抗B7—1功能性单克隆抗体对B淋巴瘤细胞生长的抑制作用

目的 分析抗Ｂ－１功能必平时本对表达Ｂ７分子的人恶性瘤细胞株Ｒａｊｉ和Ｄａｕｄｉ细胞体外生长抑制作用及其可能机制。方法 采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析肿瘤细胞的Ｂ７－１分子表达，以不同浓度抗Ｂ７－１功能性单克隆抗体，加入体外培养细胞中，经细胞计数和ＭＴＴ法，观察单克隆地肿瘤细胞体外生长的作用。结果 Ｒａｕｉ、Ｄａｕｄｉ细胞均表达Ｂ７－１分子表达阳性百分率分别为９２．７％和８９．２％，抗Ｂ７－１单     

bax加强表达对Raji细胞程序性死亡效应

目的：研究ｂａｘ过量表达对Ｂｕｒｋｉｔ淋巴瘤细胞株细胞程序性死亡的效应及其机理。方法：亚克隆构建可过量表达ｂａｘα的真核表达载体，通过脂质体转染法导入Ｒａｊｉ细胞株中。ＰＣＲ及免疫荧光定量鉴定ｂａｘα在Ｒａｊｉ细胞株中的表达；流式细胞仪检测凋亡率。结果：成功构建ｐＳＦＦＶｂａｘαＳ和ｐＳＦＦＶｂａｘαＡＳ两种质粒，转染Ｒａｊｉ细胞后，测得转染ｐＳＦＦＶｂａｘαＳ的Ｒａｊｉ细胞的ｂａｘα表达量明显高于转染空载ｐＳＦＦＶｎｅｏ质粒的Ｒａｊｉ细胞株。φ（胎牛血清）＝０．０１诱导两种Ｒａｊｉ细胞４８ｈ，Ｒａｊｉｂａｘα的凋亡率为４８．６％，Ｒａｊｉ０的凋亡率为６．４％。结论：ｂａｘα在Ｒａｊｉ细胞中的加强表达可明显促进细胞的凋亡。     

气血康抗肿瘤的体外实验研究

应用体外细胞培养技术，观察了气血康水提醇沉物对Ｌ１２０、Ｋ５６２、Ｒａｊｉ细胞系集落形成的影响。研究结果表明，气血康水提醇沉物对肿瘤细胞系Ｌ１２１０、Ｋ５６２，Ｒａｊｉ细胞集落形成有明显的抑制作用（Ｐ均〈０．００１）。这种抑制效应与药物浓度有关。本文还对气血康抗肿瘤的可能机理进行了讨论。     

几种肿瘤免疫抑制因子作用的研究

通过体外细胞培养，采用ＭＴＴ法和ＮＯ测定法，观察了淋巴瘤（Ｒａｊｉ）、实体瘤（Ｓ_（１８０））、艾氏腹水瘤（ＥＡＣ）、肝癌（ＨＣ）４种肿瘤细胞产生的肿瘤免疫抑制因子（ＴＤＳＦ）对小鼠腹腔巨噬细胞产生ＮＯ和Ｔ淋巴细胞激活的影响。结果发现Ｒａｊｉ－ＴＤＳＦ和Ｓ_（１８０）－ＴＤＳＦ对巨噬细胞产生ＮＯ均有明显的促进作用（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）．而ＥＡＣ－ＴＤＳＦ和ＨＣ－ＴＤＳＦ则否（Ｐ＞０．０５），它们对Ｔ淋巴细胞激活的抑制作用Ｓ_（１８０）－ＴＤＳＦ和ＥＡＣ－ＴＤＳＦ可被大蒜素（ＤＡＴＳ）所拮抗，与无ＤＡＴＳ组比较抑制率明显下降（Ｐ＜０．０１）；而ＤＡＴＳ却不能拮抗Ｒａｊｉ－ＴＤＳＦ和ＨＣ－ＴＤＳＦ的抑制作用（Ｐ＞０．０５）。结果表明，不同肿瘤细胞产生的ＴＤＳＦ的作用及其机制可能是多样的。     

人胚脾LAK细胞体外抗肿瘤作用的实验研究

本文对人胚脾ＬＡＫ细胞的制备及其体外抗肿瘤作用进行了实验研究，为临床推广应用提供了可行性的依据。实验表明，在红细胞低渗休克法，溶血盐法，淋巴细胞分离液分离法中，以最后一种方法制备人胚脾ＬＡＫ前体细胞的效果最佳。用重组白细胞介素２诱导的人胚脾ＬＡＫ细胞在培养的第５～８ｄ对Ｋ５６２靶细胞的细胞毒活性最高，达６５．１％；而对Ｒａｊｉ靶细胞的细胞毒活性较低，在培养的第５ｄ为２６．７％。由此可见，人胚脾ＬＡＫ细胞对Ｋ５６２和Ｒａｊｉ两种肿瘤细胞均有杀伤活性。     

表皮生长因子对体外建株瘤细胞的促增殖作用及其对瘤细胞顺铂敏感性的影响

本文采用３，４，５－二甲基噻唑－２，５－二苯基－四唑溴化物（ＭＴＴ）比色法及乳酸脱氢酶释放法，研究了表皮生长因子（ＥＧＦ）对人骨髓红白血病细胞系（Ｋ５６２）、人Ｂ淋巴细胞白血病细胞系（Ｒａｊｉ）、人宫颈癌细胞系（Ｈｅｌａ）的促增殖作用及其对３种瘤细胞顺铂（ＣＤＤＰ）敏感性的影响。结果显示，ＥＧＦ能够促进Ｒａｊｉ、Ｈｅｌａ细胞增殖，对Ｋ５６２细胞的生长没有促进作用。ＥＧＦ与ＣＤＤＰ同时接触瘤细胞，不能增高瘤细胞对ＣＤＤＰ的敏感性，但提前２４小时接触瘤细胞，Ｒａｊｉ、Ｈｅｌａ细胞对ＣＤＤＰ敏感性明显增高；Ｋ５６２细胞的敏感性则未见增高。表明ＥＧＦ增高肿瘤细胞ＣＤＤＰ敏感性可能与其提前激活瘤细胞表面的ＥＧＦ功能性受体有关。揭示ＥＧＦ激活的信号传导通路在ＣＤＤＰ细胞毒作用中起调节作用。     

茶多酚与亚硒酸钠联合对EBV抗原表达的抑制作用

用间接免疫荧光法测定Ｒａｊｉ细胞和Ｂ９５－８细胞ＥＢ病毒抗原的表达。结果显示无细胞毒浓度的茶多酚与亚硒酸钠联合对Ｒａｊｉ细胞ＥＢＶ－ＥＡ表达有显著的抑制作用,优于单纯茶多酚或亚硒酸钠的抑制作用。两药显示相互协同增效的作用 。抑制率与药物浓度相关;单纯茶多酚对Ｂ９５－８细胞ＥＢＶ－ＶＣＡ表达无抵制作用,但茶多酚能增强亚硒酸钠对Ｂ９５－８细胞ＥＢＶ－ＶＣＡ表达的抵制作用,抑制率随药物浓度的升高而升高。     

bax加强表达对Raji细胞程序性死亡效应

研究ｂａｘ过量表达对Ｂｕｒｋｉｔｔ淋巴瘤细胞株细胞程序性死亡的效应及其机理。方法；亚克隆构建可以过量表达ｂａｘ ａ的真核表达载体，通过脂 转染法导入Ｒａｊｉ细胞株中。ＰＣＲ及免疫荧光定量鉴定ｂａｘ ａ在Ｒａｊｉ细胞株中的表达；流式细胞仪检测凋亡率。     

顺铂对结直肠癌肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性的影响

以结直肠癌肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）和顺铂（ＣＤＤＰ）为研究对象，旨在为临床选择有效的免疫化疗方案提供一定的理论依据。在８名手术治疗结直肠癌患者，分别观察ＣＤＤＰ体内注射及体外预处理ＴＩＬ和Ｒａｊｉ细胞对ＴＩＬ表面标志和杀伤活性的影响。流式细胞仪检测结果显示静脉注射ＣＤＤＰ能增加结直肠癌ＴＩＬ中ＣＤ３＋／ＣＤ４＋和ＣＤ３＋／ＣＤ８＋细胞含量，同时增强ＴＩＬ体外杀伤Ｒａｊｉ细胞的活性；而体外以ＣＤＤＰ处理Ｒａｊｉ细胞能增强其对结直肠癌ＴＩＬ杀伤的敏感性。提示有必要进一步研究联合应用ＴＩＬ和ＣＤＤＰ治疗结直肠癌的临床效果     

VP16诱导Raji肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的 从细胞凋亡角度探讨ＶＰ１６抗肿瘤作用的机理。方法 用光学显微镜及电子显微镜观察了ＶＰ１６诱导Ｒａｊｉ细胞凋亡的形态学变化;用琼脂糖凝胶电泳观察了ＤＮＡ的梯形改变。结果 ＶＰ１６可明显诱导Ｒａｊｉ细胞调亡,５ｕｇ．ｍｌ＾－１ＶＰ１６作用４８ｈ时,凋亡指数为５８．３３％±３．０６％。与对照组相比有显性差异（Ｐ〈０．０１）。凋亡指数与药物浓度的对数呈正相关（ｒ＝０．９４０７,Ｐ〈０．０１）。结论 诱导凋亡是ＶＰ１６抗肿瘤作用的机理之一。     

Effects of TNF-α and curcumin on the expression of VEGF in Raji and U937 cells and on angiogenesis in ECV304 cells

Background To better understand the possibilities of antiangiogenic tumor therapy and to assess possible side effects, we investigated the effect of tumour necrosis factor （TNF）-α and curcumin on the expression of vascular endothelial growth factor （VEGF） in U937 and Raji cell lines and their effect on angiogenesis in a human umbilical vein endothelial cell （HUVECs）-derived cell line （ECV304）, and also the relationship between Notchl and VEGF. The aim of this study was to elucidate potential mechanisms controlling tumor neovascularization. Methods VEGF secreted by U937 and Raji cell lines was determined by ELISA. Angiogenesis was tested by network formation of endothelial cells on Matrigel. Levels of VEGF mRNA in U937 and Raji cells and Notchl mRNA levels in EV304 cells were determined by RT-PCR. Results Secretion of VEGF by U937 and Raji cells was increased by TNF-α treatment and suppressed by curcumin （P 〈 0. 01 ）. The mRNA expression of VEGF165 and VEGF121 （containing 165 and 121 amino acid residues, respectively） were detected in any fractions. TNF-α augmented the expression of VEGF165 and VEGF121 mRNA and curcumin reduced the expression （P 〈0. 01 ）. No networks or cords formed in control and curcumin groups. There was tube formation on matrigel in the supernatants of the Raji culture group and the supernatants groups treated by VEGF group and TNF-α in Raji cell. Notch1 mRNA was detected but there was no significant change in the VEGF group compared with control （P 〉 0. 05）. Conclusions Expressions of VEGF mRNA in U937 and Raji cells were increased by TNF-α and suppressed by curcumin. VEGF and TNF-α can induce angiogenesis, and curcumin can inhibit angiogenesis in ECV304 cells.     

Raji细胞不同激活方法的比较

目的：比较不同的Raji细胞激活方法，以选择最佳EB病毒早期抗原激活途径。方法：采用正丁酸加巴豆油和5’碘脱氧尿嘧啶核苷两种不同的方法，分别对Raji细胞进行激活，通过免疫酶法检测．根据其阳性细胞表达及血清抗体几何平均滴度，比较两种方法的优劣。结果：正丁酸加巴豆油方法阳性细胞表达百分率及抗体几何平均滴度明显高于5’碘脱氧尿嘧啶核苷方法。结论：正丁酸加巴豆油方法优于5’碘脱氧尿嘧啶核苷方法，是目前Raji细胞激活较为理想的方法。     

甲状腺机能亢进症患者血浆游离氨基酸含量的变化(16种血浆游离氨基酸的测定)

本文应用氨基酸自动分析仪,初步观察了甲状腺机能亢进症患者35例,正常人30例的16种血浆游离氨基酸的含量,以探讨甲亢患者与某些氨基酸代谢的关系及疗效的观察指标。结果表明:甲亢患者酪氨酸明显高于正常对照组(P<0.001).这可能是甲亢患者氨基酸代谢的特征之一.支链氨基酸和生酮氨基酸亦明显高于正常对照组(P<0.05),而丝氨酸、甘氨酸均低于正常组(P<0.001)。     

代谢重编程：肿瘤的平衡之舞

肿瘤细胞存在能量代谢异常,表现为糖酵解过度活跃,而线粒体有氧代谢削弱,被称为“Warburg效应”。最近的研究表明,肿瘤组织中的代谢异常远比我们之前认识的要复杂。尽管存在旺盛的糖酵解,实际上肿瘤组织仍然保留线粒体有氧代谢。另一方面,线粒体是肿瘤细胞合成代谢的主要场所之一。肿瘤组织还发现存在脂肪酸代谢、氨基酸代谢异常。肿瘤发生过程中,整个代谢网络在瘤基因、抑瘤基因主导下发生重编程,营养组织在代谢网络中的流向和流量被重新定义。肿瘤细胞代谢重编程的法则在于平衡细胞能量需求和合成代谢,以利于生物大分子合成,达到细胞倍增。靶向细胞代谢酶的抗肿瘤治疗,目的并不是干扰肿瘤细胞的能量供应,而是影响其合成代谢速率,从而抑制肿瘤的增殖。     

A novel serine protease SNC19 associated with human colorectal cancer

Objective To study the structure and function of a novel serine protease gene associated w ith human colorectal cancer SNC19.Methods The cDNA sequence was determined by both manual and automatic sequencing techniq ues. The full length cDNA sequence was obtained by the 5’-Rapid Amplification of cDNA Ends technique and web-based analysis. Open reading frame analysis and protein function prediction were also performed. Northern blot was used to det ect the expression of SNC19 in various human normal tissues and tumor cell lines . Fluorescent in situ hybridization combined with fluorescent R-banding techni que was employed to map the SNC19 gene on human chromosome.Results Full length SNC19 cDNA, size 3152 bp, encodes a protein highly homologous to a m ouse serine protease epithin. In normal human tissues, high SNC19 expression le vels were observed in the kidney, pancreas, prostate, small intestine and colon; moderate SNC19 expression levels were observed in the placenta, lung, liver, sp leen thymus, testis and peripheral blood lymphocytes; and extremely low expressi on levels were observed in the heart, brain, skeletal muscle and ovary. In tumo r cell lines, colorectal cancer cells SW480, SW620, SW1116 and Colo205, breast c ancer cell Bcap37 and gastric cancer cells MKN28 and SGC7901 showed high levels of SNC19 expression; cervical cancer cell HeLa-S3, lung cancer PAA, oral epithe lial cancer cell KB and lymphoma cell Raji showed moderate levels of SNC19 expre ssion; and tongue squamous cancer cell Tca8113, leukemia cells HL-60, K562, MOL T-4, lung cancer cell A549 and melanoma cell G361 showed very low levels of SNC 19 expression. SNC19 was mapped to human chromosome 11q24-25. Conclusion SNC19 encodes a novel human serine protease with 855 amino acid residues. As a novel serine protease associated with human colorectal cancer, the expression of SNC19 in various tissues and cell lines may have very important impact on their phenotypes and biological behaviors.     

低浓度DMSO 对SH-SY5Y 细胞存活率和氨基酸代谢的影响

目的：研究二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）对SH-SY5Y细胞存活率和氨基酸代谢的影响。方法：将细胞分为正常组和DMSO组。0.0125%浓度的DMSO作用SH-SY5Y细胞不同时间（24,48 h）后,利用MTT法测定细胞存活率;高效液相色谱法测定细胞中氨基酸的含量。 结果：与正常组相比,在0.0125% DMSO作用下,细胞活力和形态无显著差异,但细胞内氨基酸含量变化有显著差异（P<0.05）。其中作用24 h,细胞中有7种氨基酸：谷氨酸（glutamic acid,Glu）、谷氨酰胺（glutamine,Gln）、甘氨酸（glycine,Gly）、脯氨酸（proline,Pro）、苯丙氨酸（phenylalanine,Phe）、异亮氨酸（isoleucine,Ile）、亮氨酸（leucine,Leu）含量有显著变化（P<0.05）;作用48 h,细胞中有12种氨基酸：谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丝氨酸（serine,Ser）、组氨酸（histidine,His）、赖氨酸（lysine,Lys）、丙氨酸（alanine,Ala）、色氨酸（tryptophan,Trp）含量有显著变化（P<0.01）。 结论：细胞活力无显著差异时,细胞氨基酸代谢已有明显变化,氨基酸代谢异常可能为细胞损伤早期的一种特征。     

Changes in amino acid contents in hepatocellular carcinoma tissues

Contents of 22 amino acids in hepatoma with surrounding and distant liver parenchyma resected from 10 pathologically proven patients were determined using high performance liquid chromatography. Analysis of the results showed that the contents of total amino acids and essential amino acids in hepatoma tissues were much higher than those in the surrounding and distant liver parenchyma. The contents of 11 amino acids, including glutamic acid, asparagine, glutamine, serine, histidine, arginine, tryptophan, methionine, leucine, isoleucine and lysine were higher than those in the surrounding and/or distant liver parenchyma. There was no statistically significant difference of amino acid contents between the surrounding and distant liver parenchyma. Most amino acid contents which increased in hepatoma tissues were positively correlated with tumor volume and/or serum gamma-glutamyl transpeptidase activity. These results suggested that hepatoma tissues can selectively take up the necessary amino acids which fail to be produced by the cancer tissues as raw material for synthesis of protein. The faster the hepatoma grows, the greater the need for amino acidosis. This study may be helpful to the application of imbalanced amino acid for correction of metabolic disturbances in hepatoma patients.     

补阳还五汤对沙鼠脑缺血损伤细胞凋亡的影响及机理研究

目的：研究 阳还五汤对沙鼠脑缺血损伤后神经细胞凋亡的作用及可能的作用机理。方法：采用沙土鼠双侧颈总动脉夹闭脑缺血再灌注模型,于再灌后１２０ｈ取大脑半球,在解剖显微镜下切取海马,电镜观察神经细胞凋亡的情况;同样模型,于缺血再灌注后４８ｈ取脑组织测定Ｎａ＾＋、Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶、Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活性、乳酸含量、ＮＯ含量、一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性、氨基酸含量等。结果：补阳还五汤     

高表达抗PD-1抗体CHO细胞株的筛选及代谢分析

筛选高表达抗PD-1抗体的工程细胞株和较优的基础及补料培养基,并进行代谢分析。 方法 分别在TPP摇管、摇瓶中通过流加培养的方式,从6株细胞株和5种商业培养基中筛选高表达抗PD-1抗体的GS-CHO细胞株和较优的基础及补料培养基。在流加培养过程中,检测葡萄糖、谷氨酰胺、谷氨酸、乳酸及氨等的浓度变化。同时为分析限制性营养因素,进一步对乳酸、氨及氨基酸代谢进行分析。 结果 通过TPP摇管初步筛选,显示122和126两株细胞在HyCell CHO培养基中表现最好,表达量分别为1.945和1.989 g/L; 在摇瓶中进一步验证显示122细胞在6株细胞中的最大活细胞密度图最高,达2.21×10⁷ cells/mL,表达量>2 g/L。代谢分析发现,乳酸代谢切换和谷氨酸及丙氨酸代谢相关。氨基酸分析发现,蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸等必需氨基酸可能为122细胞株生长和(或)表达限制性成分。 结论 筛选出高表达抗PD-1抗体的细胞株和较优培养基,同时代谢分析和氨基酸分析为后续细胞培养工艺开发及个性化培养基优化提供理性指导。