气虚血瘀证缺血中风大鼠肠道菌群对补阳还五汤有效成分的吸收影响研究

目的探讨补阳还五汤在气虚血瘀证缺血中风大鼠肠道微生态环境下药物成分的吸收。方法采用力竭游泳法联合线栓法建立气虚血瘀证缺血中风大鼠模型,模型组与假手术组大鼠同时于术后1 h、24 h及48 h灌胃补阳还五汤,两组大鼠均于术后72 h取盲肠粪便行16S rRNA基因测序检测肠道菌群,采集分离血浆后运用液相色谱-质谱联用的非靶向代谢组学方法检测血浆代谢物,对肠道菌群及血浆代谢产物进行组间差异分析及关联分析。结果两组大鼠肠道菌群组成结构及血浆代谢轮廓存在明显差异,与假手术组比较,缺血中风气虚血瘀证大鼠中甜菜碱、α-紫罗兰酮、甲基没食子酸-O-硫酸盐、阿拉伯糖、棕榈酸、紫花前胡醇显著上调(P0.05),阿糖腺苷、3-O-甲基没食子酸显著下调(P0.05)。除3-O-甲基没食子酸外,上述其他7种药物成分的组间差异均与肠道菌群有相关性。结论气虚血瘀证缺血中风大鼠肠道菌群差异影响补阳还五汤药物成分在肠道的吸收。     

肥胖大鼠骨骼肌AMPK表达及其与糖脂代谢的关系

目的 探讨肥胖大鼠骨骼肌组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的表达及其对糖脂代谢的影响.方法 将28只6周龄雄性SD大鼠随机分为普通饮食组(NC组,15只)和高脂饮食组(HF组,13只),分别测体重(BW)、血清游离脂肪酸(FFA)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TCH)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)等指标.采用免疫印迹法测定各组大鼠骨骼肌中AMPK和磷酸化AMPK(p-AMPK)的水平.以p-AMPK/AMPK代表AMPK的活性.结果 与NC组大鼠相比,HF组大鼠的BW、FFA、TG、FPG、FINS均明显升高(P＜0.05),骨骼肌中AMPK表达降低,但差异无统计学意义(P＞0.05),p-AMPK表达及AMPK活性(p-AMPK/AMPK)降低显著(均P＜0.05).骨骼肌组织p-AMPK表达水平与FPG、FFA呈负相关(P＜0.05),AMPK活性与FPG、FFA、TG呈负相关(P＜0.05),与FINS无相关性.结论 高脂饮食诱导大鼠营养性肥胖,降低AMPK的活性,从而导致TG和TCH的合成增加,血糖升高,脂质在外周组织沉积增加.     

基于AMPK介导的线粒体自噬分析温阳益气方改善大鼠梗死后心衰的药理机制

目的观察温阳、益气方药对梗死后心力衰竭大鼠模型腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)介导的线粒体自噬的影响,完善其药理机制提供数据支撑。方法将100只健康SPF级大鼠随机分为5组,各组20只。除对照组和假手术组以外,均采用冠状动脉结扎法制备梗死后心力衰竭大鼠模型。模型制备成功后,中药干预组采用温阳益气方灌胃,AMPK激动组在温阳益气方灌胃的基础上肌肉注射AMPK激动剂EX229。干预4周,测定左室射血分数(LEVF)与心脏/体重比;采用线粒体呼吸机测定线粒体呼吸控制比(RCR),采用WB实验测定磷酸化AMPK/非磷酸化AMPK(p-AMPK/AMPK)及自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)、PINK1、Parkin的蛋白表达。结果与对照组比较,模型组和AMPK激动组心脏/体重比明显升高,state3呼吸速率与RCR明显降低;与模型组比较,中药组心脏/体重比降低,state3呼吸速率与RCR升高;差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,模型组、中药组和AMPK激动组心肌组织p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、PINK1及Parkin蛋白表达水平升高;与模型组相比,中药组p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、PINK1及Parkin蛋白表达水平降低;组间差异有统计学意义(P0.05)。结论温阳、益气方药能够改善梗死后心衰大鼠的心肌功能,其作用机制可能与抑制AMPK介导的线粒体自噬有关。     

葛根素通过Sirt3/AMPK信号通路改善奥氮平诱导的大鼠糖脂代谢紊乱

目的探讨葛根素通过沉默调节蛋白3(Sirt3)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路对奥氮平诱导的大鼠糖脂代谢紊乱的影响。方法SPF级SD雄性大鼠以奥氮平灌胃建立糖脂代谢紊乱模型,给予葛根素、Sirt3抑制剂(3-TYP)及二甲双胍干预,比较干预后糖脂代谢指标及Sirt3/AMPK信号通路蛋白表达情况。结果经葛根素干预后大鼠的Lee''s指数、空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)下降,高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、Sirt3蛋白表达及p-AMPK/AMPK、p-ACC/ACC均升高,联合3-TYP干预后上述指标变化程度降低(P＜0.05)。结论葛根素能改善糖脂代谢紊乱大鼠的代谢指标,其机制可能与调节Sirt3蛋白表达和激活AMPK和ACC磷酸化活性有关。     

电针“足三里”对脾虚大鼠心肌细胞AMPK-线粒体通路的影响

目的观察电针"足三里"对脾虚大鼠心肌细胞线粒体能量代谢、线粒体自噬的影响。方法 48只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、足三里组、非经非穴组,每组12只。采用三因素复合法复制脾虚证模型,持续14 d。足三里组针刺大鼠双侧足三里穴,非经非穴组针刺大鼠双侧髂嵴上非经非穴点,电针治疗10 d。高效液相色谱法检测大鼠心肌细胞三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)以及磷酸腺苷(AMP)的含量;Western blotting法检测大鼠心肌细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、微管相关蛋白1轻链3-I(LC3-I)以及LC3-II蛋白的表达;利用透射电镜观察大鼠心肌细胞线粒体及线粒体自噬体的超微结构。结果与正常对照组相比,模型组、足三里组以及非经非穴组大鼠心肌AMP/ATP、LC3-II/LC3-I均明显上调(P﹤0.01);模型组大鼠心肌p-AMPK/AMPK有所上调(P﹤0.05),足三里组大鼠心肌p-AMPK/AMPK显著上调(P﹤0.01)。与模型组相比,足三里组大鼠心肌LC3-II/LC3-I显著上调(P﹤0.01)。模型组大鼠心肌线粒体损伤明显,足三里组线粒体损伤有所改善,见大量的线粒体自噬体。结论电针"足三里"可能通过激活脾虚大鼠心肌细胞AMPK,调节线粒体能量代谢、提高线粒体自噬水平,对脾虚大鼠起到干预作用。     

气虚血瘀大鼠模型糖、脂代谢及氧化应激反应研究

目的 从糖、脂代谢及心、脑组织氧化应激损伤等角度,探讨气虚血瘀大鼠模型靶器官损伤及其机理.方法 采用力竭游泳法制作气虚血瘀大鼠模型,分别造模1、2、4周,然后检测模型大鼠血糖、血脂及心、脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平.结果 模型组大鼠力竭造模后1、2、4周血糖均升高,血浆总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)水平在4周时下降,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)未见明显异常变化;模型组大鼠心肌组织MDA含量升高,心肌组织SOD及脑组织MDA、SOD未见有显著性意义的变化.结论 糖、脂等能量代谢紊乱是气虚血瘀证重要生物学基础,其靶器官的损害可能与氧化应激损伤密切相关.     

结合眼底血管特征研究2种中医证型缺血性中风患者的2年期复发风险

目的  构建结合眼底血管特征的不同中医证型的缺血性中风复发风险评估模型。方法  采用前瞻性观察研究, 共纳入425例符合纳入标准的缺血性中风患者并随访2 a, 采集与中风相关的临床风险因素、中医证型及眼底血管特征参数信息, 采用生存分析法比较气虚血瘀证和风痰阻络证缺血性中风患者的复发风险, 运用单因素分析辨识中风复发的核心危险因素和眼底血管特征, 分别建立2个证型的多因素Logistic复发风险评估模型。结果  2个证型的复发风险比较, 风痰阻络证较气虚血瘀证高(P＜0.05)。气虚血瘀证缺血性中风复发风险评估模型受试者ROC曲线下面积值为0.799 6, 风痰阻络证缺血性中风复发风险评估模型值为0.719 3。结论  风痰阻络证缺血性中风患者复发风险较气虚血瘀证高, 建立识别不同证型缺血性中风复发的风险因素模型可以为临床提供有针对性的预防策略。      

女贞子提取物对帕金森病大鼠的神经炎症及AMPK/ERK信号通路的影响

目的：探讨女贞子提取物（LLE）对帕金森病（PD）大鼠神经炎症以及腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路的影响。方法：通过注射6-羟基多巴胺（6-OHDA）构建PD大鼠模型,将建模成功的大鼠随机分为模型组、LLE低、中、高剂量组、阳性对照组,每组15只;另取15只正常大鼠作为对照组;LLE低、中、高剂量组分别给予0.2 g/kg、0.4 g/kg、0.8 g/kg LLE灌胃,阳性对照组给予1.67 mg/kg美多芭灌胃,对照组、模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续15d。干预结束后,利用旋转试验检测大鼠行为学变化;利用酶联免疫吸附（ELISA）法测定大鼠脑组织中氧化应激指标[丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）],炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮（NO）]水平;采用免疫组化法检测多巴胺标志物酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞数;采用蛋白免疫印迹（western blotting）法检测PD大鼠脑组织中AMPK、ERK、p-AMPK、p-ERK表达。结果：与对照组相比,模型组大鼠旋转圈数及脑组织MDA、TN...     

高脂膳食对大鼠肝组织腺苷酸活化蛋白激酶表达的影响

目的 研究膳食对大鼠肝组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)mRNA及蛋白表达的影响.方法 用高脂饲料喂养雄性SD大鼠15周,诱导肥胖(DIO)和肥胖抵抗(DIO-R)后将DIO组半数改用基础饲料喂养(DIO-HF/LF),另一半继续高脂膳食(DIO-HF),DIO-R组膳食不变继续喂养至23周;用基础饲料喂养作对照组(CF).用RT-PCR方法检测AMPKα1、α2 mRNA水平,Western blot方法检测肝组织AMPKα及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α亚基(p-AMPKa)蛋白表达水平.结果 ①DIO-HF/LF组体重高于对照组而低于DIO-HF组(均P<0.05);②DIO-HF组AMPKα2 mRNA水平显著降低(P<0.05),而AMPKα1的mRNA水平未见明显改变,③DIO-HF组AMPKα及p-AMPKα的蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05),而其余3组之间差异无统计学意义.结论 长期高脂饮食下调AMPKα2 mRNA的表达以及AMPKα和p-AMPKα蛋白的表达.肥胖敏感大鼠改用基础膳食可降低体重,纠正高脂膳食导致的AMPK下调.肥胖抵抗可能与AMPK维持正常表达有关.     

消栓通络胶囊治疗缺血性中风21例

目的:观察消栓通络胶囊治疗缺血性中风(气虚血瘀证)的临床疗效.方法:采用随机双盲单模拟法将缺血性中风病气虚血瘀证患者分成治疗组和对照组各21例,疗程为28d.观察病人治疗前后神经功能缺损及中医证候改善程度及安全性.结果:两组神经功能缺损改善程度及中医证候疗效差异均无统计学意义(P＞0.05),且未见不良反应.结论:消栓通络胶囊(0.54g)治疗缺血性中风(气虚血瘀证)疗效较好.     

Toll样受体8基因rs3764880多态性与汉族男性缺血性中风的关联性研究

目的探讨Toll样受体8(TLR8)基因rs3764880遗传多态性与缺血性中风风痰瘀阻证、气虚血瘀证的易感性及相关数量性状的关联。方法纳入缺血性中风风痰瘀阻证患者311例、气虚血瘀证284例,对照组605例。用real-time PCR技术检测外周血TLR8基因表达水平,Sequenom Mass ARRAY platform进行基因分型,ELISA法测定炎性细胞因子血清水平。以PLINK、SPSS 16.0软件进行统计分析。结果 TLR8基因rs3764880多态性与中国汉族男性中风风痰瘀阻证易感性的关联有统计学意义(等位基因模型P0.05)。在气虚血瘀证患者中,携带GG基因型者的血清白细胞介素8(IL-8)水平较携带AA+GG基因型者高(P0.05);携带GG+AG基因型者的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-8血清水平高于携带AA基因型者(P0.05)。rs3764880多态性与男性气虚血瘀证患者的胆固醇(TC)(加性模型:β=-0.03,Padj=0.001)、低密度脂蛋白(LDL)水平(加性模型:βb=-0.25,Padj=0.018)显著关联。结论TLR8基因rs3764880多态性可能影响中国汉族男性缺血性中风风痰瘀阻证发生,并影响气虚血瘀证的炎性反应和脂质代谢。     

熊果酸调控AMPK/SIRT1通路对牙周炎大鼠牙槽骨吸收的影响

目的:探讨熊果酸(UA)对牙周炎大鼠牙槽骨吸收及腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1(AMPK/SIRT1)通路的影响。方法:将40只大鼠分为对照组、模型组、UA组(150 mg/kg)、UA+AMPK抑制剂组(150 mg/kg+0.2 mg/kg);模型组、UA组、UA+AMPK抑制剂组建立牙周炎大鼠模型，造模成功后各组给予相应处理。连续给药2周后，微计算机断层扫描技术检测大鼠牙槽骨釉牙骨质界至牙槽嵴顶的距离(CEJ-ABC)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨小梁数目(Tb.N);观察牙周组织病理变化；对大鼠牙周组织进行破骨细胞计数；检测大鼠牙周组织核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)、AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、SIRT1、乙酰化NF-κB p65(Ac-NF-κB p65)、核因子κB p65(NF-κB p65)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达。结果:与对照组比较，模型组大鼠牙槽骨表面不平整，牙槽骨高度明显降低，有较多骨吸收陷窝，有大量炎性细胞浸润，牙周膜纤维排列紊乱，牙槽...     

缺血性脑卒中气虚血瘀证大鼠模型的研究

目的 建立缺血性脑卒中气虚血瘀证病证结合大鼠模型的制作方法和评价体系.方法 通过持续力竭性游泳复合线栓法(大脑中动脉阻塞)建立缺血性脑卒中气虚血瘀证大鼠模型.观察模型鼠在表征、舌象、血液流变学及脑组织形态学等指标的变化,建立该模型的评价体系.结果 持续力竭性游泳过程中模型鼠表现出体重增长相对缓慢,进食时间相对延缓,舌质变黯、舌下络脉增长等反映气虚血瘀状态的表征,线栓法手术后模型鼠表现出少动或不动、无力抵抗、偏瘫、舌色紫黯、舌下络脉青紫粗长等反映脑缺血气虚血瘀证的表征,血液流变学检测提示模型鼠血液黏度增高、血浆纤维蛋白含量增加、血小板聚集性增高,脑组织形态学符合脑缺血改变.结论 持续力竭性游泳复合线栓法可制备缺血性脑卒中气虚血瘀证大鼠模型,表征、舌象、血液流变学及脑组织形态学等几方面指标的综合评价可构成该模型的评价体系.     

中风气虚血瘀生风病机假说的循证检验研究

目的:明确益气活血方药治疗中风的临床疗效证据,检验中风气虚血瘀生风病机假说。方法:运用系统评价方法,检索益气活血方药治疗中风的随机对照临床试验文献,筛选合格研究,应用Jadad评分法评价研究质量,应用Meta-分析等方法合并统计相关数据,应用敏感性分析、失效安全数计算分别定性、定量检验统计结果的稳定性,获得相对可靠的临床疗效证据。结果:补阳还五汤治疗缺血性中风急性期、恢复期及中风后遗症期,通心络胶囊及脑心通胶囊治疗缺血性中风急性期均有效,且其Meta-分析结果稳定。结论:检验缺血性中风急性期、恢复期及中风后遗症期气虚血瘀生风病机假说的临床疗效证据相对充分,气虚血瘀证是缺血性中风的基本证候类型,气虚血瘀生风作为缺血性中风基本病机认识具有较强的可靠性。     

燕麦β-葡聚糖治疗大鼠高脂血症

目的:考察燕麦β-葡聚糖对大鼠高脂血症的治疗作用.方法:健康成年SD大鼠70只,雌雄各半,随机分成正常对照组(n=10)和复制模型组(n=60).复制模型组喂高脂饲料,3周后测定大鼠空腹血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),以血清TC显著高于正常对照组为造模成功指标.选50只高脂血症大鼠,按血脂随机分为5组(n=10):高脂对照组(等量蒸馏水,灌胃给药),壳寡糖对照组[200 mg/(kg·d),灌胃给药],燕麦β-葡聚糖低、中、高剂量组[133 mg/(kg·d), 266 mg/(kg·d), 533 mg/(kg·d),均灌胃给药],各组继续喂高脂饲料4周;正常对照组喂普通饲料、蒸馏水4周.在灌胃给药前后分别称每只大鼠体质量.分别于大鼠灌胃给药前及给药3、4周眼眶采血,测定血清TC、HDL-C、LDL-C.结果:与正常对照组相比,燕麦β-葡聚糖高、中剂量组大鼠体质量下降(P<0.05).燕麦β-葡聚糖能显著降低高脂血症大鼠血清TC和LDL-C,显著升高HDL-C.燕麦β-葡聚糖灌胃4周后降脂作用明显高于灌胃3周后的作用,且呈明显的剂量依赖性;其降脂作用优于壳寡糖,并未见不良反应.结论:燕麦β-葡聚糖对大鼠高脂血症有显著的治疗作用.     

补阳还五汤对缺血性中风的疗效观察

目的 观察补阳还五汤对气虚血瘀型缺血性中风患者的临床疗效.方法 将急性缺血性中风患者48例随机分为治疗组及对照组,所有患者均给予阿司匹林,辛伐他汀口服,及疏血通,胞二磷胆碱治疗,治疗组在此基础上给予补阳还五汤治疗,两组疗程均为14天.结果 经两种临床疗效评定方法 评定,结果 显示治疗组疗效优于对照组,具有显著性差异(P<0.05).结论 对气虚血瘀型缺血性中风患者联合使用补阳还五汤能使治疗总有效率显著提高,且未发现明显不良反应.     

补阳还五汤对气虚血瘀证大鼠血液流变学的影响

采用强迫游泳劳损法复制大鼠气虚血瘀证模型,同时服补阳还五汤。结果治疗组大鼠全血粘度,红细胞压积、血沉,纤维蛋白均显著降低,表明补阳还五汤对气虚血瘀证大鼠血液流变学的“粘”、“浓”、“凝”、“聚”改变有显著的改善作用。     

利拉鲁肽对糖尿病肥胖大鼠内脏脂肪的调节作用

目的 探索利拉鲁肽对糖尿病肥胖大鼠内脏脂肪组织中脂肪量及肥胖相关(FTO)基因、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及蛋白激酶B(AKT)表达的影响及其可能机制。方法 将20只清洁级雄性SD大鼠制作为糖尿病模型,随机分成利拉鲁肽组和对照组(每组各10只),分别给予利拉鲁肽[0.6mg/(kg·d)]治疗或0.9%氯化钠溶液对照处理,12周后称体质量,采集标本。测定大鼠内脏脂肪组织的重量,检测大鼠血糖、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平。以实时荧光定量RT-PCR、Western blot法检测大鼠内脏脂肪组织FTO、AMPK及AKT的表达水平。采用t检验分析比较各组数据。结果 与对照组比较,利拉鲁肽组大鼠体质量、内脏脂肪的重量、血糖、TG、TC、LDL-C的水平明显降低(P<0.05),HDL-C的水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,利拉鲁肽组大鼠FTO、AKT mRNA及蛋白的水平明显降低(P<0.05),AMPK mRNA及蛋白的水平明显升高(P<0.05)。结论 利拉鲁肽可能通过激活糖尿病肥胖大鼠内脏脂肪AMPK途径及抑制AKT途径,下调FTO的表达水平,参与改善2型糖尿病腹型肥胖的过程。     

补阳还五汤对气虚血瘀模型血小板活化影响

目的从血液流变学和血小板活化探讨补阳还五汤改善气虚血瘀模型大鼠血瘀证的作用机制。方法 40只SD大鼠,随机分为空白组、气虚血瘀模型组、补阳还五汤高剂量组(14.0 g·kg~(-1))、补阳还五汤低剂量组(3.5 g·kg~(-1)),每组10只。大鼠以5%水合氯醛腹腔注射麻醉,沿颈部正中线做1 cm切口,一次性向气管内注射博莱霉素生理盐水溶液(5 mL·kg~(-1))。注射完后立即将大鼠直立旋转,使药液在肺内充分分布均匀,缝合创口。造模后第2天开始腹腔注射给药。结果与模型组比较,补阳还五汤能够显著降低全血黏度(P0.05)、血浆黏度(P0.05),可显著升高6-keto-PGF1α、cAMP含量(P0.05),显著降低TXB2、β-TG含量(P0.05);补阳还五汤高剂量组可显著降低cGMP、vWF、Fn含量。结论补阳还五汤能降低气虚血瘀模型大鼠全血黏度、血浆黏度,改善血液的高黏状态。补阳还五汤通过改善血小板聚集、黏附,抑制血小板释放亢进的状态等方面来缓解气虚血瘀模型大鼠病理状态。