抗食管癌单克隆抗体及食管癌细胞膜抗原的初步研究

以食管癌“109”细胞株免疫 BALB/C 小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0 融合,经三次克隆化,获得稳定分泌抗食管癌“109”细胞株单克隆抗体的杂交瘤细胞系2GF3。其分泌的单克隆2GF3抗体与外周血淋巴组胞、ABO 型红细胞、癌胚抗原以及3/5胃癌细胞株无反应,与2/5胃癌细胞株有弱(+)反应。与2GF3抗体对应的抗原为2GF3抗原,荧光标记检测表明后者主要表达在细胞膜上。用去污剂提取膜抗原进行电泳后转移至硝酸纤维素膜上进行酶标分析,2GF3抗原是分子量53KD 的糖蛋白,在还原及非还原条件下均显示相同的区带。它与抗癌胚抗原抗体及抗甲胎蛋白抗体均无反应,表明它不同于癌胚抗原和甲胎蛋白。     

单克隆抗体双夹心ELISA检测血吸虫循环抗原对抗血吸虫药疗效考核的价值

应用日本血吸虫抗３１／３２ｋＤ（１Ｄ＝０．９９２１ｕ）单克隆抗体双夹心酶联免疫吸附试验（双夹心ＥＬＩＳＡ）检测血吸虫循环抗原，用于城市急性血吸虫病经吡喹酮治疗５年后无再次感染患者的疗效考核，阳性率为１２．２０％。与快速法ＥＬＩＳＡ检测循环抗原的符合率为９６．３４％。与常用检测抗体的ＩＨＡ、ＥＬＩＳＡ法平行对照，阳性率基本一致。与改进的粪便孵化法比较，两法的符合率为８５．３６％。无疫水接触史健康人未见阳性反应。对肝病患者无交叉反应。结果显示双夹心ＥＬＩＳＡ法检测循环抗原敏感性高，特异性强，具有良好的抗血吸虫药物疗效考核价值。     

抗结核杆菌单克隆抗体的研制及初步鉴定

运用单克隆抗体技术 ,以结核杆菌H37Rv的培养滤液免疫Balb/c小鼠 ,以H37Rv及BCG抗原同时筛选杂交瘤细胞 ,得到了 7株稳定分泌的抗结核杆菌的杂交瘤细胞株 ,并对它们的特性作了初步鉴定。在 7株单克隆抗体杂交瘤中 ,5株 (2C5、2C11、2D1、2E11及 3D3)为IgG1亚类 ,另两株 (3C3及 5D8)为IgM。腹水经ELISA检测 ,效价可达 10 -3 ～ 10 -4 ,同时应用ELISA及免疫印迹试验分析了 7株单抗的种间反应性 ,结果 7株单抗与其它结核杆菌有不同程度的交叉反应 ,其中 1株单抗 (5D8)与大肠杆菌超声抗原也有明显交叉反应 ,提示结核抗原组分十分复杂 ,不仅分支杆菌种间有共同抗原决定簇 ,甚至与其它种属也有相同或相似的抗原决定簇。将这 7株单抗用于结核血清学诊断的价值有待进一步评估     

单克隆抗体检测血吸虫卵循环抗原的研究

单克隆抗体检测血吸虫卵循环抗原的研究＊郑南才１蒋作君１徐镜２王维１袁有赉２Ｅ１２株杂交瘤为本室研制，其分泌的单克隆抗体所针对靶抗原为日本血吸虫虫卵分泌性抗原，为了进一步验证此单克隆抗体的应用价值，进行了下列实验。１材料与方法１．１单克隆抗体制备以１０...     

日本血吸虫不同发育阶段抗原检测IgG及IgG4的疗效考核价值

目的：建立具有疗效考核价值的抗原－－抗体检测系统。方法：用日本血吸早不同发育阶段抗原（ＡＷＡ、ＡＭＡ、ＡＥＳＡ、ＳＥＡ、ＳＩＥＡ）检测治疗前及治疗后不同时间慢性血吸虫病人血清中特异性ＩｇＧ及ＩｇＧ４并测定肺吸虫病人、肝吸虫病人和健康人血清的交叉反应性。结果：不同发育阶段抗原－ＩｇＧ检测系统间对慢性血吸虫师人、肺吸虫病人、肝吸虫病人和健康人血清测试的阳性率无显著性差异（Ｐ〉０．０５），慢性血吸虫病人     

抗Sj14-3-3特异性IgY的制备及其诊断日本血吸虫病循环抗原的价值

目的制备抗重组日本血吸虫信号转导蛋白14-3-3(Sj14-3-3)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立双抗体夹心ELISA诊断体系(IgY-ELISA),探讨用于日本血吸虫病的诊断价值。方法利用Sj14-3-3制备并纯化卵黄抗体IgY和兔多克隆IgG抗体;以IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体建立双抗体夹心ELISA诊断方法,检测72例急性血吸虫病患者、128例慢性血吸虫病患者、132例正常人、42例肺吸虫患者、60例华支睾吸虫患者和46例钩虫感染者血清。探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值。结果成功制备并鉴定了抗Sj14-3-3特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为73.6%和48.4%,正常人血清的阴性率为94.7%;与肺吸虫患者、华支睾吸虫患者、钩虫感染者血清的交叉反应分别为7.1%、6.7%、6.5%。结论建立了基于IgY的双抗体夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫病患者血清的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于日本血吸虫病的辅助诊断。     

日本血吸虫不同发育阶段抗原检测IgG及IgG_4的疗效考核价值

目的 :建立具有疗效考核价值的抗原 -抗体检测系统。方法 :用日本血吸虫不同发育阶段抗原 (AWA、AMA、AESA、SEA、SIEA)检测治疗前及治疗后不同时间慢性血吸虫病人血清中特异性IgG及IgG4 并测定肺吸虫病人、肝吸虫病人和健康人血清的交叉反应性。结果 :不同发育阶段抗原 -IgG检测系统间对慢性血吸虫病人、肺吸虫病人、肝吸虫病人和健康人血清测试的阳性率无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,慢性血吸虫病人治疗后 12个月IgG的阴转率以SIEA最高 (90 .0 % ) ,其次为AMA(77.5 % ) ,最低为AESA(2 0 .0 % ) ;检测慢性血吸虫病人治疗前的特异性IgG4 的阳性率AWA最高 (85 .0 % ) ,其次为AMA(80 .0 % ) ,最低的为SIEA(37.5 % ) ,治疗后 12个月的IgG4 阴转率SIEA最高 (97.5 % ) ,其次为AMA(95 .0 % )和AWA(85 .0 % ) ,最低的为SEA(6 2 .5 % )。结论 :AMA -IgG、SIEA -IgG、AWA -IgG4 和AMA -IgG4 检测系统具有较好的疗效考核价值 ,且以SIEA -IgG和AMA -IgG4 两个检测系统最好。     

抗日本血吸虫童虫表膜单克隆抗体的制备

目的为制备分泌抗日本血吸虫感染保护性单克隆抗体细胞株。方法应用杂交瘤技术，将照射致弱尾蚴免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤的细胞融合。结果经两次以上有限稀释克隆化后，抗日本血吸虫童虫表膜抗原阳性率为１００％，建立了５株稳定分泌抗童虫表膜单抗的细胞株。杂交瘤细胞诱生腹水，ＥＬＩＳＡ效价达１０．６４×１０５～１１．２８×１０５。初步鉴定单克隆抗体类型分别为ＩｇＭ、ＩｇＧ２ａ和ＩｇＧ２ｂ。抗原抗体定位于童虫表膜。结论该单抗的制备为进一步研制抗日本血吸虫童虫表膜分子疫苗奠定基础。     

单克隆抗体检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的制备抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,用于广州管圆线虫循环抗原（CAg）的检测。方法广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB／c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2／0）融合,用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹试验对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定,双抗体（单抗3F1和4H2）夹心ELISA法检测实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠和广州管圆线虫病人血清中的CAg。结果获得了3株稳定分泌抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单抗的杂交瘤细胞株,经鉴定2株为IgG1（3F1、4H2）,1株为IgM（2A2）,杂交瘤细胞培养上清效价分别为1：25600、1：25600和1：12800,诱生腹水ELISA效价分别为1：80000、1：80000和1：40000。3株单抗均识别广州管圆线虫成虫相对分子量约为15000的蛋白。实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠血清CAg检出率分别为84．2％（48／57）和87．2％（41／47）,广州管圆线虫病人血清CAg检出率为86,4％（19／22）,与日本血吸虫、囊虫、肺吸虫、旋毛虫病人血清无交叉反应。实验感染小鼠血清CAg第2周即呈阳性反应,第4周A。。值达到高峰。结论建立了敏感性高、特异性强的3P1、4H2双抗体夹心ELISA检测广州管圆线虫循环抗原法,可用于广州管圆线虫病的临床诊断、疗效考核和流行病学调查。     

单克隆抗体检测循环血吸虫抗原的实验研究

将血吸虫成虫多糖抗原的单克隆抗体应用于ELISA直接法检测血清中的循环抗原.重感染兔血清35份、中感染兔血清7份及低感染兔血清10份,阳性率分别为100%,57.1%及20%,健康兔血清25份,弓形虫感染兔血清10份,均未见阳性反应.重感染兔于感染后5周OD均值明显上升,是感染前的2.95倍,以后逐周上升.中感染兔5周后,OD均值开始上升,5周和6周时的OD均值是感染前的1.27倍和3.49倍.低感染兔OD均值一直维持较低水平,至9周时OD均值才是感染前的2.56倍.结果表明,血吸虫病兔血清中的循环抗原出现时间或阳性率均与血吸虫尾蚴的感染度密切相关.     

斑点ELISA筛选单克隆抗体的研究

在抗日本血吸虫单克隆抗体的制备过程中，探索了用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）作为筛选方法，成功地获得了一株针对血吸虫循环抗原的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。初步结果表明：该株单抗３Ｃ２在ＰＶＦ－环卵沉淀试验中呈阳性；其检测４０例急性血吸虫病患者血清中循环抗原均呈阳性反应，２０例健康人对照血清无假阳性反应。Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ用作筛选具有操作简单、快速，无需特殊仪器等优点。     

SjAWMMcAb对吡喹酮杀虫效果的影响

目的 :制备日本血吸虫成虫表膜单克隆抗体 (SjAWMMcAb) ,探讨其与吡喹酮在宿主体内的联合杀虫作用。方法 :用SP2 / 0骨髓瘤细胞与日本血吸虫成虫表膜抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合 ,经筛选和克隆化后建立分泌日本血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,通过单层细胞培养法和小鼠体内接种法收集单克隆抗体 ;采用Westernblotting和免疫荧光测定 (IFA)对其进行鉴定 ;小鼠实验观察单抗与吡喹酮的联合杀虫作用。结果 :建立了 3个分泌SjAWMMcAb的细胞株 ,Westernblotting显示 3个McAb可识别 5种不同分子量的蛋白 ,IFA表明 3个McAb均能与血吸虫成虫表膜发生特异性反应 ,3B6和 1C2两株McAbs与吡喹酮联用杀虫率分别可提高 4 1.78%和 2 4 .12 %。结论 :某些SjAWMMcAb与吡喹酮可发挥联合杀虫作用     

循环抗原及血清抗体的联合检测诊断日本血吸虫病

目的探讨日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3)在血吸虫病免疫诊断中的价值。方法制备并纯化抗重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的单抗和多抗,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA);以纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA,分别比较该两种方法以及两种方法联合检测对于急、慢性血吸虫病患者免疫诊断的特异性和敏感性。结果利用双抗体夹心ELISA、间接ELISA和联合检测3种方法检测急性患者血清70例,敏感性分别为72.9%、75.7%和91.4%;检测慢性患者血清110例,敏感性分别为46.4%、61.8%和82.7%;检测正常人血清100例,特异性分别为96%、92%和92%;吡喹酮治疗后患者血清161份,其中急性治疗后1年以内转阴率分别为50%、38.9%和33.3%;慢性治疗后1年内分别是76.4%、55.6%和43.1%;慢性治疗后2年以上分别为93.0%、83.0%和78.9%。3种方法检测华支睾吸虫病、钩虫病的交叉反应性分别为0%、15.6%和15.6%,8.7%、19.6%和21.7%。3种方法的敏感性、与华支睾吸虫感染者血清交叉反应、慢性治疗1年内及慢性治疗2年以上患者血清的转阴率差异具有显著性(P<0.05),而特异性、与钩虫感染者血清交叉反应及其他化疗后患者血清的转阴率差异无显著性(P>0.05)。结论循环抗原Sj14-3-3和抗体联合检测在日本血吸虫病免疫诊断中具有潜在的临床应用价值。     

重组弓形虫14-3-3抗原用于弓形虫血清抗体的检测

目的　探讨重组弓形虫信号转导蛋白14- 3- 3(Toxo14- 3- 3)在弓形虫病免疫诊断中的价值。方法　根据弓形虫Beverly株猫肠上皮细胞增殖阶段的14- 3 -3编码基因,设计合成引物,自RH株速殖子基因组克隆Toxo14- 3 -3的ORF,克隆pET 28a质粒,转化大肠杆菌,获得表达产物并纯化融合蛋白,以此抗原包被反应板进行ELISA检测,并与粗制抗原及市售试剂进行比较。结果　对400份血清标本的平行检测,Toxo14 -3 -3抗原、粗制抗原和市售试剂盒的阳性率分别为2 5%、3 0%和3 .25%,三者之间差异无显著性(P>0 .05);三者之间的符合率为99 0%、98.8%和99 .0%,差异无显著性(P>0. 05 )。结论　重组Toxo14 -3- 3抗原检测弓形虫血清抗体具有潜在价值。     

重组人类神经元14-3-3zeta信号蛋白的纯化及抗体制备

目的制备抗人脑14-3-3 zeta蛋白(31 ku)的多克隆抗体与单克隆抗体,为神经系统退行性疾病的诊断提供标志物.方法用纯化的rh14-3-3zeta蛋白免疫家兔,制备抗14-3-3多克隆抗血清;电洗脱、透析纯化rh 14-3-3/β-半乳糖苷酶融合蛋白,免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术制备抗rh 14-3-3 zeta单克隆抗体;测定所得抗体效价及其特异性反应.结果得到大量纯化的表达产物;制备的多克隆抗血清双扩效价达1:8～1:64;获得 1株能稳定分泌抗rh 14-3-3 zeta单抗的杂交瘤细胞株,其亚型为IgG1型,该株单抗可与重组14-3-3蛋白发生特异性反应.结论获得了敏感、特异的抗rh 14-3-3 zeta多克隆抗血清及稳定分泌抗rh 14-3-3 zeta单抗的杂交瘤细胞株,为神经系统退行性疾病提供诊断标记.     

日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3的免疫诊断价值评估

目的探讨重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3（rSj14-3-3）间接ELISA用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法表达并利用纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA法，比较其与可溶性虫卵抗原（SEA）ELISA和间接血凝试验（IHA）检测急慢性日本血吸虫病患者的阳性率及其它寄生虫患者和正常人血清的交叉反应。结果rSj14-3-3-ELISA、SEA-ELISA和IHA3种方法的敏感性分别为90．8％、94．2％和90．0％，特异性分别为87．0％，84．8％和84．8％，差异无显著性（P〉0．05）。结论rSj14-3-3抗原间接ELISA法具有可用于日本血吸虫病免疫诊断的价值。     

VEGF165单克隆抗体对视网膜新生血管的抑制作用

目的:探讨有效阻断视网膜新生血管发生的方法.方法:对体外培养新生儿脐静脉血管内皮细胞进行血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)单克隆抗体、13-顺式维甲酸、INF-α、INF-γ 4种药物筛选实验.用倒置显微镜观察细胞生长状态;用MTT法测A560nm值,计算细胞增殖抑制率.结果:VEGF165单克隆抗体组浓度在2 000 mg*L-1时,对血管内皮细胞的增殖抑制率达91%.13-顺式维甲酸对细胞最高增殖抑制率是61%;IFN-γ浓度在2 000 mg*L-1时,对细胞增殖抑制率为56%.IFN-α浓度在2 000 mg*L-1时,细胞增殖抑制率均低于40%.结论:VEGF165单克隆抗体具有很强的抑制血管内皮细胞增殖的作用.     

日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3对日本血吸虫病的诊断价值

目的 探讨纯化的日本血吸虫(中国大陆株)重组信号蛋白14—3—3(rSjl4—3—3)诊断血吸虫病的价值。方法 利用纯化的rSjl4—3—3抗原与成虫抗原，间接EUSA法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清。结果 急、慢性血吸虫患者血清rSjl4—3—3抗体检出率为100％和92．0％，与正常人血清未出现交叉反应；抗AWA抗体检出率为98．0％和94．0％，与正常人有7．3％的交叉反应。结论 rSjl4—3—3为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性，具有实用价值。     

小剂量抗CD3单克隆抗体治疗肾移植术后早期急性排斥反应的临床研究

目的探讨应用小剂量抗CD3单克隆抗体(OKT3)治疗肾移植术后早期急性排斥反应的效果和安全性.方法将33例发生早期急性排斥反应的肾移植病人分为两组,A组16例(OKT3 5 mg/d);B组17例(OKT3 2.5mg/d).观察排斥反应逆转情况及感染的发生率.结果A组13例(81.25%)急性排斥反应逆转,移植肾功能恢复正常;1例移植肾自发性破裂行移植肾摘除术,2例移植肾失功恢复血液透析.B组15例(88.24%)急性排斥反应逆转,移植肾功能恢复正常;1例移植肾自发性破裂行移植肾摘除术,1例移植肾失功恢复血液透析.两组排斥反应逆转率无显著性差异(P＞0.05).A组合并感染43.75%,B组5.88%;两组比较有显著性差异(P＜0.05).结论小剂量OKT3治疗肾移植术后早期急性排斥反应的效果良好,并发症少,且费用较低.