地塞米松诱导大鼠胸腺细胞凋亡

细胞凋亡是细胞受到特异刺激后启动内在“自杀”程序而引起的一种控制性死亡。为观察糖皮质激素对免疫器官──胸腺的调节作用,本文加地塞米松与大鼠胸腺细胞共同孵育,胸腺细胞是现了凋亡的典型形态学改变;提取该培养细胞的ＤＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳可见典型“阶梯状”条带,提供了该细胞发生凋亡的生物化学依据。本研究结果表明糖质激素能诱导胸腺细胞凋亡。     

MBP诱导小鼠免疫细胞凋亡的体内研究

为初步探讨ＭＢＰ与免疫细胞凋亡的关系，实验设置了超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）作为阳性对照，普通蛋白抗原ＢＳＡ为阴性对照。实验方法以检测ＤＮＡ断裂为主，配以形态学观察。结果表明，ＭＢＰ处理组免疫细胞ＤＮＡ经电泳可见“典型”的梯状带；通过比色法和流式细胞术定量检测了ＤＮＡ断裂的数值。结果显示，ＭＢＰ处理组ＤＮＡ断裂百分数与ＳＥＢ组无明显区别（Ｐ＜０．０５）。同时形态学观察表明ＭＢＰ处理组凋亡细胞数目与ＳＥＢ组基本相同。上述结果表明ＭＢＰ具有类似超抗原ＳＥＢ的效应。     

地塞米松诱导NK-92MI细胞株凋亡机制的研究

目的:探讨地塞米松(DEX)对NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响及机制.方法:用不同浓度的DEX处理NK-92MI细胞:采用MTT比色法测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;RT-PCR 检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达.结果:浓度为1×10-8mol/L至1×10-3mol/L的DEX作用NK-92MI细胞24、48、72小时后,对其增殖均有明显抑制作用(P<0.05);效靶比为5∶1时,1×10-8mol/L至1×10-3mol/L的DEX对NK-92MI细胞杀伤活性均有抑制作用,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05);DEX可诱导NK-92MI细胞发生凋亡且凋亡诱导作用呈浓度时间依赖性;与对照组相比,DEX组Bcl-2基因表达降低(P＜0.05),Bax基因表达增高(P＜0.01).结论:DEX可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK-92MI细胞凋亡,而后者与Bax/Bcl-2基因表达增高有关.     

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B诱导小鼠免疫细胞凋亡

为探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素Ｂ对小鼠免疫细胞调亡的影响，采用形态学观察及ＤＮＡ断裂指标检测了ＳＥＢ诱导小鼠免疫细胞凋亡的剂量和效应关系。结果表明，１２．５μｇ，２５ｇ和２５μｇ和５０μｇＳＥＢ均要引起部分胸腺细胞、脾细胞和肠系膜淋巴结细胞出现核固缩、核断裂及凋亡小体形成等形态学变化。上述免疫细胞ＮＤＡ琼脂糖电泳可见典型的“梯状”带。而对照组免疫未见上述明显变化。本实验表明超抗原ＳＥＢ可诱导小鼠     

地塞米松诱导红系细胞凋亡的观察

以ＦＶＡ病毒诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞形成的红系细胞（ｅｒｙｔｈｒｏｉｄｃｅｌ）为研究对象，在红系细胞凋亡抑制剂——红细胞生成素（ＥＰＯ）存在情况下，观察了地塞米松（Ｄｅｘ）对上述细胞凋亡的诱导作用。结果表明，在一定浓度范围内，随着Ｄｅｘ作用时间的延长，细胞逐步凋亡并出现特有的ＤＮＡ梯形（ＤＮＡｌａｄｄｅｒ），而且其ＤＮＡ断裂程度与Ｄｅｘ的作用浓度呈正相关。透射电镜的结果证实，经最适浓度（５×１０－５ｍｏｌ／Ｌ）Ｄｅｘ处理后，红系细胞出现核固缩，染色质凝聚，核周隙扩大，核破裂，胞浆近膜处出现空泡以及细胞破碎等程度不同的细胞凋亡特征。说明Ｄｅｘ可拮抗ＥＰＯ的作用，有效地诱导红系细胞凋亡     

IL-6抑制地塞米松诱导的人骨髓瘤细胞凋亡

目的 :研究地塞米松 (Dexamethasone ,DEX)诱导人骨髓瘤细胞系Sko 0 0 7凋亡的分子机制及IL 6对此凋亡作用的抑制效应。方法 :MTT法观察DEX对Sko 0 0 7细胞生长的影响 ;碘化丙腚 (propidiumiodide ,PI)染色和流式细胞术分析Sko 0 0 7细胞经DEX处理后的凋亡情况 ;免疫印迹法检测Bcl 2家族抗凋亡蛋白———Bcl 2、Bcl XL 和Mcl 1在Sko 0 0 7细胞凋亡过程中的表达情况。结果 :DEX能够抑制Sko 0 0 7细胞增殖并诱导其发生凋亡 ;同时促进胞内Bcl 2降解。IL 6抑制DEX诱导的Sko 0 0 7细胞凋亡 ,并使Bcl 2表达水平恢复。结论 :IL 6可通过调节Bcl 2表达而实现其对DEX诱导的骨髓瘤细胞凋亡的抑制作用。     

地塞米松诱导大鼠胰岛素抵抗机制的研究

观察了大鼠肌注地塞米松１周和３周后的空腹血糖、血清胰岛素及血浆胰高血糖素ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ水平。结果是经地主松处理后、１周组和３周组的大鼠血清胰岛素明显高于对照组；１周组血糖浓度无显著变化，３周组血糖浓度明显升高；血浆胰高血糖素水平无明显变化，未被高血糖，高胰岛素所抑制；１周组血浆ｃＧＭＰ明显下降；３组间的ｃＡＭＰ浓度差异无统计学意义。     

TRAIL在免疫细胞凋亡中的作用及其意义

免疫细胞的凋亡异常与自身耐受的打破以及自身免疫性疾病的发生密切相关。TRAIL是TNF家族的成员,以往研究主要集中在肿瘤的发生、发展和治疗等方面。近年来,TRAIL在免疫系统中的作用开始受到关注。本文主要就TRAIL在免疫细胞凋亡中的作用及其与自身免疫性疾病发生和发展的关系作一综述。     

地塞米松通过下调PC12大鼠嗜铬细胞瘤细胞葡萄糖的摄取诱导细胞凋亡

目的观察地塞米松(DEX)诱导PC12大鼠嗜铬瘤细胞凋亡及对葡萄糖摄取的影响。方法体外培养的PC12细胞随机分为正常对照组、10μmol/L DEX组、100μmol/L DEX组。MTT法测细胞存活率,DAPI荧光染色、线粒体膜通透性转换孔(mPTP)、capase-3、caspase-9活性测定细胞凋亡。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测葡萄糖的摄取率,Western blot法检测葡萄糖转运子3(GLUT-3)的表达。结果与正常对照组比较,DEX作用PC12细胞48 h,DEX组细胞活力下降、引起细胞凋亡;DEX组葡萄糖的摄取下降,GLUT-3蛋白水平下降(P0.05)。结论 DEX可以诱导PC12细胞凋亡,其机制可能与DEX引起细胞GLUT-3蛋白表达水平下降引起葡萄糖摄取下降有关。     

^60Co照射诱导胸腺哺育细胞内胸腺细胞凋亡的形态学观察

目的：研究^60Co照射是否会诱导胸腺哺育细胞内的胸腺细胞（thymocyte within thymic nurse cell,TNC-T)凋亡,并探讨胸腺育细胞（thymic nurse cell,TNC)与TNC－T凋亡的关系。方法：BALB／C小鼠全身非致死量60Co照射,照射后6,12,24,36小时,采用透射电镜,对胸腺悬液中的TNC及TNC－T进行观察,结果：50Co照射后6小时,少数TNC－T呈现凋亡细胞的形态学改变。随着照射后时间的延长,大多数TNC－T发生凋亡,并逐渐消失,在TNC胞质内留下大小不等的空泡,同时TNC胞质内溶酶体增多,体积增大,结论：大多数TNC－T或60Co照射敏感,发生凋亡,TNC能消化和清除亡的TNC－T。     

大蒜素诱导人肝癌BEL—7402细胞凋亡

目的　探讨大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡作用。　方法　MTT法检测大蒜素对BEL 740 2细胞的生长抑制作用 ,光镜、电镜、流式细胞术观察大蒜素诱导BLE 740 2细胞凋亡作用。　结果　 10、2 0、40ml L大蒜素皆能抑制BEL 740 2细胞生长 ,其抑制作用与剂量、作用时间呈正相关。 6 0mg L大蒜素作用 3h ,BEL 740 2细胞出现典型凋亡形态学变化 :细胞体积缩小 ,微绒毛消失 ,染色质浓聚、边集、裂解 ,细胞表面凸起多个小泡或小球状小体 ,凋亡细胞拒染台盼蓝等。台盼蓝染色计数对照组凋亡率 2 0 2± 0 37% ,诱导组凋亡率 78 48± 3 15 % ;流式细胞分析对照组凋亡率 1 78± 0 48% ,诱导组凋亡率 74 0 7± 3 94% ,对照组诱导前时G0 /G1 、S、G2 /M期细胞分别为47 6 6± 2 72 % ,2 2 0 6± 2 0 4% ,30 2 5± 3 78% ,皆低于 74 0 7± 3 94%。　结论　大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡 ,其诱导凋亡效果明显 ,并推测大蒜素诱导BEL 740 2细胞可能自细胞周期不同分期多点启动凋亡     

gadd153基因对卵巢癌细胞生长抑制作用的研究

目的　研究生长抑制ＤＮＡ损伤基因（ｇｒｏｗ ｔｈ ａｒｒｅｓｔ ａｎｄ ＤＮＡ ｄａｍ ａｇｅ, ｇａｄｄ）对卵巢癌细胞生长抑制和凋亡的作用。　方法　ＲＴ－ＰＣＲ鉴定卵巢癌ＳＫＯＶ３ 和３ＡＯ细胞株ｇａｄｄ１５３ 基因表达。通过目的基因的克隆、载体构建技术,将目的基因ｇａｄｄ１５３ 重组于ｐｌＸＳＮ－ｎｅｏ 逆转录病毒表达载体;构建的ｐＬＸＳＮ－ｇａｄｄ１５３载体采用脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）（ＤＯＴＡＰ）的方法,分别转染ＳＫＯＶ３ 和３ＡＯ细胞株;经Ｇ４１８ 抗性筛选;ＲＴ－ＰＣＲ表达鉴定;足叶乙甙（ＶＰ１６）诱导,采用流式细胞仪分析（ＦＣＭ）的方法检测转染前后肿瘤细胞的生长抑制和凋亡。　结果　ＳＫＯＶ３－ｇａｄｄ１５３ 细胞生长抑制在Ｇ１／Ｇ０ 期,部分细胞进入凋亡的状态;３ＡＯ－ｇａｄｄ１５３ 细胞生长抑制,未引起凋亡。　结论　转染ｇａｄｄ１５３ 基因的肿瘤细胞系,诱导表达后可诱发肿瘤细胞生长抑制在Ｇ１／Ｇ０期,并有细胞进入凋亡状态。证实ｇａｄｄ１５３ 基因参与了细胞生长抑制和凋亡过程。     

阿糖胞苷对肺腺癌细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的探讨阿糖胞苷（Ara-C）对人肺腺癌细胞株A549的凋亡诱导作用及其机制。方法Ara—C体外作用于／t549细胞,噻唑蓝还原法（MTT法）检测Ara—C对A549细胞增殖的抑制作用;Hoechst33258荧光染色观察细胞核形态学的变化;单细胞凝胶电泳技术（comet assay）测定A549细胞DNA的损伤程度;以Western blotting进一步证明A549细胞发生凋亡。结果Ara-C对A549细胞的增殖有明显抑制作用;观察到特异性的凋亡小体;Ara—C导致A549细胞发生DNA链断裂,并呈明显剂量依赖性增强：Western blotting显示caspase8,9,3都不同程度被激活,多聚ADP核糖聚合酶（PARP）被剪切降解。结论揭示了Ara—C明显诱导A549细胞凋亡;细胞凋亡通路不仅通过线粒体途径,还通过膜受体途径,两条通路协同作用使凋亡信号增强;提示Ara-C对A549细胞有明显的化疗作用。     

CD4T细胞缺乏对胸腺细胞凋亡影响的研究

通过对ＬＥＣ大鼠和正常对照鼠胸遥细胞的凋亡的研究，探讨了ＣＤ４Ｔ细胞缺乏对胸腺细胞凋亡的影响。电子显微镜，抗ｓｓ－ＤＮＡ抗体免疫细胞化学染色及ＤＮＡ片段梯形电泳带结果提示：ＣＤ４Ｔ细胞缺乏可诱导不成熟Ｔ细胞凋亡，对成熟Ｔ细胞无明显影响。     

川芎嗪和剪切率对悬浮血管内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨川芎嗪和剪切率对悬浮血管内皮细胞凋亡的影响。方法 体外培养大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)，以川芎嗪和锥一板旋转剪切方式共同作用于悬浮rCMEC，采用Annexinv-FITC／PI双染法，流式细胞仪检测川芎嗪和剪应力对rCMEC凋亡的影响。结果 方差分析表明，川芎嗪和剪切率对rCMEC凋亡率有显著影响，川芎嗪降低凋亡率；剪切率增加凋亡率，二者作用相反但无交互作用。组间t检验表明：单独使用川芎嗪时，在本实验剂量范围内(3l.5～126μg／m1)，川芎嗪对静态悬浮rCMEC凋亡率无显著影响。高剪切率(6000，8000s-1)可诱导rCMEC凋亡，川芎嗪对此具有显著抑制作用。结论 适当剂量的川芎嗪可用于抑制高剪切率诱导的血管内皮细胞凋亡。     

胶质瘤细胞增殖与凋亡的研究

对未经其他治疗的手术摘除的胶质瘤标本,采用免疫组化和原位标记方法研究了胶质瘤及其瘤旁组织中细胞增殖以及凋亡的状况。结果表明,增殖细胞核抗原在世界卫生组织（ＷＨＯ）制定的不同级别的胶质瘤中其阳性率具有显著性差异（Ｐ＝ ０．０００５）,而在胶质瘤与其瘤旁组织之间则无显著性差异。恶性程度不同的胶质瘤中细胞发生凋亡的比率具有显著性的差异（Ｐ＝ ０．０１７０）,而在胶质瘤与其瘤旁组织间无显著性差异。增殖细胞核抗原是划分胶质瘤恶性程度的一个较好的指标,与Ｗ ＨＯ 胶质瘤恶性程度分级具有较好的相关性（ｒ＝ ０．４０８９）。Ｗ ＨＯ Ⅱ级星形胶质瘤细胞凋亡明显增多,可能是保留了恶性程度较高的胶质瘤细胞而清除了恶性程度相对较低的胶质瘤细胞,从而可能促进了胶质瘤的恶性进展。胶质瘤邻近的瘤旁组织可能已具有了胶质瘤的某些特性,胶质瘤呈浸润性生长可能与此有密切的关系。     

高血糖对小鼠卵母细胞发育及颗粒细胞凋亡的影响

目的 研究高血糖对排卵前小鼠卵母细胞发育及颗粒细胞凋亡的影响.方法 出生后20d ICR雌鼠,建立急性高血糖模型;取高血糖模型雌鼠和正常雌鼠超排卵,分别于hCG注射后的0、2、6和10h取卵巢组织,石蜡切片,TUNEL检测凋亡,免疫组织化学ABC法检测连接蛋白connexin-43的表达,相同时间点取生发泡期(GV期)卵母细胞统计生发泡破裂(GVBD)和第一极体(FB1)的发生率.结果 1.高血糖组卵巢湿重与小鼠体重的比值与排卵数目均低于正常组(P＜0.01);2.免疫组织化学显示,hCG注射后6h、10h颗粒细胞表达connexin-43在高血糖组明显低于正常组(P＜0.05);3.高血糖组卵泡颗粒细胞的凋亡率明显高于正常组,hCG注射后6h、10h差异最显著(P＜0.05);4.高血糖组卵母细胞GVBD发生率低于正常组,于注射后2h差异最显著(P＜0.01).结论 高血糖环境下卵母细胞发育延迟,颗粒细胞的凋亡率增高.这种发育延迟与颗粒细胞间connexin-43低表达呈正相关.     

VP-16诱导细胞凋亡及其细胞核基质中热休克蛋白表达的研究

目的　研究VP 16诱导HL 6 0细胞凋亡的变化特点以及凋亡细胞及核基质中热休克蛋白 (HSP)表达的变化。　方法　琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞基因组DNA断裂 ;TUNEL法观察凋亡细胞的形态学变化 ;用免疫印迹方法显示凋亡细胞核基质蛋白、细胞总蛋白中HSP表达的差异。　结果　VP 16作用HL 6 0细胞 0 5h出现早期凋亡特征。作用 4h可见明显的DNA梯状条带。与未凋亡的细胞比较 ,凋亡细胞核基质蛋白中HSP70和HSC70表达明显上调 ;VP 16作用 2、3及 4h细胞总蛋白中HSP70的表达随时间延长略显增加 ;诱导 2 2h比诱导 4h时去除VP 16后孵至 2 2h凋亡细胞总蛋白HSP70表达量增强了 3 4倍。　结论　 1 HL 6 0细胞早期凋亡形态出现在DNA梯状条带形成之前。 2 凋亡细胞核基质中HSP70、HSC70的表达明显增加 ,经 2、3及 4h作用的细胞总蛋白中HSP70表达差异不显著。这提示细胞凋亡后HSP70的活性位点主要位于核基质上。 3 VP 16作用细胞时间增长至2 2h ,HSP的保护作用可能消失