血清同型半胱氨酸参考测量程序的建立及量值溯源研究

目的 建立同位素稀释高效液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定人血清同型半胱氨酸的参考测量程序,并利用其对九强生物常规测定系统进行量值溯源,以通过完整溯源链传递,保证常规方法测定结果的准确性.方法 筛选色谱和质谱条件,进行前处理优化,建立同型半胱氨酸ID-LC/MS/MS参考测量程序,依据ISO17511规定建立Hcy量值溯源体系,用建立的参考测量程序对常规检测系统进行量值溯源.结果 测定血清样品同型半胱氨酸的线性范围为1～80μmol/L.重复性精密度和复现性精密度的RSD分别小于1.72％和2.90％.测定血清型参考物质SRM1950和SRM1955的偏倚小于0.82％和1.81％.参考测量程序与工作校准品校准的常规测量程序对临床样本的测定值的相关性系数R2为0.9952,斜率为1.0099,工作校准品与产品校准品校准的常规测量程序对临床样本的测定值的相关性系数R2为0.9984,斜率为1.005.结论 成功建立了ID-LC/MS/MS法测定人血清中同型半胱氨酸参考测量程序,并应用该方法对九强生物常规测定方法进行量值传递,从参考测量程序到常规检测系统,完成完整溯源链传递,保证了九强常规检测系统测定结果的准确性.     

冰冻人血浆醛固酮标准物质的研制

目的 研制冰冻人血浆醛固酮国家二级标准物质,用于血浆醛固酮的量值溯源、室内质量控制、实验室能力验证、相关试剂和方法的评估及验证等,促进血浆醛固酮检测标准化进程,实现结果互认。方法 收集无肉眼可见溶血、乳糜和黄疸的混合血浆材料,经过浓度配比、过滤、分装后,-70℃保存。参照JJG 1006-1994和JJF 1343-2012文件要求用常规测量方法评价标准物质的均匀性和稳定性。6家通过JCTLM认可和/或CNAS认可的实验室采用醛固酮ID-LC/MS/MS候选参考测量方法联合定值。分析不确定度来源并进行不确定度评定,定值结果用“认定值±不确定度”表示。参照美国国家临床实验室标准委员会EP14-A3文件要求评价互通性。结果 研制了2个浓度水平标准物质,均匀性良好(P>0.05),瓶间变异均<4%。-70℃以下条件可稳定半年;冰袋运输可稳定5d;复融后室温条件下可稳定4 h, 2～8℃条件下可稳定168h。2个浓度水平标准物质的定值结果分别为56.9±4.3和147±12pg/mL,k=2。标准物质在ID-LC/MS/MS法和2个常规方法间与临床血浆样本具有良好的互通性。结论 研...     

冰冻人血浆醛固酮标准物质的互换性研究

目的 检测一种人血浆醛固酮标准物质的互换性是否满足国家标准物质委员会及临床检测的需要.方法 使用候选参考方法和常规检测方法检测22份评价样本和醛固酮标准物质,采用EP14-A3的统计方法,对结果进行回归曲线的制作,并预估95％回归曲线的置信区间.结果 候选参考方法和迈瑞常规方法互换性统计结果,回归方程为Y=1.2406X+38.052,结果位于95％置信区间内.候选参考方法和索林常规方法互换性统计结果:回归方程为Y=1.174X+40.877,结果位于95％置信区间内.结论 经过特定方法处理的冰冻人血浆基质的醛固酮标准物质GBW(E)091171/GBW(E)091172,在ID-LC/MS/MS候选参考方法和2个常规方法中与测量样本表现一致,具有较好的互换性.     

基于CLSI EP9- A3的血清葡萄糖方法学比对及偏倚评估

目的 对不同血糖全自动生化分析仪测量结果进行方法学比对，以确保检测结果的准确性和可比性。方法 使用雅培(A)、西门子(B)2台血糖检测系统同时测量冰冻人血清葡萄糖标准物质和44份单人份血清样本，参考CLSI EP9-A3文件，将两个系统的测量结果进行比对。结果 A系统测量冰冻人血清葡萄糖标准物质的偏倚在0.09%～5.22%范围内，B系统偏倚范围为4.98%～6.96%,均在可接受范围内；两者线性相关性较好(R²=0.994);无离群值且百分比差值成正态分布。两系统间的平均百分比差值为0.29%,Bland-Altman图95%以上数据落在均值±2SD范围内。A、B两系统的Passing-bablok回归方程为Y=0.953X+0.443,其在各医学决定水平处的预期偏倚范围-0.13%～5.27%,小于可接受范围。结论 A、B两系统有较好的一致性，检测结果具有可比性，均可为临床提供准确可靠的结果。     

冰冻人血清胱抑素C标准物质的制备

目的 研制人血清基质的胱抑素C标准物质。方法 收集无溶血、黄疸、乳糜的血清样本,去除血清中的不稳定成分,经过浓度配比、过滤、混匀、分装后制成4个浓度的胱抑素C标准物质。在单一实验室内采用10种免疫透射比浊法测量原理的常规方法同时测量系列浓度ERM-DA471/IFCC溶液和各标准物质中胱抑素C浓度,以经过ERM-DA471/IFCC量值传递后的胱抑素C浓度均值作为标准物质的认定值。依据文件分别评估胱抑素C标准物质的均匀性、稳定性及互换性。结果4个水平的胱抑素C标准物质定值结果为0.89±0.10mg/L、1.82±0.13mg/L、3.55±0.28mg/L、5.25±0.29mg/L。制备的标准物质均匀性良好。-70℃以下条件可稳定半年,2～8℃条件可稳定144h,复融后室温条件可稳定8h。常规测量系统中的互换性良好。结论 该标准物质符合国家二级标准物质的要求,现已通过全国标准物质管理委员会的审批,编号为GBW(E)091173-091176,可用于临床实验室胱抑素C的质量评价。     

血清总胆红素测量原理与测量结果正确度的相关性研究

目的 研究国内临床实验室常用血清总胆红素(T-Bil)测量原理与测量结果正确度的相关性.方法 优选11个国内外厂家13种T-Bil试剂盒,涉及矾酸盐氧化法(5/13)、重氮法(3/13)、化学氧化法(3/13)、酶法(2/13)4种测量原理,复现13种厂家配套系统,分别测量冰冻人血清基质T-Bil国家一级标准物质GBW09184和GBW09185 3次,计算各系统和相同测量原理的各系统测量平均值,绘制测量结果Youden图,依据WS/T 403-2012卫生行业标准判断测量结果的正确度.结果 (1)13种T-Bil厂家配套系统测量标准物质GBW09184和GBW09185的结果与标准物质认定值的偏移分别为:-6.07%、6.2 3%、5.30%、1.39%、-9.22%、9.22%、7.68%、16.74%、-4.69%、-5.61%、-12.18%、0.63%、6.58%;-5.68%、4.78%、5.46%、2.32%、-8.37%、10.01%、9.27%、17.26%、-5.53%、-4.78%、-14.2%、1.19%、9.99%.采用卫生行业标准判断只有15%(2/13)T-Bil厂家配套系统的测量结果能满足量值溯源要求.(2)矾酸盐氧化法、重氮法、化学氧化法和酶法4种测量原理厂家配套系统测量标准物质GBW09184和GBW09185的结果与标准物质认定值的平均偏移分别为:2.96%、6.94%、-2.78%、-5.74%;3.59%、6.73%、-0.90%、-6.50%.矾酸盐氧化法和化学氧化法测量原理的各系统测量结果均值能满足量值溯源要求.结论 (1)目前国内市场血清T-Bil厂家配套系统测量结果的正确度不容乐观,实验室在建立、更新T-Bil常规测量系统前应进行正确度评价.(2)T-Bil测量结果正确度与测量原理不存在因果关系.     

血清α-淀粉酶检测的常规方法与参考方法一致性评价

目的 评估两种α-淀粉酶检测的常规方法与参考方法的一致性,旨在为临床提供准确结果。方法 采用血清α-淀粉酶参考方法和临床常规方法同时测量ERM-DA456、GBW(E)090595、GBW(E)090286、42份单人份血清样本,参考CLSI EP9-A3文件,将两种常规方法检测结果分别与参考方法进行比对;参考EP14-A3文件,对常规方法使用的校准品进行互换性分析。结果 参考方法和迈克系统标物测量结果的偏倚均小于临床可接受偏倚7.5%;西门子系统除ERM-DA456/IFCC外均大于临床可接受偏倚。迈克系统Bland-Altman图说明其与参考方法的结果一致,各医学决定水平处的偏倚也均小于临床可接受偏倚;校准品有互换性。西门子系统Bland-Altman图虽然95%以上数据落在偏倚均值±2SD范围内,但百分比偏倚均为负值,说明其有系统偏差;其在医学决定水平50U/L处的偏倚均大于临床可接受偏倚;校准品无互换性。结论 迈克系统与参考方法有较好的一致性,其检测结果更准确可靠。     

不同评价方法对胱抑素C标准物质互换性评价结果的影响

目的 观察不同评价方法对胱抑素C标准物质互换性评价结果的影响.方法 收集无溶血、无乳糜的单人份血清42份,将4个浓度的胱抑素C标准物质穿插其中,选用九强公司、迈克公司、迈瑞公司、罗氏公司、中元公司、积水公司、德赛公司、瑞源公司、景源公司9种市场占有率较高的检测方法,对评价样本重复测量3次,采用EP-14A3和IFCC互换性评价方案,分别评价标准物质的互换性.结果 4个浓度的胱抑素C标准物质采用EP-14A3评价时互换性结果不理想,采用IFCC互换性评价方案时均具有互换性.结论 两种互换性评价结果有明显差异,IFCC互换性评价方案更符合医学预期需求.     

总蛋白双缩脲法单试剂盒与双试剂盒检测结果的一致性评估

目的 探讨总蛋白双缩脲法单试剂盒与双试剂盒检测结果的一致性。方法 参照美国临床和实验室标准协会（CLSI）EP9-A2文件的要求,以双试剂盒为参比方法、单试剂盒为待评方法,使用患者新鲜血浆标本进行方法比对及偏倚评估。结果 回归方程Y=1.0064X+0.2168,相关系数r=0.9984,不同医学决定水平处的偏倚均小于我国卫生行业标准《WS/T 403-2012 临床生物化学检验常规项目分析质量指标》所规定的总允许误差的1/2。结论 总蛋白双缩脲法单试剂盒与双试剂盒的检测结果具有良好的一致性,差异临床可接受,其检测报告可使用相同的参考区间,但仍建议临床实验室使用双试剂盒检测患者样本。     

蒙古族与回族人群MBL结构基因型及其与血浆蛋白浓度的关系

目的：分析内蒙古自治区蒙古族人群和宁夏回族自治区回族人群血浆甘露聚糖结合凝集素（MBL）的结构基因型,并探讨其与血浆蛋白浓度的关系。方法：用ELISA法检测血浆MBL浓度,用序列分析法分析MBL基因外显子1区52、54和57密码子的单核苷酸多态性;统计分析采用SPSS软件11.0版,遗传学分析采用SHEsis软件。结果：79例蒙古族人和69例回族人血浆MBL浓度中位数分别为1686和1909ng/ml,两组间无显著性差异（Z=0.63,P=0.4）。蒙古族人群外显子1A/A型、A/B型和B/B型分别占62.0%、35.4%和2.5%,而回族人群A/A型、A/B型和B/B型分别占58.0%、30.4%和11.6%,蒙古族和回族人群＋230位点变异频率分别为0.203和0.268,两者变异频率无显著性差异（χ^2 1.772,P=0.183）。所有样本无C或D型外显子发现。A/A型外显子的血浆MBL浓度显著高于A/B型,后者又显著高于B/B型（χ^2 86.526,P〈0.01）。结论：蒙古族和回族人群MBL基因只有A/A,A/B和B/B3种外显子基因型,A/A型结构基因MBL浓度显著高于A/B型,又显著高于B/B型。     

化学发光法测量人附睾蛋白4的不确定度的应用与分析

目的 探讨化学发光法测量人附睾蛋白4(HE4)不确定度的评定及不确定度在临床上的应用价值.方法 确定被测量物,分析不确定度来源,基于50.00、175.00 pmol/L两个室内质控水平合成、计算标准不确定度及扩展不确定度;基于以上两个水平的不确定度举例说明不确定度在临床上的应用.结果 不精密度、系统偏倚、校准物质不确定度为HE4测量不确定度的主要来源.50.00、175.00 pmol/L两个室内质控水平的标准不确定度分别为2.22,8.33,扩展不确定度分别为4.44,16.66;HE4不确定度可帮助临床医生判断同一患者前后两次测量结果差异是否具有显著性.结论 化学发光法测量HE4的不确定度主要来源为分析中的不精密度、系统偏倚及校准品的不确定度,分析前因素的不确定度评定较难,但可通过分析前质量控制加以控制,可不予考虑.不确定度的引入对临床医生诊断疾病、评估患者病情变化有重要意义.     

白介素6量值溯源体系的建立与评价

目的 通过对白介素6(IL-6)的量值溯源方法进行研究，期望建立IL-6检测项目的量值溯源体系，确保IL-6检测结果准确可靠，促进IL-6项目检测结果的临床互认。方法 根据国际标准ISO17511-2020的要求，建立IL-6的量值溯源体系；通过对校准品进行互换性和不确定度评估，确保量值溯源建立的过程有效；通过正确性评估、室间质量评价(EQA)、方法学比对这3种方法，评价常规检测系统的准确性。结果 三诺IL-6项目溯源至国际约定校准品(NIBSC code:89/245):校准品互换性评估结果均在规定的临床样本测试95%置信区间内，互换性满足要求；两水平校准品标准相对不确定度分别为1.35%、1.27%,在50%的目标不确定度范围内。回收率实验的比例系统误差为3.85%;通过了IL-6项目的上海市临床检验中心室间质评；同罗氏检测系统进行方法学比对，回归曲线Y=0.998X+0.225,决定系数R²=0.992,斜率为0.9981,两系统检测结果具有一致性。结论 建立了IL-6的量值溯源体系，溯源至国际约定校准物，量值溯源结果准确可靠。     

血浆与血清样本果糖胺检测结果的比较分析

目的 观察血浆对果糖胺（FMN）检测结果的影响,并探讨血浆能否用于FMN的检测以及能否使用血清样本的参考区间解释血浆样本的检测结果。方法 参照美国临床实验室标准化协会（NCCLS）EP9-A2 文件要求进行血浆与血清FMN检测结果的比对及偏倚评估。结果 血浆样本FMN检测结果显著低于血清样本（P＜0.001）,其回归方程为Y=0.8757X+0.0844,相关系数r=0.978,血浆样本在1.00 mmol/L、1.50 mmol/L、2.00 mmol/L、2.50 mmol/L和3.00 mmol/L这5个浓度水平处的相对偏倚（SE%）分别为 -3.99、-6.80、-8.21、-9.05和-9.62。结论 实验室可使用肝素钠抗凝血浆代替血清进行FMN检测,但需根据其服务人群建立血浆样本的参考区间。     

两种型特异性引物聚合酶链反应法检测乙型肝炎病毒基因型和亚型的评价

目的 比较并评价本室创建的方法和日本Naito 等建立的乙型肝炎病毒(HBV)型特异性引物聚合酶链反应(PCR)基因分型法.方法 分别用新方法和Naito法检测系列稀释的含有A、D基因型和B1、C2亚型HBV基因组的质粒及不同浓度比例的B1/C2亚型混合质粒,评价两种方法的灵敏度和特异度.此外,用该两种方法分别对深圳市、河北邯郸市、新疆乌鲁木齐市送检的113份HBV DNA阳性慢性乙型肝炎患者的血清标本进行HBV基因分型,并对该两种分型方法检测结果不一致的血清样本,用PCR产物直接测序法分析.结果 两种方法对单一型别的质粒样本灵敏度无差异,但新方法对B/C混合型质粒样本的灵敏度及对各型别质粒样本的特异度明显优于Naito法.该两种方法检测单一基因型血清标本的灵敏度无差异,但新方法对B/C混合型血清样本的检出率更高.该两种方法检测结果总符合率为83.2%(94/113),不一致率为16.8%(19/113).从两法分型不一致的19份血清标本中,选取15份以PCR产物直接测序法进行分析,结果与新方法检测结果完全一致,而与Naito法不一致.结论 本室建立的HBV型特异性引物-PCR基因分犁法具有较高灵敏度,其特异度也明显优于目前临床上常用的Naito法,适用于HBV 基因型和基因亚型的临床及流行病学研究.     

不同检测系统间乙型肝炎病毒表面抗体结果一致性及影响因素分析

目的 探讨乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)单独阳性及乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)与HBsAb同时阳性这两种不同乙肝标志物结果模式下,两种不同化学发光法检测系统HBsAb检测结果的一致性及可能影响一致性的原因。方法 (1)选取在A系统行乙型肝炎病毒感染标志物检测样本64例,其中HBsAb单独阳性35例为模式一样本;HBsAg与HBsAb同时阳性29例为模式二样本,所有样本同时在B系统行HBsAb检测并比较A/B系统结果。(2)模式二样本经聚乙二醇6000(PEG6000)处理后,分别经A/B系统再次检测HBsAb,并比较其结果。结果 (1)模式一样本,A/B系统HBsAb阳性符合率为91.4%(32/35)(≥10IU/L),其中10～100IU/L浓度范围符合率为90.9%(20/22);大于100IU/L浓度范围符合率为92.3%(12/13)。A/B系统HBsAb定量检测结果差异有统计学意义[68.01(26.15, 270.60) vs 50.65(28.86, 246.79),P<0.05]。(2)模式二样本,A/B系统HBsAb阳性符合率为37.9%(11/29...     

IFCC参考方法对两种测量系统GGT结果正确性的验证

采用IFCC参考方法和A、B两厂家测量系统(以下简称方法),同时测量20份不同浓度的新鲜单人份血清、ERM-AD452(有证酶参考物质)、RELA(Ring-trial,国际参考实验室室间质量评价活动)样本,有效数据采用MVSl.380软件按EP9-A2文件评价两厂家方法测量结果的正确性,并用Bland-Altman图...     

化学发光免疫分析法HER-2测定试剂盒的初步临床评价

目的评价试验产品HER-2测定试剂盒(化学发光免疫分析法,深圳市新产业生物医学工程股份有限公司)与参比产品HER-2/neu蛋白测定试剂盒(化学发光法,西门子)的临床使用的等效性。方法使用两种试剂对临床收集的样本进行平行盲法检测。试验结束后对参比产品和试验产品的测定结果进行离群值检验、回归分析、Bland-Altman一致性分析、医学决定水平处的预期偏倚分析以及定性结果的一致性分析。结果共测定 360例临床样本,均为女性样本。对纳入定量分析的355例样本测定结果进行方法间离群值检验,无离群值。线性回归方程: Y =0.9758 X +0.1668, R 2 = 0.9910 。试验产品与参比产品差值百分比的95%一致性界限(LoA)为(-21.80%,18.87%);其中98.87%(351/355)的点在95%一致性界限内。两种方法在医学决定水平15 ng/mL处的预期偏倚百分比为-1.31%,满足评价标准。试验产品与参比产品阳性符合率为98.76%,阴性符合率为98.49%,总符合率为98.61%。其中有5例标本两种方法检测定性结果不一致,但均为非恶性组且结果在参考值附近。定性结果经Kappa一致性检验,κ值=0.9719。结论试验产品HER-2测定试剂盒与参比产品HER-2/neu蛋白测定试剂盒临床应用中具有等效性,即临床应用上的有效性和安全性。     

甲亢伴周期性麻痹患者131I治愈前后血浆RAAS系统变化及临床意义

目的 探讨肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS系统)在甲亢合并周期性麻痹患者131I治愈前后变化的临床意义.方法 选取2011年3月至2014年3月就诊核医学科确诊甲亢并用131I治愈的病例295例,其中合并周期性麻痹患者54例为A组,不合并周期性麻痹患者241例为B组,测定其血清钾K+,甲状腺功能,RAAS系统水平变化.分别比较A组、B组于131I治疗前、131I治愈后血清钾、血浆甲状腺激素水平及血浆RAAS水平变化.结果 131I治疗前A组和B组之间血浆RAAS水平差异有统计学意义(P＜0.01),131I治愈后A组和B组之间血浆RAAS水平变化差异没有统计学意义(P＞0.05).结论 甲亢合并周期性麻痹患者血浆RAAS系统水平升高可能是引起患者低血钾的一个原因,监测甲亢患者血浆RAAS系统水平变化对其是否合并周期性麻痹的预测判断有积极临床意义.     

化学发光免疫分析法检测C肽的分析性能验证

目的验证化学发光免疫分析法检测C肽的分析性能。方法参考美国临床和实验室标准化协会(CLSI)系列文件和相关文献,结合科室具体实际,验证深圳新产业MAGLUMI 4000 Plus检测系统检测C肽的基本分析性能。结果C肽低、高浓度批内不精密度、批间不精密度均在可接受范围内;无样本携带污染;C肽原装配套定值标准品检测值与靶值的偏倚小于12.5%,20例临床样本与MAGLUMI 4000检测结果差异无统计学意义(P>0.05),平均相对偏差为3.76%;C肽最大稀释倍数为8倍;功能灵敏度为0.10 ng/mL;C肽浓度范围在0.09~17.25ng/mL线性回归方程为Y=1.008X-0.2891,相关系数r=0.983;20名健康体检者检测C肽的结果为1.042~2.901ng/mL,100%的检测结果在厂家提供的参考区间内。结论深圳新产业MAGLUMI 4000 Plus化学发光免疫分析检测系统检测C肽的基本分析性能与厂家声明或相关文献基本一致,可以替换深圳新产业MAGLUMI 4000,用于临床常规工作的开展。     

MS,MTHFR,MTRR基因多态性与胎儿缺陷相关性研究

目的探讨MS、MTHFR、MTRR基因多态性与胎儿缺陷的相关性。方法共选择胎儿缺陷的孕妇60例及同期诊断无胎儿缺陷的孕妇60例作为研究对象,将有胎儿缺陷的孕妇作为研究组(B组),选取常见的先天性心脏病(B1组)、神经管缺陷(B2组)、多指/趾(B3组)、唇腭裂(B4组)为平行对照,无胎儿缺陷的孕妇作为对照组(A组),采用荧光定量PCR法检测MS、MTHFR、MTRR基因多态性分布,分析两组SNP位点的多态性分布,采用二元Logistic回归分析基因多态性与胎儿缺陷的相关性。结果研究组MS基因(A2756G)的G/G基因型、G基因与对照组基因分布无明显差异,B1、B2、B3、B4组与对照组基因分布无明显差异,均无统计学意义(P>0.05)。研究组MTHFR(C677T)的T/T基因型、T基因,B1、B4组T/T基因型,B1、B2、B3、B4组T基因频率均高于对照组;MTHFR(A1298C)的C/C基因型、C基因,B1、B2、B3、B4组的C/C基因型、C基因频率高于对照组,均有统计学意义(P<0.05)。研究组MTRR(A66G)的G/G基因型、G基因,B1、B3的G/G基因型,B1、B2、B3、B4的G基因频率高于对照组,均有统计学意义(P<0.05)。经二元Logistic回归分析,MTHFR(C677T)T/T、MTHFR(A1298C)C/C、MTRR(A66G)G/G基因型的增加是胎儿缺陷的危险因素。结论MS基因位点A2756G多态性分布与胎儿缺陷无关联性,MTHFR基因位点C677T、A1298C以及MTRR基因位点A66G多态性分布与胎儿缺陷有关联性。