NF-κB介导促红细胞生成素神经细胞保护作用的研究

目的：观察促红细胞生成素（EPO）对谷氨酸（Glu）诱导的大脑皮质神经元损伤的保护作用和核因子-κB（NF-κB）介导的细胞内信号转导机制。方法：采用1日龄Wistar大鼠皮层神经细胞体外原代培养技术,建立Glu兴奋性毒性神经细胞损伤模型。实验分为正常对照组、Glu组、EPO组和吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC,NF-κB活化阻断剂）组。倒置显微镜下观察细胞的形态学改变;MTT法测定细胞存活率;流式细胞术测定细胞凋亡率评价细胞损伤程度。结果：Glu处理后神经细胞形态明显受损,EPO组神经细胞形态趋于正常,PDTC组细胞形态与Glu组相似;与正常对照组相比,Glu组神经细胞存活率明显下降、凋亡率明显升高,差异均有统计学意义（P〈0.01）;而与Glu组相比,EPO组神经细胞存活率明显增高下降、凋亡率明显下降,差异均有统计学意义（P〈0.01）。与EPO组相比,PDTC组细胞存活率明显下降、凋亡率明显升高,差异均有统计学意义（P〈0.01）,这些变化与Glu组相似。结论：EPO对Glu诱导的大脑皮质神经元损伤的具有保护作用,其胞内信号转导机制涉及到NF-κB的活化。     

梓醇对谷氨酸诱导SD大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的梓醇对谷氨酸诱导SD大鼠海马神经元损伤的影响。方法将培养7～9d的SD大鼠海马细胞进行NSE鉴定,然后随机分为:正常对照组;谷氨酸损伤组(Glu);谷氨酸损伤前予梓醇组(CAT+Glu)。采用倒置显微镜观察细胞形态学变化,噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,流式细胞术测定细胞凋亡率。结果与正常对照组比较,0.1mmol·L-1谷氨酸作用于海马神经元24h,出现明显细胞损伤,细胞存活率下降,培养液中LDH含量明显增加,细胞凋亡率增高(<0.01);0.2、1.0、5.0mg·L-1的梓醇可不同程度的改善谷氨酸损伤引起的神经细胞形态的改变,提高细胞存活力,减少LDH的漏出,降低细胞凋亡率,并呈一定的剂量依赖性。结论梓醇对谷氨酸诱导的海马神经细胞损伤有保护作用。     

骨髓间充质干细胞通过上调EPO表达减轻缺氧损伤引起的PC12细胞凋亡

 目的：观察骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）对氯化钴（CoCl2）诱导的PC12细胞缺氧损伤及凋亡的影响并探讨其作用机制。方法：将PC12细胞分为以下几组：空白对照组、CoCl2处理组、BM-MSCs-siCTL+CoCl2处理组和BM-MSCs-siEPO +CoCl2处理组。应用MTT、流式细胞术（FCM）及Hoechst  33258染色法检测BM-MSCs对CoCl2诱导的细胞活性下降及凋亡的影响。采用逆转录PCR（RT-PCR）和Western blotting检测BM-MSCs的促红细胞生成素（EPO）表达情况。同时通过RT-PCR法检测PC12细胞的Bcl-2与Bax表达情况。此外应用分光光度法检测caspase-9和-3活性。结果：MTT结果显示BM-MSCs共培养能够提高PC12细胞活力, 0.6 mmol/L CoCl2单独处理组24 h和48 h细胞存活率仅为（43.0±6.4）%和（33.8±5.7）%,1∶15细胞比BM-MSCs共培养24 h和48 h后细胞存活率明显上升,分别为（77.9±3.8）%和（75.2±9.7）%（P＜0.01）。RT-PCR 和Western blotting显示0.6 mmol/L CoCl2处理24 h和48 h明显诱导BM-MSCs的EPO表达上调,而EPO siRNA可完全抑制BM-MSCs的EPO表达（P＜0.01）。FCM及Hoechst 33258结果表明CoCl2处理能诱导PC12细胞损伤及凋亡,BM-MSCs-siCTL与PC12细胞共培养可有效抑制CoCl2的细胞毒性作用,减少细胞缺氧性损伤及凋亡,而EPO siRNA可明显阻断BM-MSCs的抗细胞凋亡作用（P＜0.01）。 RT-PCR结果显示BM-MSCs共培养组PC12细胞的Bcl-2表达较CoCl2处理组明显升高,而Bax表达较CoCl2处理组明显降低;EPO siRNA明显抑制BM-MSCs介导的Bcl-2表达升高和Bax表达降低（P＜0.01）。分光光度法结果显示BM-MSCs-siCTL共培养组的caspase-9和-3活性较CoCl2处理组明显降低,而BM-MSCs-siEPO共培养组的caspase-9和-3活性较BM-MSCs-siCTL共培养组明显增加（P＜0.01）。结论：BM-MSCs共培养能抑制CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,其细胞保护作用的机制可能与其上调EPO的表达有关。     

13-甲基十四烷酸对氧反常诱导大鼠胚脑皮质神经元凋亡和形态学损伤的保护作用

目的探讨13-甲基十四烷酸(13-MTD)对氧反常诱导大鼠胚脑皮质神经元凋亡和形态学损伤的保护作用。方法原代培养大鼠胚脑皮质神经元,并以神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫荧光法鉴定。将神经细胞随机分为正常对照组、模型组和不同剂量13-MTD组,每组设6个复孔。氧糖剥夺3h/再复氧糖24h(OGD3h/R24h)方法制备神经元氧反常模型,于再复氧糖即刻分别给予13-MTD 5、10、20、40mg/L干预。倒置相差显微镜下观察神经细胞形态改变;磺酰罗丹明B(SRB)法测定神经细胞存活率;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色法观察神经细胞凋亡;透射电子显微镜下观察神经元超微结构的改变。结果与正常组比较,模型组神经元呈现病理改变,神经细胞存活率显著下降(P0.01),细胞凋亡显著增多(P0.01),神经元超微结构损伤明显,可见核内染色质边集或凝聚成块状,胞质内细胞器明显减少甚至消失,线粒体肿胀、嵴断裂甚至消失等;与模型组比较,不同剂量的13-MTD可有效改善上述变化(P0.05,P0.01),使神经元形态及其超微结构损伤明显恢复,且存在剂量依赖关系,以13-MTD 20mg/L改善更显著(P0.01)。结论 13-MTD对氧反常诱导的大鼠胚脑皮质神经元损伤具有明显保护作用,其可能通过改善神经细胞形态和线粒体超微结构损伤,减少神经元凋亡,提高细胞存活率。     

大鼠心肌缺血再灌注损伤中心肌细胞凋亡与NF-κB p65、iNOS的表达

目的:通过观察用吡咯烷二硫氨基甲酸脂(PDTC)干预后的大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)过程中细胞凋亡以及NF-κB p65与iNOS的表达,探讨NF-κB与iNOS在大鼠心肌缺血再灌注损伤中细胞凋亡进程中的调控作用及机制。方法:制造大鼠心肌缺血再灌注模型。采用透射电镜方法和TUNEL法观察检测凋亡心肌细胞并计算凋亡指数;采用免疫组织化学(SP法)检测心肌细胞NF-κB p65的表达以及采用免疫荧光方法检测心肌细胞iNOS表达。结果:缺血再灌组(IR组)和PDTC+IR组细胞凋亡情况及NF-κB与iNOS表达均显著强于假手术对照组(Sham组)(P0.05),而且PDTC+IR组的细胞凋亡情况及NF-κB与iNOS表达明显弱于IR组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:在大鼠心肌缺血再灌注损伤中存在明显的细胞凋亡;IR可诱发NF-κB的活化以及iNOS的生成,而NF-κB的活化以及iNOS的生成均对心肌细胞的凋亡起促进作用。PDTC能有效降低NF-κB的表达,改善细胞氧自由基清除功能,降低细胞凋亡率,减轻MIRI损伤。     

促红细胞生成素：中枢神经系统中一个新的信号转导分子

中枢神经系统可分泌促红细胞生成素 (Epo) ,神经细胞表达大量的Epo受体 ,神经元的许多功能受Epo调控。Epo是中枢神经系统中一个新的信号转导分子 ,介导Epo受体信号通路。Epo对细胞内钙浓度有明显的调节作用 ,Epo还可以抑制神经细胞的凋亡 ,促进神经细胞的存活     

促红细胞生成素对同型半胱氨酸导致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察促红细胞生成素（EPO）对同型半胱氨酸（Hcy）导致的血管内皮细胞损伤是否具有保护作用。方法采用不同浓度（1.25、2.5、5、10、20mmol/L）的Hcy处理人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,观察细胞的损伤情况,建立Hcy诱导的内皮细胞损伤模型,然后采用不同浓度（0.1、1、10、100U/ml）的EPO进行预处理,观察细胞的损伤情况。通过MTT法测定细胞存活率,ELISA法检测细胞上清IL-6含量,Hoechst33258染色检测细胞凋亡来评价细胞损伤情况。结果 Hcy对HUVEC有损伤作用,并且随浓度增加损伤作用更明显。EPO可增加细胞存活率,抑制Hcy诱导HUVECIL-6的产生,抑制细胞凋亡。结论 EPO对Hcy导致的内皮细胞损伤具有一定的保护作用。     

系统性红斑狼疮模型小鼠脾脏细胞凋亡及可能机制

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)模型小鼠的脾脏细胞凋亡及其相关调控机制.方法:采用ConA活化的同系脾脏细胞诱导BALB/c小鼠SLE,通过检测其外周血自身抗体、肾组织病理学改变确定SLE小鼠模型诱导成功.脾脏细胞凋亡的检测采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法,免疫细胞化学法检测脾脏细胞Bcl-2和NF-кB的表达.结果:ConA活化的同系脾脏细胞成功诱导BALB/c小鼠发生SLE,与盐水对照组和未活化脾脏细胞组比较,SLE模型小鼠脾脏细胞凋亡率明显降低,Bcl-2和NF-кB的表达均增加(P<0.01).结论:SLE模型小鼠脾脏细胞凋亡率降低,可能是通过Bcl-2和NF-кB的表达增加所致.     

促红细胞生成素对β淀粉样蛋白诱导大鼠海马损伤的保护作用以及对大鼠学习记忆的影响

目的:探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)大鼠脑损伤的保护机制。方法:采用大鼠海马内注射β淀粉样蛋白制作AD模型。将SD大鼠随机分为正常对照组、生理盐水对照组及EPO处理组。Aβ1-40大鼠海马内注射造模,在生理盐水对照组大鼠行脑室立体定向注射生理盐水,EPO处理组则行脑室立体定向注射重组人促红细胞生成素(rHu-EPO)。观察手术后7 d海马CA1区细胞凋亡变化,及缺血造模后4周大鼠学习和记忆力的变化。结果:EPO处理组大鼠海马CA1区凋亡细胞较生理盐水对照组减少(P<0.01),EPO处理组大鼠学习记忆能力明显高于生理盐水对照组(P<0.05)。结论:EPO可以抑制Aβ1-40诱导海马CA1区细胞凋亡,保护AD大鼠学习记忆功能。     

EPO对体外培养的神经干细胞增殖、分化和凋亡的影响

为探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对大鼠神经干细胞增殖、分化和凋亡的影响,本研究采用显微解剖、机械吹打和无血清悬浮培养方法分离培养大鼠神经干细胞,向培养基中添加不同剂量的EPO,通过计数干细胞克隆形成率、四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测法检测神经干细胞的增殖情况,用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色和激光扫描共聚焦显微镜检测细胞凋亡率;向有血清分化培养基中加入不同剂量的EPO,以神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibril-lary acidic protein,GFAP)免疫荧光染色检测神经干细胞的分化情况。结果显示:与对照组相比,加入>5U/mlEPO后神经干细胞克隆形成率和MTT检测OD值明显增高,而凋亡率显著下降,分化培养后NSE阳性细胞较对照组明显增多。结果提示:EPO可促进大鼠神经干细胞的增殖,抑制其凋亡,促进其向神经元方向分化。     

H2O2对大鼠骨骼肌卫星细胞凋亡和线粒体膜电位的影响及EPO的保护作用

目的: 探讨过氧化氢(H2O2)对大鼠骨骼肌卫星细胞(SMSC)凋亡和线粒体膜电位(MMP)的影响以及促红细胞生成素(EPO)的保护作用。方法: 取体外培养的骨骼肌卫星细胞,随机分为正常对照组、H2O2组、H2O2+EPO组,采用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率和MMP的平均荧光强度,Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学变化。结果: H2O2组凋亡发生率最高,为(22.13±1.79)%,经10、20、40 kU/L浓度的EPO预处理后凋亡率分别为(16.47±2.53)%、(4.97±0.55)%、(2.93±0.47)%;H2O2干预组MMP最低,为9.70±0.09,经10、20、40 kU/L浓度的EPO预处理后MMP分别为12.67±0.32、27.90±0.66、44.53±0.93,对照组凋亡率为(1.93±0.57)%,MMP为51.37±0.64;在H2O2干预组和低剂量EPO预干预组,Hoechst 33258染色呈现明显的凋亡征象。结论: EPO可抑制H2O2诱导的细胞凋亡并稳定线粒体膜电位。     

核因子-κB激活与细胞凋亡在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用

目的:探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺组织中核因子-κB(NF-κB)活化及细胞凋亡与肺损伤的关系.方法:SD大鼠随机分为对照组、SAP组、二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)预处理组.建立各组模型后取肺组织行光镜和电镜下病理观察,免疫组织化学观察NF-κB的表达,TUNEL法观察细胞凋亡情况.结果:对照组细胞结构基本正常,仅极少量NF-κB活化,且只有少量肺泡间质细胞和肺泡上皮细胞凋亡.SAP组可见Ⅱ型肺泡上皮细胞及血管内皮细胞有线粒体肿胀、基膜增宽、核染色质边集、间质水肿、电子密度升高等病理改变.NF-κB表达及细胞凋亡指数均明显升高,并呈动态变化,6h达高峰,NF-κB表达及凋亡细胞主要见于中性粒细胞、单核/巨噬细胞、支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞及部分血管内皮细胞.PDTC预处理组病理改变减轻,NF-κB表达及细胞凋亡指数均明显下降,但仍高于对照组.结论:SAP时肺组织NF-κB活化并通过诱导细胞凋亡参与肺损伤.PDTC可能通过抑制NF-κB活性及细胞凋亡,对肺损伤具有保护作用.     

模拟微重力影响EPO诱导K562细胞向红系分化的机制研究

目的:航天飞行性贫血现象的机制尚不清楚。本实验利用第4代细胞旋转培养系统(RCCS-4)模拟微重力,研究其对促红细胞生成素(EPO)诱导培养K562细胞向红系分化的影响及其机制。方法:实验分为地面培养组(Control组)、EPO诱导组(EPO组)、模拟微重力组(MG组)和模拟微重力+EPO组(MG+EPO组),利用RCCS-4模拟微重力,分别在地面和模拟微重力环境下,采用EPO诱导培养K562细胞。采用联苯胺染色法观察各组K562细胞向红系分化情况;流式细胞术检测K562细胞CD71抗原表达水平,Western-blotting方法检测K562细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白(AKT)及红系特异核蛋白转录因子-1(GATA-1)表达水平,流式细胞术检测K562细胞凋亡情况。结果:联苯胺染色阳性率比较,MG组和MG+EPO组明显低于EPO组(P<0.01);CD71抗原表达水平为MG+EPO组明显低于EPO组(P<0.01);AKT/GATA-1蛋白表达量MG组低于Control组,MG+EPO组低于EPO组(P<0.01);各组K562细胞凋亡率检测发现MG组和MG+EPO组(70.25±0.17%)较Control组和EPO组明显增加(P<0.01)。结论:模拟微重力可以通过下调红系分化相关蛋白AKT及GATA-1表达和诱导细胞凋亡来抑制EPO诱导K562细胞向红系分化。     

EPO/NGF对大鼠背根节压迫性损伤的治疗作用

目的:外源EPO/NGF通过其抗痛敏作用,抗凋亡作用及对钠离子通道的影响来探索和研究其在背根神经节(DRG)慢性压迫中的治疗作用。方法:制作多节段DRG慢性压迫大鼠模型,并给予外源EPO或NGF,进行行为学检测,测量大鼠的机械痛阈值和热痛阈值,Tunnel方法原位检测组织中细胞凋亡情况,通过免疫荧光技术,RT-PCR和Western Blot技术检测c-jun,c-fos,NGF,Nav1.8的表达情况。结果:与对照组相比,模型组的大鼠从建模第1 d起痛阈就开始下降,并持续到13 d;与模型组相比,EPO/NGF治疗组的机械痛阈值和热痛阈值得以升高,DRG神经细胞的损伤和凋亡现象减轻或者恢复。NGF的表达由于受到压迫损伤而降低,在给予外源NGF或EPO治疗后表达升高,Nav1.8的表达与NGF相一致。结论:EPO和NGF在神经系统中具有一定的抗凋亡作用,镇痛作用及促进钠离子通道Nav1.8的表达,并且痛阈的降低与Nav1.8表达下降具有一定相关性。     

促红细胞生成素抑制大鼠体外循环术致急性肾损伤时NF-κB P65和ICAM-1表达

 目的 研究大鼠体外循环（CPB）术致急性肾损伤时肾脏核转录因子-κB（ NF-κB ）P65和内皮细胞表面黏附分子-1（ICAM-1）表达水平变化及促红细胞生成素(EPO)对其的抑制作用。方法 30只雄性SD大鼠随机分为3组（每组n=10）:Sham组、CPB组和EPO组, Sham组建立CPB模型,不行体外转流,其余2组行体外转流,EPO组于转流前在预充液中加入3 000U/kg的EPO。分别于肝素化后转流前 (T0)和转流结束后(T1)、术后0.5 (T2)、1 (T3)、2 ( T4)和24 h (T5)检测血清肌酐水平, 术后24h取肾脏组织,HE染色观察组织形态,并分别采用免疫组化和western-blot法检测肾组织中NF-κB P65和ICAM-1表达。结果 术后CPB组各时间点与sham组比较血清肌酐水平均明显升高（P<0.05）,与CPB组相比,EPO组的肌酐水平明显下降（P<0.05）;CPB组肾组织中NF-κB p65及ICAM-1表达水平均明显高于sham组（P<0.05）,EPO组NF-κB p65及ICAM-1表达水平均低于CPB组（P<0.05）;病理学检查显示EPO组的肾小管上皮细胞肿胀、胞质内空泡形成、间质出血明显减轻。结论EPO可抑制大鼠体外循环后肾脏NF-κB P65及ICAM-1表达,从而减轻大鼠体外循环引起的肾脏损伤。     

NF-κB在发育鼠戊四氮反复点燃癫痫形成中的作用

目的：用NF-κB阻滞剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)阻断NF-κB的表达，探讨核因子κB(NF-κB)在发育鼠戊四氮(PTZ)点燃癫痫形成过程中的作用。方法:生后10 d（P10）Wistar大鼠72只，随机分为PTZ组、PDTC＋PTZ组及生理盐水对照组3组，制备戊四氮反复点燃癫痫模型。观察各组大鼠行为学改变、海马各区细胞形态及细胞计数、NF-κB表达、5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞数和苔藓纤维发芽等指标。结果:(1)NF-κB表达，PTZ组显著高于对照组及PDTC+PTZ组（P<0.01）；(2)海马神经细胞计数，PTZ组齿状回（DG）区颗粒细胞较对照组显著增加(P<0.05)；PDTC+PTZ组CA1、CA3和门区神经元数较PTZ组均明显减少（P<0.05）；(3)DG区BrdU阳性细胞数，PTZ组和PDTC+PTZ组均较对照组显著增加（P<0.01）；PDTC＋PTZ组DG区BrdU阳性细胞数目明显较PTZ组少（P<0.01）；NF-κB吸光度值与BrdU阳性细胞数/颗粒细胞数相关性分析呈正相关，具有统计学意义（P<0.01）；（4）苔藓纤维发芽，PDTC＋PTZ组和PTZ组均有苔藓纤维发芽，两组比较没有显著差异。结论:NF-κB在发育鼠癫痫中发挥重要作用，促进海马神经元发生，保护海马神经细胞，但对苔藓纤维发芽无明显作用。     

大鼠重症急性胰腺炎肺损伤中PDTC预处理对NF-κB表达及细胞凋亡的调节作用

目的观察核因子-κB(NF-κB)在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰、肺组织内的表达及肺组织内细胞凋亡情况。方法 SD大鼠60只,分为对照组、SAP组、二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)预处理组。5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱发大鼠SAP模型。SP法观察NF-κB在胰、肺组织内的表达情况,TUNEL法检测肺组织内细胞凋亡情况。结果 SAP组各时间点NF-κB在胰、肺组织内的阳性表达水平与对照组相比均明显增加(P<0.01),PDTC预处理组各时间点NF-κB阳性表达水平与SAP组相比均明显减弱(P<0.05)。SAP组肺组织内凋亡指数高于相对应的对照组(P<0.05),PDTC预处理组凋亡指数均低于相对应的SAP组(P<0.05)。结论 NF-κB的激活和凋亡细胞的增多是加重肺损伤的重要因素之一。PDTC对SAP肺损伤的保护作用可能与抑制NF-κB激活及肺组织内细胞凋亡相关。     

寡聚态β-淀粉样肽1～42可通过胶质-炎症反应损伤神经元

目的 观察寡聚态β-淀粉样肽1～42(Oligo-Aβ1～42)诱导的小胶质细胞条件培养液对Neuro-2A神经元细胞的影响,探讨炎症介质在胶质介导的神经元损伤中的作用.方法 以Oligo-Aβ1～42诱导BV-2细胞,制备小胶质细胞条件培养液,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定Neuro-2A神经细胞的活力,AO-EB染色荧光显微镜观察计数细胞凋亡和坏死率;酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定小胶质细胞培养上清中的肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)及前列腺素E2(PGE2)水平;Griess法检测上清NO水平;免疫印迹法测定小胶质细胞胞质环氧合酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达水平.结果 Oligo-Aβ1～42诱导的小胶质细胞条件培养液(Aβ-CM)明显引起Neuro-2A神经细胞损伤,MTF法显示神经元活力随Aβ诱导剂量的增加而逐渐下降(P<0.01),并且浓度为1.0μmol/L和5.0μmol/L的Aβ-CM组比同浓度Aβ单纯组神经细胞的存活率更低,分别为(53.75±3.95)%和(34.61±2.72)%(Aβ-CM组与Aβ单纯组相比P<0.05,P<0.01);联合作用组(Aβ-CM+Aβ)神经细胞存活率下降更明显,两因素方差分析显示,Aβ诱导的小胶质细胞条件培养液与单纯Aβ(1.0μmol/L)有协同作用[F(3.39)=53.16,P<0.001].AO-EB荧光观察计数显示,低浓度(0.2μmol/L)Oligo-Aβ1～42诱导的小胶质细胞条件培养液可引起神经细胞发生凋亡性损伤,较高浓度(1.0～5.0μmol/L)Oligo-Aβ1～42诱导不仅引起神经细胞凋亡,还引起细胞发生坏死性改变.进一步研究显示,低浓度(0.2～5.0μmol/L)的Oligo-Aβ1～42明显增加小胶质细胞培养上清中TNF-α、PGE2、NO的产量及胞质COX-2和iNOS蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),呈现一定的量效关系.结论 低浓度Oligo-Aβ1～42可通过胶质-炎症反应加剧神经元损伤,其作用可能与Oligo-Aβ1～42诱导小胶质细胞产生炎症介质及胞质内COX-2、iNOS蛋白表达水平增高有关.     

促红细胞生成素对急性心肌梗死大鼠的心肌HIF-1α与Survivin表达的影响

目的探讨促红细胞生成素对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与生存素(Survivin)蛋白表达的影响。方法将36只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、急性心肌梗死组和促红细胞生成素(EPO)治疗组。急性心肌梗死组及EPO治疗组通过冠状动脉左前降支结扎建立急性心梗模型。模型建立4周后,利用心脏超声评价心功能,原位末端凋亡法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况,采用免疫组织化学方法与Western blot方法检测各组大鼠心梗区域心肌HIF-1α与Survivin蛋白的表达。结果与急性心肌梗死组大鼠相比,EPO治疗组大鼠心功能明显改善,左室射血分数明显增加,左室舒张末期内径(LVEDD)明显缩小(P0.01)。急性心肌梗死组大鼠比假手术组心肌细胞凋亡数明显升高,心肌HIF-1α蛋白表达量显著升高,Survivin蛋白表达量显著降低,而EPO治疗组大鼠比急性心肌梗死组心肌细胞凋亡数明显降低,心肌HIF-1α蛋白表达量显著降低,Survivin蛋白表达量显著升高(P0.01)。结论降低HIF-1α蛋白表达与上调Survivin蛋白表达可能是促红细胞生成素抑制急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的机制之一。     

PDTC 对急性CO 中毒迟发性脑病大鼠海马区NF-κB 和C-myc 表达的影响

目的:探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对急性CO中毒迟发性脑病(DEACMP)大鼠海马区NF-κB和C-myc表达水平的调控及对神经细胞凋亡的影响。方法:按照随机数字表法将经水迷宫实验筛选后的150只成年健康SD雄性大鼠分为空气对照组(NC组),CO中毒组(CO组),CO中毒+PDTC组(PCO组),每组50只。采用分次腹腔注射纯品CO气体法制备DEACMP大鼠模型,PCO组于首次注射CO气体后0.5 h腹腔注射PDTC稀释液,1次/d,直到处死。于染毒后1 d、3 d、7 d、14 d、21 d,从三组中分别选取10只大鼠,采用Morris水迷宫实验验证大鼠学习记忆能力,免疫荧光法检测海马CA1区NF-κB和C-myc蛋白的动态表达情况,苏木精-伊红染色及TUNEL荧光染色检测海马CA1区的细胞凋亡情况。结果:与NC组对比,染毒后14～21 d CO组逃避潜伏期明显延长(P0.01),穿越平台次数显著减少(P0.01);CO组海马CA1区NF-κB和C-myc蛋白表达增多(P0.05),在染毒后1 d即明显升高,于染毒后3～7 d达峰值(P0.05);CO组海马CA1区神经细胞凋亡明显(P0.05),在染毒后7 d达高峰(P0.05)。PCO组大鼠行为学改变介于NC组和CO组之间,海马CA1区NF-κB、 C-myc蛋白表达和细胞凋亡在染毒3 d以后较CO组明显减少(P0.05),但仍高于NC组(P0.05)。结论:NF-κB、C-myc持续过量表达可加剧急性CO中毒所致的神经细胞凋亡,PDTC通过阻断NF-κB信号通路,减少凋亡因子C-myc的表达,减轻海马CA1区神经元损伤,从而达到改善DEACMP大鼠认知功能障碍的作用。