C242T基因多态性与脂质氧化的相关性研究

目的研究上海地区汉族人群烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与血脂异常的相关性。方法采用PCR-限制片段长度多态性、基因测序技术、分光光度技术、ELISA对上海松江地区汉族人群血脂异常患者332例(血脂异常组)和健康体检者305例(对照组)的C242T基因多态性位点进行基因型、等位基因频率检测,分析C242T基因多态性与血脂异常的相关性。结果血脂异常组TG、TC、LDL、脂蛋白(a)、VLDL、氧化型高密度脂蛋白(ox-HDL)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)水平明显高于对照组,HDL水平明显低于对照组(P<0.05,P<0.01)。所有研究对象CT+TT基因型携带者ox-HDL、ox-LDL、丙二醛、NADPH氧化酶活性明显高于CC基因型[(521.32±121.56)μg/Lvs(441.92±134.21)μg/L,P=0.015;(14.23±5.34)mg/L vs(10.87±9.05)mg/L,P=0.043;(8.75±3.52)μmol/L vs(5.28±2.34)μmol/L,P=0.003;(3.45±2.15)μmol/(min·mg)vs(1.93±1.13)μmol/(min·mg),P=0.000]。logistic回归分析显示,NADPH氧化酶p22phox亚基C242T基因型不是血脂异常的独立危险因素。结论 NADPH氧化酶p22phox亚基C242T多态性与血脂异常无相关性,但与脂质氧化有关。     

中枢氧化应激对心绞痛模型大鼠心功能的影响

目的 观察心绞痛大鼠中枢氧化应激水平的变化,并运用NADPH氧化酶抑制剂APO减少超氧化物的生成进而降低中枢氧化应激水平以改善心绞痛时心功能.方法 采用冠脉结扎术制作心绞痛动物模型,假手术组仅进行手术而不造成缺血状态,干预组通过侧脑室插管给予APO (60 μg/3 min),对照组给予人工脑脊液.雄性Sprage-Dawley大鼠随机分为心绞痛干预组(Angina+APO)、心绞痛对照组(Angina +VEH)、假手术干预组(SHAM+APO)和假手术对照组(SHAM+VEH).2 h后各组大鼠分别进行血流动力学、右心室/体重比值、肺/体重比值的测量.免疫组化方法检测下丘脑室旁核NADPH亚基gp91 phox的表达.结果 心绞痛对照组与假手术对照组相比,下丘脑室旁核NADPH亚基gp91 phox表达增加,左心室舒张末压明显升高,左心室内压最大上升速率和最大下降速率明显降低(P<0.05),右心室/体重比值、肺/体重比值均增加(P<0.05).心绞痛干预组与心绞痛对照组相比,中枢NADPH亚基gp91 phox表达减少,右心室/体重比值、肺/体重比值均减小.结论 心绞痛大鼠中枢氧化应激水平升高,降低中枢氧化应激可在一定程度上改善心绞痛大鼠心功能.     

慢性间歇低氧大鼠的血压变化及其颈动脉体中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶的表达

目的 探讨慢性间歇低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)大鼠的血压变化及其颈动脉体中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的表达情况,以明确CIH致血压升高的可能机制.方法 清洁级雄性SD大鼠30只按随机数字表法分为CIH组、慢性持续缺氧组及对照组.尾袖法测量大鼠尾动脉收缩压,采用RT-PCR法检测大鼠颈动脉体中NADPH氧化酶各亚基gp91 phox、p22phox及p47phox mRNA的表达,对颈动脉体行免疫组织化学染色,并对p22phox的表达情况行半定量分析.结果 CIH组大鼠的尾动脉收缩压为[(145±11)mm Hg,1 mm Hg=0.133kPa],较CIH组(129±9)mm Hg及对照组(124±7)mm Hg显著升高(F值为19.895,P＜0.01),CIH组gp91phox、p22phox及p47phox mRNA的表达(分别为2.82±0.51、2.74±0.45和2.88±0.47)较慢性持续缺氧组(分别为2.35±0.42、2.25±0.38和2.41±0.43)及对照组(分别为2.23±0.35、2.16±0.30和2.30±0.36)显著升高(F值分别为5.794、6.854和7.163,P＜0.01)免疫组织化学检查结果显示CIH组p22phox蛋白相对表达量(99±12)较其他两组(分别为38±7和34±8)增多.结论 CIH可刺激大鼠颈动脉体中NADPH氧化酶的表达上调并使血压升高,NADPH氧化酶在颈动脉体中的过度表达可能与OSAHS患者发生高血压病存在相关联系.

Abstract：

Objective Chronic intermittent hypoxia (CIH) occurs in patients with obstructive sleep apnea-hyponea syndrome (OSAHS) and has adverse effects on multiple physiological functions. Previous studies have shown that reflexes arising from carotid bodies mediate CIH evoked circulation-respiratory responses, and reactive oxygen species (ROS) play important roles in eliciting systemic responses to CIH.But very little is known about the molecular mechanisms underlying CIH. NADPH oxidase is the most important sources of ROS. In the present study we examined changes of blood pressure and expression of NADPH oxidase in carotid body in rats exposed to intermittent hypoxia. Methods Thirty healthy male SD rats were randomly divided into 3 groups, a CIH group, a chronic continuous hypoxia group and a control group. The systolic blood pressure (SBP) was measured with tail-cuff method. RT-PCR was used to examine mRNA expressions of NADPH oxidase subunit gp91phox, p22phox, p47phox. Immunohistochemistry and semiquantitative analysis of NADPH oxidase subunits p22phox were done in the carotid body sections of all rats. Results Compared with normal group [ ( 124 ± 7 ) mm Hg, 1 mm Hg = 0. 133 kPa ] and chronic continuous hvpoxia group[ (129 ± 9) mm Hg], the SBP in CIH group [( 145 ± 11 ) mm Hg] was significantly higher( F = 19. 895, P ＜0. 01 ＝, and the expression of NADPH oxidase subunits gp91phox,p22phox,p47phox mRNA in CIH group ( 2. 82 ± 0. 51, 2. 74 ± 0. 45, 2. 88 ± 0. 47, respectively ) were significantly higher than those in chronic continuous hypoxia group ( 2. 35 ± 0. 42, 2. 25 ± 0. 38, 2. 41 ±0. 43, respectively)and normal group(2. 23 ±0. 35, 2. 16 ±0. 30, 2. 30 ±0. 36, respectively) ( F =5.794,6. 854, 7. 163, respectively, P ＜ 0. 01 ). The Immunohistochemistry and semiquantitative analysis showed that the expression of NADPH oxidase subunit p22phox in the carotid body in CIH group ( 99 ± 12 ) were more than those in chronic continuous hypoxia and control groups ( 38 ± 7 and 34 ± 8, P ＜ 0. 05 ).Conclusion CIH upregulates the expression of NADPH oxidase in rat carotid body and elevates the rat SBP. These results indicate that NADPH oxidase up-expression is closely associated with OSAHS patients with hypertension.     

硫辛酸对db/db小鼠胰岛内NADPH氧化酶表达的影响

目的 探讨硫辛酸对db/db小鼠胰岛内NADPH氧化酶表达水平的影响.方法 将20只8周龄db/db小鼠随机分为硫辛酸组和db/db对照组,每组10只,分别给予硫辛酸60 mg/(kg·d)和安慰剂灌胃.另设10只同周龄db/m小鼠,给予安慰剂灌胃作为非糖尿病对照组(db/m对照组).每周监测体重、血糖,6周后取胰腺行免疫组化,分析NADPH氧化酶表达情况.结果 与db/db组相比,硫辛酸组小鼠的血糖降低,胰岛内NADPH氧化酶gp91phox、p22phox亚基的表达水平亦显著降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 硫辛酸降低胰岛内NADPH氧化酶的表达,减少氧化应激,从而保护胰岛β细胞.     

罗格列酮对糖尿病兔动脉粥样硬化形成和氧化应激的影响

应用罗格列酮干预糖尿病兔动脉粥样硬化,干预后主动脉内/中膜厚度比、斑块截面面积及NADPH氧化酶亚基p22phox、gp91phox表达均降低,血清总抗氧化力升高(均P<0.05).与治疗组比较,罗格列酮预防组使血清超氧化物歧化酶升高和血清丙二醛降低(均P<0.05).提示罗格列酮可通过抗氧化应激减缓动脉粥样硬化的形成和发展.     

NADPH氧化酶在肿瘤坏死因子-α致乳鼠心肌细胞肥大中的作用

目的 探讨NADPH氧化酶来源的活性氧(ROS)在肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导乳鼠心肌细胞肥大中的作用.方法 原代培养SD乳鼠心肌细胞,分为正常对照组,TNF-α组(80ng/ml),APO(100 μmol/L)组和TNF-α+APO组.BCA法测定心肌细胞蛋白合成总量.荧光染料(DCFH-DA)及激光共聚焦显微镜检测心肌细胞活性氧水平.RT-PCR检测p22phox mRNA的表达.免疫细胞化学染色法检测心肌细胞p22phox的表达.结果 TNF-α可显著增加心肌细胞ROS生成,APO显著抑制TNF-α刺激后ROS的产生.TNF-α促进心肌细胞p22phox mRNA和蛋白的表达,APO可抑制TNF-α的作用.结论 TNF-α可能通过上调NADPH氧化酶亚基p22phox的表达,促进心肌产生ROS增加,导致了心肌细胞肥大的发生.     

还原型辅酶Ⅱ氧化酶抑制剂对慢性间歇缺氧大鼠血压的影响及相关机制

目的 探讨还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶抑制剂罗布麻宁对慢性间歇缺氧(CIH)模型大鼠血压可能的影响及相关作用机制.方法 使用随机数字表法将30只雄性SD大鼠分为健康对照组、CIH组及罗布麻宁治疗组,每组10只.采用气囊加压法测定大鼠尾动脉收缩压,应用实时PCR检测外周血单核细胞NADPH氧化酶亚基p22phox的mRNA表达,并用Western blot检测胸主动脉组织匀浆中p22phox蛋白的表达,采用比色法测定胸主动脉组织匀浆中一氧化氮及超氧阴离子含量,采用化学比色法测定大鼠外周血丙二醛及超氧化物歧化酶(SOD)水平.各组均数之间比较采用单因素方差分析,组内两两比较采用SNK-q检验.结果 CIH组p22phox mRNA(2.85±0.47)及其蛋白(0.63±0.15)的表达明显高于健康对照组(2.26±0.48,0.27 ±0.13,q值分别为3.202、6.522,均P＜0.05),罗布麻宁治疗组p22phox mRNA(2.75±0.50)及其蛋白(0.57±0.16)的表达与CIH组比较两组无明显差异,但治疗后可显著逆转由慢性间歇缺氧导致的丙二醛、超氧阴离子及尾动脉收缩压的升高以及SOD和一氧化氮水平的降低.结论 NADPH氧化酶亚基p22phox的过度表达在慢性间歇缺氧导致的高血压发生过程中起重要作用,这可能是OSAHS患者并发高血压的病理生理基础之一;抑制NADPH氧化酶的活性可能对OSAHS合并高血压的治疗有一定积极的意义.     

水飞蓟素改善棕榈酸引起的胰岛素抵抗及机制初步探讨

目的评价水飞蓟素(Sil)对棕榈酸(PA)诱导HepG2细胞IR的作用并进一步揭示其机制。方法实验分为正常对照(NC)组,棕榈酸(PA)组,Sil干预低剂量(12.5μmol/L,L-Sil)组、中剂量(25μmol/L,M-Sil)组和高剂量(50μmol/L,H-Sil)组。PA诱导HepG2细胞IR,分别给予12.5,25,50μmol/L Sil作用6 h,测定葡萄糖消耗量,使用活性氧簇(ROS)试剂盒测定ROS活性水平。采用Western blot方法检测AKT以及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的NOX2、p67phox、p47phox蛋白表达水平。结果PA组与NC组比较,葡萄糖耗氧量降低[(41.2±6.1)%vs(100±12)%,P=0.0087],磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达量降低[(0.458±0.185)vs(1.00±0.13),P=0.0184],同时PA组ROS水平[(1567±189 vs(14±34)U/ml,P=0.0094]以及NAPDH氧化酶NOX2、p67、p47亚基的表达水平升高(P0.05)。Sil各组与PA组比较可增加葡萄糖消耗量[(52.8±8.4)%vs(62.2±6.5)%vs(82.3±9.8)%],差异有统计学意义(P=0.041、0.039、0.0076);H-Sil组磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达量提高(0.793±0.249),与PA组比较,差异有统计学意义(P=0.0395);Sil可降低ROS水平[(1085±252)vs(851±184)vvs(405±35)],与PA组比较,差异有统计学意义(P=0.047、0.023、0.0015),以及降低NAPDH氧化酶NOX2、p67、p47亚基的表达水平(P0.05),且作用强度随Sil剂量的增加而增强。结论Sil可能通过降低NADPH氧化酶活性降低氧化应激,从而改善HepG2细胞的IR。     

转基因2型糖尿病MKR鼠心肌NADPH氧化酶和一氧化氮合酶表达的变化

目的糖尿病心肌病与氧化应激及NOS密切相关,研究骨骼肌胰岛素样生长因子1受体及胰岛素受体功能缺失转基因2型糖尿病MKR鼠的心肌NADPH氧化酶和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的变化。方法转基因2型糖尿病MKR鼠和C57BL/6野生小鼠各10只,透射电镜观察小鼠心肌形态学改变;比色法测定心肌中总抗氧化能力(T-OAC),丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;全自动生化分析仪检测血清心肌酶肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)活性;Western blot及免疫组织化学检测NADPH氧化酶亚基P47phox和eNOS在心肌中的表达。结果透射电镜下可见正常C57BL/6野生鼠心肌纤维排列整齐,线粒体浓密;MKR模型组心肌细胞周围水肿,部分肌节断裂消失,z线模糊或消失,心肌细胞线粒体部分嵴部分膜断裂或消失。与C57BL/6野生鼠比较,MKR小鼠心肌组织MDA含量显著升高(P<0.01),而T-OAC及SOD和GSH-Px活性显著下降(P<0.01),MKR小鼠血清心肌酶CK-MB和LDH活性均显著升高(P<0.01);MKR小鼠心肌NADPH氧化酶亚...     

晚期糖基化终产物对大鼠血管外膜成纤维细胞中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶p22phox亚基及活性氧表达的影响

目的:探讨晚期糖基化终产物(AGE)对大鼠血管外膜成纤维细胞(AF)中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶p22phox亚基及活性氧表达的影响。方法:用组织贴块法培养SD大鼠的血管外膜成纤维细胞,用逆转录—聚合酶链反应、蛋白质印迹检测不同浓度的糖基化人血清白蛋白(AGE-HSA,分为对照组、100μg/ml AGE-HSA组,200μg/ml AGE-HSA组、300μg/ml AGE-HSA组)对NADPH氧化酶p22phox亚基信使核糖核酸(mRNA)及蛋白的表达的影响,并观察不同干预因素[分为对照组1、200μg/ml AGE-HSA组(200μg/ml处理组1)、200μg/ml AGE-HSA+50μg/ml抗RAGE中和抗体组(抗RAGE中和抗体组1)及200μg/ml AGE-HSA+30 nmol/L坎地沙坦组(坎地沙坦组1)对AGE-HSA上调NADPH氧化酶p22phox亚基mRNA和蛋白表达的影响。用2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐检测不同干预因素[空白对照组、AGE-HSA 200μg/ml组(200μg/ml处理组2)、200μg/ml AGE-HSA+50μg/ml抗RAGE中和抗体组(抗RAGE中和抗体组2)、200μg/ml AGE-HSA+30μmol/L夹竹桃素组(夹竹桃组),200μg/ml AGE-HSA+30 nmol/L坎地沙坦组(坎地沙坦组2)对血管外膜成纤维细胞内活性氧表达的影响。结果:3个浓度(100μg/ml、200μg/ml和300μg/ml)的AGE-HSA组均与对照组比较,血管外膜成纤维细胞NADPH氧化酶p22phox亚基mRNA及蛋白的表达随AGE-HSA增加呈浓度依赖性上调;抗RAGE中和抗体组1、坎地沙坦组1比200μg/ml处理组1的p22phox mRNA及蛋白表达降低;抗RAGE中和抗体组2、夹竹桃素组2及坎地沙坦组2比200μg/mlAGE-HSA处理组2血管外膜成纤维细胞内活性氧相对荧光强度降低,上述比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:AGE-HSA经由RAGE影响活性氧与NADPH氧化酶p22phox亚基的表达上调,活性氧的上调与NADPH氧化酶p22phox亚基表达相关。NADPH氧化酶抑制剂及坎地沙坦可通过下调NADPH氧化酶p22phox亚基的表达减少血管外膜成纤维细胞内活性氧的产生。     

英夫利昔治疗瘘管型克罗恩病的研究进展

瘘管是克罗恩病（CD）常见的一种并发症,往往导致患者生活质量明显下降.许多临床试验证实英夫利昔对瘘管型CD安全有效.对传统治疗方案无效者,早期规律给予英夫利昔可很好地控制疾病进展和复发.对单药治疗效果不佳者,联合英夫利昔和内外科治疗可提高疗效.本文就近年英夫利昔治疗瘘管型CD的研究进展作一综述.     

大黄素诱导急性胰腺炎胰腺细胞凋亡机制的实验研究

目的 从凋亡信号传导的角度探讨中药大黄素治疗大鼠急性胰腺炎的分子生物学机制。方法 将44只雄性Wistar大鼠随机分为正常组，非治疗组，大黄素组，以腹腔注射雨蛙肽物方法诱导大鼠急性胰腺炎模型。并于大黄素治疗后6，24，48，72，96小时处死大鼠。应用HE染色比较胰腺组织病理学改变，应用Tunel法检测胰腺细胞凋亡指数，应用RT-PCR技术检测治疗前后凋亡调控基因Bak和BaxmRNA表达。结果 大黄素干预治疗急性胰腺炎后96小时淀粉酶值显低于未治疗组，胰腺细胞凋亡指数显高于未治疗组，凋亡调控基因BakmRNA的表达与未治疗组之间无显性差异。而BaxmRNA的表达显高于未治疗组。结论 大黄素治疗实验性急性胰腺炎的机制可能与干预凋亡调控基因有关。诱导凋亡调控基因Bax表达增强可能是干预凋亡信号传导的重要机制，而与Bak基因表达无关。     

北京市某医院结核科护士压力源调查分析

目的 对结核科护士工作压力源进行调查分析.方法 自行设计调查问卷,采用便利抽样方法,对首都医科大学附属北京胸科医院88名结核科护士工作压力源进行调查.结核科护士平均年龄为（33.04±9.07）岁,工作年限（12.70±9.04）年,每月夜班数（4.25±2.25）个.本研究结核科护士工作压力源问卷分为8个维度,共有61个条目,采用分量法计分.其中,没有压力1分,压力程度一般为2分,压力程度较高为3分,压力程度非常高为4分,可能的得分范围为61～244分,分数越高,表明护士所承受的压力越大.采用问卷调查法,调查前向被调查者说明调查的目的、方法,取得知情同意.由研究者亲自发放调查问卷,30 min后当场收回.本次共发放问卷90份,回收88份,有效88份,有效回收率97.8％.结果 （1）结核科护士压力源总体得分为（154.81±36.03）分.（2）压力源各维度得分从高到低依次是：结核护理专业特殊性的问题（3.07±0.81）分;工作环境及资源方面的问题（2.88±0.81）分;工作量及时间分配问题（2.67±0.78）分;社会环境带来的问题（2.63±0.78）分;护理专业发展方面的问题（2.55±0.74）分;患者护理方面的问题（2.52±0.68）分;护理专业及工作方面的问题（2.45±0.74）分;管理及人际关系方面的问题（1.89±0.64）分.（3）得分排在前10位的压力源条目分别是：长期接触排菌、耐药肺结核患者（3.55±0.78）分;担心自己患上结核病（3.47±0.88）分;同伴被确诊患上结核病（3.36±0.89）;担心消毒防护设施的效果（3.28±0.94）分;担心工作中出现差错事故（3.21±0.95）分;工作环境差（3.18±0.92）分;病区拥挤（3.02±1.07）分;收入差距大（2.98±0.94）分;工作量太大（2.97±0.94）分;经常倒班（2.94±1.03）分.结论 结核科护士承受着较高的工作压力,护理管理者应采取有针对性的措施,指导护士积极应对,减轻护士工作压力.     

大黄素诱导急性胰腺炎胰腺细胞凋亡机制的实验研究

目的从凋亡信号传导的角度探讨中药大黄素治疗大鼠急性胰腺炎的分子生物学机制.方法将44只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、非治疗组、大黄素组.以腹腔注射雨蛙肽的方法诱导大鼠急性胰腺炎模型,并于大黄素治疗后6、24、48、72、96小时处死大鼠.应用HE染色比较胰腺组织病理学改变,应用Tunel法检测胰腺细胞凋亡指数,应用RT-PCR技术检测治疗前后凋亡调控基因Bak 和Bax mRNA表达.结果大黄素干预治疗急性胰腺炎后96小时淀粉酶值显著低于未治疗组,胰腺细胞凋亡指数显著高于未治疗组,凋亡调控基因Bak mRNA 的表达与未治疗组之间无显著性差异,而Bax mRNA的表达显著高于未治疗组.结论大黄素治疗实验性急性胰腺炎的机制可能与干预凋亡调控基因有关,诱导凋亡调控基因Bax表达增强可能是干预凋亡信号传导的重要机制,而与Bak 基因表达无关.     

2011年全国血吸虫病监测点疫情分析

目的了解2011年全国81个血吸虫病监测点疫情变化趋势。方法收集2011年全国81个血吸虫病监测点螺情、人畜病情和相关因素的调查数据,分析不同地区疫情特征及变化情况。结果2011年全国血吸虫病监测点血清学检测阳性率以及居民感染率分别为7.78%和0.54%,家畜感染率为0.97%,较2010年均有所下降。2011年81个血吸虫病监测点共查出感染性钉螺面积98.30 hm2,活螺平均密度为0.222 6只/0.1 m2,感染性钉螺平均密度为0.000 3只/0.1 m2,钉螺感染率为0.14%。有螺地带敞放家畜12 422头,比2010年上升46.99%。结论2011年全国血吸虫病监测点疫情较2010年下降不明显。仍需加大家畜传染源控制措施的实施力度。     

莫昔沙星的抗结核作用及其应用研究进展

全球结核病的疫情非常严重,尤其是耐多药结核病不断增加,WHO于20世纪90年代就一再呼吁予以重视。解决此世界性难题的首要措施就是积极落实现代结核病控制策略,亦即直接监视督导下短程化疗（DOTS）,在此基础上要研发新药,使耐多药结核病的治疗和缩短结核病疗程两个跨世纪性课题有所突破^[1]。