帕金森病(PD)模型小鼠脑内的存活与分化。方法 C57BL／6小鼠皮下注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)造成PD模型。用5-溴尿嘧啶(BrdU)标记的神经干细胞分别移植到模型鼠的一侧或两侧纹状体。用酪氨酸羟化酶免疫荧光评价MPTP对黑质多巴胺能神经元的毒性。用免疫组织化学和激光共聚焦鉴定移植的神经干细胞在体内的存活与分化。结果 MPTP使黑质酪氨酸羟化酶阳性细胞显著减少；在细胞移植的纹状体内发现有明显散在分布的BrdU阳性细胞，表明移植的神经干细胞已经存活；激光共聚焦显示部分BrdU阳性细胞已分化为酪氨酸羟化酶阳性细胞。结论 移植的神经干细胞能在PD模型小鼠纹状体存活，并可分化出特定的多巴胺能神经元。     

人脐血间充质干细胞脑内移植改善帕金森病大鼠行为缺陷的研究

背景已有较多的研究证明脐血细胞能向神经元样细胞分化,且成功的运用脐血治疗脑卒中及其他神经系统疾病的研究已有报道,能否应用脐血干细胞治疗神经变性疾病尚未可知.目的探讨应用人脐血间充质干细胞治疗大鼠帕金森病的可行性及其机制.设计随机对照实验研究.地点和对象健康Sprague-Dawley大鼠18只,清洁级,体质量220～260 g.脐血标本取自郑州大学第三附属医院妇产科,每个标本60～120 mL.干预制备6-羟多巴胺帕金森病偏侧大鼠模型,随机分为3组①对照组(n=6).②PBS组(n=6)在每只大鼠右侧纹状体移植10 μL的PBS.③间充质干细胞组(n=6)将3×106个用BrdU标记的脐血间充质干细胞植入大鼠右侧纹状体,4周后用阿朴吗啡诱发旋转试验并用免疫组织化学检测植入细胞的存活情况及纹状体酪氨酸羟化酶阳性细胞.主要观察指标①移植前后各组大鼠旋转圈数.②免疫组织化学染色结果.结果脐血间充质干细胞在体内存活,与对照组相比,间充质干细胞移植组阿朴吗啡诱发的旋转行为[每30钟大鼠旋转圈数为212±60比340±30]显著改善(P＜0.05),但右侧纹状体酪氨酸羟化酶阳性细胞数与对照组相比无显著性差异(P＞0.05).结论人脐血间充质干细胞脑内移植能改善帕金森大鼠的行为缺陷,可作为治疗神经变性疾病的一种潜在细胞资源.     

人脐血间充质干细胞脑内移植改善帕金森病大鼠行为缺陷的研究

背景：已有较多的研究证明脐血细胞能向神经元样细胞分化，且成功的运用脐血治疗脑卒中及其他神经系统疾病的研究已有报道，能否应用脐血干细胞治疗神经变性疾病尚未可知。目的：探讨应用人脐血间充质干细胞治疗大鼠帕金森病的可行性及其机制。设计：随机对照实验研究。地点和对象：健康Sprague-Dawley大鼠18只，清洁级，体质量220～260g。脐血标本取自郑州大学第三附属医院妇产科，每个标本60～120mL。干预：制备6-羟多巴胺帕金森病偏侧大鼠模型，随机分为3组：①对照组（n=6)。②PBS组(n=6)：在每只大鼠右侧纹状体移植10μL的PBS。③间充质干细胞组(n=6)：将3&;#215;10^6个用BrdU标记的脐血间充质干细胞植入大鼠右侧纹状体，4周后用阿朴吗啡诱发旋转试验并用免疫组织化学检测植入细胞的存活情况及纹状体酪氨酸羟化酶阳性细胞。主要观察指标：①移植前后各组大鼠旋转圈数。②免疫组织化学染色结果。结果：脐血间充质干细胞在体内存活，与对照组相比，间充质干细胞移植组阿朴吗啡诱发的旋转行为[每30钟大鼠旋转圈数为212&;#177;60比340&;#177;30]显著改善(P&;lt;0．05)，但右侧纹状体酪氨酸羟化酶阳性细胞数与对照组相比无显著性差异(P&;gt;0．05)。结论：人脐血间充质干细胞脑内移植能改善帕金森大鼠的行为缺陷，可作为治疗神经变性疾病的一种潜在细胞资源。     

TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对帕金森病模型动物的旋转行为及神经生化的影响

背景:神经干细胞(neuronalstemcells,NSCs)能提供多巴胺能神经元来治疗帕金森病(Parkinsondisease,PD),但脑内移植NSCs治疗PD的疗效目前观察结果欠佳。研究显示酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH)基因脑内移植能缓解PD的症状,TH基因修饰的NSCs脑内移植可能使PD的治疗效果出现新的结局。目的:探讨TH基因修饰的NSCs脑内移植对PD模型动物旋转行为和神经生化的影响。设计:完全随机对照实验。地点和对象:本实验选择105只大鼠,在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。干预:构建pN2ATH反转录病毒载体质粒,用PA317细胞包装,G418筛选阳性克隆,病毒上清感染NSCs,将NSCs和表达TH的NSCs植入PD大鼠纹状体内,测定移植后不同时间PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸(dihydroxy-phenylaceticacid,DOPAC)含量变化。主要观察指标:PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和DOPAC含量变化。结果:TH基因修饰的NSCs移植8周后能显著降低PD大鼠旋转行为,增加纹状体多巴胺和DOPAC含量,疗效好于单纯NSCs移植组和对照组。结论:TH基因修饰的NSCs脑内移植能增加纹状体多巴胺和DOPAC含量,降低PD大鼠旋转行为,从而对PD大鼠有明显的治疗作用。     

TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对帕金森病模型动物的旋转行为及神经生化的影响

背景：神经干细胞(neuronal stem cells，NSCs)能提供多巴胺能神经元来治疗帕金森病(Parldnson disease，PD)，但脑内移植NSCs治疗PD的疗效目前观察结果欠佳。研究显示酪氨酸羟化酶(tyrosine hydIDxylase，TH)基因脑内移植能缓解PD的症状，TH基因修饰的NSCs脑内移植可能使PD的治疗效果出现新的结局。目的：探讨TH基因修饰的NSCs脑内移植对PD模型动物旋转行为和神经生化的影响。设计：完全随机对照实验。地点和对象：本实验选择105只大鼠，在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。干预：构建pN2ATH反转录病毒载体质粒，用PA317细胞包装，G418筛选阳性克隆，病毒上清感染NSCs，将NSCs和表达TH的NSCs植入PD大鼠皱状体内，测定移植后不同时间PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和3，4-二羟基苯乙酸(dihydroxy-phenyl acetlc acid，OOPAC)含量变化。主要观察指标：PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和DOPAC含量变化。结果：TH基因修饰的NSCs移植8周后能显降低PD大鼠旋转行为。增加纹状体多巴胺和DOPAC含量，疗效好于单纯NSCs移植组和对照组。结论：TH基因修饰的NSCs脑内移植能增加纹状体多巴胺和DOPAC含量，降低PD大鼠旋转行为，从而对PD大鼠有明显的治疗作用。     

微囊化PC12细胞蛛网膜下腔移植治疗慢性神经源性疼痛

背景：大量动物实验已证实,微囊化嗜铬细胞蛛网膜下腔移植具有镇痛作用,但由于异体移植存在伦理学的广泛争议,而人肾上腺嗜铬细胞来源匮乏,因此,必须寻求一种新的、可合成和释放脑啡肽等物质,且来源丰富的细胞用于移植镇痛研究。目的：观察微囊化PC12细胞移植入慢性神经源性疼痛模型大鼠蛛网膜下腔后的镇痛效果。方法：将慢性坐骨神经缩窄性损伤模型鼠随机数字表法分为3组,造模后1周进行移植。微囊化PC12细胞组、裸PC12细胞组、空微囊组分别取微囊包裹后第3-5天的微囊化PC12细胞悬液、PC12细胞悬液、APA空微囊悬液植入大鼠蛛网膜下腔。结果与结论：微囊化PC12细胞组大鼠在移植后各时间点,两侧后肢收缩次数和时间的差值与移植前相比显著下降（P〈0.01）,组间比较其差值均低于裸PC12细胞组和空微囊组（P〈0.01）;在移植后第7周,微囊化PC12细胞组大鼠脑脊液中脑啡肽和去甲肾上腺素的浓度显著高于裸PC12细胞组和空微囊组（P〈0.01）。提示微囊化PC12细胞蛛网膜下腔移植可有效缓解慢性坐骨神经缩窄性损伤模型鼠在冷致痛实验中的痛觉过敏现象,同时,大鼠脑脊液中脑啡肽和去甲肾上腺素的水平相应升高。     

神经前体细胞纹状体注入对帕金森病模型大鼠行为的影响

背景:胚胎干细胞经诱导产生神经前体细胞,再进行脑内移植,依旧具备增殖与分化的潜能,与宿主神经组织整合,使其有强的可塑性,这将有助于帕金森病的治疗效果观察。目的:观察小鼠胚胎干细胞分化为神经前体细胞,以及定点移植对改进型帕金森病大鼠模型行为学的影响。设计:随机对照动物实验。单位:解放军第三军医大学基础医学部生理学教研室和神经生物学教研室。材料:健康成年Wistar大鼠50只,随机分为实验组45只,对照组5只。方法:①实验组大鼠黑质致密部与中脑腹侧背盖区两点各注射6-羟基多巴5μL(2g/L)制备帕金森病大鼠模型,对照组注射生理盐水5μL/点,术后1周开始行为学检测,测定模型成功率,1次/周,连续7周。②选取成功帕金森病模型大鼠20只实施纹状体神经前体细胞移植,剂量为2μL[细胞悬液记数为(5～8)×106个/μL]。另取5只模型大鼠纹状体注射生理盐水2μL为生理盐水对照组。主要观察指标:①帕金森病模型成功率。②神经前体细胞移植对帕金森病模型大鼠旋转次数的影响。③移植的神经前体细胞在体分布,存活与分化情况。结果:①6周后实验组45只大鼠中共有33只(73%)达到成功帕金森病模型标准。②细菌培养皿上用无血清培养基培养形成胚胎体5d后,约85%胚胎干细胞分化为Nestin阳性的神经前体细胞。③神经前体细胞脑内移植后的帕金森病大鼠的旋转次数明显少于生理盐水对照组。多数移植的神经前体细胞存活,部分分化为TH阳性神经元。结论:小鼠胚胎干细胞诱导的神经前体细胞脑内移植后,分化为TH阳性神经元,帕金森病大鼠旋转次数明显减少。     

神经前体细胞纹状体注入对帕金森病模型大鼠行为的影响

背景：胚胎干细胞经诱导产生神经前体细胞，再进行脑内移植，依旧具备增殖与分化的潜能，与宿主神经组织整合，使其有强的可塑性，这将有助于帕金森病的治疗效果观察。 目的：观察小鼠胚胎干细胞分化为神经前体细胞，以及定点移植对改进型帕金森病大鼠模型行为学的影响。设计：随机对照动物实验。单位：解放军第三军医大学基础医学部生理学教研室和神经生物学教研室。材料：健康成年Wistar大鼠50只，随机分为实验组45只，对照组5只。 方法：①实验组大鼠黑质致密部与中脑腹侧背盖区两点各注射6-羟基多巴5μL（2g／L）制备帕金森病大鼠模型，对照组注射生理盐水5μL／点，术后1周开始行为学检测，测定模型成功率，1次／周，连续7周。②选取成功帕金森病模型大鼠20只实施纹状体神经前体细胞移植，剂量为2μL[细胞悬液记数为（5～8）&;#215;10^6个／μL]。另取5只模型大鼠纹状体注射生理盐水2μL为生理盐水对照组。主要观察指标：①帕金森病模型成功率。②神经前体细胞移植对帕金森病模型大鼠旋转次数的影响。③移植的神经前体细胞在体分布，存活与分化情况。 结果：①6周后实验组45只大鼠中共有33只（73％）达到成功帕金森病模型标准。②细菌培养皿上用无血清培养基培养形成胚胎体5d后，约85％胚胎干细胞分化为Nestin阳性的神经前体细胞。③神经前体细胞脑内移植后的帕金森病大鼠的旋转次数明显少于生理盐水对照组。多数移植的神经前体细胞存活，部分分化为TH阳性神经元。 结论：小鼠胚胎干细胞诱导的神经前体细胞脑内移植后，分化为TH阳性神经元，帕金森病大鼠旋转次数明显减少。     

微囊化PC12细胞的分泌特征及其致瘤性

背景：有报道微囊化细胞移植不仅能避免免疫排斥反应，而且肿瘤细胞微囊化后可以消除其致瘤性。目的：观察大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12细胞微囊化前后的分泌功能变化，及微囊化PC12细胞植入大鼠蛛网膜下腔后的存活情况和致瘤性。设计、时间及地点：动物观察实验，于2007—07／12在中LU大学实验动物中心完成。材料：用微囊包裹PC12细胞。方法：将微囊化后第3～5天的PC12细胞植入12只雄性SD大鼠蛛网膜下腔。主要观察指标：检测微囊化前后PC12细胞去甲肾上腺素和甲硫氨酸脑啡肽的分泌情况：移植术后8周，回收移植的微囊化PC12细胞，检测存活情况和分泌功能；移植术后12周，对大鼠腰段脊髓予病理切片检查，观察移植物对脊髓组织的影响。结果：①PC12细胞经微囊包裹后，体外培养生长良好，除微囊化后第1天外，细胞微囊化前后去甲肾上腺素和甲硫氨酸脑啡肽分泌水平差异无显著性意义（P〉0．05）。②回收移植术后的微囊化PC12细胞，再培养，其去甲肾上腺素和甲硫氨酸脑啡肽的分泌水平与移植前比较差异无显著性意义（P〉0．05）。③移植术后12周，大鼠脊髓大体观察均未见新生物形成，病理切片显示神经细胞和髓鞘结构完整，少量淋巴细胞浸润，无纤维增生和坏死。结论：PC12细胞微囊化后可保持其活性和分泌功能：同种移植于蛛网膜下腔后，仍保持活性和分泌功能，无致瘤性。     

胚胎神经上皮干细胞脑内移植治疗大鼠帕金森病

背景：研究表明胚胎干细胞移植可改善血管性痴呆大鼠的学习记忆功能,增强神经的可塑性,诱导自身定向迁移并分化为成熟神经元。目的：观察胚胎神经上皮干细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠及移植细胞的迁徙情况。方法：将绿色荧光蛋白转基因鼠的胚胎神经上皮干细胞分别移植到帕金森病大鼠的黑质、纹状体和侧脑室内,移植后检测移植细胞的存活、迁徙与分化;利用高效液相色谱法检测实验动物脑内多巴胺神经递质的含量：对比实验动物旋转行为的改变,评估胚胎神经上皮干细胞移植对帕金森病大鼠的治疗作用。结果与结论：移植细胞存活良好且分化出了酪氨酸羟化酶阳性细胞,向黑质纹状体环路迁徙趋势明显;脑内多巴胺含量增加,动物旋转行为改善明显。表明移植到帕金森病大鼠脑内的神经上度干细胞多向黑质纹状体环路迁徙,且可增加脑内多巴胺神经递质的含量治疗帕金森病。     

微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞偏侧帕金森病样猴脑内移植研究

目的:观察微囊化牛肾上腺嗜铬细胞脑内移植对偏侧帕金森病样猴的行为影响、移植物的存活状况、脑组织液中单胺类物质含量的变化及纹状体区多巴胺D2受体的活动性。方法:实验于1999-01/2003-06在解放军总医院老年医学研究所完成。①右侧颈内动脉注射甲基-苯基-四氢吡啶诱发帕金森病样猴模型(n=9),随机分为微囊化牛肾上腺嗜铬细胞组6只、牛肾上腺嗜铬细胞组2只及空微囊组1只。②获取牛肾上腺嗜铬细胞,以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠为材料包裹牛肾上腺嗜铬细胞,将微囊化、非囊化牛肾上腺嗜铬细胞或空微囊分别植入微囊化牛肾上腺嗜铬细胞组、牛肾上腺嗜铬细胞组及空微囊组帕金森病样猴右侧尾状核和壳核。③观察3组帕金森病样猴移植后的行为改善、移植后14个月及28个月时移植物的状况,微囊化牛肾上腺嗜铬细胞组移植后2个月及7个月时移植区微透析液中单胺类物质变化及48个月时多巴胺D2受体的活动性变化。结果:①囊化牛肾上腺嗜铬细胞组(n=6)和牛肾上腺嗜铬细胞组(n=2)移植后1周开始帕金森病样猴左上肢活动明显增加,囊化牛肾上腺嗜铬细胞组改善时间7～48个月,牛肾上腺嗜铬细胞组一两个月,空微囊组(n=1)左侧上肢活动无改善。②囊化牛肾上腺嗜铬细胞植入28个月时仍存活于帕金森病样猴脑内。③囊化牛肾上腺嗜铬细胞组移植后2,7个月时,右侧壳核、尾状核细胞外液中多巴胺、3,4-二羟基苯乙酸和高香草酸水平较移植前明显提高(P<0.05),但仍低于左侧的水平。④囊化牛肾上腺嗜铬细胞移植48个月时移植区D2受体活性较对侧明显提高。结论:结果表明帕金森病样猴脑内移植的囊化牛肾上腺嗜铬细胞能够长期存活、产生多巴胺、改善其异常行为。     

帕金森病大鼠模型定向移植Resovist标记骨髓基质干细胞的活体MR示踪

目的 筛选并确定特定条件下行帕金森病(PD)大鼠模型纹状体定向移植骨髓基质干细胞(BMSCs)磁共振(MR)活体观察的最佳移植细胞数量及最佳观察时间. 方法 40只PD大鼠分为5组,移植Resovist标记BMSCs数量分别为1×10~5(第1组)、1.5×10~5(第2组)、2×10~5(第3组)、2.5×10~5(第4组)和对照组(第5组,注射生理盐水),每组8只.运用FFE-T2WI序列在移植前、移植后1、4、8周对其行MR检查和阿朴吗啡旋转试验,测量并比较各组大鼠在各观察时间点脑内低信号区的体积大小,评估不同数量移植细胞的迁移情况,并观察其对PD大鼠的行为学治疗效果.移植细胞后12周,MR检查后处死大鼠行免疫组化检查. 结果 第1和第2组随时间延长MRI低信号区体积变小;第3和第4组第4周的低信号区体积大于第1周,但仅第3组差异有统计学意义(P=0.005);第3组每分钟旋转次数降低幅度最大,与对照组差异有统计学意义(P=0.02). 结论 与行为学试验相对应,2.0×10~5剂量组可作为活体MR观察的最佳剂量;立体定向移植BMSCs后1～4周可作为MR活体观察最佳时间.