miR-155调控前列腺癌细胞NF-κB通路机制研究

目的探讨miR-155调控前列腺癌细胞核因子转录κB(NF-κB)通路的分子机制。方法前列腺癌DU145和PC-3细胞株经Anti-miRTM miR-155抑制剂(anti-miR-155)转染后(实验组),采用蛋白印迹法(Western blot)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测转染后细胞中RelA和RelB蛋白及mRNA表达水平,同时检测NF-κB活性及细胞因子水平。以转染AntimiR~(TM)阴性对照的DU145和PC-3细胞株为对照组。结果与对照组相比,实验组细胞RelA、白细胞介素(IL-6)、白细胞介素(IL-21)表达水平,以及NF-κB活性显著降低(P0.05),RelB表达水平比较差异无统计学意义(P0.05)。结论降低人前列腺癌细胞NF-κB活性和RelA表达水平,可能是miR-155参与调控前列腺癌生物学行为的分子机制之一。     

急性全脑缺血-再灌注后大鼠海马回中脑红蛋白与NF-κB p65表达的关系

目的 通过探讨急性全脑缺血-再灌注(I/R)后大鼠海马回中脑红蛋白(NGB)与核因子-κappaB p65(NF-κB p65)的表达关系,研究其在再灌注损伤后的作用.方法 60只健康SD大鼠,随机分为假手术组(SO)30只和I/R组30只.观察I/R后3、6、12、24和48 h苏木素-伊红(HE)染色海马CA1区存活锥体细胞数目;TUNEL原位末端标记法检测的锥体细胞凋亡率;免疫组织化学法检测锥体细胞中NF-κB p65、NGB的表达.结果 NGB的表达随I/R时间的延长而下调,各时间点比较差异有统计学意义(P<0.01),与SO组比较在3、6 h下调不明显(P>0.05),但到12 h降低明显(P<0.01);锥体细胞凋亡率(AP)随再灌注时间的延长而提高,与NGB表达呈负相关(r=-0.813,P<0.01);NF-κB p65在胞核中的表达随I/R时间的延长而增强,各时间点间差异有统计学意义(P<0.01),与SO组各相应观察时间点间差异有统计学意义(P<0.01),与NGB的表达呈负相关(r=-0.767,P<0.01).结论 随全脑I/R时间的延长,NGB在海马CA1区锥体细胞中的表达下调.NGB与抑制NF-κB p65的表达及抗神经元凋亡作用密切相关,因此短期内可能有一定的脑保护作用.     

NF-κB和HSP70在失血性休克肝枯否细胞中的活性变化研究

目的 探讨NF-κB和HSP70在失血性休克诱发肝脏损伤中的活性变化和相互影响机制.方法 采用原位杂交(ISH)、凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)方法检测失血性休克家兔模型动物休克后不同时间点(2、6、12、24 h)肝脏枯否细胞(KC)中HSP70 mRNA表达和NF-κB活性变化.结果 休克动物NF-κB 活性于2 h已升高(0.722±0.115)、6 h升高最明显(1.163±0.229)、12 h开始下降(0.732±0.229)、24 h下降到最低点(0.512±0.102);而HSP70 mRNA表达2 h(0.088±0.013)开始升高、6 h(0.125±0.019)逐渐升高、12 h(0.161±0.011)至24 h(0.185±0.039)增高最为显著.结论 失血性休克肝脏炎症损伤过程中NF-κB活化可能受到体内HSP70活性变化的抑制调控.     

NF-κB信号转导途径研究进展

NF κB信号途径涉及机体多种生理病理过程 ,本综述详细描述了近年来有关NF κB信号途径组成、活化信号、活化与调节方面的最新进展     

NF-κB在儿童支气管哮喘发病中的作用探讨

目的探讨血液中NF-κB与哮喘发病的关系.方法测定30例哮喘患儿在急性发作期及缓解期外周血单核细胞NF-κB水平,并与正常儿童做对照.结果①哮喘急性发作期及缓解期NF-κB水平均较正常对照组高;②哮喘患儿在缓解期NF-κB水平较急性发作期明显下降,差异有统计学意义.结论 NF-κB可能参与了哮喘发作的病理过程,其水平的高低可能与哮喘的活动度有关.     

OPN、IKK-β、NF-κB p65和MMP-9在胃癌细胞中的表达及意义

目的:检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、IκB激酶抑制剂-β(inhibitor of IκB kinase-beta,IKK-β)、核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)在具有转移潜能和低分化的胃癌细胞系及永生化胃上皮细胞中的表达.为进一步研究OPN在胃癌侵袭转移中的可能作用机制及其临床应用提供实验基础.方法:免疫细胞化学SP法和Western blot检测OPN、IKK-β、NF-κB p65和MMP-9在具有转移潜能和低分化的胃癌细胞系MKN45、GC9811-C11、803、AGS、GC7901及永生化胃上皮细胞293中的表达.结果:(1)免疫细胞化学结果显示:胃癌细胞胞浆及胞周可见OPN和MMP-9弱阳性染色,尤以803明显.而在293细胞中,未见OPN和MMP-9阳性染色.IKK-β和NF-κB p65在胃癌细胞胞浆中均成阳性染色,胞核中还可见NF-κB p65弱阳性染色,而293细胞中IKK-β和NF-κB p65未见阳性染色.(2)Western blot结果显示:OPN、IKK-β和MMP-9在胃癌细胞MKN45、GC9811-C11、803、AGS、GC7901与293细胞中的表达有差异,细胞核中NF-κB p65的表达也有差异.结论:OPN、IKK-β、NF-κB p65和MMP-9与胃癌的侵袭转移密切相关,OPN参与胃癌侵袭转移的分子机制及其能否作为胃癌侵袭转移的生物学指标还需进一步的实验研究.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注伤后神经元IκB及NF-κB表达研究

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后早期神经元IκB及核因子κB（NF-κB）的动态变化。方法 采用大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组化法检测IκB、NF-κB的动态表达,并与假手术组对照。结果 与假手术对照组相比,脑缺血再灌注后,随着再灌注时间的延长,IκB阳性细胞数逐渐减少（P〈0.01）,NF-κB蛋白阳性细胞逐渐增加（P〈0.01）。结论 脑缺血区缺血再灌注损伤可导致IκB降解,引起NF-κB的激活,进一步导致自由基大量产生,加重了细胞内DNA的损伤,从而促进损伤区的神经元凋亡。     

糖尿病患者树突细胞中NF-κB活性改变及检测TNF-α意义

目的探讨糖尿病患者血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平及外周血树突细胞（DC）中NF-κB活性变化的意义。方法无偿献血员10例为正常对照组（N组）,糖尿病患者20例分为IDM组和ODN组各10名。外周血分离单核细胞（PBMC）,加入IL-4、GM-CSF对DC进行诱导培养,同时向ODN组中加入NF-κB特异性低脱氧核苷酸（ODN）培养细胞,采用ELISA法测定血液及培养上清中TNF-α的含量。免疫印迹分析检测DC中NF-κB p65的磷酸化水平,β-actin作为内参。结果糖尿病组患者的血清TNF-α水平显著高于正常对照组（P〈0.001）;培养物上清液TNF-α水平的测定结果为：N组和ODN组显著低于IDM组（P〈0.05）;N组和ODN组水平无显著差异（P〉0.05）;在N组和ODN组DC中NF-κB p65的磷酸化的表达水平显著地低于IDM组（P〈0.05）;N组和ODN组无显著差异（P〉0.05）。结论提示炎症因子TNF-α及NF-κB可能参与糖尿病的病理生理过程。糖尿病患者外周血树突细胞中NF-κB p65的磷酸化水平可以被ODN抑制。     

miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响

目的观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子κB(NF-κB)信号转导通路的影响。方法体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(control组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 n M浓度NC至癫痫大鼠海马神经元; miR-146a-5p组:转染80 n M浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元。转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p IκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ) mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、p IκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平。结果体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P 0. 05); miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05)。结论miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放。     

重组腺病毒IκBαM在血管内皮细胞ECV-304中的表达及对NF-κB活性的抑制

目的　检测重组腺病毒IκBαM(AdIκBαM)在血管内皮细胞ECV - 30 4中的表达及肿瘤坏死因子 (TNF -α)诱导下IκBαM的变化与对NF -κB活性的抑制作用。方法　用携有NF -κB抑制物IκBα突变体的AdIκBαM感染ECV - 30 4细胞 ,用West ernblot及EMSA法检测IκBαM的表达及NF -κB活性的变化情况。结果　AdIκBαM在ECV - 30 4细胞中表达且不被TNF -α诱导降解 ,感染IκBαM的ECV - 30 4 /IκBαM细胞在TNF -α刺激下NF -κB无激活 ,而未感染IκBαM的ECV - 30 4细胞经TNF -α刺激后可有NF -κB的过度活化。结论　AdIκBαM能高效扩增并有效感染ECV - 30 4血管内皮细胞 ,且不会被TNF -α诱导而降解 ,能有效抑制血管内皮细胞NF -κB的过度活化 ,抑制NF -κB活性可能保护血管内皮细胞免于TNF -α介导的细胞损害     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞NF-κB DNA结合活性测定及其临床意义

目的:观察系统性红斑狼疮(SLE)患者NF-κB DNA结合活性变化及其意义.方法:6例SLE患者,5例健康人作为对照.NF-κB DNA结合活性测定采用凝胶滞留电泳.结果:健康对照组5例外周血单个核细胞(PBMC)NF-κB凝胶滞留电泳均为阴性.6例SLE患者中5例阳性,1例阴性.以血清抗dsDNA抗体的滴度为指标,5例显著升高者的NF-κBDNA结合活性也显著升高,1例阴性.NF-κB DNA结合活性与抗dsDNA抗体的滴度呈显著正相关.结论:SLE的NF-κB DNA结合活性显著升高,且与病情活动性有关.     

脂多糖对中性粒细胞核转录因子-κB活性的影响

目的：探讨在脂多糖（LPS）刺激下,中性粒细胞核转录因子-κB（NF-κB）活性变化及其抑制因子（IκBα）的影响。方法：离体培养人中性粒细胞,分为来普霉素B（LMB）干预组（A组）、LPS刺激组（B组）和LPM＋LPS组（C组）。各组分别在刺激后0、15、60、120min,用NF-κBp65试剂盒检测细胞核NF-κB活性,用Western-blot检测细胞核、浆中IκBα含量。结果：A组中各时相点NF-κB活性无明显变化;同一时相点细胞核、浆之间,以及不同时相点细胞核之间、细胞浆之间IκBα含量无明显变化。B组LPS刺激后,NF-κB活性较0点时明显增强;细胞核、浆中各时相点IκBα较未刺激时显著降低;细胞核、浆中呈现一致性变化。C组NF-κB活性于60min时点后,较B组同时相点明显受抑制;胞浆中IκBα于60min时较B组明显减少,而核中IκBα于60min后较B组明显增加。结论：NF-κB活性与核中IκBα含量呈负相关;IκBα在中性粒细胞存在核浆穿梭,通过抑制IκBα核浆穿梭,可显著降低NF-κB活性。     

微小RNA-182-5p通过靶向MAPK1调控MAPK/NF-κB通路治疗急性肺损伤的研究

目的 通过分子生物学手段探讨微小RNA-182-5p(miR-182-5p)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)的影响及其分子机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测LPS诱导的ALI模型miR-182-5p和丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)表达.双荧光素酶报告基因检测用于检测miR-...     

东菱迪芙对大鼠局灶性脑缺血再灌注后NF-κB表达的影响

目的 探讨东菱迪芙对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法 72只健康SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和东菱迪芙组，采用大脑中动脉线栓法（MCAO）建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，在大鼠脑缺血2h再灌注22h时，用免疫印迹法检测海马核因子-κB（NF-κB）、抑制蛋白-κB（IκB）、Bel-2、Bax的活性。用氯化三苯四氮唑染色和原位缺口末端标记（TUNEL）法分别观察脑梗死体积比和凋亡细胞数。结果 脑缺血．再灌注后，NF-κB、Bcl-2、Bax的活性明显升高，IκB的活性明显下降，凋亡细胞数、梗死体积比明显增高。东菱迪芙可明显降低NF-κB的活性、Bax的表达、凋亡细胞数、梗死体积比，增加IκB和Bcl-2的表达。结论 东菱迪芙对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用，抑制IκB的降解及NF-κB的活性，从而减轻脑细胞凋亡是其脑保护机制之一。     

核因子κB与血液系统肿瘤凋亡的关系

核因子κB(NF-κB)是调控多种基因的重要转录因子。近年来发现,NF-κB的不适当激活与血液系统肿瘤的发生、增殖、转移及细胞耐药密切相关。对NF-κB进行调控目前已经成为抗肿瘤治疗的热点。     

多发伤患者外周血单个核细胞NF-κB活性变化及乌司他丁的保护作用

目的 探讨多发伤患者早期外周血单个核细胞NF-κB活性变化及乌司他丁的保护作用.方法 收集2008-01~2010-05急诊收治20～55岁的多发伤患者,将入选的多发伤患者随机分为多发伤对照组、乌司他丁治疗组.乌司他丁治疗组在创伤后12 h内开始给予乌司他丁治疗,20万U溶于100 mL生理盐水中静脉注射,以后每8 h 1次,连续7 d.采集患者在入院时(0)、第1天、第2天、第3天、第4天及第7天外周静脉血.测定外周血单个核细胞NF-κB活性及血清TNF-α、IL-1、IL-6浓度.分析比较不同组患者实验室指标和临床指标的差异.结果 多发伤患者创伤后第1天(24 h)外周血单个核细胞NF-κB活性、血清IL-6、TNF-α浓度均最高,随后逐渐降低,至第3天(72 h)后降至正常.乌司他丁治疗组单个核细胞NF-κB活性、血清IL-6、TNF-α浓度均较对照组降低,但差异无统计学意义.多发伤患者SIRS平均持续(10±3.5)d,乌司他丁治疗组平均持续(7±3.1)d,两组比较差异有统计学意义(t=2.31,P=0.029).多发伤患者MODS平均持续(8.8±2.6)d,乌司他丁治疗组平均持续(5.6±2.7)d,两组差异有统计学意义(t=2.27,P=0.025).结论 多发伤患者早期单个核细胞NF-κB活性及血清前炎症细胞因子呈一过性升高.乌司他丁能缩短多发伤患者SIRS、MODS持续时间,但未发现能显著降低外周血单个核细胞NF-κB活性.     

儿童急性淋巴细胞白血病核转录因子κB的表达及其意义

为了探讨儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）NF-κB P65蛋白的表达及意义,应用SP免疫组织化学法检测32例ALL患儿和40例非血液病的对照儿童NF-κBP65蛋白的表达。结果表明：32例ALL患儿的NF-κB P65蛋白的阳性表达率为87.50%（28/32）,表达定位于ALL细胞的胞核及胞浆中,阳性表达率明显高于对照组12.50%（5/40）,两者比较有显著性差异（χ2=40.28,p〈0.01）。在28例ALL患儿组阳性表达者中,弱阳性表达（＋）占10.71%（3/28）,阳性表达（＋＋）占42.86%（12/28）,强阳性表达（＋＋＋）占46.43%（13/28）。正常对照组均为弱阳性表达（5/5）,两者表达程度经Ridit分析差异有显著意义（p〈0.01）。ALL病程间（初发或复发）、免疫表型间（T系ALL与B系ALL）、各细胞形态学间的表达程度差异均无显著意义（p〉0.05,四格表精确概率法）。结论：NF-κB P65蛋白表达于儿童ALL细胞中,抑制NF-κB信号传导途径可能在儿童ALL治疗中有重大价值,这为临床寻求以NF-κB为靶点的治疗手段提供了科学依据。     

NF-κB在肝细胞及肝脏疾病中作用的研究进展

核因子-κB（NF-κB）是近年来研究极为广泛的转录调控因子，具有多种转录调节活性。参与细胞因子、活化因子、生长因子和粘附分子及某些急性期反应蛋白转录活性的调控，在正常及疾病状态下、在肿瘤的发生和发展过程中有重要作用。NF-κB在肝细胞、肝癌细胞都有表达，在肝移植、肝缺血再灌注损伤等病理生理过程中均发挥重要作用。     

调控NF-κB/IκB炎症信号转导通路对MODS大鼠炎性反应的影响

目的建立大鼠MODS模型,将IκB通过腺病毒载体导入体内,以了解其对MODS大鼠炎性反应的影响。方法50只大鼠随机分为五组:A组(正常对照组),B组(MODS损伤1d组),C组(MODS损伤7d组),D组(腺病毒转载IκB治疗1d组),E组(腺病毒转载IκB治疗7d组)。观察五组大鼠从致伤开始后1、7d的各脏器功能的生化指标,病理组织学及血清TNF-α、IL-6的表达。结果经中心静脉途径导入腺病毒转载的IκB基因,可降低MODS大鼠血肌酐、谷丙转氨酶、总胆红素、肌酸磷酸肌酶水平,改善动脉血氧分压;减轻大鼠病理组织学损伤,降低血液中TNF-α、IL-6含量。结论通过中心静脉途径注入腺病毒转载的IκB基因,直接增加了体内IκB的表达,抑制了NF-κB的活化,阻断其所调控的炎症因子的合成,从而消除炎性细胞在体内的大量聚集最终达到阻断炎症反应的恶性循环,成为治疗MODS新的方向。     

基于p38MAPK/NF-κB研究miR-146a干预脓毒性心肌病的分子机制

目的 基于p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）/核因子κB(NF-κB)研究微小RNA-146a(miR-146a)干预脓毒性心肌病（SIC）的分子机制。方法 随机数字表法将SD大鼠分成四组，正常对照组、SIC模型组、miR-146a激动剂组、miR-146a抑制剂组。正常对照组、SIC模型组大鼠腹腔注射0.2μL/g生理盐水，miR-146a激动剂组大鼠腹腔注射0.2μL/g miR-146a激动剂、miR-146a抑制剂组大鼠腹腔注射0.2μL/g miR-146a抑制剂；24 h后SIC模型组、miR-146a激动剂组、miR-146a抑制剂组大鼠，腹腔注射脂多糖（LPS）制备SIC大鼠模型，正常对照组注射等量生理盐水。HE染色观察组织病理学形态学；TUNEL法检测心肌细胞凋亡率；ELISA法检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)、B型脑钠肽（BNP）含量；用化学发光法检测肌酸激酶心肌结合（CK-MB）和肌红蛋白（Mb）含量；Western blot检测大鼠心肌组织p38MAPK、NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达水平；逆转录定量...