福建省食品污染物监测O157∶H7大肠杆菌的调查与分析

目的:对福建省食品中O157∶H7大肠杆菌进行分离调查,并对分离菌株的O157抗原编码基因(rfbO157)和H7抗原编码基因(flicH7)以及毒力基因(志贺毒素基因stx、粘附抹平因子基因eaeA、溶血素基因hlyA)进行检测。方法:按照《全国食品污染物检测相关实验室操作手册(食源性致病菌部分)》的要求,用EC肉汤增菌,快诊金卡筛选,接种CHROM agar O157显色平板,血清和生化系列证实。结果:1 380件食品中分离到O157∶H7大肠杆菌4株,分别为福州的生猪肉和水产品蚶中各1株、尤溪的冻鸡肉2株,检出率0.29%。结论:福建省食品中存在O157∶H7大肠杆菌的污染,虽检出率较低,这可能与福建不是O157∶H7大肠杆菌的流行地区有关,但监测是一项长期的工作,防患于未然,同时福建省也将O157∶H7大肠杆菌列入了食品安全预警系统的一部分。     

福建省O157∶H7大肠杆菌毒力及特征基因的初步研究

[目的]对福建省分离的80株E. Coli O157∶H7菌株进行毒力及特征基因的检测分析.[方法] 应用聚合酶链反应 (PCR),以志贺毒素基因 (stx)、粘附抹平因子基因 (eaeA)、溶血素基因(hlyA)、O157抗原编码基因 (rfbO157) 和H7抗原编码基因 (fliCH7) 为靶基因进行检测.[结果] 福建省分离的O157∶H7菌株毒力基因携带率为6.25%(5 / 80). 菌株毒力基因图谱为stx+eaeA+hlyA和eaeA+hlyA.rfb O157 基因阳性与O157血清型符合率为100 %.[结论] 福建省分离的O157∶H7菌株毒力基因携带率 (6.25%) 低于江苏省疾病高发地区 (85.7%,P<0.05).     

福建省O157：H7大肠杆菌毒力及特征基因的初步研究

目的 对福建省分离的80株E.coli O157：H7菌株进行毒力及特征基因的检测分析。方法 应用聚合酶链反应（PCR），以志贺毒素基因（stx)，粘附抹平因子基因（eaeA)，溶血素基因（hlyA)，O157抗原编码基因(rfbO157)和H7抗原编码基因（fliCH7)为靶基因进行检测。结果 福建省分离的O157：H7菌株毒力基因携带率为6．25％（5／80）。菌株毒力基因图谱为stx eaeA hlyA和eaeA hlyA。rfb O157基因阳性与O157血清型符合率为100％。结论 福建省分离的O157：H7菌株毒力基因携带率（6．25％）低于江苏省疾病高发地区（85．7％，P＜0．05）。     

从农村耕牛粪便中检出产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7

目的：调查东阳市家畜、家禽中O157：H7的携带状况,并进一步了解分离到的1株STEC O157：H7的分子生物学特性。方法：随机采集全市各乡镇的家畜、家禽粪便及其生鲜肉样品,进行大肠埃希菌O157：H7的检测,应用O157和H7特异性抗血清凝集试验进行菌株血清型的鉴定;选用ATB全自动微生物鉴定仪和VITEK 2-COMPACT进行常规生化及药敏试验;使用PCR检测O、H抗原编码基因和SLTl、SLT2、hly、eaeA 4种毒力基因。结果：在109份样品中,分离出1株经细菌生化鉴定为大肠埃希菌O157,血清型为O157：H7的菌株;使用PCR检测到O157：H7的O、H抗原编码基因和毒力基因SLT2、hly、eaeA,但未检测到毒力基因SLTl。结论：从东阳市的一头农村耕牛粪便中分离到1株STEC O157：H7,提示疾控中心要加强主动监测,及时发现可能发生的疫情,通过有效干预,防范肠出血性大肠杆菌O157：H7所致食源性疾病的发生。     

河北省食品中大肠杆菌O157∶H7分布及毒力研究

目的:掌握河北省食品中大肠杆菌O157∶H7分布状况及菌株的毒力研究.方法:运用免疫磁珠富集进行分离培养,并用PCR进行毒力基因分析.结果:共采集食品530份,检出O157∶H7大肠杆菌5株,总检出率为0.9%.其中,以生牛、羊肉检出率较高,分别为6.7%和4.4%.5株O157∶H7菌株中,4株带有SLT2、eae和Hly 3种毒力基因,1株带有SLT1、SLT2、eae和Hly 4种毒力基因.结论:掌握食品中O157∶H7分布及生物学特性对预防食源性疾病暴发有重要意义.     

徐州地区73株大肠杆菌O157:H7的遗传多样性分析

目的了解不同来源大肠杆菌O157:H7菌株遗传标志物的分布频率。方法对1999年徐州地区O157:H7暴发疫情中分离到的73株O157:H7菌株,用PCR方法对stx1和stx2阳性菌株分别进行亚型分型;对stx2阳性菌株检测q933和q21基因;用RT-PCR进行tir等位基因检测。结果 73株菌中除1株tir(255A)和tir(255T)均为阴性外,其余菌株均携带tir(255T)基因;10株携带stx1,亚型分型检测显示均为stx1a;全部分离株均为stx2阳性,其中携带stx2a13株(17.81%),携带stx2c 60株(82.19%)。食品中未检出stx2a;病人分离株中stx2a检出率高于动物分离株,差异有统计学意义(P0.01),食品、动物分离株中stx2c检出率(100.00%、87.30%)较高。13株(17.81%)菌株为单q933阳性,60株(82.19%)为单q21阳性。食品中未检出q933,病人分离株中检出率高于动物分离株(P0.01);q21在病人分离株中未检出,食品、动物分离株检出率较高(100.00%、87.30%)。结论不同来源的O157:H7分离菌株的遗传标志存在多样性,这可能有助于从外环境来源菌株中识别具有潜在人类疾病风险的基因型。     

广东省食品中0157:H7大肠杆菌分离株的生化特征、毒力因子与耐药性的探讨

目的了解广东省食品中O157H7大肠杆菌分离株中生化特征、毒力因子的携带与耐药情况.方法采用免疫磁珠富集法进行O157H7大肠杆菌分离,对O157H7大肠杆菌分离株进行生化、噬菌体、血清学鉴定后,应用PCR技术检测其毒力因子,应用纸片法(K-B法)进行药敏试验.结果从277份样品中分离出2株O157H7大肠杆菌,总检出率为0.72%;对这2株O157H7大肠杆菌分离株进行PCR毒力因子的测定,其中1株为携带eaeA、Hly和SLT2毒力因子的强毒株,而另1株分离株未检出毒力因子.药敏试验结果显示,这两个O157H7大肠杆菌分离株对青霉素类、四环素类、磺胺类、喹诺酮类、大环内酯类5大类的部分抗生素有多重耐药性.结论广东省食品中存在O157H7大肠杆菌强毒株的污染.O157H7大肠杆菌多重耐药株的出现,提示应关注我国畜牧养殖业抗生素的使用情况.     

河北省食品中大肠杆菌O157：H7分布及毒力研究

目的:掌握河北省食品中大肠杆菌O157:H7分布状况及菌株的毒力研究。方法:运用免疫磁珠富集进行分离培养,并用PCR进行毒力基因分析。结果:共采集食品530份,检出O157:H7大肠杆菌5株,总检出率为0.9%。其中,以生牛、羊肉检出率较高,分别为6.7%和4.4%。5株O157:H7菌株中,4株带有SLT2、eae和H ly 3种毒力基因,1株带有SLT1、SLT2、eae和H ly 4种毒力基因。结论:掌握食品中O157:H7分布及生物学特性对预防食源性疾病暴发有重要意义。     

广东省食品中O157:H7大肠杆菌分离株的生化特征、毒力因子与耐药性的探讨

目的:了解广东省食品中O157:H7大肠杆菌分离株中生化特征、毒力因子的携带与耐药情况。方法:采用免疫磁珠富集法进行O157:H7大肠杆菌分离,对O157:H7大肠杆菌分离株进行生化、噬菌体、血清学鉴定后,应用PCR技术检测其毒力因子,应用纸片法(K-B法)进行药敏试验。结果:从277份样品中分离出2株O157:H7大肠杆菌,总检出率为0.72%;对这2株O157:H7大肠杆菌分离株进行PCR毒力因子的测定,其中1株为携带eaeA、H ly和SLT2毒力因子的强毒株,而另1株分离株未检出毒力因子。药敏试验结果显示,这两个O157:H7大肠杆菌分离株对青霉素类、四环素类、磺胺类、喹诺酮类、大环内酯类5大类的部分抗生素有多重耐药性。结论:广东省食品中存在O157:H7大肠杆菌强毒株的污染。O157:H7大肠杆菌多重耐药株的出现,提示应关注我国畜牧养殖业抗生素的使用情况。     

12株疑似O157:H7大肠菌PCR鉴定研究

目的:对12株疑似O157:H7大肠菌采用PCR法进行鉴定。方法:利用单一PCR和多重聚合酶链反应(mPCR)检测不同来源菌株志贺样毒素(stx1和stx2)、溶血素(hly)、粘附抹平因子(eaeA)、β-葡糖醛酸糖苷酶(u idA)、O157抗原编码(rfbE)、H7鞭毛抗原编码(fliC)基因。结果:4株大肠菌rfbE和fliC基因检测为阳性,确认为EHEC O157:H7,其中1株菌株扩增出全部毒力基因,另3株菌株扩增出除stx1外其它全部毒力基因;2株大肠菌rfbE基因检测阳性,确认为O157:H7-大肠菌;其它均为非O157:H7其它大肠菌。结论:PCR技术的应用能对可疑O157:H7大肠菌进行有效鉴定与分析,应成为今后病原学鉴定的主要技术手段。     

龙岩市1999～2005年O157大肠杆菌监测研究

[目的]为了解龙岩市O157大肠杆菌人的感染、食品污染以及动物和媒介昆虫带菌情况.[方法]1999～2005年采集腹泻病人粪便、动物粪便以及各类食品、苍蝇、养殖场污水等标本,mEC增菌后用SMAC进行分离,纯化菌株经生化鉴定、血清分型、毒力及特征基因检测等.[结果]共检测2212份标本,检出O157大肠杆菌29株,阳性率为1.31%.其中猪粪为3.42%,牛粪为2.62%,牛肉为2.33%,鸡肉为2.06%,养殖场污水为2.27%.其余标本均未检出目的菌.O157:H718株,O157:NM 6株,O157:H?5株.对12株O157:H7,进行了rfbO157和fliCH7基因的测定,结果rfbO157均为阳性,而fliCH7均为阴性.对18株(O157:H7 14株、O157:NM 3株、O157:H?1株),进行了SIT2、SLT1、eaeA、hly4种毒力基因检测,结果仅2株O157:H7 eaeA hly阳性,1株O157:H7 hly阳性,其余菌株均为阴性.检出菌株对环丙沙星、氟嗪酸、丁胺卡那、庆大霉素敏感.检出ESBLs 2株.[结论]我市畜、禽中存在O157大肠杆菌,未检出含有SLT2、SLT1毒素的菌株,未发现O157大肠杆菌病例和食物中毒患者,应加强宿主动物O157大肠杆菌监测.     

PCR检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

目的研究快速、特异、灵敏的检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法,并比较单一PCR和多重PCR对检测灵敏度的影响.方法选择O157∶H7的O抗原、H鞭毛抗原及SLT1和SLT2毒素基因特异的4对引物,分别或共同进行PCR扩增,检测40株O157∶H7和非O157∶H7菌株,将细菌按10+1～10+6稀释后比较PCR的检测灵敏度.结果所有O157∶H7菌株均在497 bp和625 bp处出现O157抗原基因和H7抗原基因产物,其产毒株在484 bp和(或)210 bp处出现SLT2和(或)SLT1基因产物,非O157∶H7菌株PCR结果均为阴性;单一PCR检测灵敏度为150 CFU/PCR反应,多重PCR为＞1 500 CFU/PCR反应.结论在经过增菌后,多重PCR比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便,为产毒和非产毒O157∶H7的诊断提供了新的手段.     

郑州市2005年肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染状况调查

目的：了解郑州市肠出血性大肠杆菌O157∶H7在腹泻病人中的检出情况和宿主动物带菌及毒力基因情况.方法：对采集的宿主动物和腹泻病人粪便及食品应用免疫磁珠富集分离法进行大肠杆菌O157∶H7分离和鉴定.结果：郑州市内共发现3例肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染病例,首次从腹泻病人中检出产毒O157∶H7菌株,采集5种以上动物粪便标本共计475份,从牛粪（247份）中分离到16株O157∶H7,检出率为6.48%,从羊粪（33份）中分离到3株O157∶H7,检出率为9.10%,并检出3株产毒O157∶H7菌株.采集5类市售食品共146份,未分离到O157∶H7.结论：郑州市存在发生肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染暴发或流行的潜在危险.     

动物性食品中大肠杆菌O157:H7多重PCR检测方法的建立

目的:大肠杆菌O157:H7是近年来引发食物中毒事件的重要病原菌,对其建立灵敏、特异的多重PCR检测方法,是确保饮食安全,预防和控制大肠杆菌O157:H7传播的重要手段。方法:根据大肠杆菌O157:H7rfbE和fliC抗原基因的保守序列设计了2对引物,建立并优化了特异性检测大肠杆菌O157:H7的多重PCR体系,扩增产物分别为678 bp(rfbE)和560 bp(fliC)。结果:建立的多重PCR方法可以快速特异地检测出猪肉、牛肉等动物性食品中的大肠杆菌O157:H7污染,人工污染猪肉检测限达到2.2×102cfu/ml。结论:选择两对特异引物的多重PCR方法可简便、快速、特异地实现对动物性食品中大肠杆菌O157:H7的检测。     

2005～2007年中国食品中疑似O157大肠埃希菌的鉴定及毒素基因的检测

目的对中国2005～2007年食源性疾病监测网分离疑似O157大肠埃希菌进行鉴定,了解各种不同类型监测食品中大肠埃希菌O157的分布及毒力基因的携带情况。方法运用API20E生化试剂条进行初步鉴定,使用血清分型和PCR方法确定菌株,并检测毒力基因。结果(1)通过API20E生化初步鉴定共获得154株疑似O157大肠埃希菌。(2)通过血清学方法和特异基因的检测,共确定89株大肠埃希菌O157,其中42株是O157:H7(47%),其余的菌株为O157:NM和O157:hund(未确定型)。(3)毒力基因的检测:42株O157:H7和6株O157:NM携带eaeA+hlyA基因;共29株菌携带stx基因,主要分布在不发酵山梨醇O157:H7菌株中。(4)监测的生羊肉、生牛肉、生猪肉、生鸡肉、蔬菜沙拉等食品中均检出了携带stx基因的O157:H7。结论鉴定结果显示中国部分监测食品中均分离到有一定程度致病力的大肠埃希菌O157。     

厂东省食品中O157：H7大肠杆菌分离株的生化特征、毒力因子与耐药性的探讨

目的：了解广东省食品中O157：H7大肠杆菌分离株中生化特征、毒力因子的携带与耐药情况。方法：采用免疫磁珠富集法进行O157：H7大肠杆菌分离，对O157：H7大肠杆菌分离株进行生化、噬菌体、血清学鉴定后，应用PCR技术检测其毒力因子，应用纸片法（K—B法）进行药敏试验。结果：从277份样品中分离出2株O157：H7大肠杆菌，总检出率为0．72％；对这2株O157：肿大肠杆菌分离株进行PCR毒力因子的测定，其中1株为携带eaeA、Hly和SLT2毒力因子的强毒株．而另1株分离株未检出毒力因子。药敏试验结果显示，这两个O157：H7大肠杆菌分离株对青霉素类、四环素类、磺胺类、喹诺酮类、大环内酯类5大类的部分抗生素有多重耐药性。结论：广东省食品中存在O157：H7大肠杆菌强毒株的污染。O157：肿大肠杆菌多重耐药株的出现，提示应关注我国畜牧养殖业抗生素的使用情况。     

大肠埃希菌O157：H7特异基因检测与毒力基因分析

目的：对江苏省2000和2001年分离的经血清玻片凝集试验初筛为大肠埃希菌O157：H7（E.coliO157:H7)的菌株进行O157O抗原及H7抗原特异性基因检测，了解2000年监测点宿主动物分离O157菌株毒力基因携带率及毒力基因图谱。方法：用聚合酶链反应法检测O157特异基因，H7特异基因，多重引物聚合酶链反应法检测VT1，VT2，eaeA,hly等毒力基因并进行分析。结果：134株血清玻片凝集试验初筛为E.coliO157:H7的菌株经特异基因检测确定为E.coliO157的占72.4%(97/134),E.coliO157:H7的仅为29.1%(39/134)；非O157菌株占26.9%(36/134)，有44.3%(58/134)的O157菌株鞭毛抗原不是H7。2000年宿主动物分离菌株，经特异基因检测为非O157的不携带毒力基因（0/18）；为E.coliO157:H?的菌株，毒力基因携带率为10.7%(3/28)；确定为E.coliO157:H7的菌株，毒力基因携带率高达93.1%(27/29)。且毒力基因型以VT2 eaeA hly为主。结论：特异性基因检测鉴定E.coliO157:H7，可大大减少血清玻片凝集试验的误判，结合毒力基因检测，可分析E.coliO157:H7菌株毒力基因型的变化，对制定切实有效的防制对策控制E.coliO157:H7流行具有重要意义。     

漳州市首次检出O157∶H7大肠杆菌

[目的] 建立食品污染微生物监测点,调查O157∶H7大肠杆菌在生肉类食品中污染状况. [方法]采用 E.Coli O157∶H7检测卡对样品初筛,对阳性样品再进行分离培养鉴定. [结果] 从生猪肉和生羊肉中分离出2株O157∶H7 大肠杆菌,生肉类食品检出率3.7%. [结论] 首次证实了漳州市有O157∶H7大肠杆菌的存在,动物性食品是该菌感染人类的主要来源,应引起有关部门高度重视.     

MPCR-DHPLC检测大肠杆菌O157研究

目的:建立多重PCR(Multiplex PCR,MPCR)结合变性高效液相色谱(Denaturing High-PerformanceLiquid Chromatography,DHPLC)检测大肠杆菌O157的方法,并了解食品中分离的O157毒力基因携带情况。方法:针对大肠杆菌O157的rfbE、flicH7、eaeA、stx1、stx2基因设计引物,其单一PCR扩增产物在DHPLC上出现的色谱峰为标准色谱峰,建立MPCR-DHPLC检测方法。结果:MPCR扩增产物在DHPLC上的色谱峰,在位置和峰型上与标准色谱峰有较好的对应性。DHPLC能分离大小4个碱基差异的DNA片段。4株分离株检测结果,O157-1出现rfbE、flicH7、eaeA基因色谱峰,O157-2、O157-3、O157-4只出现rfbE基因色谱峰。结论:建立的MPCR-DHPLC方法可用于大肠杆菌O157及其毒力基因的检测。     

解旋酶依赖性等温扩增快速检测O157:H7及其毒力基因的研究

目的建立一种快速、特异的检测大肠杆菌O157:H7及其毒力基因的解旋酶依赖性等温扩增法(HDA)。方法以大肠杆菌O157:H7的溶血素基因(hly)、粘附抹平因子(eae)和O抗原编码基因(rfb)为扩增对象,设计3对特异性HDA引物,通过优化条件后进行灵敏度和特异度试验,并与普通PCR法比较。结果 HDA法从标准菌株和实验室分离株中均扩增出hlyA、eaeA和rfb基因片段,产物大小分别为100、93和109 bp,而其他非大肠杆菌O157:H7的扩增结果均为阴性。通过对各梯度大肠杆菌O157:H7菌悬液的检测表明HDA法可以检测的最低菌液浓度为3.0×101cfu/ml,该法与普通PCR法灵敏度相当。结论本HDA法具有较高的灵敏度和特异度,可快速、高效地检出大肠杆菌O157:H7菌和其毒力基因,而且对试验仪器要求低,特别适合应急处置现场和基层检验机构作为临床大肠杆菌O157:H7感染的辅助诊断。