脂蛋白(a)测定试剂性能评价

目的 评估Lp(a)测定试剂盒的胶乳增强免疫透射比浊法在分析性能方面的表现。方法 采用日立7180全自动生化分析仪,按照CLSI EP文件要求对Lp(a)测定试剂的正确度、精密度、线性和参考区间进行评估。结果 胶乳增强免疫透射比浊法Lp(a)测定试剂盒在正确度、精密度、线性和参考区间方面均符合性能评价标准。具体而言,Lp(a)测定试剂的批内精密度为低浓度1.40%、高浓度1.20%;批间精密度为低浓度1.90%、高浓度1.80%。线性范围良好,相关系数r=0.9999。健康人群的Lp(a)参考范围小于300mg/L。结论 胶乳增强免疫透射比浊法Lp(a)测定试剂盒在正确度、精密度、线性和参考区间等方面均达到性能评价标准,具备临床应用的可行性。     

抗链球菌溶血素O在Cobas c501生化分析仪上的比对试验

目的:对"抗链球菌溶血素O诊断试剂盒"在Cobas c501生化分析仪上进行体外诊断和分析.方法:收集临床"风湿热"患者血标本135份, 用已具备中国注册证和临床常规使用的免疫比浊方法与罗氏诊断产品(上海)有限公司"抗链球菌溶血素O诊断试剂盒"作比对检测, 评价其试验结果.结果:用参比试剂和考核试剂共检测各类标本135份, 参比试剂与考核试剂显著有关(r=0.966, y=1.204x-22.217, R2=0.9333).结论:抗链球菌溶血素O在Cobas c501生化分析仪上的应用与参比试剂间总体的符合情况良好.     

免疫透射比浊法血清白蛋白检测试剂盒的性能验证和临床应用评价

目的对免疫透射比浊法血清白蛋白检测试剂盒进行性能验证和临床应用评价。方法根据美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的标准要求,使用全自动日立生化分析仪7600-020,对该试剂盒的精密度、正确度、检出限、线性范围、干扰实验、参考区间、方法学比对进行验证,并将检测结果和厂家提供的的性能指标进行比较。结果该试剂检测血清白蛋白的批内精密度为1.1%、批间精密度为1.2%,均小于厂家提供的指标;正确度在允许偏倚范围内;检出限为0.152g/L;线性斜率为0.9755,相关系数的平方R2为0.9945,大于0.99符合要求;生物参考区间符合率100%;在厂家说明书标示的干扰物浓度范围内,对检测结果没有明显影响;与溴甲酚绿法做比对实验,相关性回归方程为Y=0.9894X-1.1033,R2为0.9794,在低值结果中两种方法学差异呈非线性分布,无法用校正系数调整。结论免疫透射比浊法血清白蛋白检测试剂盒在7600-020生化分析仪上主要分析性能符合厂家的声明,结果准确可靠,抗干扰能力强,可以开展用于临床检验分析。     

快速诊断用超敏C反应蛋白检测试剂盒的研制及性能评价

目的 研发一种配套床边快速散射比浊仪使用的全血检测超敏C反应蛋白试剂盒.方法 根据乳胶增强散射比浊法的原理,用溯源至NIBSC标准品的工作校准品制定射频卡,含有表面活性剂的试剂1及含有致敏胶乳的试剂2与样品反应后,根据射频卡的标准曲线换算浓度.结果 本试剂盒线性范围0.05 ～ 30mg/L,灵敏度为0.05 mg/L,批内CV值分别为0.85％和0.42％,日间CV值分别为1.85％和1.65％,对血红蛋白、胆红素、甘油三酯有较强的抗干扰能力.结论 本试剂盒与商品化试剂配套生化仪检测系统比对,结果相关性较好,符合临床快速诊断的要求.     

血清总25-羟基维生素D胶乳免疫比浊法检测的方法学评价

目的 验证及评估一种体外定量测定人血清中总25-羟基维生素D[25(OH)D]水平的方法学性能.方法 使用贝克曼AU5800全自动生化分析仪对血清25-羟基维生素D采用胶乳免疫比浊分析法进行检测,并对建立的方法进行准确度、精密度、灵敏度、线性范围、携带污染、抗干扰以及方法学比对等性能评价.结果 该方法准确度偏差和批内、批间精密度均小于10％;空白限及检测限的灵敏度验证在要求范围内,功能灵敏度为3.26ng/mL;在试剂线性范围验证的线性方程中,相关系数R2为0.9983,斜率为1.0152;在抗干扰能力验证中,当胆红素浓度不大于40mg/dL、三酰甘油浓度不大于1000mg/dL、血红蛋白浓度不大于150mg/dL时,对样本检测结果不产生明显的干扰作用;携带污染率经过公式计算为零,在与西门子ADVIA CentaurXP全自动化学发光分析仪进行方法学比对后,两种方法的线性相关方程的相关系数R2为0.972,斜率为0.737,一致性比对中有97％的结果在95％的一致性置信区间内.结论 该方法检测性能良好,具有较好的重复性及精确性,可满足临床需求.     

基蛋生物肌酸激酶同工酶项目性能验证

目的评价基蛋生物Getein1600荧光免疫定量分析仪分析CK-MB的正确度、精密度、线性范围,为POCT的应用提供质量保证。方法参考美国临床与实验室标准化协会(CLSI)EP9-A2文件对基蛋生物Getein1600荧光免疫定量分析仪与雅培I2000全自动免疫分析仪进行方法学比对,验证正确度;采用EP15-A进行精密度验证;采用EP6-A对线性范围进行验证。结果CK-MB在两台仪器的比对结果相关性良好(R=0.9936,P>0.05);CK-MB均值为4.58、10.47、14.99时总CV分别为8.75%、9.29%、6.45%。CK-MB项目线性范围参考品理论值与测试平均值回归系数R2=0.990,在3.06~72.51ng/mL浓度区间呈线性,该分析测量范围通过验证。结论基蛋生物Getein1600荧光免疫定量分析仪性能验证良好,与厂家说明书声明相符。     

荧光免疫层析定量检测髓过氧化物酶方法的建立

目的：通过荧光免疫层析技术初步建立MPO荧光免疫层析定量检测方法。方法：采用羧基荧光微球，利用EDC一步法偶联标记抗体，对过程中EDC量、标记蛋白量与标记时间、保护液进行研究，选出最佳条件，并对线性范围、灵敏度、精密性等进行性能评价。结果：确定偶联过程中EDC 160 μg，标记蛋白125 μg、标记1.5 h；线性范围3.125~600 ng/ml，最低检出限0.9 ng/ml；精密性质控品(高、中、低)批内、批间变异系数均小于10%；通过与国外试剂盒（ELISA法）检测比对45份临床血清，相关性良好，R2=0.979 5。结论：成功建立荧光免疫层析快速定量检测MPO的方法，为冠心病的辅助诊断提供一种技术手段。     

胶乳免疫比浊法检测总前列腺特异性抗原性能评价及其与电化学免疫发光法的一致性评价

目的 对胶乳免疫比浊法(比对方法)检测总前列腺特异性抗原(total prostate specific antigen, tPSA)做性能验证,比较其与电化学免疫发光法(参比方法)检测结果的一致性。方法 依据CNAS-GL037文件对比对方法检测PSA进行准确度、精密度、线性区间的验证;收集2021年5月至8月解放军总医院第二医学中心剩余血清样本225例,分别由比对方法及参比方法检测总PSA,并对检测结果进行一致性评价。用Passing-Bablok回归、一致性相关系数(CCC)、Bland-Altman图分析2种检测方法的一致性和偏差。结果 比对方法检测国家标准物质4个浓度偏倚均在±5%以内,低于厂家声明的15%;重复性和实验室内精密度(CV)不超过2%;临床高低值样本验证1.20～98.12μg/L区间符合临床线性要求。比对方法与参比方法的相关性(r=0.994)、一致性(CCC=0.989)均较好;两种方法检测总PSA平均偏差为-0.617μg/L(-4.36%)。结论 比对方法检测总PSA正确度、精密度、线性区间验证均符合要求,比对方法与参比方法检测总PSA具有较好的相关性和...     

同一厂家两种胱抑素C检测试剂盒的性能验证及其 检测结果的一致性

目的 对同一厂家生产的胶体金增强免疫法（标为A）和胶乳免疫比浊法（标为B）胱抑素C测定试剂盒在日立7600全自动分析仪上的分析性能进行验证,并通过方法比对评估两试剂盒检测结果的一致性。方法 参照我国卫生行业标准WS/T420-2013对两试剂盒的精密度、正确度及线性范围进行验证,其结果与厂家声称的性能指标进行比较;并参照EP9-A2文件对两试剂盒进行方法比对,评估其检测结果的一致性。结果 两试剂盒的批内不精密度均≤3.15%,总不精密度均≤4.81%;5份室间质评样本的检测结果与靶值的偏倚≤10.07%;线性范围内其斜率（b）均在0.97~1.03范围内,截距（a）接近于0,相关系数R2均＞0.995,回收率均在理论值±10%的范围内;两试剂盒的以上性能指标均满足YY/T1230-2014行业标准及试剂厂家声明的性能和质量指标的要求。两试剂盒方法比对结果显示,回归方程为Y=1.03X+0.0181,相关系数R2为0.9956,不同医学决定水平处的预期偏倚均小于我国室间质评要求的1/5。结论 某公司生产的两种Cys-C检测试剂盒的分析性能均满意,且两方法间检测结果一致,均能满足临床实验室的要求。     

胶乳免疫比浊法tPSA、fPSA诊断试剂盒临床应用评价

目的 评估胶乳免疫比浊法总前列腺特异性抗原(total prostate specific antigen, tPSA)、游离前列腺特异性抗原(free PSA,fPSA)测定试剂盒的正确度、精密度、线性范围、抗干扰和方法一致性等性能指标,从而评价其临床应用价值。方法参照WST 420-2013《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》、CNAS-GL037:2019《临床化学定量检验程序性能验证指南》以及NCCLS EP7-A2等文件,对北京九强金斯尔tPSA、fPSA测定试剂盒进行性能验证,并与对应罗氏电化学发光法进行方法学比对。结果 tPSA、fPSA诊断试剂盒测定其企业参考品的偏差均小于±7%;且tPSA、fPSA在原装配套质控品靶值附近的测量重复性精密度和中间精密度的变异系数(CV)均在±5%范围内;在线性范围验证试验中,tPSA、fPSA实测值与线性预期值的相对偏差均小于±10%,且线性回归分析提示其决定系数(R²)分别为0.9977、0.9994。抗干扰试验：当直接胆红素(DBIL)≤18.9mg/dL,血红蛋白(Hb)≤490mg/dL,三酰甘油...     

基于化学发光磁微粒免疫分析技术检测血清Lp- PLA2浓度

目的 建立一种脂蛋白相关性磷脂酶A2(Lp-PLA2)直接化学发光免疫分析方法并进行性能评价。方法 根据双抗夹心法原理,将磁珠-Lp-PLA2抗体1(MAb, Coating)与血清中的Lp-PLA2抗原以及吖啶酯-Lp-PLA2抗体2(MAb, Labeling)反应形成免疫复合物,磁场吸附清洗,加入预激发液和激发液后仪器检测反应过程中相对发光单位(RLU),通过标准曲线方程计算样本中Lp-PLA2浓度,并对试剂各项性能进行评估。结果 本方法空白限为0.5ng/mL,线性范围为5～1 000ng/mL,回收率在85%～115%范围内,批内精密度为2.26%～3.80%,批间精密度为3.82%～4.63%,特异性和抗干扰能力符合要求,与热景Lp-PLA2检测试剂盒比对相关系数r=0.9874。结论 本方法各项性能指标均达到临床检验质量要求,与现有试剂盒比对结果具有较好的一致性,可供广大研究者借鉴参考。     

三种HIV抗原/抗体检测方法对HIV早期感染检测的诊断研究

目的:比较市售的三种HIV抗体试剂盒检测HIV感染的能力,为HIV感染的早期发现提供参考方法。方法:分别采用两种第4代HIV试剂盒(英国Abbott公司生产的Murex HIV Ag/Ab检测试剂:编号为A;荷兰Organon公司Vironostika HIV Uni-FormⅡAg/Ab检测试剂:编号为B);一种第3代HIV试剂盒(英国Abbott公司生产的Murex HIV-1.2.O试剂:编号为C)及P24抗原(ELISA法)检测盒对3 863份血液样本及BBI阳转血清盘进行检测,对两种第4代HIV试剂盒检测的敏感性、特异性进行分析,同时分析三种抗体检测试剂盒对HIV感染窗口期检出的时间是否提前。结果:试剂盒A、B均完全检出54例HIV感染阳性的血液样本,试剂A检出的灵敏度=100%,特异度=99.61%,漏诊率=0,误诊率=0.39%;试剂B检出的灵敏度=100%,特异度=99.37%,漏诊率=0,误诊率=0.63%;试剂A和试剂B检出结果进行比较,结果差异不显著(P0.05);A试剂、B试剂分别较C试剂的检测窗口期提前5.5和3.7 d,但与P24抗原试剂盒的检出窗口期比较却滞后4.25至6.05 d。结论:本研究中的两种第四代HIV抗体试剂盒检测HIV感染的能力较强,灵敏度均达到100%,同时能够将HIV感染检出的窗口期提前,有利于保证用血安全。     

TORCH-IgM捕获法ELISA试剂盒的研制和应用

目的 为了发展TORCH近期感染的IgM酶免疫诊断技术。方法 以抗人IgM McAb包板，加待检血清、TORCH抗原，接着加酶标记的抗TORCH—McAb，最后加3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TNB)显色。用这种自制的捕获法ELISA(C—ELISA)试剂盒和HOPE公司的间接法ELISA(I—ELISA)试剂盒平行检测1196份孕妇血清TORCH-IgM。结果C—ELISA试剂盒检出阳性血清67份，并经其他试验证实为阳性。其中4份用I—ELISA试剂盒检测为阴性。由乳胶凝集试验诊断为类风湿因子(RF)阳性的2份血清，经I—ELISA试剂盒检测为阳性，但经C—ELISA试剂盒检测为阴性。结论 在检测孕妇TORCH—IgM方面，C—ELISA比I-ELISA有更强的敏感性和更高的特异性。C—ELISA试剂盒是诊断TORCH近期感染的良好工具。     

应用ROC曲线评价化学发光法及酶联免疫法对HCV感染的诊断价值

目的 探讨国内五种主流丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)酶联免疫法(ELISA)试剂与进口化学发光法(CLIA)检测性能的可比性及其对HCV感染的诊断价值.方法 应用CLIA及五种ELISA(编号为A、B、C、D、E),同时检测免疫印迹法(RIBA)确认的抗-HCV阳性、阴性血清样本各68例,应用受试者工作特征曲线(ROC)评价其性能指标.结果 CLIA及A、B、C、D、E五种ELISA试剂ROC曲线下面积(AUC)分别为:0.989、0.784、0.945、0.841、0.890、0.883(P ＜0.05),差异有统计学意义;CLIA的敏感性大于五种ELISA试剂(P＜0.05),差异有统计学意义,差异主要在于CLIA 8＞S/CO值≥1标本的符合率较低;几种试剂间特异性无显著性差异(P=0.75).结论 国内五种主流HCV抗体ELISA试剂与进口CLIA对HCV感染均具有较高的诊断价值,利用CHA高敏感性及ELISA的高特异性联合检测抗-HCV,可提高HCV感染的诊断效率.     

酶法测定游离脂肪酸液体试剂盒的稳定性评价

目的评估北京九强生物技术股份有限公司(简称九强)和德国德赛诊断系统有限公司(简称德赛)的酶法游离脂肪酸(FFA)试剂盒的效期稳定性、开瓶稳定性以及热加速稳定性。方法取出两个厂家的三批试剂后同时定标,分别测定其批内不精密度、线性范围、开瓶稳定性和热加速稳定性。结果九强和德赛各批次试剂配套质控品的偏倚均小于5%,质控品及低、中、高浓度血清样本的批内不精密度CV均小于5%;九强和德赛试剂线性范围分别是0.1~2mmol/L和0.01~3mmol/L;九强和德赛试剂在开瓶监测期前后测定质控累计偏差分别为4.26%、8.88%(朗道质控水平1)和5.19%、-1.43%(朗道质控水平2)。结论九强和德赛试剂实时稳定性良好,在效期内各批次包括接近效期末批次的试剂正确度、批内不精密度、线性范围都可满足厂商制定的性能指标要求。两种试剂开瓶稳定性都较好,在机开瓶可稳定4周,但九强试剂比德赛试剂具有更长的有效期,可达18个月。     

人胱抑素C单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备人胱抑素C(Cystatin C,Cys C)的单克隆抗体(McAb),并建立检测人血清Cys C的颗粒增强透射免疫浊度分析法(PETLA).方法:构建人Cys C的原核表达载体pET32a( )/Cys C,纯化Cys C重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,杂交瘤技术制备Cys C的McAb;以自制的McAb包被乳胶颗粒,建立PETIA法测定血清Cys C,并对其分析性能进行初步方法学评价.结果:建立分泌抗Cys C单克隆抗体的杂交瘤细胞株3株,其分泌的McAb为IgG1,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合;将杂交瘤细胞注射于小鼠腹腔,腹水中Cys C McAb效价为1∶4×106;用自制的McAb建立定量测定Cys C的PETIA,方法学评价试验结果证实我们建立的PETIA法,与进口试剂有很好的可比性,具有较满意的方法学性能.结论:成功制备了抗Cys C单克隆抗体,该抗体可用于建立定量检测Cys C的PETIA法.     

两种商品化新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒的应用性能评价

目的评价两种商品化新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)中和抗体检测EIA试剂盒的应用性能。方法使用两种商品化SARS-CoV-2中和抗体ELISA检测试剂盒(A和B), 以疫苗免疫前血清44例、免疫后1个月血清120例、COVID-19患者愈后6个月的恢复期血清64例作为样本盘, 进行中和抗体检测, 同时通过活病毒微量中和试验(micro-neutralization test, micro-NT)检测上述血清样本的50%中和抗体滴度(50% neutralization titer, NT50)。分析两种商品化试剂盒与活病毒中和试验在定性及定量结果上的一致性。结果定性结果分析发现, 以micro-NT检测结果作为标准, A和B试剂盒的阳性符合率分别为97.40%和100.00%;阴性符合率分别为97.30%和95.95%;约登指数分别为0.95和0.96。定量结果分析发现, 对于疫苗免疫后样本, A、B试剂盒与micro-NT检测结果的相关系数分别为0.24(P<0.05)和0.5...     

即时、定量黄曲霉毒素M1荧光淬灭免疫层析检测法建立和评价

目的 利用原创性荧光淬灭免疫层析技术进行黄曲霉毒素M1 (AFMl)快速、定量检测方法的探索.方法 对原创性AFM1检测试纸条从灵敏度、重复性与准确性方面进行性能验证,同酶联免疫吸附法原理的AFM1检测试剂进行比对研究.结果 荧光淬灭免疫层析AFM1检测试纸条最低检测下限为0.075ng/mL,批内变异系数≤7.3％,回收率为65.8％ ～94.1％.AFM1荧光淬灭免疫层析检测试纸条与酶联免疫法检测试剂具有良好的相关性(R2=0.9659).结论 荧光淬灭免疫层析AFM1检测试纸条可灵敏、准确、定量检测牛乳中的AFM1.     

Lp- PLA2酶法测定试剂盒的临床应用评价

目的 验证北京九强金斯尔脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)酶法测定试剂盒的性能指标，评价其是否符合临床需求。方法 根据WS/T492-2016《临床检测定量测定项目精密度与正确度性能验证》、CNAS-GL037:2019《临床化学定量检验程序性能验证指南》及WST402-2012《临床实验室检验项目参考区间的制定》等文件要求，对北京九强金斯尔Lp-PLA2酶法测定试剂盒的正确度、精密度、线性范围、可报告范围和生物参考区间等性能进行验证，并与上海润鸿Lp-PLA2测定试剂盒进行方法学比对。结果 正确度验证中，金斯尔Lp-PLA2酶法测定试剂盒测定厂家工作标准品偏差均小于8%;检测配套高低两水平质控品，每个水平检测的重复性和实验室内精密度的变异系数(CV)均在±2%范围内；在线性区间评价试验中，得到线性回归方程Y=1.0054X-3.3466,R²=0.9998。验证线性区间为58.53～1 181.07U/L,最大可稀释倍数为64倍，临床可报告上限水平为75 588.48U/L。厂家提供的生物参考区间男性：230～728U/L,女性：194～640U/L(18～...     

ELISA差减分析——一种简便实用的免疫逃逸变异HBsAg检测新方法

目的:立足现有实验技术与试剂,建立一项血清免疫逃逸变异HBsAg检测的新方法。方法:以市售ELISA试剂筛选其检测信号在灰区范围的HBV感染者;采用2种不同免疫逃逸变异HBsAg检测能力的ELISA试剂对选留血清进行检测,以"ELISA差减分析"方式确认免疫逃逸变异HBsAg阳性者;以中和实验及雅培化学发光试剂验证检测结果的特异性;并对部分免疫逃逸变异HBsAg阳性者以PCR及直接测序做HBV DNA分析。结果:自10231例受检者中筛选HBsAgELISA检测信号灰区标本244例;复核检测显示G6ELISA、市售ELISA两者对野生HBsAg检测敏感性分别为0.0625ng/ml,与0.125ng/ml;检测阳性率分别为16.80%(G6ELISA)及5.73%(市售ELISA)。ELISA差减分析确定免疫逃逸变异HBsAg阳性者27例,阳性率为11.07%。对部分免疫逃逸变异HBsAg阳性血清做进一步考核,抗HBs中和强度为(84.07%±6.32%),中和率100%(13/13);雅培化学发光试剂复核阳性率为94.4%(17/18,阳性者中包括两份单项G6-ELISA检测最低阳性信号标本);HBV DNA阳性率36.9%(7/19),略低于同期HBsAg低信号阳性者(6/14,42.9%,P0.05);直接测序发现其中"a"区变异3例,分别为P142L、T126A及M133T/K160T;S蛋白亲水区非"a"决定簇变异1例,变异类型为L109Q。结论:ELISA差减分析法能有效地用于部分免疫逃逸变异HBsAg的临床诊断,其诊断能力视所依托试剂免疫逃逸变异检测能力不同而有显著差别。