均相酶免疫技术检测血清利奈唑胺浓度的方法学建立

目的 基于均相酶免疫技术检测血清利奈唑胺的浓度。方法 收集2021年6月至10月于解放军总医院第一医学中心服用利奈唑胺药物患者的血清标本,用本研究建立的均相免疫方法检测标本中利奈唑胺浓度,参照CLSI EP文件对该方法进行正确度、精密度、线性范围、可报告范围的验证,同时与厂家声明的性能标准作比较;将质谱仪检测与本方法进行方法学比对。结果 正确度验证方面,5份参考物偏倚百分比均小于12.5%,验证通过;精密度验证方面,高、低水平标本检测结果批内CV≤6.25%,批间CV≤8.33%,验证通过;检测线性范围为1.2～22.0μg/mL,厂家声明的线性范围为1.2～20.0μg/mL;临床可报告范围上限为60.0μg/mL;携带污染率小于1%;与质谱仪检测结果的相关系数为0.984。结论 该检测方法适用于临床血清利奈唑胺浓度的检测。     

高灵敏均相酶免疫法测定血清皮质醇方法建立与性能评价

目的 建立高灵敏均相酶免疫法定量检测血清皮质醇.方法 对此方法的线性范围、准确度、精密度、抗干扰能力、临床可报告范围以及参考区间进行性能验证.结果 本研究建立的血清皮质醇均相酶免疫测定方法,线性范围为30.0～1200.0ng/mL,准确度相对偏差B≤10.0％,批内CV≤10.0％,批间差R≤10.0％,当样本中胆红素≤50mg/L、血红蛋白≤1000mg/L、白蛋白≤100g/L、抗坏血酸≤176mg/dL时,对测定结果无影响,临床可报告范围上限6500ng/mL,血清皮质醇参考区间为60～230ng/mL.结论 该均相酶免疫法能够满足临床血清皮质醇检测的需求,可以进一步推广至临床使用.     

均相免疫测定法

木文简要介绍了均相免疫测定法的基本原理和应刚概况。均相免疫测定法操作简便、快速、试剂稳定性好,可全自动化检测。部分方法的灵敏度接近或超过常规的放射免疫测定法。由于这些方法均为非同位素免疫测定法、所以避免了应用放射免疫测定法带来的危害作用。     

化学发光免疫分析、放免分析和磁珠酶免疫分析测定血清甲状腺激素的评价

为比较化学发光免疫分析(CLIA)、放射免疫分析(RIA)和磁珠酶免疫分析(MSP -ELISA)测定血清TT3、TT4、FT3、FT4和TSH的方法学特性,分别用CLIA、RIA和MSP-ELISA测定标准品、质控品及40份患者血清中TT3、TT4、FT3、FT4和TSH含量, 进行线性、相关性、精密度、回收率等实验结果分析评价.结果显示: CLIA、RIA和MSP-ELISA检测TT3、TT4、FT3、FT4和TSH的线性和相关性无显著性差异, CLIA检测的精密度、回收率优于RIA、MSP-ELISA,且具有快速的特点.     

血清肌红蛋白快速酶免疫分析诊断急性心肌梗死

建立一种测定人血清肌红蛋白（Mb)的快速双位点酶免疫分析（ELISA）,仅需30min即可给出结果,用以早期快速诊断急性心肌梗死（AMI）,要点为取得高亲和力,高滴度和高特异性的抗人Mb抗体,Mb-ELISA的各项质量控制指标均符合要求,经初步临床使用,9例确诊为AMI的患者,血清Mb浓度为244－955ng/mL,而7例非AMI的患者,Mb均在32－78ng/mL正常范围之内,正常上限值为100ng/mL。     

乳铁蛋白酶免疫分析法的建立及乳品含量检测的初步应用

目的：建立乳铁蛋白（LF）酶免疫分析法,检测LF在血清及乳汁中的水平。方法：用人源的LF多次免疫兔,获得高效价的抗体。纯化后包被成固相酶标板,以识别并结合待测标本中的LF。用生物素标记抗原（Bio-Ag）,同辣根酶标记亲和素（HRP-A）可特异结合。向固相酶标板中同时加入Bio-Ag和不同浓度的标准品,37℃反应1.5h。洗涤后以HRP-A为探针,经酶底物显色后可获得良好的ELISA竞争抑制曲线。结果：该法测定范围：（0.36～9.00）μg/ml,最低检出量0.25μg/ml,批内和批间误差分别为〈6.3%和7.4%。用该法测正常献血员（40名）血清LF水平为（0.438±0.183）μg/ml;人初乳（5名）水平为（7.82±0.51）mg/ml。血清和初乳中的LF经65℃30min处理后活性不变,经100℃3min处理明显降解。结论：该法稳定、简便、特异适于检测人血清和乳汁中的LF水平。     

广谱检测磺胺类药物的酶联免疫分析方法的建立

目的 利用抗磺胺类药物多抗建立酶联免疫分析方法,测定磺胺类药物在动物源食品中的残留.方法 以抗磺胺类药物抗体包被微孔板,辣根过氧化物酶(HRP)标记磺胺类半抗原磺胺噻唑(ST),磺胺间甲氧嘧啶为标准品建立酶联免疫分析方法.结果 本方法的标准曲线测定范围为0.3～ 100ng/mL.方法学鉴定结果表明,灵敏度为0.2ng/mL,批内、批间变异分别为9.2％ ～ 14.4％、10.5％～ 12.7％.牛奶、蜂蜜、水产品及鸡肉、鸡蛋样品的添加回收率分别在79.3％～88.9％、65.5％～136.4、63.0％～83.3％、59.3％～78.1％之间.牛奶稀释实验表明,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数r=0.997.结论 本方法可同时快速测定动物源性食品中23种磺胺类药物的残留,对19种磺胺类药物的检测灵敏度高于10ng/mL.     

化学发光免疫分析定量检测乙肝病毒标志物方法学研究

采用碱性磷酸酶标记,金刚烷衍生物发光,自动化学发光分析仪测量等,进行乙肝病毒五种标志物化学发光免疫分析(CLIA)方法学研究.结果表明这五种标志物CLIA方法的精密度、灵敏度、回收率和临床符合率等技术参数均达到方法学和临床诊断的要求.CLIA方法比ELISA和RIA更简便、快速而实用,为临床诊断和科研工作提供了一种有用的检测手段.     

血清丙型肝炎病毒抗原的免疫酶斑点法检测

目的建立一种可筛查早期HCV感染者的简单快捷方法。方法制备特异性的抗HCV核心蛋白和抗HCVNS3的单克隆抗体(mAb)酶标记物,应用免疫酶斑点法检测各种类型肝炎患者和正常人血清中的HCV-Ag,并与双抗体夹心ELISA检测HCV-Ag及RT-PCR检测HCVRNA的结果进行比较。结果免疫酶斑点法检测表明,HCV-Ag的检出率在抗HCV抗体阳性、乙肝和非甲非戊肝炎患者中,分别为15.4%(8/52)、1.73%(19/1099)和1.03%(1/97);在81例甲肝和67例戊肝患者及50例正常人中均未检出。免疫酶斑点法与双抗体夹心ELISA及RT-PCR的检测的结果没有显著性差异,但其与RT-PCR检测结果有一定的相关性。结论免疫酶斑点法特异性强,操作简便快捷,不需要特殊仪器设备,为HCV的早期诊断和常规筛查提供了有效的方法。     

基于化学发光磁微粒免疫分析技术检测血清Lp- PLA2浓度

目的 建立一种脂蛋白相关性磷脂酶A2(Lp-PLA2)直接化学发光免疫分析方法并进行性能评价。方法 根据双抗夹心法原理,将磁珠-Lp-PLA2抗体1(MAb, Coating)与血清中的Lp-PLA2抗原以及吖啶酯-Lp-PLA2抗体2(MAb, Labeling)反应形成免疫复合物,磁场吸附清洗,加入预激发液和激发液后仪器检测反应过程中相对发光单位(RLU),通过标准曲线方程计算样本中Lp-PLA2浓度,并对试剂各项性能进行评估。结果 本方法空白限为0.5ng/mL,线性范围为5～1 000ng/mL,回收率在85%～115%范围内,批内精密度为2.26%～3.80%,批间精密度为3.82%～4.63%,特异性和抗干扰能力符合要求,与热景Lp-PLA2检测试剂盒比对相关系数r=0.9874。结论 本方法各项性能指标均达到临床检验质量要求,与现有试剂盒比对结果具有较好的一致性,可供广大研究者借鉴参考。     

化学发光免疫分析法检测C肽的分析性能验证

目的验证化学发光免疫分析法检测C肽的分析性能。方法参考美国临床和实验室标准化协会(CLSI)系列文件和相关文献,结合科室具体实际,验证深圳新产业MAGLUMI 4000 Plus检测系统检测C肽的基本分析性能。结果C肽低、高浓度批内不精密度、批间不精密度均在可接受范围内;无样本携带污染;C肽原装配套定值标准品检测值与靶值的偏倚小于12.5%,20例临床样本与MAGLUMI 4000检测结果差异无统计学意义(P>0.05),平均相对偏差为3.76%;C肽最大稀释倍数为8倍;功能灵敏度为0.10 ng/mL;C肽浓度范围在0.09~17.25ng/mL线性回归方程为Y=1.008X-0.2891,相关系数r=0.983;20名健康体检者检测C肽的结果为1.042~2.901ng/mL,100%的检测结果在厂家提供的参考区间内。结论深圳新产业MAGLUMI 4000 Plus化学发光免疫分析检测系统检测C肽的基本分析性能与厂家声明或相关文献基本一致,可以替换深圳新产业MAGLUMI 4000,用于临床常规工作的开展。     

免疫透射比浊法血清白蛋白检测试剂盒的性能验证和临床应用评价

目的对免疫透射比浊法血清白蛋白检测试剂盒进行性能验证和临床应用评价。方法根据美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的标准要求,使用全自动日立生化分析仪7600-020,对该试剂盒的精密度、正确度、检出限、线性范围、干扰实验、参考区间、方法学比对进行验证,并将检测结果和厂家提供的的性能指标进行比较。结果该试剂检测血清白蛋白的批内精密度为1.1%、批间精密度为1.2%,均小于厂家提供的指标;正确度在允许偏倚范围内;检出限为0.152g/L;线性斜率为0.9755,相关系数的平方R2为0.9945,大于0.99符合要求;生物参考区间符合率100%;在厂家说明书标示的干扰物浓度范围内,对检测结果没有明显影响;与溴甲酚绿法做比对实验,相关性回归方程为Y=0.9894X-1.1033,R2为0.9794,在低值结果中两种方法学差异呈非线性分布,无法用校正系数调整。结论免疫透射比浊法血清白蛋白检测试剂盒在7600-020生化分析仪上主要分析性能符合厂家的声明,结果准确可靠,抗干扰能力强,可以开展用于临床检验分析。     

小鼠肿瘤坏死因子ELISA、TRFIA及ALPHAScreen检测方法的建立及评估

目的分别建立ELISA、TRFIA及ALPHAScreen检测小鼠肿瘤坏死因子(mTNF-α)的方法,对3种检测技术进行评估。方法采用两株针对mTNF-α不同表位的单克隆抗体,分别构建双抗体夹心法mTNF-α-ELISA、mTNF-α-TRFIA、mT-NF-α-ALPHAScreen,对以上3种检测方法进行反应动力学,方法学参数和相关性的比较。结果 ALPHAScreen采用均相反应系统,反应速度最快。TRFIA和ALPHAScreen由于采用了稀土离子作为标记物,其灵敏度和检测范围大大高于ELISA。样品检测结果表明,3种方法的相关性较好。结论本文建立的mTNF-α-TRFIA和mTNF-α-ALPHAScreen具有很好的应用前景。     

荧光免疫层析定量检测髓过氧化物酶方法的建立

目的：通过荧光免疫层析技术初步建立MPO荧光免疫层析定量检测方法。方法：采用羧基荧光微球,利用EDC一步法偶联标记抗体,对过程中EDC量、标记蛋白量与标记时间、保护液进行研究,选出最佳条件,并对线性范围、灵敏度、精密性等进行性能评价。结果：确定偶联过程中EDC 160 μg,标记蛋白125 μg、标记1.5 h;线性范围3.125~600 ng/ml,最低检出限0.9 ng/ml;精密性质控品(高、中、低)批内、批间变异系数均小于10%;通过与国外试剂盒（ELISA法）检测比对45份临床血清,相关性良好,R2=0.979 5。结论：成功建立荧光免疫层析快速定量检测MPO的方法,为冠心病的辅助诊断提供一种技术手段。     

CA125酶促化学发光免疫分析方法的建立

CA125是细胞表面的一种高分子糖蛋白。对卵巢癌患者血清中CA125浓度进行测量,结果显示80％的上皮癌患者血清中的CA125含量有所升高,而健康女性中CA125升高比例只有不到1％,所以利用CA125浓度值来判断卵巢癌的发生具有重要的临床意义。酶促化学发光免疫分析方法继承了酶联免疫分析的特点,又普遍具有高灵敏度、快速检测等优点,已被医院大量使用。利用双抗体夹心法建立CA125酶促化学发光免疫分析方法具有重要意义。     

罗氏电化学发光检测系统促甲状腺激素受体抗体检测方法学评价及性能验证

目的 按CAP和15189实验室认可的要求,对罗氏电化学发光系统促甲状腺激素受体抗体（TRAb）检测方法进行评价和性能验证。方法 取高、低浓度混合血清,分别进行批内20次和连续20天检测,统计分析批内不精密度和批间不精密度;将高浓度和低浓度血清按一定比例混合进行检测,验证分析测量范围;取接近厂商提供最低检测限值的标本连续检测12天,进行检测限（LoQ）验证;取随机正常体检人群的血清20份,进行参考区间验证;测50份正常人血清和50份病例组血清进行特异性和灵敏度的验证;选取各浓度血清14份,进行室间比对。结果 高、低浓度批内不精密度为CV 0.63%和CV6.13%;批间不精密度为CV 4.15%和CV 9.55%;LoQ为1.20IU/L;AMR为2.72~33.66IU/L;参考区间〈1.24IU/L;特异性为94%,敏感度为92%;室间比对偏差小于1/2CLIA＇88规定的允许误差,符合室间比对质量要求。结论 本系统性能符合实验室要求。