加热诱导肺癌细胞凋亡的体外实验研究

目的:探讨同一温度不同时间和同一时间不同温度加热对凋亡坏死、survivin、caspase基因表达的影响及其作用机制.方法:对数生长期肺癌A549细胞.分别在同一温度不同时间和同一时间不同温度加热,用流式细胞仪检测细胞凋亡百分比和坏死百分比,用RT-PCR检测survivin和caspase基因的表达.结果:加热后细胞凋亡增加,加热温度42℃和加热时间2h最为明显.随加热温度升高和加热时间增加坏死增加.加热明显加强Casepase-3的表达和降低Survivin的表达,且42℃加热不同时间时,2h效果最明显,不同温度加热1h时42℃效果最明显.结论:(1)加热能明显抑制肺癌细胞生长,促进肺癌细胞的凋亡.(2)加热明显增强Casepase-3的表达和降低Survivin的表达,从而促进肺癌细胞的凋亡.(3)加热温度42℃、加热时间2h为肺癌细胞热疗的最佳条件.     

金丝桃苷体外抗胃癌作用及其机制研究

目的：研究金丝桃苷（Hyperoside）对胃癌BGC-823细胞的生长、周期及凋亡的作用,并通过检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase 3、caspase 8、caspase 9）的活性探讨金丝桃苷诱导胃癌凋亡的可能机制。方法：采用MTT法检测金丝桃苷对胃癌BGC-823细胞的增殖影响;流式细胞技术检测金丝桃苷对胃癌BGC-823细胞周期和凋亡的影响;比色法测定金丝桃苷对胃癌BGC-823细胞凋亡过程中caspase 3、caspase 8和caspase 9活性影响。结果：金丝桃苷处理BGC-823细胞24h和48h后,细胞生长明显抑制,作用24h和48h时其IC50分别为32.14和22.67μg/mL;金丝桃苷处理组与对照组相比,胃癌BGC-823细胞G0/G1期比例明显增加,凋亡细胞比例明显增加;caspase 3、caspase 8和caspase9活性随药物浓度增加而逐渐升高。结论：金丝桃苷能够通过阻断细胞周期、诱导细胞凋亡有效抗胃癌,其诱导肿瘤细胞凋亡机制可能与激活caspase 3、caspase 8和caspase 9活性密切相关。     

羟基喜树碱对胃癌细胞凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨羟基喜树碱诱导胃癌细胞凋亡与细胞周期变化的关系.方法 用MTT法测定不同浓度的HCPT对胃癌细胞的生长抑制作用,用流式细胞仪测定一定浓度下不同作用时间细胞凋亡率和细胞周期的变化.结果 在3.125～50.0 μg/ml浓度范围内药物对细胞的抑制率随浓度的增加而增加;在相同浓度下,随时间的延长细胞的凋亡率也逐渐增加,0、12、24、48h的凋亡率为2.8%、8.5%、10.2%,13.3%,在24h内S期细胞减少而G0/G1细胞增多,第二个24h S期和G2/M的阻滞.结论羟基喜树碱可诱导胃癌细胞凋亡,其细胞凋亡与细胞周期分布有关.     

顺铂处理卵巢癌细胞系OVCAR3引起Survivin表达差异的研究

的 探讨顺铂(DDP)处理卵巢癌细胞系时Sur-vivin表达是否有变化,进而探讨Survivin表达与肿瘤细胞耐药之间的关系及其在肿瘤细胞获得性耐药及细胞凋亡耐受所起的重要作用。方法 以卵巢癌细胞系OVCAR3为材料,用MTT比色法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。RT-PCR检测Survivin mRNA表达差异,Western blot检测Survivin蛋白表达变化。结果 顺铂抑制卵巢癌细胞生长,具有时间和浓度依赖效应,即随时间延长和浓度增加,细胞生长抑制越强,细胞凋亡率也有同样的趋势,最高达31.6％。1mg·L~(-1)DDP处理卵巢癌细胞,Survivin mRNA及蛋白表达随作用时间的增长,分别在8 h和12 h达最高,随后又降低。结论 抗凋亡蛋白Survivin在卵巢癌细胞系中呈高表达,顺铂处理卵巢癌细胞,Survivin mRNA表达随作用时间延长而增加,这可能是卵巢癌细胞对化疗药物产生耐药性的重要因素之一。     

黄芪总苷对SCC15口腔癌细胞活力的影响及机制

目的 探讨黄芪总苷对SCC15口腔鳞状癌细胞活力的抑制作用及机制.方法 将不同浓度黄芪总苷（100,200,400 μg/ml）作用于SCC15口腔癌细胞,72 h后以噻唑蓝比色法检测各组细胞活力,Western blot法检测细胞凋亡抑制蛋白Survivin的表达.结果 黄芪总苷可剂量依赖性地抑制SCC15口腔癌细胞活力.不同浓度黄芪总苷均可抑制Survivin在SCC15细胞中的表达,Survivin的表达随黄芪总苷浓度增加而减少.结论 黄芪总苷可能通过抑制Survivin表达而降低SCC15口腔癌细胞活力.     

Survivin在喉癌组织中的表达及其与细胞凋亡的相关性

目的：研究Survivin基因在喉癌发生发展中的作用。方法：应用RT-PCR及流式细胞术检测42例喉癌组织细胞中survivin mRNA、蛋白及细胞凋亡率（AP）。结果：Survivin mRNA及蛋白在喉癌组织中尤其是Ⅲ、Ⅳ期中高度表达；在survivin表达组中AP明显降低，且survivin蛋白定量与AP呈负相关。结论：Survivin基因可能通过抑制细胞凋亡参与了喉癌的发生、发展，提示喉癌的高侵袭性和预后不良。     

紫杉醇对胃癌细胞survivin 蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的探讨紫杉醇对胃癌细胞系SGC-7901survivin蛋白表达以及细胞凋亡的影响。方法不同浓度紫杉醇处理SGC-7901细胞后,在不同时间点采用Western Blot方法检测细胞中survivin蛋白的表达,同时采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,并分析其与survivin蛋白表达的关系。结果 Western Blot结果显示,紫杉醇处理SGC-7901细胞后survivin蛋白表达增加,并呈时间、剂量依赖性;流式细胞术检测结果显示,紫杉醇处理SGC-7901细胞后,细胞凋亡率随时间延长而增加。结论紫杉醇可以诱导胃癌细胞系SGC-7901survivin蛋白表达增加,这可能是导致肿瘤耐药的重要机制。     

肝细胞癌细胞株HepG2细胞甲胎蛋白基因沉默对Survivin表达的影响

目的 研究肝细胞癌细胞株HepG2细胞甲胎蛋白基因沉默(即基因不表达或表达量极低)对Survivin表达的影响.方法 应用siRNA技术对肝细胞癌细胞株HepG2细胞中甲胎蛋白基因的表达进行下调,应用ELISA法(即酶联免疫吸附测定法)对转染前后上清液甲胎蛋白的浓度进行测定,应用MTT比色法对转染前后细胞存活和生长情况进行检测,应用流式细胞术对细胞凋亡率进行分析,应用逆转录PCR技术对转染前后细胞Survivin mRNA水平进行检测.结果 与转染前相比,转染后研究组的上清液中甲胎蛋白的浓度均发生逐渐降低,且转染48 h后,观察组的下降更为明显.观察组的吸光度明显逐渐下降,肝癌细胞生长活性减弱了45.23％;HepG2细胞的凋亡率增至36.8％,较转染前升高了24.4％,HepG2细胞中Survivin mRNA表达下降了74.32％.对于上述情况,空白组和对照组均未见明显的变化.结论 肝细胞癌细胞株HepG2细胞甲胎蛋白基因沉默可抑制Survivin mRNA表达,从而降低肝癌细胞的生长活性以及增加细胞的凋亡率.     

平胃汤诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的探讨不同浓度复方平胃汤对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及可能的机制。方法以细胞超微结构和细胞凋亡情况评价不同浓度(120、240或480 mg/ml)平胃汤对人胃癌SGC-7901细胞的影响。结果 1与空白组比较,平胃汤组细胞超微结构变化显著(细胞内线粒体数目增加且体积增大、细胞膜较完整),细胞增殖抑制率和凋亡率明显增高,且具有一定的时间及剂量依赖性(P<0.05);2与空白组比较,平胃汤组Bax蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量下调,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论平胃汤能促进人胃癌SGC-7901细胞凋亡,其机制可能与Bax表达增高以及Bcl-2表达降低有关。     

选择性COX-2抑制剂NS-398对人胃腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对胃癌培养细胞系BGC-823增殖及凋亡的影响.方法 应用MTT法检测NS-398对胃癌细胞BGC-823细胞增殖的影响;应用流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测NS-398对胃癌细胞BGC-823细胞凋亡的影响.结果 NS-398随剂量的增加及作用时间延长对胃癌细胞呈抑制作用;体外NS-398能减少BGC-823细胞株COX-2的表达,对BGC-823有细胞毒作用,可增加细胞凋亡率.结论 NS-398可抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,促进胃癌BGC-823细胞的凋亡.其可能机制是与抑制COX-2表达有关.     

Topoisomerase I inhibitor (camptothecin)-induced apoptosis in human gastric cancer cells and the role of wild-type p53 in the enhancement of its cytotoxicity

Camptothecin (CPT), a human topoisomerase I inhibitor, blocks DNA replication in human cancer cells. It represents a promising new class of chemotherapeutic agents with broad anti-tumor activity. However, its effect on gastric cancer cells remains unknown. We examined cell growth, apoptosis and cell cycle phase distribution in gastric cancer cells by exposing these cells to CPT for up to 72 h. Cell viability was determined by the Trypan blue exclusion assay. Cell cycle phase distribution and apoptosis were measured using flow cytometry, fluorescence microscopy and DNA ladder assay. Exposure of exponentially growing gastric AGS cancer cells to CPT induced time-dependent apoptosis and growth inhibition. Serum starvation-synchronized AGS cells (about 60% cells in G0/G1 phase) showed similar cellular responses. Analysis of cell cycle phase distribution of AGS cells treated with CPT for up to 72 h showed no obvious differences compared to untreated control cells. Although the induction of apoptosis was noticed in gastric cancer cell lines both with and without p53, cells lacking p53 showed less apoptosis compared to those cell lines possessing p53. Our data show that CPT is capable of inducing gastric cancer cell growth inhibition and apoptosis. Wild-type p53 may enhance the cytotoxicity of CPT against gastric carcinoma.     

阿帕替尼与5-氟尿嘧啶联合应用对人胃癌细胞AGS增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探索小分子酪氨酸激酶抑制剂阿帕替尼与5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)联合应用对人胃癌细胞AGS增殖、凋亡及迁移的影响。方法:采用Western Blot方法评估人胃癌细胞系AGS、MKN-45、SGC-7901及人脐静脉血管内皮细胞中血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)蛋白表达情况。采用MTS法测定空白对照组、阿帕替尼单药组、5-FU单药组及阿帕替尼与5-FU联合组对人胃癌细胞AGS增殖情况的影响;采用Annexin V-FITC/PI流式双染法测定四组细胞的凋亡情况;采用划痕试验测定药物处理后人胃癌细胞AGS的迁移情况。结果:人胃癌细胞AGS表达VEGFR2。MTS结果显示,与空白对照、阿帕替尼单药和5-FU单药比较,阿帕替尼与5-FU联合应用可显著抑制人胃癌细胞AGS增殖,差异均有统计学意义(P<0.05);阿帕替尼单药、5-FU单药对人胃癌细胞AGS增殖的抑制呈时间及剂量依赖性。流氏双染法结果显示,与空白对照、阿帕替尼单药和5-FU单药比较,阿帕替尼与5-FU联合应用可显著诱导人胃癌细胞AGS凋亡,差异均有统计学意义(P<0.001);其总凋亡率为45.8%,以晚期调亡细胞为主。划痕试验结果显示,与空白对照、阿帕替尼单药和5-FU单药比较,阿帕替尼与5-FU联合应用可明显抑制人胃癌细胞AGS迁移,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论:体外实验结果显示,阿帕替尼与5-FU联合应用可显著抑制人胃癌细胞AGS的增殖、迁移,并诱导细胞凋亡,该研究可为上述两药联合应用治疗晚期胃癌提供实验依据。     

山茱萸多糖对胃癌细胞增殖和凋亡的机制

目的探讨山茱萸多糖对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法用不同剂量山茱萸多糖灌胃接种AGS细胞的裸鼠,检测裸鼠体内肿瘤体积;TUNEL法检测细胞凋亡指数;胃癌细胞AGS分为对照组、山茱萸多糖低、中、高剂量组、si-NC组、si-ELF3-AS1组、山茱萸多糖+pcDNA组、山茱萸多糖+pcDNA-ELF3-AS1组。MTT检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测lncRNA ELF3-AS1表达水平。结果山茱萸多糖处理的裸鼠体内移植瘤体积减少,细胞凋亡指数升高(P<0.05)。山茱萸多糖处理胃癌细胞AGS后,细胞增殖抑制率升高,凋亡率升高,ELF3-AS1表达水平降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。胃癌细胞AGS中ELF3-AS1表达水平升高(P<0.05)。抑制ELF3-AS1表达后,细胞增殖抑制率升高,凋亡率升高(P<0.05)。ELF3-AS1过表达逆转了山茱萸多糖对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的作用。结论山茱萸多糖可能通过下调ELF3-AS1抑制胃癌AGS细胞增殖,促进AGS细胞凋亡。     

Inhibition of apoptosis facilitates necrosis induced by cisplatin in gastric cancer cells

Although cisplatin has been shown to induce both apoptosis and necrosis in cancer cells, the potential interconnections between these modes of cell death induced by the drug remain unknown. We studied this phenomenon in gastric cancer cell lines and identified one cell line (SGC-7901) that underwent apoptosis, and another cell line (BGC-823) that primarily underwent nonapoptotic cell death, in response to cisplatin. Apoptosis in cisplatin-treated SGC-7901 cells seemed to be caspase dependent and was mediated, at least in part, by the BH3-only protein, Noxa. This was evidenced by the rapid upregulation of Noxa and inhibition of apoptosis by small interfering RNA knockdown of Noxa. Nonapoptotic cell death induced by cisplatin in BGC-823 cells was characterized by lack of DNA fragmentation, delayed externalization of phosphatidylserine, caspase independence, plasma membrane disruption, and intracellular vacuole formation, indicative of necrosis. Surprisingly, blockage of apoptosis induction by a general caspase inhibitor or by Noxa small interfering RNA in SGC-7901 failed to protect against cisplatin-induced cell death. Under such conditions, SGC-7901 cells displayed cellular features associated with necrosis. Cisplatin-induced apoptosis, thus, seems to precede necrosis when the apoptotic machinery is operative. When the apoptosis program is defective, necrotic cell death takes place as an alternative pathway leading to cell demise. Induction of different modes of cell death that are interrelated in the same cells by cisplatin has the potential to be exploited in formulating new adjuvant cancer therapies.     

卡维地洛与庚醇减少低氧再供氧心肌细胞凋亡及坏死的研究

目的 研究卡维地洛（carvedilol,CVD）、庚醇（heptanol ,HT）对不同时间低氧再供氧心肌细胞坏死、凋亡的影响。方法 利用锥虫蓝染色技术和流式细胞仪分别观察低氧后不同时间再供氧细胞坏死、凋亡情况,观察CVD、HT对其的影响。结果 对照组（未给药）正常和低氧30 min时凋亡指数差异无显著性（P>0.05）,再供氧1 h凋亡指数为27.4%,与正常时比较差异有极显著性（P<0.01）。坏死的心肌细胞在再供氧2 h后差异有极显著性（P<0.01）。运用CVD、HT后凋亡指数在再灌注1 h时分别较对照组减少了55.11%和21.53%。结论 HT和CVD通过不同的作用可以减少低氧再供氧心肌细胞的死亡和凋亡.     

余甘子醇提物抑制人胃癌株AGS细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用

目的 考察余甘子醇提物体外对人胃癌AGS细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用。方法 采用MTT法、细胞集落实验、Hoechst染色分析、Annexin-V-FITC/PI等方法对经过余甘子醇提物体外作用的AGS细胞进行观察和检测。结果 AGS细胞经0.05,0.1,0.15 mg·mL^-1余甘子醇提物作用后,各组细胞形态均发生不同程度的变化,并呈现浓度-时间依赖性;细胞集落实验表明余甘子醇提物抑制肿瘤细胞的集落形成率;Hoechst染色分析、Annexin V/PI实验表明余甘子醇提物能够促进肿瘤细胞的凋亡。结论 余甘子醇提物在体外对人胃癌AGS细胞具有良好的抑制生长和诱导凋亡的作用。     

云芝糖肽通过调控p-糖蛋白 提高多柔比星胃癌细胞毒性的作用和机制研究

目的：探讨云芝糖肽辅助化疗药多柔比星协同增效的机制。方法：CCK-8检测云芝糖肽影响多柔比星在AGS胃癌细胞中细胞毒性的作用；LC-MS/MS法检测云芝糖肽对多柔比星在AGS细胞内累积的影响；RT-PCR检测云芝糖肽对AGS细胞P-gp的mRNA表达的影响；流式细胞术检测云芝糖肽对AGS细胞表面P-gp蛋白表达的影响。结果：云芝糖肽能显著增加多柔比星对AGS胃癌细胞的毒性；中、高浓度（0.5、1.0 mg·mL-1）的云芝糖肽显著增加多柔比星在AGS胃癌细胞内的累积；中、高浓度（0.5、1.0 mg·mL-1）的云芝糖肽显著减少AGS胃癌细胞p-gp mRNA的表达，显著减少AGS胃癌细胞表面P-gp蛋白的表达。结论：云芝糖肽能提高多柔比星在AGS细胞上的药效，其机制可能与减少细胞P-gp表达有关，减少了多柔比星在肿瘤细胞的外排，增加胞内浓度，从而提高药效。     

云芝糖肽通过调控p-糖蛋白 提高多柔比星胃癌细胞毒性的作用和机制研究

目的：探讨云芝糖肽辅助化疗药多柔比星协同增效的机制。方法：CCK-8检测云芝糖肽影响多柔比星在AGS胃癌细胞中细胞毒性的作用；LC-MS/MS法检测云芝糖肽对多柔比星在AGS细胞内累积的影响；RT-PCR检测云芝糖肽对AGS细胞P-gp的mRNA表达的影响；流式细胞术检测云芝糖肽对AGS细胞表面P-gp蛋白表达的影响。结果：云芝糖肽能显著增加多柔比星对AGS胃癌细胞的毒性；中、高浓度（0.5、1.0 mg·mL-1）的云芝糖肽显著增加多柔比星在AGS胃癌细胞内的累积；中、高浓度（0.5、1.0 mg·mL-1）的云芝糖肽显著减少AGS胃癌细胞p-gp mRNA的表达，显著减少AGS胃癌细胞表面P-gp蛋白的表达。结论：云芝糖肽能提高多柔比星在AGS细胞上的药效，其机制可能与减少细胞P-gp表达有关，减少了多柔比星在肿瘤细胞的外排，增加胞内浓度，从而提高药效。     

细胞死亡模式交互作用作为药理学靶点（英文）

Cell death plays an essential role in the development of organs,homeostasis,and cancer.Apoptosis and programmed necrosis are two major types of cell death,characterized by different cell morphology and pathways.Accumulating evidence shows autophagy as a new alternative target to treat tumour resistance.Besides its well-known pro-survival role,autophagy can be a physiological cell death process linking apoptosis and programmed necrosis cell death pathways,by various molecular mediators.Here,we summarize the effects of pharmacologically active compounds as modulators of different types of cancer cell death depending on the cellular context.Indeed,current findings show that both natural and synthetic compounds regulate the interplay between apoptosis,autophagy and necroptosis stimulating common molecular mediators and sharing common organelles.In response to specific stimuli,the same death signal can cause cells to switch from one cell death modality to another depending on the cellular setting.The discovery of important interconnections between the different cell death mediators and signalling pathways,regulated by pharmacologically active compounds,presents novel opportunities for the targeted treatment of cancer.The aim of this review is to highlight the potential role of these compounds for context-specific anticancer therapy.