持续感染乙肝病毒e抗原血清转换与基因变异的关系

目的：了解乙肝病毒慢性持续感染e抗原血清转换中前C基因及C基因启动子变异的关系。方法：HBV－DNA阳性且e抗原／或e抗体阳性的慢性乙型肝炎患者各30例，以PCR结合微板核酸杂交－ELISA方法检测乙肝病毒前C基因（nt1896,nt1899)及其基本核心启动子（BCP，nt1762,nt1764)变异。结果：不论前C基因还是BCP变异，均与e抗原血清转换相关（P＜0．05）；不论e抗体阳性组还是e抗原阳性组，BCP变异均高于前C基因变异（P＜0．05），但二者均不相关（P＞0．05）。结论：乙肝病毒C基因启动子与前C基因的变异是随机的，都可下调HBeAg的表达，前者更易于发生变异。     

乙肝患者血清中HBV C基因启动子变异与病毒含量及前S1抗原的关系

目的 研究HBV C基因启动子(Basic Core Promoter，BCP)基因变异与前S1(Pre-S1)抗原的关系以及BCP基因变异与HBV DNA含量的关系。方法用PCR-微板核酸杂交ELISA技术检测94例HBeAg阳性乙肝患者的BCP中nt1762A-T和nt1764G-A的基因突变，酶联免疫吸附分析(ELISA)检测Pre-S1抗原，PCR荧光定量技术检测HBV DNA。结果在94例HBeAg阳性乙肝患者的血清中，Pre-S1抗原阳性有65例，其中BCP阳性51例，BCP变异率为78．5％；Pre-S1抗原阴性有29例，其中BCP阳性23例，BCP变异率为79．3％。BCP基因突变血清中HBV DNA拷贝数明显高于非BCP基因突变血清中HBV含量。结论 在e抗原阳性乙肝患者中，Pre-S1抗原的存在与BCP的变异无相关性，但BCP基因变异与HBV DNA拷贝数明显相关，可反映乙肝病情的严重程度及其愈后、转归。     

HBeAg阳性患者血清中Pre-S1抗原与C基因启动子变异的检测

目的 研究HBV C基因启动子(Basic Core Promoter，BCP)与前S1(Pre-S1)抗原基因变异的关系，以及BCP基因变异与HBV DNA含量的关系。方法 分别对94例HBeAg阳性乙肝患者进行酶联免疫吸附法(ELISA)检测Pre—S1抗原，PCR荧光定量技术检测HBV DNA，PCR—微板核酸杂交ELISA技术检测BCP中nt1762A—T和nt 1764G—A的基因突变。结果 在94例HBeAg阳性乙肝患者血清检测中，Pre—S1抗原阳性有65例，其中BCP阳性51例，BCP变异率为78．5％；Pre—S1抗原阴性有29例，其中BCP阳性23例，BCP变异率为79．3％。74例BCP基因突变血清中，55例(74．3％)的HBV DNA拷贝数超过了10^5 CPS／ml；而在20例非BCP基因突变血清中，只有6例(30％)的HBV DNA拷贝数超过了10^5CPS／ml。结论 e抗原阳性乙肝患者中，Pre—S1抗原的存在与BCP的变异并无相关性，但BCP基因变异与HBV DNA拷贝数则成正相关，它们都可反映乙肝病情的严重程度及其愈后、转归。     

乙肝患者血清中HBV C基因启动子变异与病毒含量及前S1抗原的关系

目的研究HBVc基因启动子(Basic Core Promoter，BCP)基因变异与前S1(Pre—S1)抗原的关系，以及BCP基因变异与HBV DNA含量的关系。方法94例HBeAg阳性乙肝患者，用PCR-微板核酸杂交ELISA技术检测BCP中nt1762A—T和nt 1764G—A的基因突变，酶联免疫吸附分析(ELISA)检测Pre—S1抗原，PCR荧光定量技术检测HBVDNA。结果在94例HBeAg阳性乙肝患者血清检测中，Pre—S1抗原阳性者65例，其中BCP阳性51例，BCP变异率为78．5％；Pre—S1抗原阴性者29例，其中BCP阳性23例，BCP变异率为79．3％。BCP基因突变血清中HBV DNA拷贝数明显高于非BCP基因突变血清中HBV含量。结论在e抗原阳性乙肝患者中，Pre—S1抗原的存在与BCP的变异无相关性，但BCP基因变异与HBV DNA拷贝数明显相关，可反映乙肝病情的严重程度及其愈后、转归。     

慢性乙肝病毒B亚型感染儿童不同HBeAg状态下 CP基因变异测定

目的:了解HBV基因型B/adw2型的慢性HBV感染儿童不同血清HBeAg状态下HBV C区启动子基因的变异.方法:选择HBV基因型为B型/血清型adw2的慢性HBV感染儿童64例,按血清HBeAg不同状态分为血清e抗体阳性组(n=34)和e抗原阳性组(n=30)2组,以HBV DNA为模板行PCR反应扩增S区序列(确定HBV基因型)及C区启动子(CP)基因片断,CP基因片断经胶回收纯化后,应用T-A克隆技术构建重组质粒pGEM-CP,经蓝白斑筛选,阳性克隆以凝胶电泳、双酶切及PCR验证后将鉴定正确的克隆测序,将测序结果与Entrez database中血清亚型及基因型相同的HBV序列相比较并进行分析.结果:S区基因测序结果证实64例儿童感染的HBV基因型均为B型/血清型adw2.CP基因测序结果证实2组均有CP基因变异,血清e抗体阳性组CP变异率(29.41%)高于e抗原阳性组(6.67%)(P＜0.05).e抗体阳性组有4个变异热点,而e抗原阳性组无变异热点.结论:慢性乙肝病毒B亚型感染儿童存在CP基因变异,且可能与e抗原血清转换有关.     

拉米夫定治疗过程中乙型肝炎病毒变异的分析

目的 :研究拉米夫定治疗慢性乙肝患者血清乙型肝炎病毒变异发生情况及意义。方法 :采用微孔板核酸杂交法对 5例非乙肝肝病患者、49例慢性乙肝患者 (其中 2 9例采用拉米夫定治疗 )的血清进行乙型肝炎病毒P基因区YMDD变异、C基因启动子 (BCP)变异检测。结果 :非乙肝肝病患者未检出YMDD、BCP变异 ,未经拉米夫定治疗的乙肝患者中 10 .0 % ( 2 /2 0 )YMDD阳性 ,2 0 .0 % ( 4 /2 0 )BCP阳性 ,其中 5 .0 % ( 1/2 0 )YMDD、BCP均阳性。治疗组中17 2 % ( 5 /2 9)YMDD阳性 ,34.5 % ( 10 /2 9)BCP阳性 ,其中 6 .9% ( 2 /2 9)YMDD、BCP均阳性。结论 :微孔板核酸杂交法能准确检测乙肝病毒基因变异 ;乙肝患者中存在一定比例的BCP、YMDD变异 ;部分病人在拉米夫定治疗过程中出现病情反复 ,可能与HBV、YMDD、HBVBCP变异有关     

乙型肝炎病毒c基因启动子变异与血清HBeAg及HBV DNA的关系

目的 :研究乙型肝炎病毒 (HBV ) c基因启动子 (BCP)变异与 e抗原及 HBV DNA含量的关系。方法 :采用错配引物聚合酶链反应 (PCR) -限制性片段长度多态性 (RFL P)分析及荧光定量 PCR(FQ- PCR)对 10 5例血清 HBV DNA阳性 HBV感染者进行 HBV BCP基因变异及 HBV DNA定量测定。结果 :BCP变异组 HBe Ag阴性率为 84 .4 % (5 4 / 6 4 ) ,非 BCP变异组为2 6 .8% (11/ 4 1)。 BCP变异组 HBV DNA含量在 HBe Ag+ 病例 (10 8.79± 0 .85vs 10 7.4 8± 0 .39copy/ ml,P <0 .0 1)及 HBe Ag- 病例(10 8.0 5± 1 .1 6 vs10 6 .55± 0 .91 copy/ ml,P<0 .0 1)中均较非 BCP变异组高。结论 :HBV BCP变异在下调前 c/ c基因表达的同时可能促进 HBV复制 ,对 HBs Ag+ / HBe Ag- 患者需要进一步检测 HBV DNA,以免由于基因变异导致将 HBe Ag阴性者误认为病毒的免疫清除或静息而延误抗病毒治疗时机     

HBeAg、HBeAb双阳性患者血清中病毒前C区基因序列分析

目的　了解乙型肝炎病毒e抗原和e抗体双阳性患者血清中病毒前C区基因的变异情况。方法　采用时间分辨荧光免疫分析方法检测乙肝病毒免疫标志物 ,对HBeAg、HBeAb双阳性患者采用聚合酶链反应 (PCR)扩增其血清中HBVDNA前C区基因 ,然后对阳性样品的PCR产物直接标记测序 ,并和Genbank中登录的代表株进行比较分析。结果　 1 5例HBeAg、HBeAb双阳性患者中有1 1例HBVDNA阳性 ,序列分析显示所有阳性血清中病毒前C区基因均发生了变异 ,其中有 4例存在A1 896变异。结论　在HBeAg和HBeAb血清学转换过程中 ,均伴有HBV前C区基因变异 ,A1 896变异的产生主要在HBeAb产生过程中或产生以后。     

慢性肝病患者乙型肝炎病毒C基因启动子变异对病毒复制水平及肝功能损害的影响

目的 :探讨乙型肝炎病毒慢性感染 C基因启动子 (BCP)变异对病毒复制水平及肝功能损害程度的影响。方法 :采用PCR微板核酸杂交结合 EL ISA检测显示技术 ,检测 74例乙型肝炎病毒慢性感染者 BCP区核苷酸 (nt) 176 2碱基 A→ T和176 4碱基 G→ A联合突变。结果 :在 74例乙型肝炎病毒慢性感染者中检出 BCP区 T176 2 A 176 4突变 2 4例 (32 .4 % ) ,BCP变异阳性组的 HBVDNA水平 (10 8.2 992± 0 .86 6 5拷贝 / m l)显著高于 BCP变异阴性组的水平 (10 7.1 737± 1 .1 539拷贝 / ml) (P <0 .0 0 1) ;BCP变异组的肝功能损害程度较非变异组明显。结论 :BCP变异可引起 HBV致病力增强 ,复制水平提高 ,变异者的肝功能损害程度较重     

HBV慢性感染者PC/BCP区变异特点及血清检测指标临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者前核心区(precore,PC)和基本核心启动子(basalcore promoter,BCP)变异特点以及变异株血清乙肝病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)、乙肝病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、乙肝病毒脱氧核酸(HBV-DNA)检测的临床意义。方法采集138例慢性HBV感染者清晨空腹血,以免疫化学发光法检测血清HBeAg、HBsAg,并同时采用磁珠法检测HBV-DNA,应用半巢式聚合酶链反应检测PC/BCP区基因突变。结果 101例未经抗病毒治疗的慢性HBV感染者中,HBeAg阴性组PC、BCP、PC+BCP变异率高于HBeAg阳性组,差异有统计学意义(P0.05)。37例服用核苷类药物一年以上组PC、BCP、PC+BCP检出率要高于未经抗病毒治疗的HBeAg阳性HBV感染者组(P0.05)。HBeAg阴性HBV感染患者其PC、BCP和PC+BCP的变异率随着病程的增加而增加(P0.01)。PC、BCP和PC+BCP变异株组与野生株比较,慢性HBV感染者HBeAg含量减少(P0.05),DNA复制活跃、HBsAg含量增加(P0.01)。结论变异的发生使HBeAg阴性的慢性HBV感染患者越来越多,服用核苷类抗病毒药物和长的疾病病程可能是变异相关因素。对于HBeAg阴转的慢性HBV感染患者观察DNA、HBsAg含量,可了解体内病毒是否确实已被免疫清除。     

酒精对慢性乙型肝炎患者乙肝病毒多位点基因突变影响研究

目的：探讨酒精对HBV DNA多位点基因变异的影响,为慢性乙型肝炎的临床诊断和治疗提供依据。方法:选取45例慢性乙肝患者为研究对象,分为嗜酒组和非嗜酒组,采用DNA芯片技术, 检测HBV DNA前C区1896及1814位点、BCP区1762及1764位点、P区528及552位点的基因变异。结果:嗜酒组在BCP区1762 、1764位点的变异率明显高于非嗜酒组(P均＜0.05)。在前C区1896、1814位点,P区528、552位点变异率差异无统计学意义（P均＞0.05）。结论:酒精可导致乙肝病毒BCP区1762 、1764位点发生基因突变,BCP区基因变异可促进HBV在人体内的复制表达,加重慢性乙型肝炎患者的病情。     

乙型肝炎患者HBV-DNA与血清e系统的关系

目的：探讨乙型肝炎患者HBV－DNA与血清e系统的关系。方法：用PCR和ELISA法分别检测135例急、慢性乙型肝炎患者血清中HBV－DNA和HBsAg、抗－HBs、HBeAg、抗－HBe、抗－HBc。结果：e抗原阳性组与e抗体阳性组,HBV－DNA阳性率差异有显著性（P＜0.01）;但与各临床类型间差异无显著性（P＞0.05）。结论：HBV－DNA阳性多见于活动性乙型肝炎患者,且与e抗原表达水平有一定关系。     

乙型肝炎病毒核心基因启动子变异对HBeAg表达及病情的影响

目的:研究乙型肝炎病毒核心基因启动子(HBVBCP)变异对HBeAg表达及病情的影响。方法:采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,对176例HBV慢性感染者血清进行检测HBVBCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764G→A联合突变。采用ELISA检测技术,检测患者血清HBV标志物。结果:在176例HBV慢性感染者中检出HBVBCP区T1762A1764G变异者73例,HBVBCP变异的阳性率为41.5%,HBVBCP变异在HBeAg阴性病例的阳性率为49.4%,显著高于HBeAg阳性病例的阳性率33.3%。HBVBCP双变异在慢性乙型肝炎轻、中、重度组,肝炎肝硬化组,慢性重症肝炎组和原发性肝癌组的阳性率分别为28.0%、31.4%、34.2%、39.4%、60.0%和70.0%。各型肝病与HBVBCP变异的阳性或阴性进行相关分析,结果有显著性差异。结论:本组病例HBVBCP变异的阳性率为41.5%,变异可引起HBV感染者的HBeAg阴转。HBVBCP变异与HBV慢性感染的临床类型呈正相关,随着病情加重,BCP变异的阳性率有增高趋势。     

α干扰素治疗慢性乙肝远期疗效的临床研究

目的:观察α干扰素治疗慢性乙型肝炎的远期疗效。方法:对α干扰素治疗的109例慢性乙肝患者和未经过干扰素治疗的95例慢性乙肝患者进行24-126个月（平均70个月）的随访。结果:治疗结束时干扰素治疗组和对照组的HBeAg和HBVDNA阴转率分别为:50.5％/14.7％、52.3％/15.8％,差异有显著性（P<0.01）;随访结束时,两组患者HBeAg和HBVDNA阴转率分别为:68.8％/64.2％、64.2％/62.1％（P>0.05）;重型肝炎、肝硬化、肝细胞癌发生率及病死率两组比较依次为:3.7％/4.2％、10.1％/16.8％、2.8％/2.1％、7.3％/7.3％,均无显著性差异（P<0.05）。50％病情恶化患者HBeAg和/或HBVDNA仍为阳性。82.6％的肝硬化、肝细胞癌患者血清存在HBV前C区1896位点和/或其启动子T1762A1764双位点变异。结论:α干扰素对HBV的复制有一定的抑制作用,可加速乙肝患者HBeAg自然阴转过程,但单一、短程α干扰素治疗未能降低重型肝炎、肝硬化、肝细胞癌的发病率及病死率。     

乙型肝炎病毒HBs、HBx基因与HBVM的相关性及临床意义研究

目的：阐明HBs、HBx基因与HBVM的相关性及临床意义。方法：以HCCs、LCir、SeCH、CHB以及ASCs作为研究对象,应用ELISA法检测研究对象血清中HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb;应用PCR技术、探针杂交法及免疫化学自显影法定性检测HBs、HBx基因。结果：在研究对象中,HBsAg＋HBeAb＋HBcAb、HBsAg＋HBeAg＋HBcAb和HBsAg＋HBcAb模式阳性率分别为：53．3％、27．0％和11．8％;除ASCs组外,各临床类型肝病HBsAg＋HBeAb＋HBcAb模式阳性率均高于HBsAg＋HBeAg＋HBcAb模式的阳性率,但差别无统计学意义（P〉0．05）;与ASCs组比较,HCCs组的HBx基因阳性率明显高于ASCs组（P〈0．05）,其余各组均无明显差别（P〉0．05）。与ASCs组比较,LCir和SeCH组病人中的HBs基因阳性率显著高于ASCs组（P〈0．025）,其余各组无明显差异（P2〉0．05）;以HBsAg模式作为对照时,各HBVM模式的HBs、HBx基因阳性率与HBsAg模式的阳性率无明显差别（P〉0．05）;但在HBsAg＋HBeAg＋HBcAb模式中阳性率显著高于HBsAg＋HBeAb＋HBcAb模式的阳性率（P〈0．001）;HBsAg＋HBcAb模式中的HBx基因阳性率也显著高于HBsAg＋HBeAb＋HBcAb模式的阳性率（P〈0．001）。结论：HBsAg＋HBeAb＋HBcAb模式与肝病的发病关系似乎比HBsAg＋HBeAg＋HBcAb模式更为密切;HBx基因与HCCs的发生存在密切关系,而HBs基因与LCir、SeCH的发生关系密切。HBs、HBx基因与HBsAg＋HBeAg＋HBcAb模式关系密切,而HBx基因还与HBsAg＋HBcAb模式存在密切关系。     

乙型肝炎患者HBV-DNA与HBV-M及HBV-DNA前C/C区变异的对比研究

目的:探讨乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒血清学标志(HBVM)与HBVDNA及HBVDNA前C/C区变异检测结果的相关性与临床意义。方法:对359例乙型肝炎患者血清的HBVM和HBVDNA及HBVDNA前C区1896/1814位变异检测结果进行比较;HBVM用ELISA定性分析法检测;HBVDNA用PCR荧光定量法检测;HBVDNA前C/C区用基因芯片显色法检测。结果:急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化HBVDNA检出率分别为81.8%、62.4%、44.7%,三组进行组间比较,差异均有显著性(P<0.01);HBsAg与HBeAg均阳性组HBVDNA检出率显著高于HBsAg与抗HBe均阳性组(P<0.01);HBsAg与抗HBe均阳性组的变异率高达50.7%,显著高于HBsAg与HBeAg均阳性组(P<0.01)。结论:HBVDNA是评价HBV活动最理想的标志;HBVDNA前C/C区变异在我国乙型肝炎患者中普遍存在,对抗HBe阳性患者的临床意义更大;抗HBe的出现不能作为HBV复制停止的指标;HBVDNA量的变化可作为临床评价病毒复制和抗病毒疗效的参考指标。     

381例HBV感染者HBV DNA前C区基因突变的研究

目的：研究乙肝病毒前C区基因变异株感染在乙肝病毒感染者中的分布情况,探讨其临床意义。方法：采用PCR－SSCP分析技术对381例HBV感染者进行HBV DNA前C区基因突变检测。结果：在不同临床类型的感染者中,检出率以肝癌患者最高（66．7％）,其次为慢重肝（50．00％）、肝硬化（43．75％）和慢性肝炎（35．35％）,它们与无症状HBV感染者和急性肝炎患者比较,差异均有显著性（P＜0．05）;在ALT明显升高的患者中,前C突变的检出率（34．86％）明显高于ALT正常者（21．71％）。结论：HBV DNA前C区基因突变可能与乙型肝炎病变的病程和严重程度有关;SSCP方法是检测HBV DNA前C区基因突变较为简便、快速、经济的方法,适合于对大样本进行研究。     

乙型肝炎病毒基本核心启动子T1762A1764 联合突变的临床意义

目的:研究乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)T^1762A^1764联合突变情况及其临床意义。方法:采用聚合酶链反应(PCR)与限制性长度片段多态性分析(RFLP)相结合，检测130例乙型肝炎患者BCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764碱基G→A联合突变。结果：HBeAg( )和HBeAb( )两组患者中BCP T^1762A^1764联合突变率的不同频率分别为慢性乙型肝炎患者(Chronic hepatitis B，CHB)40．0％和85．7％，无症状携带者(Asymptomatic carrier，ASC)22．2％和65．0％，献血员为5％。BCP T^1762A^1764双点联合突变组HBV-DNA≥10^5 cps／ml检出例数81例(96．4％)，非突变组HBV-DNA≥10^5 cps／ml检出例数25例(54．3％)。结论：BCP T^1762A^1764联合突变与乙型肝炎的发生、发展以及预后有关，可能是CHB与ASC患者HBeAg(-)的原因之一，可促进乙肝病毒繁殖。对慢性乙型肝炎患者检测HBV BCP T^1762A^1764联合突变有一定的临床意义。     

乙型肝炎患者HBV-M与HBV-DNA检测结果分析

目的了解分析各型乙型肝炎患者血清的标志物HBV-M(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)与从基因水平测得的HBV-DNA的关系.方法采用ELISA法检测HBV-M,FQ-PCR法检测HBV-DNA.结果各种HBV-M模式都有一定的HBV-DNA检出率.HBsAAg、HBeAg、抗-HEe阳性和HBsAg、HbsAg阳性这两种模式HBV-DNA阳性率最高,分别为91.5%、90.6%.其次为HbsAg、抗-HBc阳性;HbsAg阳性;HbsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性,HBV-DNA阳性率分别为50.0%、28.6%和23.4%.在HBsAg阴性的模式中,HBV-DNA阳性率可达8.1%(15/105),单项抗-HBc阳性患者血清HBV-DNA阳性率为8.3%,抗-HBs阳性的病例中亦可检出HBV-DNA阳性(6.0%).HBeAg组的HBV-DNA阳性率为91.4%与抗HBe组的HBV-DNA阳性率(21.1%)比较,有显著差异(P＜0.01).结论 HBeAg与HBV-DNA关系密切,乙型肝炎患者血清学标志物HBV-M无论何种模式,都应检测HBV-DNA,以此确证HBV感染后在体内的复制情况并追踪预后.