姜黄素对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对肝癌细胞（QGY）细胞增殖和细胞周期的调控及细胞凋亡的影响。方法 采用MTT法测定姜黄素在不同浓度，不同时间对QGY的抑制作用，流式细胞仪分析细胞周期分布，透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果 姜黄素可抑制QGY的抑制作用。流式细胞仪分析细胞周期分布，透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果 姜黄素可抑制QGY细胞的生长，其抑瘤率与药物浓度和作用时间呈依赖关系，72h的中效浓度（IC50）为49.50μmol/L，流式细胞仪分析证实姜黄素能使QGY细胞聚积在S期，电镜观察发现姜黄素可导致细胞变性。坏死，诱导细胞凋亡。结论 姜黄素可干扰QGY细胞的周期分布，具有细胞毒作用。抗增殖，诱导细胞凋亡的作用。     

姜黄素对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的　观察姜黄素对体外培养肝星状细胞 (HSC)增殖与凋亡的影响。方法　不同浓度姜黄素处理HSC株HSC T6 ,MTT法检测细胞增殖 ,流式细胞仪、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡。结果　在 2 0～ 10 0 μmol/L浓度范围内 ,姜黄素可剂量依赖性地抑制HSC增殖 (P <0 .0 1)。 2 0、4 0、6 0 μmol/L姜黄素处理HSC 2 4h后 ,细胞周期分析发现S期细胞减少 ,G2 /M期细胞显著增加 (P <0 .0 1) ;流式细胞术检测到明显的亚G1峰 ,各组的凋亡指数 (% )分别是 15 .3± 1.9,2 6 .7± 2 .8,37.6± 4 .4 ,与对照组 (1.9± 0 .6 )相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;4 0 μmol/L姜黄素作用 12、2 4、36、4 8h ,凋亡指数 (% )分别是 12 .0± 2 .4、2 6 .7± 3.5、33.8± 1.8和 4 9.3± 1.6 ,与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;透射电镜观察到细胞皱缩、核染色质浓缩沿核膜排列和凋亡小体形成等 ;琼脂糖凝胶电泳可见到明显的DNA梯带形成。结论　姜黄素可显著抑制HSC增殖 ,使细胞周期停滞于G2 /M期 ,并诱导其凋亡 ,其作用具有时间和剂量依赖性     

姜黄素对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

肝星状细胞(HSC)在肝纤维化的发生中起重要作用，我们应用体外HSC培养技术，初步研究了姜黄素对HSC增殖与凋亡的影响，探讨姜黄素用于肝纤维化治疗的可能性。     

姜黄素对小鼠肝癌细胞体外增殖和凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对小鼠肝癌Hepa1-6细胞体外增殖和凋亡的影响。方法 取处于对数生长期的Hepa1-6细胞,随机分为对照组、10μmol/L组、20μmol/L组和40μmol/L组,分别采用0、10、20、40μmol/L的姜黄素进行干预,通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。RT-qPCR法检测Hepa1-6细胞中凋亡相关分子Bcl-2和Caspase-3及Toll样受体2(TLR2)、IFN-α、IFN-β基因表达。ELISA法检测Hepa1-6细胞培养上清IFN-Ⅰ。对照组、40μmol/L组中Hepa1-6细胞分别与CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞共孵育,流式细胞术检测CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞CD69表达。结果 10、20、40μmol/L组Hepa1-6细胞增殖抑制率呈剂量依赖性增加,抑制率依次为(36.45±2.11)%、(46.40±2.08)%、(82.16±3.32)%,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);10、20和40μmol/L组Hepa1-6细胞凋亡比例分别为10.47%、26.66%和49.81%,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。RT-qPCR结果显示,10、20和40μmol/L组中抗凋亡基因Bcl-2转录水平分别是对照组的(0.77±0.06)倍、(0.44±0.06)倍和(0.25±0.08)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);同时,促凋亡基因Caspase-3表达增高,10、20和40μmol/L组中促凋亡基因Caspase-3转录水平分别是对照组的(1.73±0.31)倍、(2.52±0.45)倍和(3.25±0.20)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。随姜黄素浓度的增加,TLR2转录水平逐渐升高,10、20和40μmol/L组TLR2转录水平分别是对照组的(3.56±0.59)倍、(4.93±0.04)倍和(6.60±0.47)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);10、20和40μmol/L组IFN-α转录水平升高,分别为对照组的(4.21±0.22)倍、(5.54±0.39)倍和(8.05±0.93)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);IFN-β转录水平分别为对照组的(3.08±0.51)倍、(5.31±0.55)倍和(8.35±0.59)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。10、20和40μmol/L组细胞分泌IFN-α水平分别为(57.00±8.8)、(82.47±4.42)、(100.37±8.99)pg/mL,对照组为(36.26±6.12)pg/mL,10、20和40μmol/L组细胞分泌IFN-α水平高于对照组(P均<0.01);10、20和40μmol/L组细胞分泌IFN-β水平分别为(60.67±6.81)、(91.33±5.51)、(144.00±10.15)pg/mL,对照组为(44.67±1.15)pg/mL,10、20和40μmol/L组细胞分泌IFN-β水平高于对照组(P均<0.01)。对照组CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞表达CD69水平分别为(24.53±1.39)%、(23.40±2.32)%、(32.33±3.08)%,40μmol/L组CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞表达CD69水平分别为(39.90±3.51)%、(31.47±3.88)%、(50.83±4.74)%,对照组与40μmol/L组CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞CD69水平比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 姜黄素通过调控TLR2分子表达,促进IFN-Ⅰ分泌,从而抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡,同时促进免疫细胞活化。     

姜黄素对人子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察姜黄素对人子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法将对数生长期的人子宫肌瘤细胞分为两组,观察组加入终浓度分别为10、50、100μmol/L的姜黄素,对照组加入1‰的二甲基亚砜(DM-SO),分别于培养12、24、48、72 h后,采用MTT法测算细胞增殖抑制率,用流式细胞术检测细胞凋亡率。将对数生长期的细胞随机分为3组,A组加入终浓度100μmol/L的姜黄素,B组加入100μmol/L的线粒体ATP敏感钾通道开放剂二氮嗪及100μmol/L的姜黄素,C组加500μmol/L的线粒体ATP敏感钾通道阻断剂5-羟基癸酸脱氢酶(5-HD)及100μmol/L的姜黄素;培养48 h后,分别采用MTT法和流式细胞仪测算细胞增殖抑制率和凋亡率。结果随着姜黄素浓度的增加和作用时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐减低(P均<0.05),而细胞凋亡率逐渐增加(P均<0.05)。A组细胞增殖抑制率和凋亡率分别为75.65%±9.42%、41.82%±6.12%,B组分别为17.66%±2.45%、32.46%±6.71%,C组分别为40.67%±5.46%、74.42%±8.47%,B组与A、C组比较,P均<0.05。结论姜黄素可抑制人子宫肌瘤细胞增殖并促进其凋亡,该作用可能与姜黄素抑制线粒体ATP敏感钾通道有关。     

姜黄素诱导SSMC7721细胞凋亡及对细胞周期的影响

目的探讨姜黄素对人肝癌细胞株(SSMC7721)细胞的诱导分机制,为肝癌的治疗提供理论依据。方法应用噻唑蓝(MTT)比色法检测姜黄素对SSMC7721细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期进程的变化及凋亡率,透射电子显微镜观察SSMC7721亚细胞结构改变。结果姜黄素对SSMC7721细胞有明显的增殖抑制作用,且呈剂量依赖性,流式细胞仪分析G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,电子显微镜下可见经姜黄素作用后的细胞高度空化,线粒体肿胀,核染色质趋边,可见凋亡小体。结论姜黄素能够抑制SSMC7721细胞增殖,阻止SSMC7721细胞G1期向S期转化进程,诱导SSMC7721细胞凋亡及亚细胞结构改变。     

羟基喜树碱对人肝癌细胞增殖影响及凋亡诱导

目的 探讨羟基喜树碱对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及其诱导凋亡的作用。方法 以不同浓度的羟基喜树碱在体外作用于人肝癌细胞株SMMC-7721,采用MTT法检测细胞增殖;化学荧光法检测Bcl-2的细胞表达;电镜观察、流式细胞仪与原位末端标记方法检测细胞凋亡情况。结果 与空白对照组比较,羟基喜树碱浓度在3.125μg/mL～100μg/mL组,对肿瘤细胞的增殖抑制率显著增高(P<0.01);在0.05mg/mL组出现细胞早期凋亡现象,Bcl-2表达明显减少;在0.1mg/mL组形成凋亡小体;细胞凋亡比例随羟基喜树碱浓度增加而增高。结论 羟基喜树碱在体外可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖,其作用机制可能系通过抑制Bcl-2表达诱导细胞凋亡。     

细胞增殖和凋亡与肝癌浸润转移的相关性

肿瘤的发生发展不仅与肿瘤细胞的增殖而且与其凋亡(ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)有着密切的联系[1] 。本文利用ＤＮＡ末端标记法(ＩＳＥＬ)、光镜、电镜和免疫组化法分别对肝癌 (ＨＣＣ)凋亡和增殖细胞核抗原 (ＰＣＮＡ)进行原位观察和比较 ,并结合计算机图像技术定量分析 ,与ＨＣＣ各生物学参数对比 ,以探讨细胞增殖和凋亡在ＨＣＣ浸润和肝内转移过程中的可能机制。一、材料与方法1.病例资料 :近期手术切除且病理证实的ＨＣＣ标本 5 5例 ,男 4 6例 ,女 9例 ,年龄为 2 5～ 74岁 ,中位年龄 4 9.7岁。所有患者术前均未接受化疗、放疗或免疫治疗。ＨＣ…     

海南美登木对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨海南美登木提取物在体外对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响。方法海南美登木提取物0、10、40μg/ml分别作用HepG2细胞24 h后,以Hoechst 33528染色法观察细胞核的形态学变化;分别用海南美登木提取物0、10、20、40、60、80μg/ml在24、48、72 h对人肝癌HepG2细胞进行处理,细胞生长的抑制率采用MTT法检测,对各时间点的IC50进行计算;流式细胞仪检测海南美登木提取物0、20、60μg/ml作用人肝癌HepG2细胞24 h后对细胞周期的影响,对细胞凋亡的作用采用Annexin-V-FITC/PI双染法检测。结果海南美登木提取物能抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,且呈时间和浓度依赖性,抑制率较阴性对照组有显著差异;HepG2细胞在海南美登木提取物干预后染色观察,呈典型的核质浓缩、核碎裂、凋亡小体形成的凋亡变化,且依赖于浓度变化;细胞数量在G2/M期增加,而G0/G1期明显减少,与0μmol/L组相比,呈浓度依赖性的凋亡峰有显著差异。双染法检测细胞凋亡率发现与0μmol/L组相比呈浓度依赖性明显增加。结论海南美登木提取物可能通过使肝癌细胞滞留在G0/M期及诱导细胞凋亡等机制,抑制肝癌细胞的增殖。     

没药甾酮对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的研究没药甾酮对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法以正常人肝细胞L-02作为对照,采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法观察不同浓度没药甾酮（5～100μmol/L）对人肝癌细胞HepG2和L-02细胞增殖的影响并观察细胞形态的变化;应用流式细胞术检测细胞周期变化和凋亡发生。结果不同浓度没药甾酮均可显著抑制人肝癌细胞HepG2生长,并呈时间、剂量依赖性,最大抑制率可达81.9%±1.92%（100μmol/L）;没药甾酮可使G0/G1期细胞比例增多,G2/M期细胞比例下降,可将细胞阻滞于G0/G1期;没药甾酮诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡,50μmol/L和75μmol/L没药甾酮早期细胞凋亡率分别为24.91%±2.41%、53.03%±2.28%,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论没药甾酮可抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导凋亡,其作用可能与干扰细胞周期有关。     

洛铂对肝癌HepG2细胞增殖和调亡的作用及机制

目的在体外细胞中研究洛铂对肝癌HepG2细胞在增殖、凋亡方面的作用及其机制。方法将HepG2细胞分为洛铂组(增殖实验:5、10、15μmol/L组;凋亡实验:10μmol/L;侵袭实验:4μg/ml)和对照组(不加药物)。利用CCK8法和流式细胞术分别检测2组HepG2细胞的增殖和凋亡情况。通过Western Blot初步检测2组细胞中增殖、凋亡相关蛋白NF-κB、Bcl-2、Bax、Bid、Puma、Caspase-3的表达变化。增殖实验采用双因素方差分析,凋亡实验采用χ2检验,侵袭实验采用t检验。结果在作用于细胞24、48、72 h后,对照组与实验组细胞生长增殖抑制率差异有统计学意义(F=273.5,P<0.01),同一时间不同浓度间、同一浓度不同时间差异均有统计学意义(F分别为1857、1365,P值均<0.01)。2组间细胞凋亡率比较差异有统计学意义(χ2=1821,P<0.001)。实验组HepG2细胞中穿透Transwell小室的细胞数少于对照组(21.30±2.74 vs 45.00±4.26,t=11.89,P<0.001)。洛铂组HepG2细胞Bcl-2表达水平下降,NF-κB、Bax、Puma、Caspase-3表达水平升高。结论洛铂可通过影响一系列增殖、凋亡蛋白发挥抑制肝癌细胞增殖及促进凋亡的作用,但细胞内信号通路复杂,需要进一步研究。     

Apoptosis and proliferation of human hepatocellular carcinoma

Abstract: To investigate the contribution of apoptosis, a major mechanism of cell death, in the growth of hepatocellular carcinoma, we analyzed both apoptosis and cell proliferation in human hepatocellular carcinoma. We used the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling method and proliferative cell nuclear antigen staining, respectively. Among 21 hepatocellular carcinoma specimens examined, four were well, ten were moderately, and seven were poorly differentiated hepatocellular carcinoma. Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling-positive cells in hepatocellular carcinoma were scattered individually or were sometimes clustered in the tumors. The terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling indices were 0.35±0.09, 0.81±0.29, and 1.9±0.94 in well, moderately, and poorly differentiated hepatocellular carcinoma, respectively. The proliferative cell nuclear antigen labeling indices were 6.6±0.9, 13.1±3.5, and 26.7±6.3 in hepatocellular carcinoma in the same respective order of differentiation. The differences in both terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labelling indices and proliferative cell nuclear antigen labeling indices (p>0.05) were significant between well, moderately and poorly differentiated hepatocellular carcinoma. There was a positive correlation between the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling and proliferative cell nuclear antigen labeling indices in hepatocellular carcinoma (r=0.84, p>0.001). This study showed that the proliferation rate and the incidence of apoptosis increased as the differentiation grade of hepatocellular carcinoma was lowered, suggesting a rapid turnover of cancer cells in the lower differentiation grades. Apoptosis may thus play an important role in the growth of hepatocellular carcinoma.     

肝癌组织中p27蛋白表达与肿瘤增殖凋亡活性的研究

研究肝细胞癌组织中p27表达对细胞增殖与凋亡活性的影响.采用Elivision法检测47例肝癌及相应癌旁肝组织中p27及PCNA的表达,TUNEL法检测原位细胞凋亡.结果显示肝癌组织中细胞增殖与凋亡指数明显高于癌旁肝组织.肝癌组织中p27染色指数明显低于癌旁肝组织与正常肝组织.低分化肝癌组织中p27表达和凋亡指数均明显降低.存在肝外转移的肝癌组织中p27表达降低而增殖指数明显增高.进一步研究显示,p27高表达组肝癌组织中凋亡指数明显高于低表达组,而增殖指数却显著降低.提示p27蛋白表达降低与肝癌的发生和进展有着密切关系,并可能是导致肝癌细胞增殖凋亡失衡的因素之一.     

纤维介素蛋白2凝血酶原酶在人肝癌细胞增殖和凋亡中的作用

目的:探讨纤维介素蛋白2凝血酶原酶(fibrinogen-like protein 2/fibroleukin,fgl2)在人肝癌(hepatocel-lular carcinoma,HCC)细胞系HCCLM6细胞的表达及在肿瘤生长中的作用。方法:用RT-PCR方法检测HCCLM6细胞在静息和细胞因子作用下fgl2mRNA水平的表达;用RNA干扰技术建立fgl2敲除的HCCLM6细胞模型;以流式细胞技术检测fgl2敲除后的HCCLM6细胞体外培养细胞周期和增殖指数的改变以及对TNF-α(肿瘤坏死因子-α)诱导凋亡的抵抗能力改变。结果:IFN-γ(干扰素-γ)、IL-1β(白介素-1β)和TNF-α均可在mRNA水平上调HCCLM6细胞fgl2的表达,以TNF-α诱导作用最为显著;fgl2干扰后HCCLM6细胞增殖指数显著降低,细胞周期分析S期比例显著下降;fgl2干扰对HCCLM6细胞在全培养基和无血清培养基中培养的凋亡率无显著影响,但在合并大剂量TNF-α诱导下,fgl2干扰可显著提高HCCLM6细胞的凋亡率。结论:炎性细胞因子可诱导HCCLM6细胞表达fgl2,fgl2的表达可直接促进肿瘤细胞的生长,并增强对TNF-α诱导凋亡的耐受。     

抗氧化剂PDTC对肝癌细胞株Hep3B增殖的影响及机制

目的探讨抗氧化剂二硫代氨基甲酸毗咯烷（PDTC）在肝细胞性肝癌化学预防中的作用及机制。方法将不同浓度PDTC、阿霉素及PDTC联用阿霉素作用于Hep3B细胞。采用MTT法检测细胞存活率;流式细胞术（FCM）检测凋亡率;电泳迁移率变动分析（EMSA）检测NF—KB活性。结果PDTC作用后Hep3B存活率明显降低,呈浓度依赖性,P〈0．01。阿霉素联用PDTC的细胞生长抑制率明显高于单用阿霉素（P〈0．01）。PDTC为10μmol／L时的细胞凋亡率明显低于50μmol／L时（P〈0．01）。EMSA示PDTC作用后NF-κB表达降低,不同浓度PDTC作用两两相比P〈0．01。结论PDTC能抑制肝癌细胞株Hep3B的增殖、促进细胞凋亡、增强阿霉素的细胞毒作用;其作用机制主要是抑制NF-κB激活。PDTC可用于肝癌的化学预防,联用阿霉素可进一步提高疗效。     

High,persistent hepatocellular proliferation and apoptosis precede hepatocarcinogenesis in growth hormone transgenic mice

Abstract: Aims/Background: Growth hormone (GH) transgenic mice are known to develop hepatocellular adenomas and carcinomas. In order to understand more about hepatocarcinogenesis in the GH-transgenic mouse model we quantitated the rates of hepatocellular proliferation and apoptosis in these mice. Methods: Two lines of GH-transgenic mice and non-transgenic control mice were generated and sacrificed at regular intervals between one and nine months. Hepatocellular replication was measured by in vivo incorporation of bromodeoxyuridine (BrdU) and counting BrdU-positive nuclei in histological liver sections. Serial sections taken from these mouse livers were also assessed for rates of hepatocellular apoptosis using the in situ endlabelling of fragmented DNA (TU-NEL) method. Results: High levels of hepatocellular replication were sustained life-long in this model. Increased rates of hepatocellular proliferation preceded the onset of hepatic inflammation, a prominent feature in the liver pathology of GH-transgenic mice. In tumour tissue, cellular proliferation was up to 17-fold greater than in surrounding non-tumour tissue. Apoptosis rates were also elevated in non-tumour regions of GH-transgenic mouse livers compared to controls. Interestingly, large dysplastic hepatocytes were common in the fraction of cells undergoing apoptosis, especially in older mice with inflamed livers. The increase in the rate of hepatocellular apoptosis in GH-transgenic animals largely balanced the augmented levels of proliferation seen in these mice. In tumour tissue, however, the profound increase in the number of proliferating tumour cells outstripped the increase in apoptosis. Conclusion: Relatively high and enduring levels of hepatocellular replication and apoptosis precede hepatocarcinogenesis in GH-transgenic mice. Increased cellular proliferation and resistance to apoptosis were evident in tumour growth in older animals.