长链非编码RNA H19通过靶向miR-18b调控Wnt/β-catenin信号通路对宫颈癌细胞顺铂耐药性的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)H19对宫颈癌顺铂耐药性的影响及分子机制。方法 体外培养人宫颈癌细胞株HeLa,采用顺铂梯度暴露法构建宫颈癌顺铂耐药细胞HeLa/DDP;qRT-PCR检测正常宫颈细胞ECT1/E6E7、HeLa细胞和HeLa/DDP细胞中H19、miR-18b的相对表达水平;以HeLa/DDP细胞为研究对象,根据转染载体不同将细胞分为pcDNA-NC组、pcDNA-H19组、si-H19组、si-H19+inhibitor-NC组、si-H19+miR-18binhibitor组;qRT-PCR检测细胞转染后H19和miR-18b表达水平;MTT法检测细胞存活率和顺铂半数抑制浓度（顺铂IC50值）;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验验证H19与miR-18b的靶向关系;Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白cleavedcaspase-3、Bax、Bcl-2及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果 与HeLa细胞比较,HeLa/DDP细胞中H19表达水平显著升高（P<0.05）,miR-18b表达水平显著降低（P<...     

miR-145在转染的HeLa细胞中的表达及其对CDK6的靶向抑制

目的构建miR-145高效表达载体,研究其对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法人工合成miR-145基因序列,构建真核重组质粒pcDNATM6.2-GW-miR-145,并转染HeLa细胞,将HeLa细胞分为转染miR-145组、空载体组和未经处理的HeLa细胞组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测miR-145及其下游靶基因细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)在各组中的表达,采用MTT法检测miR-145对HeLa细胞增殖活性的影响。结果经测序和qRT-PCR分析鉴定证明重组质粒pcDNATM6.2-GW-miR-145构建成功,qRT-PCR和Western blot结果显示转染miR-145组的HeLa细胞中CDK6的表达水平明显降低,MTT试验结果显示转染miR-145的HeLa细胞其增殖活性明显受到抑制(P0.05)。结论成功构建miR-145真核表达载体pcDNATM6.2-GW-miR-145,miR-145能够抑制宫颈癌HeLa细胞中CDK6的表达。     

miR-129-5p调控Wnt5a抑制胆囊癌细胞增殖和转移能力的机制研究

目的 研究微小RNA-129-5p(miR-129-5p)靶向调控Wnt5a抑制胆囊癌细胞增殖和转移能力的作用及机制。方法 采用RT-PCR检测胆囊癌细胞NOZ、SGC-996、GBC-SD和正常胆管上皮细胞系HIBEpic中miR-129-5p的表达水平。选择miR-129-5p表达较低的胆囊癌细胞进行miR-129-5p mimic转染,分为对照组(NC组)和miR-129-5p过表达组(miR-129-5p mimic组),采用MTT实验检测各组细胞的增殖能力,Transwell实验检测各组细胞的转移能力。Targetscan7.1预测软件及双荧光素酶报道基因试验检测miR-129-5p对Wnt5a基因的靶向调控作用。RT-PCR检测胆囊癌细胞NOZ、SGC-996、GBC-SD及NC组、miR-129-5p mimic组中Wnt5a mRNA的表达水平。胆囊癌细胞分为NC组、miR-129-5p mimic组、miR-129-5p过表达与Wnt5a敲减质粒共转染组(miR-129-5p mimic+sh-Wnt5a组)和miR-129-5p过表达与Wnt5a过表达质粒共转染组(...     

微小RNA-513c-5p在宫颈癌中的表达及靶向组蛋白去乙酰化酶1调节宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制

目的 探讨微小RNA（miR)-513c-5p在宫颈癌中的表达及靶向组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）调节宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制。方法 临床收集宫颈癌患者86例,通过Real-time PCR检测肿瘤组织和癌旁组织中miR-513c-5p水平,分析其与宫颈癌病理特征的关系。通过双荧光素酶报告验证miR-513c-5p靶向HDAC1。将宫颈癌HeLa细胞系分为4组：对照组、类似物(mimic)组、mimic+HDAC1组和HDAC1组。通过质粒转染技术过表达miR-513c-5p和(或)HDAC1。Real-time PCR和Western blotting分别用于检测RNA或蛋白的表达水平。分别通过CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell实验检测各组的细胞生长、迁移和侵袭能力。 结果 宫颈癌组织中miR-513c-5p水平显著低于癌旁组织。低水平的miR-513c-5p与更高的局部侵袭、淋巴转移和远端转移有关（P<0.05）。miR-513-5p靶向抑制HDAC1表达。过表达miR-513c-5p显著抑制宫颈癌细胞生长、迁移和侵袭（P<0.05）。过表达HDAC1促进细胞生长、迁移和侵袭（P<0.05）,并且可以逆转miR-513c-5p的抑制作用（P<0.05）。 结论 低水平的miR-513c-5p可能与宫颈癌转移有关,并且miR-513c-5p可通过靶向抑制HDAC1蛋白的表达抑制宫颈癌HeLa细胞生长、迁移和侵袭。     

miR-410通过靶向Snail1抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭

目的分析miR-410通过Snail1蛋白抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭的机制。方法通过双荧光素酶报告验证miR-410靶向Snail1。将宫颈癌HeLa细胞系分为4组:对照组、mimic组、mimic+Snail1组和Snail1组。通过质粒转染技术过表达miR-410和/或Snail1。qPCR和Western blot分别用于检测RNA和蛋白的表达水平。分别通过CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell实验和细胞共培养检测各组的细胞生长、迁移、侵袭能力和免疫抑制情况。结果 miR-410直接靶向抑制Snail1。Mimic组的Snail1mRNA和蛋白水平显著低于对照组(P<0.05),Mimic+Snail1组的Snail1 mRNA和蛋白水平显著高于mimic(P<0.05)。mimic组的细胞活力、迁移、侵袭和免疫抑制水平显著低于对照组(P<0.05),Snail1组的细胞活力、迁移、侵袭和免疫抑制水平显著高于对照组(P<0.05),并且mimic+Snail1组的细胞活力、迁移、侵袭和免疫抑制水平显著高于mimic组(P<0.05)。结论 m...     

miR-1 靶向调控VEGFA 肺癌干细胞侵袭和转移的影响

目的:研究miR-1在肺癌干细胞(CSCs)中的表达水平,并探讨miR-1靶向调控VEGFA对肺癌CSCs侵袭和转移的影响。方法:收集肺癌患者新鲜肿瘤组织,分离培养原代肺癌细胞,经无血清悬浮培养形成肿瘤细胞球,磁珠分选肿瘤细胞球中CD133阳性的细胞。Western blot检测CD133阳性细胞中Nanog、SOX2、OCT4干性标志蛋白及miR-1在CSCs中的表达水平;经脂质体分别转染miR-1 mimic和对照48 h后,Boyden实验检测各组CSCs侵袭能力,Transwell实验检测各组CSCs转移能力。TranScan7.1预测软件及双荧光素酶报道基因试验检测miR-1对VEGFA基因的靶向作用,qRT-PCR检测miR-1 mimic对CSCs中VEGFA mRNA表达的影响。在转染miR-1 mimic的CSCs中转染vector和过表达VEGFA(oe-VEGFA)质粒,Boyden实验检测各组CSCs侵袭能力,Transwell实验检测各组CSCs转移能力。结果:Nanog、SOX2、OCT4干细胞标志蛋白在CSCs中表达增加;miR-1在CSCs中表达显著下降;转染miR-1 mimic后,CSCs侵袭和转移能力均下降(P0.05)。TargetScan7.1预测软件和双荧光素酶报道基因试验证实VEGFA为miR-1的靶基因,miR-1 mimic组VEGFA mRNA的表达减少(P0.05)。与转染miR-1 mimic和vector组相比,转染miR-1 mimic和oe-VEGFA组的CSCs侵袭和转移均增加(P0.05)。结论:miR-1在肺癌CSCs中低表达,通过负调控VEGFA抑制CSCs侵袭和转移。     

miR-30a通过靶向调控Beclin-1、ATG5影响食管癌细胞自噬及增殖过程北大核心CSCD

目的:探究miR-30a通过靶向调控Beclin-1、ATG5表达对食管癌细胞自噬及增殖过程的影响。方法:靶基因预测、双荧光素酶报告实验验证miR-30a对Beclin-1、ATG5的靶向调控作用。GEO、Human Protein Atlas和GEPIA在线分析TCGA数据库和GTEx项目中食管癌组织及癌旁组织miR-30a、Beclin-1、ATG5表达、患者预后生存期。免疫组化检测45例食管癌及癌旁组织标本Beclin-1、ATG5表达,并分析Beclin-1、ATG5表达与患者临床病理参数的关系。采用脂质体LipofectamineTM3000将靶向Beclin-1、ATG5的miR-30a-mimic转染至Eca-109细胞,体外常规培养并分为3组:未转染组(control组)、转染无义RNA的阴性对照组(mimic NC组)、转染miR-30a-mimic的干扰组(miR-30a组)。MTT和克隆形成实验测定细胞增殖活力;qRT-PCR检测miR-30a、Beclin-1、ATG5 mRNA表达;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测Beclin-1、ATG5、LC3Ⅱ、p62蛋白表达。透射电镜观察细胞自噬泡形成情况。结果:生信分析结果显示,食管癌组织中miR-30a表达高于正常组织,Beclin-1、ATG5表达低于正常组织,且预后生存期与miR-30a表达呈负相关,与Beclin-1、ATG5表达呈正相关(P<0.05)。与control组和mimic NC组相比,miR-30a组细胞增殖、迁移和侵袭能力、p62蛋白表达明显升高,Beclin-1、ATG5、LC3Ⅱ表达、细胞自噬活力明显降低(P<0.05)。而control组与mimic NC组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-30a靶向调控Beclin-1、ATG5表达;Beclin-1、ATG5在食管癌组织和细胞中表达均降低,具有肿瘤抑制基因作用,可能通过抑制癌细胞增殖、迁移和侵袭、促进自噬发挥抑癌作用,为通过靶向调控自噬途径治疗食管癌提供了新思路。     

miR-198在卵巢癌中的表达及对卵巢癌细胞增殖作用的机制研究

目的 研究微小RNA-198 (microRNA-198,miR-198)在卵巢癌中的表达水平及对卵巢癌细胞增殖的影响,并探讨其发挥作用的分子机制.方法 采用qRT-PCR检测miR-198在卵巢癌和正常卵巢组织中的表达水平;t检验分析卵巢癌中miR-198的表达水平与患者临床病理参数的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析miR-198的表达对癌患者预后的影响;qRT-PCR检测miR-198在卵巢癌细胞SKOV3、CAOV4、CoC1和正常卵巢上皮细胞IOSE80中的表达;选择低表达miR-198的卵巢癌细胞系,转染miR-198模拟物(mimic),分为对照组NC和实验组miR-198 mimic,qRT-PCR检测各组细胞中miR-198的表达水平;MTS实验检测各组细胞的增殖活性;平板克隆检测各组细胞的克隆形成能力;流式细胞仪检测各组细胞的周期比率;Western blotting检测miR-198对增殖周期相关蛋白CDK4、CDK6、cyclinD1和p21表达的影响.结果 qRT-PCR结果显示miR-198在卵巢癌中的表达低于正常卵巢组织(t=6.55,P＜0.001),且miR-198的表达与患者淋巴结转移和FIGO分期相关(P ＜0.05);miR-198低表达的卵巢癌患者预后较差(x2=4.14,P=0.035).与正常卵巢上皮细胞IOSE80相比,miR-198在卵巢癌细胞SKOV3、CAOV4、CoC1中的表达降低,在SKOV3细胞系中的表达最低(F=59.07,P＜0.001).与对照组NC相比,实验组miR-198 mimic细胞中miR-198的表达增加(t=16.50,P＜0.001),miR-198 mimic组细胞增殖活性和克隆形成能力降低及诱导细胞周期阻滞在G0/G1期(P＜0.05);与对照组NC相比,miR-198 mimic组细胞中CDK4、CDK6和cyclinD1蛋白表达降低,p21蛋白表达增加(P＜0.05).结论 miR-198可能通过调控细胞周期抑制卵巢癌细胞的增殖.miR-198可能是治疗卵巢癌的潜在靶点.     

白藜芦醇调控miR-34a表达对骨肉瘤MG-63细胞生长、侵袭和自噬的影响

目的:探讨白藜芦醇通过调控微小RNA-34a(miR-34a)表达对骨肉瘤MG-63细胞生长、侵袭和自噬的影响。方法:将骨肉瘤MG-63细胞分为对照组及10、20、40、60和80μmol/L白藜芦醇处理组。采用MTT法、Transwell小室和Western blot实验检测各组骨肉瘤细胞的活力、侵袭能力及自噬蛋白表达;RT-q PCR检测各组骨肉瘤细胞中miR-34a的表达。转染miR-34a模拟物(miR-34a mimic)及阴性对照(miR-34a NC)至骨肉瘤细胞,检测miR-34a mimic和miR-34a NC在白藜芦醇处理后对骨肉瘤细胞活力和侵袭能力的影响,Western blot检测自噬标志蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和beclin-1的蛋白表达。结果:与对照组相比,不同浓度的白藜芦醇可抑制肿瘤细胞的活力和侵袭能力,促进自噬(P0.05)。白藜芦醇可上调肿瘤细胞中miR-34a的表达,并具有剂量依赖性(P0.05),同时促使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,beclin-1蛋白表达量上调(P0.05)。miR-34a mimic可增加白藜芦醇对骨肉瘤细胞活力和侵袭能力的抑制,并进一步促进自噬。结论:白藜芦醇可能通过上调miR-34a表达抑制骨肉瘤MG-63细胞生长并促进其自噬。     

miR-664 及其靶基因在肝癌细胞及组织中的表达及其与化疗敏感性关系 研究

目的：探讨miR-664及其靶基因CREB1在肝癌细胞和肝癌组织中的表达及其与化疗敏感性的关系。方法：双荧光素酶实验验证miR-664对CREB1的调控作用;生物数据库分析CREB1在肝组织的表达及患者的生存期;qRT-PCR检测肝癌细胞及组织标本miR-664和CREB1的表达,并分析miR-664的表达与患者临床病理参数的关系。体外细胞实验：采用脂质体瞬时转染法将miR-644 mimic和mimic NC转染至肝癌细胞株HepG2。采用MTT法、癌细胞单克隆形成、流式细胞术、划痕实验及Transwell小室实验测定细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、caspase-3、Bax的表达水平。结果：双荧光素酶实验验证了miR-664对CREB1的靶向调控作用。生物数据库显示CREB1在肝组织中的表达越高,患者生存期越短（P<0.001）。肝癌组织miR-664表达水平明显低于癌旁组织,CREB1表达水平明显高于癌旁组织（P<0.05）。体外细胞实验：与miR-control组相比,miR-664组、DDP组、DDP+miR-...     

miR-140在人胃癌组织中的表达及对SGC-7901胃癌细胞功能的影响

 目的: 研究microRNA-140(miR-140)在人胃癌和正常胃组织中的表达水平,以及调控miR-140表达后对SGC-7901胃癌细胞功能的影响。方法: 采用实时荧光定量PCR检测miR-140在人胃癌和正常胃组织中的表达水平;将miR-140 mimics(miR-140上调表达)和miR-140 inhibitors(miR-140下调表达)分别通过脂质体转染至人胃癌SGC-7901细胞中,同时设置未转染对照组(control组)和miRNA无义序列转染对照组(NC组)。实时荧光定量PCR检测转染后各组细胞中miR-140的表达变化;MTT方法检测各组细胞的生长活力和顺铂(DDP)作用下的生长抑制率;流式细胞术检测各组的细胞周期和凋亡率;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;Western blot检测各组细胞中组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)蛋白表达。结果: miR-140在人胃癌组织中表达水平显著低于正常胃组织(P<0.05)。与control和NC组相比,miR-140 mimics组中SGC-7901细胞活力和侵袭能力下降,细胞周期被阻滞,DDP作用下细胞生长抑制率和凋亡率上升,且HDAC4蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);而miR-140 inhibitors组中SGC-7901细胞活力和侵袭能力上升,细胞周期被促进,DDP作用下细胞生长抑制率和凋亡率下降,且HDAC4蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: miR-140在胃癌组织中低表达,可作为抑癌因子调控胃癌细胞活力、细胞周期变化、凋亡、侵袭并通过下调HDAC4发挥作用。miR-140可能作为胃癌诊断和治疗的新靶点。     

miR-485-5p 在前列腺癌组织中表达的临床意义及对前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探究miR-485-5p在前列腺癌(PC)组织中表达的临床意义及对PC细胞生物学行为的影响。方法:实时定量PCR(RT-PCR)检测45例PC组织、癌旁组织及3种PC细胞系(LNCaP、22RV1、PC-3)中miR-485-5p相对表达量,分析PC组织miR-485-5p表达量与各病理参数间的关系。将PC细胞分为miR-485-5p mimic组(miR组)和阴性对照组(NC组),分别转染miR-485-5p mimic及对照质粒,采用MTT法检测两组细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、划痕实验及Transwell实验分别检测细胞迁移及侵袭。结果:PC组织中miR-485-5p相对表达量明显低于癌旁组织(P0.05),3种细胞系中LNCaP细胞miR-485-5p表达量最低。PC组织中miR-485-5p表达与淋巴结转移、临床病理分级及TNM分期相关(P0.05)。转染后,miR组miR-485-5p表达量明显高于NC组(P0.05)。随着孵育时间延长,miR组细胞抑制率及凋亡率均明显升高,且高于NC组(P0.05);miR组细胞划痕愈合率及侵袭细胞数均低于NC组(P0.05)。结论:miR-485-5p在PC组织及细胞中低表达,且与病理参数相关,通过上调其表达水平可明显抑制PC细胞增殖、迁移及侵袭并诱导凋亡。     

miR-433-3p靶向HP1BP3抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力

目的：探究微小RNA-433-3p(miR-433-3p)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，以及miR-433-3p靶向异染色质蛋白1结合蛋白3(HP1BP3)对胃癌细胞的调控作用。方法：将人胃癌细胞系HGC-27和AGS分为阴性对照（NC）mimic组、miR-433-3p mimic组、NC siRNA (si-NC)组和HP1BP3 siRNA (si-HP1BP3)组，分别转染NC mimic、miR-433-3p mimic、si-NC和si-HP1BP3。RT-qPCR检测miR-433-3p在HGC-27和AGS细胞中的表达；CCK-8法和细胞集落形成实验检测细胞增殖；划痕愈合实验检测细胞迁移；Traswell实验检测细胞侵袭；Western blot检测HP1BP3蛋白表达。结果：与NC mimic组相比，miR-433-3p mimic组HGC-27和AGS细胞中miR-433-3p表达升高。过表达miR-433-3p抑制HGC-27和AGS细胞的增殖、迁移和侵袭，抑制HP1BP3蛋白表达；敲减HP1BP3抑制HGC-27和AGS细胞的增殖和迁移。结论：miR-433...     

miR-23a和ESRP1在直肠癌中的作用

目的:研究miR-23a和上皮剪接调节蛋白1(epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)在直肠癌组织及细胞系中的表达,以及对体外直肠癌细胞活力和凋亡的作用。方法:采用RT-q PCR分析miR-23a在36例直肠癌组织和癌旁组织中的表达,免疫组化检测ESRP1在直肠癌组织中的表达,分析miR-23a和ESRPl在直肠癌组织中的相关性;利用RT-q PCR检测miR-23a在直肠癌Caco-2和SW480细胞及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;合成miR-23a inhibitor和inhibitor阴性对照(inhibitor NC),并将其分别转染至SW480细胞后,通过CCK-8法检测miR-23a inhibitor转染SW480细胞后对细胞活力的影响,流式细胞术检测转染后细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭;通过Western blot技术检测SW480细胞中ESRPl蛋白的表达;构建野生型pGL3-ESRP1-3’UTR(wt-pGL3-ESRP1-3’UTR)或突变型pGL3-ESRP1-3’UTR(mut-pGL3-ESRP1-3’UTR)质粒,并分别与miR-23a inhibitor或inhibitor NC共转染至HEK293和SW480细胞中,利用双萤光素酶报告基因检测试剂盒说明检测双萤光素酶活性;将ESRP1 mimic或mimic NC瞬时转染SW480细胞后,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡;Western blot法检测瞬转ESRP1 mimic后对ESRP1、caspase-3、Smac和XIAP蛋白表达的影响。结果:miR-23a和ESRP1在直肠癌组织的表达较癌旁正常组织分别上调和下调,两者呈明显负相关(P0.01);miR-23a的表达与直肠癌的淋巴结转移和肿瘤浸润深度相关;与NCM460细胞相比较,miR-23a在SW480细胞中的表达量显著上调(P0.01);转染miR-23a inhibitor后,SW480细胞活力较inhibitor NC组显著下降(P0.01);转染miR-23a inhibitor后SW480细胞早期凋亡率明显升高,同时细胞体外侵袭能力受到抑制;萤光素酶报告基因结果表明ESRP1是miR-23a的直接靶基因;转染miR-23a inhibitor至SW480细胞后ESRP1蛋白表达水平明显升高;ESRP1 mimic转染SW480细胞后可抑制细胞活力并诱导细胞凋亡,同时上调caspase-3和Smac的表达,下调XIAP的表达。结论:miR-23a可通过负向调控下游靶基因ESRP1从而影响直肠癌细胞生长和凋亡。     

miR-130a靶向调节SMAD4基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-130a对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-130a抑制剂组、miR-130a模拟物组和对照组,分别将miR-130a抑制剂或miR-130a模拟物转染至miR-130a抑制剂组或miR-130a模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-time PCR法检测各组细胞miR-130a表达水平,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞SMAD4 mRNA和蛋白表达水平。结果转染miR-130a模拟物后,SKOV3细胞miR-130a的表达水平显著升高,SKOV3细胞的增殖与侵袭能力显著降低,SMAD4 mRNA及蛋白的表达水平显著降低(P0.01);转染miR-130a抑制剂后,SKOV3细胞miR-130a的表达水平显著降低,SKOV3细胞的增殖与侵袭能力显著升高,SMAD4 mRNA及蛋白的表达水平显著升高(P0.01)。结论 miR-130a抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭可能与下调SMAD4的表达相关。     

lncRNA LSINCT5 通过 miR-451 调控肺癌细胞侵袭、迁移及顺铂敏感性的 实验研究

目的：探讨lncRNA LSINCT5调控miR-451对肺癌细胞侵袭、迁移及顺铂（DDP）敏感性的影响。方法：以肺癌A549细胞为研究对象,使用LSINCT5特异性siRNA、DDP(4μg/ml)、si-LSINCT+DDP+miR-451 inhibitor处理细胞,不经特殊处理的细胞为空白组,qRT-PCR检测LSINCT5和miR-451 mRNA表达;Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测E-cadherin、Vimentin和N-cadherin表达;双荧光素酶报告基因检测试剂盒测定LSINCT5和miR-451的靶向关系。结果：在转染LSINCT5 siRNA的A549细胞中,LSINCT基因表达明显降低（P<0.05）。LSINCT5 siRNA及DDP均可明显抑制A549细胞侵袭、迁移能力,上调E-cadherin表达,下调Vimentin和N-cadherin表达（P<0.05）,LSINCT5 siRNA及DDP联合使用对细胞侵袭、迁移及E-cadherin、Vimentin和N-cadherin表达影响明显强于单...     

miR-93-5p靶向MICA基因促进宫颈癌细胞活力并上调NK细胞Th1细胞因子表达

为研究miR-93-5p、主要组织相容性复合体Ⅰ类相关基因A(MHC classⅠchain-related gene A, MICA)对宫颈癌细胞增殖及NK细胞Th1细胞因子分泌的影响及机制,采用qRT-PCR法检测人正常宫颈细胞Ect1/E67、人宫颈癌细胞HeLa中miR-93-5p的表达;在miR-93-5p mimics组(转染miR-93-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、pcDNA 3.1-MICA组(转染pcDNA 3.1-MICA)和pcDNA 3.1组(转染pcDNA 3.1)中用脂质体转染HeLa细胞,并与NK细胞共培养;MTT法检测各组细胞增殖率;ELISA检测各组细胞中Th1细胞因子IFN-γ、TNF-α含量;Western blotting检测各组细胞中MICA蛋白的表达量。结果显示,与Ect1/E67细胞相比,HeLa细胞中miR-93-5p的表达水平显著升高(P0.05),且miR-93-5p靶向MICA;抑制miR-93-5p、过表达MICA均可显著下调HeLa细胞的增殖率,上调IFN-γ、TNF-α表达。由此,miR-93-5p可促进宫颈癌细胞增殖,抑制NK细胞杀伤能力,或可为宫颈癌的靶向治疗提供新靶点。     

miR-147a靶向ATF2抑制非小细胞肺癌细胞侵袭和迁移北大核心CSCD

目的:探究miR-147a靶向激活转录因子2(ATF2)对非小细胞肺癌迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。方法:RT-qPCR检测非小细胞肺癌组织和细胞miR-147a和ATF2 mRNA表达,Western blot检测ATF2蛋白表达。采用miR-NC、pc-NC、miR-147a mimic、pc-ATF2质粒分别或联合转染H1703细胞,双荧光素酶报告验证其靶向关系,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移,Western blot检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、间质钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和ATF2蛋白表达。裸鼠分为4组:control组、miR-147a mimic组、pc-ATF2组、miR-147a+pc-ATF2组。裸鼠左腋下皮下注射转染后的非小细胞肺癌H1703细胞,第30天颈椎脱位法处死,完整取出皮下肿瘤,免疫组化检测N-cadherin阳性表达,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果:与正常肺组织和细胞相比,非小细胞肺癌组织和细胞miR-147a表达显著下调,ATF2 mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.01)。miR-147a靶向下调ATF2表达。与对照组相比,miR-147a mimic组H1703细胞ATF2表达显著下调,侵袭数显著减少,划痕闭合率显著降低,E-cadherin表达显著上调,N-cadherin和Vimentin表达显著下调(P<0.01),共转染pc-ATF2逆转miR-147a mimic对H1703细胞的作用。与对照组相比,miR-147a mimic组移植瘤中N-cadherin阳性细胞百分比降低,E-cadherin表达显著上调,N-cadherin和Vimentin表达显著下调(P<0.01),共转染pc-ATF2逆转miR-147a mimic对H1703移植瘤的作用。结论:miR-147a靶向ATF2可抑制非小细胞肺癌迁移、侵袭和上皮-间质转化。     

microRNA-373 过表达可促进乳腺癌侵袭转移

目的:探讨microRNA-373在乳腺癌组织中表达与侵袭转移的相关性。方法:建立乳腺癌细胞MCF-7裸鼠移植瘤模型,采用qRT-PCR法检测癌组织和癌旁组织中miRNA-373的表达。分别转染空白试剂、miR-373阴性对照物、miR-373拟似物、miR-373阻遏物至MCF-7细胞,采用荧光实时定量PCR法检测细胞内miRNA-373含量,采用Transwell小室法检测MCF-7细胞侵袭能力。结果:qRT-PCR检测显示,乳腺癌组织miRNA-373表达显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(P 0. 05)。qRT-PCR检测显示,转染后BC组和NC组miRNA-373表达差异无统计学意义(P0. 05),MT组miRNA-373表达显著高于BC组、NC组和RT组(P0. 05),RT组miRNA-373表达显著低于BC组、NC组和MT组(P0. 05)。MT组穿膜细胞数显著低于BC组、NC组和RT组,RT组穿膜细胞数显著高于BC组、NC组和MT组,差异均有统计学意义(P0. 05); BC组和NC组穿膜细胞数相比较差异无统计学意义(P 0. 05)。结论:乳腺癌MCF-7细胞的侵袭和迁移能力受miR-373调控,增强miRNA-373可降低MCF-7细胞侵袭和迁移能力,为乳腺癌治疗的新基因靶点药物的开发提供了思路。     

miR-26a靶向调节GSK-3β基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-26a对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-26a抑制剂组、miR-26a模拟物组和对照组,分别将miR-26a抑制剂或miR-26a模拟物转染至miR-26a抑制剂组或miR-26a模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-time PCR法检测各组细胞miR-26a表达水平,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞GSK-3βm RNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,miR-26a抑制剂组SKOV3细胞miR-26a表达水平显著降低,miR-26a模拟物组则显著升高(P0.01)。与对照组相比,miR-26a抑制剂组SKOV3细胞增殖与侵袭能力显著降低,GSK-3βm RNA及蛋白表达水平显著升高,miR-26a模拟物组SKOV3细胞增殖与侵袭能力显著升高,GSK-3βm RNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论 miR-26a促进卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭可能与下调GSK-3β的表达相关。