补肾活血汤结合组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损

目的进一步验证补肾活血汤对骨髓基质干细胞(BMSCs)复合体修复兔关节软骨缺损的影响,评价修复效果。方法取兔骨髓基质干细胞进行密度离心法结合贴壁培养法体外增殖后,复合于改建后的脱细胞真皮基质(acellular dermal ma-trix,ADM)载体上,植入到兔膝关节软骨缺损,并以中药补肾活血汤灌胃为复合组,并设立单纯中药组、单纯干细胞复合体组、空白组为对照组。4、8、12周后分别对修复组织进行形态学观察及组织学检查。进行Wakitani评分,观察其体内修复关节缺损效果。结果术后12周,复合组的缺损由透明软骨样组织充填,软骨及软骨下骨组织基本修复,修复的软骨组织在组织形态学上优于其他各组。结论骨髓基质干细胞复合体能修复家兔膝关节软骨缺损,中药补肾活血汤能促进软骨的修复,且提高了修复质量。     

基于盒转录因子9分泌探讨柚皮苷复合骨髓间充质干细胞结合基质载体对于软骨损伤修复实验研究

目的基于盒转录因子9(Sox-9)分泌情况,观察柚皮苷刺激骨髓间充质干细胞结合基质载体对兔关节软骨的损伤修复情况。方法对骨髓间充质干细胞进行体外增殖,复合于脱细胞真皮基质载体,植入软骨损伤处,并以柚皮苷汤或去离子水灌胃,设立模型组(Mod组)、骨髓间充质干细胞结合基质载体组(Tec组)、柚皮苷复合骨髓间充质干细胞结合基质载体组(Nar/Tec组),于第12周后对修复组织进行形态学评分、病理学染色及免疫组化染色观察。结果(1)形态学观察上,应用国际软骨修复学会软骨修复的宏观评价量表进行量化评估,Nar/Tec组与其他两组相比,取得了更优的修复效果,且差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)病理染色观察上,阿斯新兰染色及番红-O染色,Nar/Tec组在软骨基质及软骨细胞上均可见到明显的修复表现,修复处组织与正常组织相似,Tec组修复效果次之。(3)免疫组化染色观察上,Nar/Tec组在Ⅱ型胶原表达上,优于其他两组;该组在软骨损伤修复处可见明显分泌的Sox-9。结论骨髓间充质干细胞结合基质载体对于兔膝关节软骨损伤有修复作用,加用柚皮苷能提高软骨损伤的修复质量,该效果的产生可能与柚皮苷促进损伤处Sox-9的分泌有关。     

基于盒转录因子9分泌探讨柚皮苷复合骨髓间充质干细雕结合基质载体对于软骨损伤修复实验研究

目的 基于盒转录因子9(Sox-9)分泌情况,观察柚皮苷刺激骨髓间充质干细胞结合基质载体对兔关节软骨的损伤修复情况.方法 对骨髓间充质干细胞进行体外增殖,复合于脱细胞真皮基质载体,植入软骨损伤处,并以柚皮苷汤或去离子水灌胃,设立模型组(Mod组)、骨髓间充质干细胞结合基质载体组(Tec组)、柚皮苷复合骨髓间充质干细胞结...     

鹿茸多肽对兔骨髓间充质干细胞移植修复关节软骨缺损的影响

为探讨经鹿茸多肽诱导的兔自体骨髓间充质干细胞-胶原膜支架(MCMG)复合物修复兔膝关节软骨缺损的效果,抽取兔骨髓液经体外分离、培养获得兔MSCs.选用健康的新西兰大白兔27只,随机分成A、B、C 3组.A组以未经诱导的自体MSCs-MCMG复合物修复兔膝关节软骨缺损;B组以经TGF-β1诱导后的自体MSCs-MCMG复合物修复兔膝关节软骨缺损;C组以经鹿茸多肽诱导后的自体MSCs-MCMG复合物修复兔膝关节软骨缺损.分别于术后2、4、8周取材,行HE、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色观察各组兔膝关节软骨缺损修复情况.结果显示术后8周,C组修复软骨缺损的效果无论从大体标本观察或是组织学检查都与B组的修复效果相当,而且C组与B组修复效果明显优于A组.说明经鹿茸多肽诱导的兔自体MSCs-MCMG复合物移植可提高兔膝关节软骨缺损的修复质量.     

兔关节软骨缺损修复的实验研究

目的观察自制猪耳廓的脱细胞软骨基质(Extracellular Cartilage Matrix ECM)复合自体软骨细胞对兔膝关节软骨5mm的缺损的修复作用。方法新西兰大白兔60只,随机分为3组,均制备股骨下端滑车处直径为5mm、深4mm的软骨缺损。实验组(A组)：用自制ECM复合自体培养的软骨细胞修复兔关节软骨缺损,实验组(B组)：单纯自制ECM修复兔关节软骨缺损,于4、8、12、24周后分别与空白对照组(C组)相比较,通过大体形态学观察、组织学检查、胶原含量的测定,观察EcM修复软骨缺损的能力。结果第12、24周时,A组修复效果最好,修复组织填充于软骨缺损处,与正常组织连接紧密,分界较为平滑;B组修复效果次之;C组最差,各阶段缺损少量的新生软骨,修复组织多为纤维组织。结论自制的ECM与自体软骨细胞复合具有较强的软骨生成能力,可作为异体软骨移植的一种替代物。     

水凝胶材料复合物修复软骨缺损的组织学评鉴

目的探讨水凝胶材料复合物对兔膝关节软骨全层缺损的修复。方法35只（70个关节）青紫蓝兔随机分为4组,实验组A组（n=20）：纤维蛋白凝胶＋骨髓间充质干细胞＋转化生民因子-β1;对照组B组（n=20）：纤维蛋白凝胶＋骨髓间充质干细胞;对照组CgH（n=20）：纤维蛋白凝胶＋转化生长因子-β1;空白对照组D组（n=10）：单纯钻孔。自大转子处抽取骨髓,密度梯度离心法分离间充质干细胞并行体外培养扩增,依分组将复合物分别填充到软骨缺损处,12周后取标本,进行大体及HE染色组织学观察,行甲苯胺蓝染色,Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定修复组织的性质,并行改良Pineda法半定量评分后统计学处理。结果12周后见：实验组缺损由类透明软骨或透明软骨修复,Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性,甲苯胺蓝异染性明显,修复面较平整光滑;而对照组则以纤维软骨及纤维组织修复,Ⅱ型胶原免疫组化染色阴性。改良Pineda法半定量组织学评分实验组总分平均为6．50,较对照组差异有显著性（P〈0．05）。结论水凝胶材料复合物移植到兔关节软骨缺损处,能够生成透明软骨而修复软骨缺损。     

碱性成纤维细胞生长因子对兔关节软骨全层缺损的修复作用

目的：利用注射型活性材料碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）修复兔关节软骨缺损，观察其治疗效果。方法：实验尝试在兔的膝关节软骨缺损区应用碱性成纤维细胞生长因子，分别于10周，14周，18周处死，观察大体和形态学特征，组织学评分。结果：A组于10、14周时，软骨缺损被白色半透明坚硬组织平滑修复，富有光泽，与正常软骨边界清楚，18周时修复组织与正常软骨边界模糊，质地坚硬，表面平滑光润。对照组于10、14、18周时均未见软骨修复。组织学评分A组明显优于对照组。结论：碱性成纤维细胞生长因子可以有效修复兔关节软骨的缺损，为组织工程化软骨的临床应用提供理论基础。     

关节止痛胶囊对骨髓基质干细胞凝胶复合体修复兔膝关节软骨缺损的影响

目的：探讨关节止痛胶囊对骨髓基质干细胞凝胶复合体修复兔膝关节软骨缺损的影响。方法：采用密度梯度离心＋贴壁培养法分离、纯化和扩增骨髓基质干细胞（BMSCs）,取第三代BMSCs制备纤维蛋白凝胶复合体。将40只新西兰兔随机分为四组：I组缺损不做任何处理;Ⅱ组缺损中植入未加细胞因子的凝胶复合体;Ⅲ组和Ⅳ组缺损种植人含细胞因子的凝胶复合体,Ⅱ组和Ⅳ组每天给予关节止痛胶囊灌胃。分别于术后第4、8、12周后取材,进行大体及组织学观察。结果：传代后BMSCs增殖速度快,易扩增可获取足够数量的细胞来修复软骨缺损。术后12周,大体观察,Ⅳ组缺损内修复组织大体形态与周围正常软骨无明显差异,没有裂隙,边界模糊,表面光滑,按之有韧性,几乎与周围关节面平齐,不易区分;组织学观察,Ⅳ组缺损完全由透明软骨组织填充,软骨细胞排列规则,新生软骨的厚度与正常软骨厚度基本相同。结论：骨髓基质干细胞凝胶复合体加关节止痛胶囊能修复关节软骨缺损,关节止痛胶囊在体内可以诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化,促进凝胶复合体修复软骨缺损。     

兔胚胎软骨细胞移植修复关节软骨缺损的初步研究

目的　采用兔胚胎软骨细胞培养移植修复关节软骨缺损 ,并对其组织形态学进行观察。方法　在成兔股骨内侧髁作关节软骨缺损模型 ,实验组采用生物蛋白胶与胚胎软骨细胞相混后 ,植入兔膝关节实验性软骨缺损区 ,对照组不做任何处理或单纯用生物蛋白胶移植修补 ,分别于术后 4、8、1 2周观察关节软骨缺损修复的情况 ,并对其进行组织学评分。结果　实验组在胚胎软骨细胞移植 8、1 2周后 ,于缺损区内可形成透明软骨 ,组织评分及效果评定优于对照组。结论　胚胎软骨细胞移植组所产生的修复组织接近正常软骨组织 ,明显优于对照组     

低频脉冲磁场对兔膝关节软骨缺损修复作用的实验研究

目的:研究低频脉冲磁场在间充质干细胞和双层PLGA支架构建复合体修复兔骨软骨缺损过程的作用。方法:用密度梯度离心法和贴壁培养法获得5月龄兔骨髓来源间充质干细胞,在体外培养并进行分化诱导后作为种子细胞复合双层PLGA构建成复合体植入兔膝股骨髁间设计骨软骨缺损模型,全过程施加低频脉冲磁场干预,于第24周取材,进行大体观察、组织学检查和病理评分。结果:诱导MSCs+支架+2.0A·m-1脉冲电磁场刺激组在术后又继续进行脉冲电磁场照射后,兔膝关节骨软骨创伤修复明显加快,统计学分析各组单项评价指标得分差异有显著性(P<0．05),与自体骨软骨移植组相当。结论:在适当低频脉冲磁场作用下,诱导MSCs+双层PLGA支架能较好地修复兔膝关节骨软骨创伤。     

自体骨髓间充质干细胞和同种异体肋软骨细胞共培养修复 五指山小型猪膝关节软骨缺损的实验研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)和肋软骨细胞(costal chondrocytes,CCs)共培养构建组织工程软骨及共培养细胞修复五指山小型猪膝关节软骨缺损的可行性,为临床修 复关节软骨缺损提供理论依据和奠定实验基础。方法：密度梯度离心法分离五指山小型猪BMSCs,双酶消化法分离 CCs。取第3代BMSCs和第2代CCs,随机分为3组：BMSCs:CCs为1:2的共培养组为A组,单纯CCs为B组,单纯BMSCs 为C组。绘制细胞生长曲线图,测定软骨细胞外分泌基质糖胺多糖(glycosaminoglycan,GAG)的能力。将12只五指山 小型猪随机分为共培养细胞/胶原膜实验组、胶原膜对照组和空白组。共培养细胞/胶原膜实验组髁间窝软骨缺损处 植入共培养细胞/胶原膜,胶原膜对照组单纯植入胶原膜,空白组不做任何植入,于术后第8和16周分别处死6只动 物,每组2只。取材行大体观察、软骨组织学评分及病理组织学检测。结果：密度梯度离心法分离的BMSCs生长良 好,双酶消化法分离的CCs生物活性良好,共培养细胞生长良好。术后16周共培养细胞/胶原膜实验组修复组织呈透 明软骨样,表面光滑平坦,周围软骨及软骨下骨整合良好,而胶原膜对照组和空白组为纤维性修复和无修复。共培 养细胞/胶原膜实验组修复组织大体评分明显优于胶原膜对照组和空白组(均P<0.05),胶原膜对照组和空白组之间差 异无统计学意义(P>0.05)。结论： BMSCs,CCs和共培养细胞均适合作为软骨组织工程的种子细胞,其中共培养细胞 (BMSCs:CCs为1:2)更具优势;共培养细胞复合胶原膜修复软骨缺损近期效果满意。     

Repair of articular cartilage defects in minipigs by microfracture surgery and BMSCs transplantation

Objective：To investigate the feasibility of minimal invasive repair of cartilage defect by arthroscope-aided microfracture surgery and autologous transplantation of mesenchymal stem cells. Methods： Bone marrow of minipigs was taken out and the bone marrow derived mesenchymal stem cells （BMSCs） were isolated and cultured to passage 3. Then 6 minipigs were randomly divided into 2 groups with 6 knees in each group. After the articular cartilage defect was induced in each knee, the left defect received microfracture surgery and was injected with 2.5 ml BMSCs cells at a concentration of 3×107 cells/ml into the articular cavity; while right knee got single microfracture or served as blank control group. The animals were killed at 8 or 16 weeks, and the repair tissue was histologically and immunohistochemically examined for the presence of type Ⅱ collagen and glycosaminoglycans （GAGs） at 8 and 16 weeks. Results： Eight weeks after the surgery, the overlying articular surface of the cartilage defect showed normal color and integrated to adjacent cartilage. And 16 weeks after surgery, hyaline cartilage was observed at the repairing tissues and immunostaining indicated the diffuse presence of this type Ⅱ collagen and GAGs throughout the repair cartilage in the treated defects. Single microfracture group had the repairing of fibrocartilage, while during the treatment, the defects of blank group were covered with fewer fiber tissues, and no blood capillary growth or any immunological rejection was observed. Conclusion： Microfracture technique and BMSCs transplantation to repair cartilage defect is characterized with minimal invasion and easy operation, and it will greatly promote the regeneration repair of articular cartilage defect.     

专用四肢关节磁共振在兔膝关节软骨缺损修复中的应用

【目的】 研究新西兰成年白兔膝关节软骨缺损修复后的低场强专用四肢关节磁共振诊断价值&#65377;【方法】 40只兔左膝关节随机分为两组:A组:通过手术形成软骨缺损,不植入Ⅱ型胶原;B组:缺损内填充Ⅱ型胶原,术后2&#65380;6&#65380;12&#65380;18周分别行专用关节MR扫描,扫描后取材,行组织学检查&#65377;【结果】 A&#65380;B两组手术区均显示有规律的动态MR改变,结合组织学分析,A组是软骨缺损的自我修复过程,B组是填充物的成熟过程&#65377;12周时两组均可见关节软骨信号,B组软骨信号较光滑,与组织学结果相符&#65377;【结论】 专用四肢关节MR检查具有评价关节软骨修复的潜力,可望成为一种无创的软骨修复术疗效评价方法&#65377;     

脱钙松质骨复合同种异体软骨细胞修复兔关节骨软骨缺损的实验研究

目的评价脱钙松质骨（DCB）复合同种异体软骨细胞构建组织工程软骨修复兔关节骨软骨缺损的效果。方法分离1月 龄雄性新西兰兔关节软骨细胞,原代培养后复合制备的DCB体外培养2周构建组织工程软骨。4~5月龄新西兰兔30只双侧股 骨内髁制作直径3 mm、深3 mm,穿透软骨下骨板的骨软骨缺损模型,20只右侧关节缺损处植入构建的组织工程软骨（A组）,左 侧缺损处植入DCB（B组）,10只双侧骨软骨缺损未予处理作为空白对照（C组）。分别于术后1、3、6月取修复组织标本,进行大 体形态、组织学及Ⅱ型胶原染色;并对6月修复组织进行组织学评分,比较各组修复效果差异。结果制备的DCB为三维多孔的 海绵结构,孔隙大小约为100~500 μm,相互交通。DCB植入体内后1月开始降解,3月完全吸收。术后6月A组缺损处修复组织 主要为透明样软骨,与周围正常软骨厚度基本一致,修复交界区整合良好,不易辨认。修复组织深层细胞在软骨陷窝内,呈柱状 排列,基质蛋白多糖和Ⅱ型胶原染色接近正常软骨,软骨下骨板完整。B组缺损处以纤维软骨样组织修复为主。C组以纤维组 织填充。组织学评分显示术后6月A组除软骨下骨板重建与B组比较无统计学差异外, 其它各项评分均优于B组和C组,差异 有统计学意义（P<0.05）。结论DCB是一种较好的软骨组织工程支架材料,复合同种异体软骨细胞能修复关节骨软骨缺损,修 复组织为透明样软骨。     

组织工程化软骨对兔膝关节全层软骨缺损的修复效果

目的 观察同种异体软骨细胞复合人胎盘Ⅰ型胶原蛋白海绵对兔膝关节股骨髁间窝全层软骨缺损的修复效果.方法取2周龄新西兰兔软骨细胞体外培养传代,选择生长状态相对较好的第2代细胞作为种子细胞,并与人胎盘Ⅰ型胶原蛋白海绵复合.取雄性8月龄新西兰兔54只,制作股骨髁间窝全层软骨缺损模型,随机分为3组：分别为对照组、种子细胞组及种子细胞＋支架材料组.后两组分别植入相应成分.于术后12周、24周、36周分别取其膝关节,观察修复效果. 结果 术后12周种子细胞组缺损区可见少量白色半透明组织覆盖,组织结构粗糙,可见多数针尖样结构;复合支架材料组表面相对光滑,亦可见半透明白色组织形成.24周,种子细胞组缺损区可见较多白色组织形成,透明度较前降低,呈半软骨半纤维样组织;复合支架材料组修复明显较种子细胞组快,表面光滑,呈半透明状覆盖于缺损区,与周围组织有较好吻合,但仍未完全修复软骨缺损.36周,种子细胞组可见更多白色组织覆盖,透明度较前更低;复合支架材料组则修复完好,高度基本与周围组织平齐,呈半透明样软骨组织.空白对照组随着时间的推移,呈现不同程度的纤维组织样修复. 结论 关节软骨自身修复能力有限,只能实现纤维样修复;软骨细胞可部分修复关节软骨缺损,但随着修复时间的推移,逐渐去分化而出现纤维样改变;而软骨细胞复合Ⅰ型胶原蛋白海绵则可以较好地修复关节软骨缺损,且随着时间的延长,关节软骨可基本实现完全修复.     

抗坏血酸/聚已酸内酯生物材料修复新西兰白兔软骨缺损

目的 探讨抗坏血酸复合聚已内酯(PCL-AA)生物材料在关节软骨缺损修复过程中的作用.方法 将8只雄性6月龄新西兰白兔完全随机分成3组,每只动物于双侧膝关节股骨膑股关节面制备直径3.5 mm、深3 mm的单纯软骨缺损模型,不钻通骨髓腔.A组:PCL-AA;B组:单纯PCL材料;C组:单纯手术空白对照,其中A、B两组填充材料后加入制备好的纤维蛋白胶(10 μg)和凝血酶原(10 μg)混合物以固定材料,空白对照组制备缺损仅冲洗缝合,不予特殊处理.于术后6周和12周,取材,进行大体观察、HE染色、番红固绿染色、Wakitani修复效果评分以及相关定量分析.结果 6周标本外观上A组修复效果明显优于B组,C组未见软骨缺损修复,边界清楚,中央凹陷明显.A组缺损被白色半透明坚硬组织修复,富有光泽.Wakitani评分A组优于B、C两组(P＜0.05).12周A组番红固绿染色显示软骨修复情况优于6周A组标本.HE染色各组均未见急慢性炎症细胞浸润.新生软骨面积百分数和新生软骨细胞数定量分析提示PCL-AA组均明显大于单纯PCL材料组(P＜0.05),C组未见明显软骨长出.结论 PCL-AA生物材料具有良好的生物相容性,可以有效修复兔关节软骨损伤,可能成为关节软骨损伤治疗新的治疗方法.     

微骨折结合bFGF纤维蛋白胶复合物修复关节软骨缺损的实验研究

目的探讨微骨折结合碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor bFGF）与纤维蛋白胶复合物对关节软骨缺损的修复作用。方法选择健康成年新西兰大白兔24只,随机分为A实验组、B对照组、C对照组、D空白对照组,每组6只（12膝）,所有兔子均造成股骨髁间窝直径4mm全层软骨缺损。A实验组：软骨缺损区造成微骨折并注入1μg bFGF和0．1ml纤维蛋白胶的混合物;B组：软骨缺损区造成微骨折并注入0．1ml纤维蛋白胶;C组：软骨缺损区注入1μg bFGF和0．1ml纤维蛋白胶的混合物;D组：软骨缺损区注入0．1ml纤维蛋白胶;术后8、12周处死动物取标本每次每组3只（6膝）,大体观察膝关节活动度及修复组织与周边组织的结合情况,苏木素一伊红染色和甲苯胺蓝染色观察修复组织的形态。根据Wakitani评分标准测定各组不同时间点标本光镜组织学评分,进行统计学分析。结果术后8、12周大体观察与织学观察结果,实验组关节软骨缺损的再生修复均明显优于对照组,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论微骨折和碱性成纤维细胞生长因子都有促进软骨修复的作用,两者结合起来对软骨再生具有更明显的促进作用。     

骨形态发生蛋白/碱性成纤维细胞生长因子复合材料修复关节软骨缺损的实验研究

目的探讨骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growthfactor,bFGF)复合材料在关节软骨缺损修复过程中的作用,为内源性修复关节软骨缺损提供实验基础。方法选用兔作为实验动物造成双侧股骨髁间窝全层软骨缺损,分别采用不同的材料(rhBMP2/PVP组、bFGF/PVP组、rhBMP2/bFGF/PVP组、PVP组)进行缺损修复,光镜及电镜下观察修复效果。结果术后8周rhBMP2/bFGF/PVP组软骨缺损已基本修复,12周时软骨修复更加光滑、完整。其余组软骨缺损修复效果不如rhBMP2/bFGF/PVP组。结论BMP具有诱导形成软骨的活性,与bFGF的复合物能增强软骨细胞增生,较单独应用BMP效果好,是生物学修复关节软骨缺损的良好材料。     

脱钙骨基质／纤维蛋白凝胶复合体在兔骨关节软骨损伤修复中的作用

目的 探讨脱钙骨基质／纤维蛋白凝胶复合体在新西兰大白兔骨关节软骨损伤修复中的意义。方法 12只兔随机分为两组,每组6只,观察组兔膝关节内植入复合支架材料,另对照组6只体内注射等量生理盐水。结果 实验组兔软骨缺损区充填充分,修复后的软骨组织呈现半透明、乳白色,色泽圆润、表面光滑,且Wa-kitani评分显著优于对照组（P〈0．05）。结论 脱钙骨基质／纤维蛋白凝胶复合支架可用于关节软骨缺损的修复。