基于肠道菌群及肠黏膜屏障功能探索百药煎治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的 比较百药煎发酵炮制前后对溃疡性结肠炎（UC）小鼠肠道菌群及肠黏膜中闭合蛋白（Occludin）和闭锁小带蛋白-1（ZO-1）表达的影响，探讨五倍子和百药煎治疗UC的作用机制，指导中医临床区别用药。方法 将50只小鼠随机分为5组，每组10只，随机选取1组为空白组，其余4组采用右旋葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导UC模型；造模完成后，空白组和模型组给予生理盐水，给药组分别给予美沙拉嗪（0.8 g·kg^-1），五倍子水煎液（1.8 g·kg^-1）和百药煎水煎液（2.7 g·kg^-1）灌胃7 d；运用16S rRNA测序技术检测小鼠粪便肠道菌群的变化，苏木精-伊红（HE）染色观察结肠组织病理学变化，免疫组化对比小鼠结肠组织Occludin和ZO-1的表达。结果 UC小鼠肠道菌群丰度、多样性较空白组均明显降低，结肠组织充血增厚，出现明显溃疡，Occludin和ZO-1的表达量显著降低（P<0.01）。经五倍子和百药煎治疗后，菌群丰度及多样性均有提升，门水平主要表现为五倍子组厚壁菌门、变形菌门和放线菌门相对丰度显著增加（P<0.01），拟杆菌门丰度显著减少（P<0.01）；百药煎组变形菌门和放线菌门相对丰度显著增加（P<0.01），厚壁菌门相对丰度增加和拟杆菌门相对丰度减少，但差异均无统计学意义。属水平主要表现为五倍子组拟杆菌属、瘤胃球菌属和Allobaculum相对丰度显著降低（P<0.01），罗斯氏菌属、普雷沃菌属、颤螺旋菌属和帕拉普氏菌属相对丰度明显升高（P<0.05，P<0.01）；百药煎组拟杆菌属和Allobaculum相对丰度明显降低（P<0.05，P<0.01），普雷沃菌属、颤螺旋菌属、罗斯氏菌属和瘤胃球菌属相对丰度显著升高（P<0.01）。与模型组比较，五倍子组和百药煎组结肠组织均明显恢复，充血减轻，仅见散在溃疡；Occludin和ZO-1的表达量升高，且百药煎组的表达量高于五倍子组。结论 百药煎治疗UC效果优于五倍子，其机制可能为通过调节肠道菌群的相对丰度和多样性，改善肠道菌群紊乱状况，提高ZO-1和Occludin的表达，保护肠道黏膜屏障功能，起到减轻肠道炎症的作用。     

健脾合剂对脾虚腹泻型肠易激综合征小鼠肠道菌群的干预研究＊

目的 通过观察健脾合剂对脾虚腹泻型肠易激综合征（IBS-D）模型小鼠的肠道菌群的干预作用，研究健脾合剂对脾虚型IBS-D肠道微生物的影响。方法 将清洁级幼龄 ICR 雄性小鼠 48 只随机分为四组（n=12），并建立脾虚型IBS-D 小鼠模型（3n=36），造模评价成功后，空白组和模型组分别予双蒸水（10 ml·kg^-1）、西药组予复合乳酸菌（0.26 g·kg^-1）、中药组予健脾合剂（16 ml·kg^-1）灌胃，治疗周期均为 14 天。治疗周期结束后，每组随机抽取 5 只小鼠，分别标记为B1、B2、B3、B4组，随后通过 16SrDNA 高通量基因测序法分析治疗前后小鼠肠道菌群的变化。结果 本研究测序深度充分，样品均具有良好的丰富度与多样性。与B1组比较，B2组小鼠的肠道菌群多样性明显降低（P < 0.05）；与B2组比较，B3、B4组小鼠的肠道菌群多样性明显提高（P < 0.05）；与B1组比较，B3、B4组小鼠肠道菌群多样性无明显差异（P > 0.05），说明健脾合剂和复合乳酸菌的干预均能调节脾虚型IBS-D小鼠肠道菌群达到或接近健康小鼠的肠道菌群稳态；且B3与B4组间的小鼠肠道菌群多样性无明显差异（P > 0.05），推测健脾合剂有益生元样作用；健脾合剂干预后，在门水平，Tenericutes、Actinobacteria、Saccharibacteria丰度上调（P < 0.05），Proteobacteria丰度下调（P < 0.05）；在属水平，Alistipes、Ruminiclostridium、Candidatus_Saccharimonas、Rikenella、Intestinimonas、Lachnoclostridium、Oscillibacter、Coprococcus、Faecalibaculum、Enterorhabdus、Peptococcus、Romboutsia、Papillibacter丰度上调（P < 0.05），Lactobacillus、Bacteroides、Parasutterella、Escherichia、Erysipelatoclostridium、Parabacteroides、Candidatus_Stoquefichus丰度下调（P < 0.05）。结论 健脾合剂干预可以增加脾虚型IBS-D小鼠肠道菌群多样性，并调节到与健康小鼠相似的平衡状态。     

刺五加乙酸乙酯部位对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠肠道菌群的影响

目的 观察刺五加乙酸乙酯部位对高脂饮食诱导的载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠的影响,探讨其通过调控肠道菌群从而治疗动脉粥样硬化的作用机制。方法 32只8周龄雄性^-/-小鼠随机分为模型组,瑞舒伐他汀组（10 mg·kg^-1）和刺五加乙酸乙酯部位高、低剂量组（75,25 mg·kg^-1）,每组8只。8只C57BL/6小鼠作为空白组。连续给药8周后,取血测定其血脂水平;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）试剂盒检测小鼠血清中相关指标含量;苏木素-伊红（HE）染色法观察小鼠主动脉病理形态;收集盲肠内容物采用16S rRNA扩增子测序检测肠道菌群。结果 与空白组比较,模型组小鼠斑块面积显著增加并伴有炎性浸润,升高甘油三酯（TG）,总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量,增加炎症因子和血管内皮因子诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）含量,降低高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量;与模型组比较,瑞舒伐他汀组和刺五加乙酸乙酯部位高、低剂量组能改善小鼠主动脉斑块沉积,降低TG,TC,LDL-C,炎症因子和iNOS含量,升高HDL-C含量。与空白组比较,模型组厚壁菌门和变形菌门相对丰度升高,拟杆菌门相对丰度降低。Alpha和Beta多样性分析显示,各组样本能够显著分离,模型组肠道菌群物种总数和丰度较低;与模型组相比,刺五加乙酸乙酯部位可提高有益菌的相对丰度,降低致病菌的相对丰度。结论 刺五加乙酸乙酯部位主要为黄酮类成分,能够通过调控肠道菌群来治疗动脉粥样硬化,改善高脂饮食喂养ApoE^-/-小鼠主动脉病理变化,作用机制可能与其能够降低炎症因子水平、提高抗氧化能力、修复肠道菌群结构紊乱现象有关。     

化瘀解毒方改善子宫内膜异位症小鼠肠道菌群及粪便代谢组

目的 探讨化瘀解毒方（HYJDP）对子宫内膜异位症模型小鼠肠道菌群、粪便代谢物和异位病灶的影响。方法 将正常雌性C57BL/6J小鼠分为正常组（CO）,子宫内膜异位症组（EM）,化瘀解毒方组（CM）,CO和EM组予生理盐水灌胃,CM组予HYJDP汤药灌胃。采用非靶向代谢组学检测小鼠粪便上清中代谢物,运用接受者操作特性曲线（ROC）分析筛选重要差异代谢物;采用16S rRNA高通量测序方法检测小鼠肠道菌群结构,并用Spearman相关系数表示差异代谢物与肠道菌群之间关联程度;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测小鼠肠壁组织、血清及腹腔液中脂多糖（LPS）含量;运用免疫组化检测异位病灶中波形蛋白（Vimentin）和钙黏蛋白（E-cadherin）表达情况。结果 HYJFD能够恢复子宫内膜异位症小鼠肠道菌群紊乱代谢物水平,以homoveratric acid,melilotoside C和physapubescin 3种代谢物水平恢复为特征,homoveratric acid,melilotoside C和physapubescin EM分别与CO,CM比较时变量权重值（VIP）值均超过2且ROC分析中AUC值均>0.9。与EM组比较,HYJDP能够恢复子宫内膜异位症小鼠肠道菌群中Lachnospiraceae_NK4A136_group,Lactobacillus,Blautia等物种丰度（P<0.05）。EM组腹腔液上清LPS水平明显高于CO组（P<0.05）,并明显高于CM组（P<0.05）。子宫内膜异位灶Vimentin 和E-cadherin蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论 HYJFD能够改善子宫内膜异位症小鼠肠道内环境,降低体内LPS水平,减轻异位灶纤维化,是治疗子宫内膜异位症的有效药物。     

滋肾丸对db/db糖尿病模型小鼠肠道屏障功能及骨骼肌转录组的影响

目的 探索滋肾丸对自发型糖尿病模型db/db小鼠糖脂代谢的作用,并基于肠道屏障功能和骨骼肌转录组测序结果,探索其在体内改善糖尿病作用的可能机制。方法 使用液相色谱-质谱联用技术（LC-MS/MS）对滋肾丸进行成分分析。将6周龄db/db小鼠16只分为模型组、滋肾丸组,将野生型小鼠8只作为正常组。滋肾丸灌胃给药共6周,期间测量小鼠空腹血糖、体质量、进食量。检测小鼠血清总胆固醇（TC）及甘油三酯（TG）水平,检测小鼠空腹胰岛素水平并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。给药结束后,取小鼠骨骼肌、回肠组织,行苏木素-伊红（HE）染色,同时使用免疫组化法检测回肠紧密连接蛋白闭合蛋白（Occludin）和闭锁连接蛋白-1（ZO-1）的表达。使用转录组学测序检测小鼠骨骼肌转录本,并对差异表达基因进行富集分析。结果 从滋肾丸中识别出多种中药活性成分。与正常组比较,模型组小鼠空腹血糖、体质量、TC、TG和HOMA-IR显著升高（P<0.01）;与模型组比较,滋肾丸给药显著降低db/db小鼠的空腹血糖、体质量、TC、TG、HOMA-IR（P<0.01）,而对进食量差异无统计学意义。与正常组比较,模型组小鼠的骨骼肌出现脂质沉积,同时回肠结构改变,肠道Occludin和ZO-1的蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;与模型组比较,滋肾丸改善了小鼠骨骼肌和回肠的病理改变,显著升高回肠Occludin和ZO-1的蛋白表达（P<0.01）。转录组提示,滋肾丸可能改善了小鼠骨骼肌的代谢,并增加了胰岛素敏感性。结论 滋肾丸可以改善db/db小鼠的糖脂代谢,此作用可能和其对肠道屏障功能的保护和对骨骼肌代谢相关基因的转录调控有关。     

枳实总黄酮对5-氟尿嘧啶诱导的肠黏膜炎小鼠肠道菌群失调的影响

目的 研究枳实总黄酮对5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）诱导的肠黏膜炎和肠道菌群的影响及作用机制。方法 雄性昆明小鼠随机分为对照组、模型组及枳实总黄酮低、中、高剂量（50、100、200 mg/kg）组和洛哌丁胺（0.3 mg/kg组）,ip 5-FU（50 mg/kg）5 d诱导肠黏膜炎模型,第6天开始,各给药组ig相应药物,1次/d,连续7 d,观察小鼠体质量、饮食量、饮水量、腹泻评分、胸腺指数、脾脏指数、结肠形态、隐窝深度;采用苏木素-伊红（HE）染色考察小鼠结肠组织病理变化;采用ELISA法检测小鼠结肠组织中白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、IL-1β和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平;检测小鼠结肠组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活性和丙二醛（maleic dialdehyde,MDA）水平;采用细菌16S rRNA基因V3～4区高通量测序技术分析小鼠肠道菌群变化。结果 与模型组相比,枳实总黄酮组小鼠体质量和饮食量增加,饮水量减少,腹泻评分降低,胸腺指数和脾脏指数显著增加（P<0.05、0.01）,结肠组织损伤减轻,结肠长度和隐窝深度显著增加（P<0.05、0.01）,结肠组织中促炎细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著降低（P<0.05、0.01）,SOD和GSH-Px活性显著升高（P<0.05、0.01）,MDA水平显著降低（P<0.01）。16S rRNA基因测序结果显示,模型组小鼠肠道菌群多样性和丰度降低,枳实总黄酮组小鼠肠道菌群多样性和丰度增加。门水平主要表现为厚壁菌门相对丰度升高;属水平上拟杆菌属Bacteroidetes、unidentified_Clostridiales、拟普雷沃菌属Alloprevotella、unidentified_Ruminococcaceae和乳酸杆菌属Lactobacillus 5个菌属相对丰度升高。结论 枳实总黄酮能够有效改善5-FU所致的小鼠肠黏膜炎,其机制可能与抗氧化、抗炎、调节肠道菌群有关。     

普洱茶素II改善高脂血症ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化作用机制研究

目的 研究普洱茶素II对高脂血症诱发动脉硬化ApoE基因敲除小鼠（ApoE^-/-）的治疗效果及作用机制。方法 ApoE^-/-小鼠通过喂养高脂饲料建立动脉粥样硬化动物模型,造模成功后将小鼠随机分为对照组、模型组、阿托伐他汀（30 mg/kg）组和普洱茶素II低、高剂量（50、100 mg/kg）组,给药6周后检测小鼠血浆总胆固醇（total cholesterol,TC）、三酰甘油（triglycerides,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）和非高密度脂蛋白胆固醇（non-high density lipoprotein cholesterol,non-HDL-C）水平,以及主动脉流出道斑块面积等指标的差异。体外培养人脐静脉内皮细胞HUVEC和人外周血单核细胞THP-1,检测普洱茶素II对氧化低密度脂蛋白（oxidized low density protein,ox-LDL）诱发单核与内皮细胞黏附的影响,利用Western blotting对蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）/核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）/血管细胞黏附因子（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）通路相关蛋白表达进行检测。结果 普洱茶素II显著抑制了高脂饮食诱导ApoE^-/-小鼠的体质量、肝脏质量、肝脏指数、附睾脂肪质量和附睾脂肪指数（P＜0.05、0.01）,降低血浆TC、TG、non-HDL-C水平（P＜0.05、0.01）,升高HDL-C水平（P＜0.05）,减少主动脉流出道脂质沉积。体外实验证实,普洱茶素II显著抑制HUVEC与THP-1细胞间的黏附（P＜0.05）,抑制ox-LDL诱导的HUVEC细胞中VCAM-1、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1,MCP-1）和Akt/NF-κB通路相关蛋白表达（P＜0.05、0.01）。结论 普洱茶素II能够显著改善ApoE^-/-小鼠的肥胖、脂代谢紊乱、主动脉斑块沉积,通过调控Akt/NF-κB/VCAM-1通路抑制内皮细胞与单核细胞的黏附,进而抑制动脉粥样硬化的发生与发展。     

肉苁蓉苯乙醇苷对ALD小鼠肠道黏膜屏障和肠道菌群的影响

目的 探讨肉苁蓉苯乙醇苷（CHPhGs）对酒精性肝病（ALD）小鼠肠道黏膜屏障和肠道菌群影响。方法 将36只C57BL/6N雌性小鼠,随机分为正常组、正常给药组、模型组和CHPhGs低、中、高剂量组（175、350、700 mg·kg^-1）,每组6只。采用利伯-德卡利（Lieber-Decarli）乙醇液体饲料建立ALD小鼠模型。正常给药组和CHPhGs低、中、高剂量组按相应剂量每天灌胃给予CHPhGs。生化仪检测血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、甘油三酯（TG）和总胆固醇（TC）水平;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、脂多糖（LPS）、脂多糖结合蛋白（LBP）、D-乳酸（D-LA）和二胺氧化酶（DAO）水平,肝脏LBP水平;比色法检测肝脏中TG和TC水平;肝脏行油红O和苏木素-伊红（HE）染色;电镜观察空肠上皮细胞微观结构;空肠和结肠道行HE和阿利新蓝-过碘酸-雪夫（AB-PAS）染色,及黏蛋白2（Muc2）免疫组化。收集正常组、正常给药组、模型组和CHPhGs高剂量组肠道内容物,进行测序。结果 ALD模型建立成功,与正常组比较,模型组血清中ALT、AST和TG水平,以及肝脏TG和TC水平均明显升高（P<0.05）;病理结果提示,与正常组比较,模型组肝脏细胞出现了明显的脂肪变性。与模型组比较,CHPhGs低、中、高剂量组的血清中TG和肝脏TG和TC水平均明显降低（P<0.05）;CHPhGs高剂量组血清中ALT、AST、TNF-α、IL-1β、LPS和LBP明显降低（P<0.05）;CHPhGs高剂量组脂肪变性肝细胞数量明显减少,空肠上皮细胞微绒毛结构基本完整,结肠Muc2表达减少,肠道菌群出现了明显改变（P<0.05）。与正常组比较,异杆菌（Allobaculum）在模型组出现了显著上调（P<0.01）;与模型组比较,嗜黏蛋白阿克曼菌（Akkermansia）在CHPhGs高剂量组中明显上调（P<0.05）。Akkermansia与Allobaculum的丰度呈负相关（r=-0.701,P<0.01）。结论 CHPhGs对ALD的肠道屏障损伤有改善作用,可能是通过调节肠道有益菌Akkermansia和潜在有害菌Allobaculum的丰度和结构,影响肠道黏液稳态来发挥作用。     

茱萸丸抑制氧化三甲胺介导的ROS/TXNIP/NLRP3信号通路诱导血管内皮细胞焦亡

目的 研究茱萸丸对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的影响及其相关机制。方法 采用高脂饲料喂养雄性低密度脂蛋白受体敲除（low density lipoprotein receptor knockout,LDLR^-/-）小鼠诱导AS模型,造模周期为12周。造模成功的50只LDLR^-/-小鼠随机分成模型组及茱萸丸低、中、高剂量（130.54、261.08、552.16 mg/kg）组和阿托伐他汀（10.40 mg/kg）组,每组10只,C57BL/6J小鼠10只作为对照组。给药12周后,采用生化法检测小鼠血清三酰甘油（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）水平;苏木素-伊红（hematoxylin-eosin,HE）、Masson、油红O染色观察小鼠主动脉的病理学改变;ELISA检测血清中白细胞介素-18（interleukin-18,IL-18）、IL-1β、活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性;超高液相色谱串联质谱法（ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UHPLC-MS/MS）检测小鼠血浆中三甲胺（trimethylamine,TMA）、氧化三甲胺（trimethylamine oxide,TMAO）含量;16S rRNA技术检测小鼠粪便中肠道菌群物种组成差异;荧光探针法检测主动脉ROS的荧光强度;免疫荧光及Western blotting检测小鼠主动脉硫氧还蛋白相互作用蛋白（thioredoxin interacting protein,TXNIP）和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白（NOD like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3）蛋白表达;qRT-PCR检测主动脉硫氧还蛋白（thioredoxin,TRX）、TXNIP、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein,ASC）、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）mRNA表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平升高（P＜0.01）,HDL-C水平显著下降（P＜0.01）,主动脉内膜大面积增厚,形成明显的泡沫细胞,脉壁胶原蛋白沉积增多,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO水平显著升高（P＜0.01）,SOD活性显著降低（P＜0.01）,Chao1、Ace以及observed species指数降低（P＜0.01）,拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度显著下降（P＜0.01）,主动脉中ROS含量增加（P＜0.01）,TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平升高（P＜0.01）,TRX、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平升高（P＜0.01）。与模型组比较,茱萸丸组血清TG、TC、LDL-C水平显著降低（P＜0.05、0.01）,HDL-C水平显著升高（P＜0.01）,主动脉斑块、血管壁泡沫细胞及胶原蛋白沉积均呈现不同程度的改善,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO水平显著降低（P＜0.05、0.01）,SOD活性显著升高（P＜0.01）,Chao1、Ace以及observed species指数均明显升高（P＜0.01）,拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度升高（P＜0.05、0.01）,厚壁菌门菌群丰度降低（P＜0.05）,主动脉中ROS含量减少（P＜0.05、0.01）,TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平显著降低（P＜0.01）,TRX、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平显著降低（P＜0.01）。结论 茱萸丸能够显著抑制LDLR^-/- AS小鼠主动脉病理改变、调节肠道菌群中有益菌和有害菌的相对丰度,减少TMAO生成,抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,改善炎症反应,减轻内皮细胞损伤,从而发挥抗AS的作用。     

中药复方配伍理论下生血宝复方化学成分溶出规律研究

目的 通过检测7种配伍及7个单味组成药的单个化学成分与总响应成分的溶出量及变化情况,探讨生血宝复方配伍理论背后的科学内涵。方法 根据生血宝复方中君臣佐使组方规律将各单味药重新进行配伍分组,建立16种成分（原儿茶酸、原儿茶醛、红景天苷、芍药苷、毛蕊异黄酮苷、二苯乙烯苷、木犀草苷、毛蕊异黄酮、特女贞苷、白藜芦醇、木犀草素、蟛蜞菊内酯、芒柄花素、旱莲苷A、大黄素、大黄素甲醚）同时含量测定的超高效液相色谱（UPLC）-二极管阵列检测器（PDA）方法学,并运用总量统计矩等方法进行定性定量分析。结果 7种配伍分组（君、臣、佐使、君加臣、君加佐使、臣加佐使、复方）16个成分的总溶出量前3位的是E（君+佐使）、复方组、C（佐使）,分别为2.956 3、2.884 6、2.007 2 mg/g,与复方指纹图谱相似度最高前3位是D（君+臣）、B（臣）和墨旱莲,其值分别为0.767、0.754、0.711。结论 从中药化学成分溶出规律角度探讨了中药复方配伍理论科学内涵,研究结果揭示了生血宝复方中各成分的溶出度受复方配伍规律的影响与支配,同时也为生血宝复方制剂的现代化研究奠定了基础。     

葛根芩连汤成分间自组装纳米粒改善伊立替康所致肠毒性作用研究

目的 基于中药经典复方葛根芩连汤（Gegen Qinlian decoction,GQD）合煎过程中成分间相互作用,探讨其代表性成分葛根素、小檗碱、汉黄芩苷、黄芩苷、甘草酸、巴马汀体外结合形成自组装纳米粒的性能及改善伊立替康（CPT-11）所致肠毒性作用的药理活性,为来源于中药汤剂的活性成分间的自组装纳米粒提供参考。方法 采用溶剂挥发法分别制备小檗碱-汉黄芩苷自组装纳米粒（berberine-wogonoside nanoparticles,Ber-Wog NPs）、小檗碱-葛根素自组装纳米粒（berberine-puerarin nanoparticles,Ber-Pue NPs）、黄芩苷-葛根素自组装纳米粒（baicalin-puerarin nanoparticles,Bai-Pue NPs）、黄芩苷-巴马汀自组装纳米粒（baicalin-palmatine nanoparticles,Bai-Pal NPs）、黄芩苷-甘草酸自组装纳米粒（baicalin-glycyrrhizic acid nanoparticles,Bai-GA NPs）5种组分自组装纳米粒,测定其粒径分布、多分散指数（polydispersity index,PDI）、包封率、载药量,采用透射电子显微镜（transmission electron microscope,TEM）观察其微观形貌,紫外光谱和傅里叶红外光谱考察成分间相互作用;考察5种组分自组装纳米粒缓解CPT-11致小鼠迟发性腹泻的药理作用。结果 组分间按1∶1投药比,制备所得Ber-Wog NPs、Ber-Pue NPs、Bai-Pue NPs、Bai-Pal NPs、Bai-GA NPs的平均粒径分别为（198.09±4.64）、（216.29±5.31）、（173.53±5.46）、（185.75±3.38）、（242.10±12.30）nm;PDI分别为0.14±0.06、0.13±0.06、0.19±0.03、0.19±0.01、0.21±0.05,TEM观察均为球状纳米粒,除Ber-Wog NPs外,其余4种纳米粒包封率均较高。紫外可见吸收光谱和红外光谱提示,5种纳米粒的组装均是通过分子间非共价键作用形成;分子对接模型进一步提示,其形成机制与分子间静电相互作用或氢键相关。药效试验结果显示,制剂组可缓解小鼠体质量降低,腹泻指数降低,结肠组织炎症因子肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin,IL-1β）含量降低,IL-10含量升高;苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining,HE染色）显示结肠黏膜组织病变显著缓解。结论 GQD来源的几种代表性成分可高效自组装形成纳米粒,且具有类似GQD缓解CPT-11所致肠毒性作用,为研究传统中药汤剂药效物质基础形态与药效的相关性提供了新思路。     

基于指纹图谱及化学计量学研究不同发酵程度建曲中成分变化

目的 采用指纹图谱技术结合化学计量学分析方法,探究不同发酵程度建曲中化学成分的差异性,筛选差异性标志物,为规范建曲炮制工艺、建立饮片质量标准提供参考。方法 采用Waters SunFire C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%乙酸水溶液为流动相梯度洗脱,体积流量1.0m L/min,检测波长280 nm,柱温30℃,进样体积10μL,建立不同发酵时间建曲HPLC指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件（2004A版）进行相似度评价,标定共有峰并进行指认及归属;以共有峰峰面积为指标,利用层次聚类分析法（hierarchicalclusteranalysis,HCA）对不同发酵时间建曲进行区分,再借助正交偏最小二乘-判别分析法（orthogonal partial least square-discriminant analysis,OPLS-DA）筛选出不同发酵程度建曲间差异性标志物;建立多指标成分含量测定方法,对多个差异性标志物进行定量分析。结果 不同发酵时间建曲指纹图谱相似度大于0.900,共标定46个共有峰,指认并归属21个成分;HCA结果显示9...     

多中心切割二维液相色谱法同时测定九味熄风颗粒中10种成分

目的 采用在线多中心切割二维液相色谱法,建立同时测定九味熄风颗粒中10种成分的含量测定方法。方法 第一维采用Acquity BEH C18(100 mm×3.0 mm,1.7μm)为色谱柱,第二维色谱柱为X Select HSS T3(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相均采用甲醇-乙腈（95∶5）混合溶液-磷酸水体系,梯度洗脱;体积流量分别为0.2、1.0 mL/min;柱温35℃。结果 同时测定了九味熄风颗粒中次黄嘌呤、天麻素、有机酸类（原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸）、环烯醚萜苷类（马钱苷酸、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、当药苷）10种成分的含量,各成分在考察的质量浓度范围内线性关系良好（r≥0.999）,精密度RSD均小于2%,重复性RSD均小于5%,供试品溶液室温24 h内稳定,平均加样回收率为97.45%～104.82%,13批制剂中次黄嘌呤、天麻素、原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、马钱苷酸、隐绿原酸、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、当药苷质量分数分别为0.034～0.111、1.224～2.078、0.032～0.055、0.010～0.066、0.202～0.341、1.052...     

清肺汤中8种有效成分同时测定及其指纹图谱研究

目的采用HPLC-VWD同时测定清肺汤市售制剂中绿原酸、苦杏仁苷、栀子苷、橙皮苷、黄芩苷、汉黄芩苷、甘草酸铵、五味子醇甲等指标成分的含量并建立清肺汤的指纹图谱,表征与区分不同来源的清肺汤市售制剂。方法采用Agilent Technologies Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,3.5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,柱温35℃,体积流量0.6 mL/min,进样量10μL,同时对指标成分的含量和指纹图谱进行检测。采用指纹图谱相似度评价、热图聚类分析等方法,表征与区分不同来源清肺汤市售制剂。结果 8种成分专属性、线性关系(r20.9998)、精密度(RSD≤1.85%,n=6)、重复性(RSD≤1.82%,n=6)、稳定性(RSD≤1.49%,48h)均良好;加样回收率为(93.19±1.93)%～(102.36±4.17)%(n=6)。含量测定结果显示清肺汤市售制剂中指标成分的每日服用量在不同厂家中波动较大,如黄芩苷的波动范围59.85～224.05mg;但在相同厂家的不同剂型中波动不明显,如港香兰药厂2种制剂中黄芩苷质量为140.00～142.47 mg;同时指纹图谱相似度计算结果均大于0.945,表明不同来源的清肺汤市售制剂指纹图谱相似度较高。结论该方法准确可靠、具有良好的重复性,可用于测定清肺汤市售制剂中8种成分的含量及建立清肺汤的指纹图谱,通过成分每日服用量热图聚类分析与相似度评价,能表征与区分不同来源的清肺汤市售制剂。     

油浴模拟砂炒过程中印乌碱的结构转化途径及转化产物毒性研究

目的研究印乌碱在砂炒(油浴模拟)过程中的结构转化途径并比较印乌碱及其转化产物的毒性。方法采用HPLC法筛选出印乌碱发生结构转化的温度和时间参数;通过柱色谱法和NMR、MS等波谱法,分离、鉴定出印乌碱的砂炒转化产物;采用心脏毒性实验比较原型成分印乌碱及其转化产物的毒性。结果通过比较不同炮制温度、时间样品的HPLC色谱图,筛选出印乌碱在160～180℃,加热10～30 min时发生结构转化;分离、鉴定出砂炒产物mithaconitine;II导联心电图(electrocardiogram,ECG)表明,0.06mg/kg印乌碱可引起正常大鼠出现室性早搏(ventricularprematurebeat,VPB)、室性心动过速(ventricular tachyrhythmia,VT)等心律失常现象;mithaconitine在该剂量下未引起大鼠典型的心律失常ECG。结论砂炒过程中,印乌碱的C-8位脱去乙酰基,转化为14-benzoylpseudaconine;接着,14-benzoylpseudaconine的C-8位、C-15位发生脱水反应转化为mithaconitine,达到砂炒减毒的目的。     

柿叶中黄酮类化合物及提取工艺研究进展

柿叶来源于柿科柿属植物柿Diospyros kaki的干燥叶。柿叶中的主要化学成分有黄酮、三萜等,其中黄酮类化合物是中药制剂脑心清片的主要活性成分,在脑心清片治疗心脑血管疾病的过程中起关键作用,因此柿叶中的黄酮类成分具有较高的经济和药用价值。针对柿叶中的黄酮类化合物结构类型及柿叶黄酮的不同提取工艺进行综述,以期为柿叶中黄酮成分的深入开发和应用提供参考依据。     

经典名方温经汤标准汤剂HPLC指纹图谱建立及9种成分含量测定

目的建立经典名方温经汤标准汤剂HPLC指纹图谱,同时对其中9种成分进行含量测定,为其质量控制提供参考。方法采用Kromasil C18色谱柱(250 mm~3 4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量0.8 mL/min,采用多波长切换法,检测波长分别为220、280、320、380 nm,柱温25℃,对15批温经汤标准汤剂进样分析,采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012年版)并结合聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)与偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)对结果进行评价,同时进行含量测定。结果建立了温经汤标准汤剂HPLC指纹图谱,15批样品相似度在0.902～0.992,共标定出18个共有峰,指认出其中9个色谱峰(即2号峰没食子酸、5号峰芍药苷、7号峰甘草苷、8号峰阿魏酸、9号峰芹糖异甘草苷、11号峰异甘草苷、14号峰桂皮醛、15号峰甘草酸铵、16号峰丹皮酚),CA、PCA及PLS-DA将15批样品分为2类。定量分析条件方法学考察结果良好,9个成分加样回收率在94.91%～108.16%;15批样品中没食子酸、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、芹糖异甘草苷、异甘草苷、桂皮醛、甘草酸铵及丹皮酚的质量分数分别为10.7～31.3、95.8～228.4、18.6～62.4、3.3～8.3、4.8～18.7、2.8～10.6、13.7～108.2、83.9～292.3、31.1～125.5 mg/g。结论建立的HPLC指纹图谱结合多成分同时含量测定的分析方法简便稳定,重复性好,可为经典名方温经汤物质基准的质量评价提供依据。     

代谢组学在中医药领域的应用与展望

代谢组学作为系统生物学的重要组成部分，与中医药基础理论的“整体观”具有一致性，通过现代分析技术手段检测生物体系内代谢产物的变化，更准确、直接地反映生物体系的终端和表型信息，揭示中医药治疗复杂疾病的作用机制。将中医药研究与代谢组学方法相互结合是中医药现代化进程的重要之举，为探求中医药研究新思路和新方法奠定重要基础。通过对近10年相关研究成果进行归纳，概述代谢组学在中医证候、中药作用机制、中药安全性评价和中药质量控制等方面的应用和研究进展，分析和总结代谢组学在中医药领域中的研究方法，并提出代谢组学在中医药研究中的思考和展望。     

三物黄芩汤的研究进展及其质量标志物（Q-Marker）预测

三物黄芩汤（Sanwu Huangqin Decoction,SHD）始载于《金匮要略》,由黄芩、苦参、地黄3味药组成,为滋阴清热之经典方剂。主要含有黄酮类、生物碱类、环烯醚萜苷类及苯乙醇苷类等化合物,具有抗肿瘤、抑菌、抗病毒、抗过敏、抗白塞病等药理作用,临床多用于发热性疾病、红斑性肢痛症、自身免疫性肝病、皮肤性疾病等。通过对SHD的处方考证与历史沿革、化学成分、药理作用及现代临床应用等进行系统分析,并在此基础之上,依据中药质量标志物（quality marker,Q-Marker）的五原则对SHD的Q-Marker进行预测,黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A,苦参中苦参碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐果碱、槐定碱、三叶豆紫檀苷、苦参酮,地黄中梓醇、地黄苷D可初步确定为SHD的Q-Marker,为完善SHD的制剂过程中质量溯源体系及其质量评价与控制体系奠定一定的基础。