热打击联合脂多糖刺激对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响

目的：观察脂多糖（LPS）与热打击分别单独作用与联合作用对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响。方法：于37℃、5％CO2标准培养箱中培养人肠上皮细胞株SW480。实验分4组：空白对照组直接收集细胞上清;LPS单独刺激组（LPS组）分别使用0、0．01、0．1、1和10μg／ml的LPS刺激SW480细胞,24h后收集细胞上清;热打击组将SW480细胞进行热打击（42℃,1h）后在标准孵箱分别培养1h和24h后收集细胞上清;LPS＋热打击组将SW480细胞42℃热打击1h后给予上述浓度的LPS刺激,再重新置于标准孵箱中培养,24h后收集细胞上清。各组细胞上清用LiquiChip液相蛋白芯片系统分别检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）、7干扰素（IFN-7）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等10种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平。结果：单独LPS刺激时呈剂量依赖性诱导SW480表达分泌IL-8,对其余9种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平影响不明显。单纯热打击仅诱导SW480细胞表达分泌IL-8的水平升高,且与空白对照组比较,仅热打击24h后IL-8的水平显著增加（P〈0．01）。热打击联合不同浓度的LPS刺激SW480细胞,LPS浓度低时并不影响SW480表达分泌IL-8的水平（P〉O．05）,而高浓度LPS可以显著减少其表达分泌水平（P〈0．05）。结论：人肠上皮细胞SW480作为脏器实质细胞,对炎性刺激仅能产生单一种类的细胞因子,其中LPS单独刺激和一定强度的热打击均可上调SW480分泌IL-8;但高浓度LPS在热环境下可抑制SW480细胞的IL-8表达分泌水平。     

交感神经递质NE对内毒素诱导大鼠kupffer细胞TNF-α/IL-1β表达的影响

目的探讨交感神经递质去甲肾上腺素对体外培养大鼠kupffer细胞TNF-α、IL-1β炎症相关细胞因子表达的影响。方法分离大鼠kupffer细胞体外分三组培养,经体外培养48h后,给予外源性内毒素（LPS10μg／m1）刺激,同时给予不同浓度的去甲。肾上腺素（0．1μmol／L～10μmol／L）分别作用12h,运用定量逆转录多聚酶链反应检测各处理组TNF-α和IL-1β mRNA的表达,ELISA检测细胞培养上清TNF-α IL-1β蛋白的表达。结果同时给予LPS（10μg/ml）刺激和去甲肾上腺素（1μmol／L及10μmol／L）作用后,kupffer细胞培养上清TNF-α和IL-1β蛋白较LPS组显著增高（P〈0．05）;TNF-α mRNA表达分别较LPS组增加50．9％（P〈0．05）和59．1％（P〈0．05）;IL-1β mRNA较LPS组表达增加53．7％（P〈0．05）和57．8％（P〈0．05）。结论应激浓度的去甲肾上腺素能增加内毒素诱导大鼠kupffer细胞TNF-α、IL-1β表达,具有促炎效应。     

内毒素耐受对人正常前列腺上皮细胞分泌ＩＬ－６和ＩＬ－８的影响

目的 研究发现前列腺组织炎症在前列腺增生的发生与进展中有着重要作用。方法 内毒素耐受（endotoxin tolerance，ET）现象存在于人组织上皮细胞中如肠上皮细胞和人牙龈上皮细胞等，并可能影响组织的炎症和免疫反应。产生内毒素/脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）的G-菌如大肠埃希菌是影响前列腺炎的主要病原体。因此，本研究拟通过分析LPS反复刺激人正常前列腺上皮细胞RWPE-1中细胞炎性因子IL-6和IL-8表达，探讨是否内毒素耐受现象存在于人前列腺上皮细胞中。结果 采用1 μg/mL大肠杆菌（Escherichia coli）LPS刺激人正常前列腺上皮细胞RWPE-1 24 h，洗涤细胞后，给予1 μg/mL 浓度LPS再次刺激24 h，构建内毒素耐受模型。采用液相芯片技术检测细胞培养液中细胞因子IL-6和IL-8分泌水平的变化。结果 LPS刺激后6 h和24 h，IL-6和IL-8分泌水平均呈现上升趋势（P<0.05），较空白对照组有明显增高（P<0.05），LPS反复刺激后，诱导细胞耐受后，IL-6和IL-8分泌水平较第1次刺激后明显降低（P<0.05）。结论 内毒素耐受现象存在于RWPE-1中，能抑制RWPE-1细胞因子IL-6和IL-8的表达，进而可能影响前列腺组织的炎症和免疫反应。     

辛伐他汀对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎性反应抑制作用

目的：运用脂多糖（LPS）诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的炎性反应,观察辛伐他汀对HUVECs炎性反应的抑制作用。方法：体外培养HUVECs,细胞至第3代,随机分为空白对照组、LPS（100 ng/mL）组、辛伐他汀（5 mg/mL）组、辛伐他汀（5 mg/mL）和LPS（100 ng/mL）共作用组,运用实时荧光定量PCR和ELISA的方法,测定各组细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白介素-1（IL-1）、白介素-6（IL-6）和尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体（uPA/uPAR）的mRNA和蛋白表达的变化。结果：与对照组相比,LPS组细胞的MCP-1I、L-1I、L-6及uPA/uPAR的mRNA表达和上清液中各因子蛋白的表达均明显增加（P均〈0.01）;与LPS组相比,辛伐他汀和LPS共作用组的细胞MCP-1I、L-1、IL-6及uPA/uPAR的mRNA表达和上清液中各因子蛋白的表达均明显降低（P均〈0.05）。结论：辛伐他汀可抑制HUVECs合成及分泌细胞因子MCP-1I、L-1I、L-6及uPA/uPAR,延缓动脉粥样硬化的进程。     

异丙酚对脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体-4 mRNA表达的影响

目的 观察异丙酚对脂多糖（LPS）诱导大鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体-4（TLR-4）mRNA表达的影响，探讨异丙酚抑制LPS诱导白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）产生的机制。方法 雄性Wistar大鼠32只，处死后分离腹腔巨噬细胞，随机分为4组（n=8）：A组（阴性对照组）；B组LPS（终浓度为1μg／ml）／加入巨噬细胞中；C组LPS（终浓度为1μg／ml）＋异丙酚（终浓度为1μg／ml）加入巨噬细胞中；D组LPS（终浓度为1μg／ml）＋异丙酚（终浓度为5μg／ml）加入巨噬细胞中。细胞培养12h后。用ELISA方法检测培养上清液中IL-6、TNF-α的浓度，用RT-PCR方法检测TLR-4mRNA的表达水平。结果 与A组相比，B组IL-6、TNF-α和TLR-4m RNA水平均增加，C组IL-6、TLR-4m RNA水平升高（P〈0．01）；与B组相比，C组、D组IL-6、TNF-α和TLR-4m RNA水平降低（P〈0．05或〈0．01）。结论 异丙酚通过下调TLR-4m RNA的表达水平，从而一定程度上抑制了LPS诱导大鼠腹腔巨噬细胞，TNF-α和IL-6的产生。     

角质形成细胞源IL-1α对成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响

目的：研究角质形成细胞分泌的IL-1α对成纤维细胞生物学行为的影响。方法：组织块法培养成纤维细胞，消化法培养角质形成细胞，采用免疫组化方法检测角质形成细胞分泌的IL-1α；成纤维细胞中加入含不同浓度IL-1α抗体（0．04μg／ml，0．2μg／ml，1μg／ml）的角质形成细胞条件培养液为实验组，含DMEM的条件培养液为对照组，采用Cell counting kit-8、放免法测定成纤维细胞增殖、胶原合成。结果：细胞爬片可见大量染色阳性角质形成细胞，细胞增殖测定，各实验组吸光度（A）值与对照组比较，差异均有统计学意义（P（0．01）；随抗体浓度增高，A值减小，0．2μg／ml及1μg／ml浓度组与0．04μg／ml浓度组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；胶原分泌浓度测定，各实验组与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）：随抗体浓度及胶原浓度增高，0．2μg／ml及1μg／ml浓度组与0．04μg／ml浓度组比较，差异有统计学意义（P（0．01）。结论：正常角质形成细胞分泌大量IL-1α，可促进成纤维细胞增殖，抑制胶原分泌。     

切应力对大鼠肝窦内皮细胞分泌功能的影响

目的了解不同切应力下肝窦内皮细胞分泌肝细胞生长因子（HGF）、白细胞介素-6（IL-6）、-氧化氮（N0）及-氧化氮合成酶（NOS）的分泌量，探讨切应力对原代培养的大鼠肝窦内皮细胞分泌功能的影响。方法构建血流动力学模型。实验分为对照组（切应力为0 dyn／cm^2）和实验组2组。实验组又按切应力不同分为12、24和48dyn／cm^2 3个亚组。每组分别在4、8、12及24h抽取1ml培养基，利用试剂盒检测培养基中HGF、IL-6、NO和NOS浓度。结果在不同切应力下，肝窦内皮细胞分泌HGF、IL-6、NO和NOS各不相同，在同一时相随着切应力的升高。HGF、IL-6、NO和NOS的分泌量也升高，实验组明显高于对照组（P〈0．01），且48dyn／cm^2组明显高于另两个亚组（P〈0．01）；实验组作用8、12、24h时，HGF、IL-6、No及NOS分泌量明显高于作用4h时。结论体外实验证实，切应力升高时肝窦内皮细胞分泌HGF、IL-6、NO和NOS的量明显增加，提示部分肝切除术后门静脉压力急剧升高能促使肝窦内皮细胞活化。分泌大量促肝细胞再生的细胞因子和介质。     

表面活性蛋白-A对脂多糖诱导的人肾小管近曲上皮细胞白介素-6表达的影响

目的：探讨表面活性蛋白-A（SP-A）的表达改变对脂多糖（LPS）诱导的人肾小管近曲上皮细胞（HK-2细胞）白介素-6（IL-6）表达的影响及机制。方法培养HK-2细胞,ELISA方法检测不同浓度的LPS（0、0．1、1、2、5、10 mg／L）作用8 h及5 mg／L的LPS于不同时间（0、2、4、8、16、24 h）作用HK-2细胞后IL-6蛋白表达的变化;应用脂质体转染法将SP-A SiRNA转染入HK-2细胞,筛选稳定转染细胞株,采用5 mg／L的LPS刺激SP-A SiRNA稳定转染的HK-2细胞8 h,ELISA方法检测细胞上清中IL-6的分泌量,Western印迹检测细胞NF-κB p65蛋白的表达。结果应用1、2、5、10 mg／L的LPS刺激HK-2细胞8 h后,IL-6蛋白表达水平较0、0．1 mg／L的LPS刺激后显著升高（P＜0．05）;同时,应用5 mg／L的LPS作用HK-2细胞4、8、16、24 h后,IL-6蛋白的表达水平较5 mg／L的LPS作用0、2 h显著升高（P＜0．05）。SP-A SiRNA转染的HK-2细胞经LPS刺激后,其NF-κBP65和IL-6蛋白表达较未转染经LPS刺激细胞明显升高（P＜0．05）。结论 SP-A可能通过抑制NF-κB p65的表达进而下调LPS诱导的HK-2细胞IL-6的表达,在脓毒症急性肾损伤时发挥保护作用。     

白鲜皮提取物拮抗内毒素/脂多糖的实验观察

目的 了解白鲜皮提取物2（DPR-2）对内毒素／脂多糖（LPS）的体外拮抗活性。方法 采用动态比浊法鲎试验定量检测DPR-2对LPS（0．1μg／L）的中和作用，激光共聚焦扫描显微镜观察不同浓度DPR-2（0、8、0、16．0、32．0、64．0mg／L）对异硫氰酸荧光素-LPS（FITC-LPS，100．0μg／L）与小鼠单核细胞株RAW264、7结合力的影响，用荧光定量反转录．聚合酶链反应（RT-PCR）法检测以上浓度DPR-2对LPS（100．0μg／L）刺激的RAW264．7细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）mRNA表达的影响。结果 DPR-2对LPS具有一定的中和作用（P〈0．05或P〈0．01）；浓度为32．0、64．0mg／L时可显著抑制FITC-LPS与RAW264．7细胞结合（P〈0.01）；对LPS刺激的小鼠RAW264．7细胞TNF-α和IL-6mRNA的表达有抑制作用，该作用具有一定的剂量-效应关系。结论 DPR-2可通过中和LPS的作用阻断与RAW264．7细胞膜受体结合，从而抑制LPS介导的细胞活化。     

血必净注射液对巨噬细胞一氧化氮生成和IL-10与IL-12平衡的影响

目的：探讨血必净注射液影响巨噬细胞一氧化氮（NO）生成和白细胞介素（IL）-10与IL-12分泌的量效-时效关系。方法：体外培养小鼠RAW264．7巨噬细胞株,在无或有细菌脂多糖（LPS）诱导下,分别给予不同浓度（1、5、10mg／ml）的血必净注射液干预,培养4、8和24h后收集上清,分别采用Griess和ELISA方法检测NO、IL-10和IL-12p70的分泌水平。结果：与对照组比较,血必净注射液能够促进正常细胞IL-10的分泌,同时抑制NO和IL-12p70的分泌（P〈0．05或P〈0．01）,这一效应能够持续到24h,随着血必净浓度的增加,效应逐渐增强,其中高浓度抑制NO分泌能力最强,4h和24h较中浓度组有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）,而中浓度促进IL-10分泌和抑制IL-12p70分泌的能力最强,中、高浓度组无统计学意义（P〉0．05）;LPS诱导自4h便能够促进NO和IL-12p70的分泌（P〈0．05或P〈0．01）,而8h才能明显促进IL-10的分泌（P〈0．01）,随着时间延长,效应逐渐增强（P〈0．05或P〈0．01）,血必净注射液能够抑制各时间点NO的分泌和促进IL-10的分泌,同时随着血必净浓度的增加,效应逐渐增强,其中高浓度效应最强,中、高浓度之间差异无统计学意义（P〉0．05）,中浓度血必净抑制IL-12p70的分泌效应最强,而中、高浓度间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：血必净注射液能够影响小鼠巨噬细胞NO的分泌和IL-10与IL-12平衡,并存在明显的时效-量效关系。     

小剂量脂多糖诱导血管内皮细胞TLR4的表达

目的:观察小剂量脂多糖(LPS)对人脐静脉内皮细胞(ECV304)TOLL样受体4(TLR4)表达的影响。方法:体外培养ECV304细胞,分别与LPS及LPS+TLR4抗体进行孵育。MTT法检测细胞的增殖活性,免疫组化染色法检测细胞表面TLR4的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞核核内TLR4-mRNA及IL-8mRNA的表达。结果:LPS(10～50ng/mL)刺激ECV304细胞24h内,细胞增殖活性无明显变化(P>0.05);而以100ng/mL刺激24h后,细胞增殖活性明显降低(P<0.05),TLR4抗体对此无明显拮抗作用。LPS能明显上调ECV304表达TLR4、TLR4-mRNA及IL-8mRNA,其中10ng/mL的LPS在24h时、50ng/mLLPS在6～24h时,TLR4表达具有统计学意义(P<0.05);50ng/mL的LPS刺激ECV304细胞在4h及8h时,细胞核内TLR4mRNA表达均明显升高(P<0.05),而IL-8mRNA表达在8h时明显升高(P<0.05)。TLR4抗体对ECV304表达TLR4及TLR4-mRNA有拮抗作用(P<0.05),对IL-8mRNA表达无明显拮抗作用(P>0.05)。结论:小剂量LPS可诱导ECV304细胞表达TLR4并引起细胞活化,TLR4抗体可抑制TLR4的表达,但不能抑制细胞的活化。     

腹膜高发性神经母细胞瘤细胞MIF的表达及生物学作用研究

目的：探讨腹膜高发性的人神经母细胞瘤细胞巨噬细胞移动抑制因子表达及对肿瘤发生发展的作用机理,为该病早期诊断及治疗寻找新的靶点。方法：RT-PCR分析人神经母细胞瘤细胞MIF mRNA表达,3H-TdR掺入法检测肿瘤细胞增殖,MTT实验分析NK细胞的对肿瘤细胞的杀伤活性,放射免疫分析法测定肿瘤细胞产生IL-10水平。结果：腹膜神经母细胞细胞表达MIF基因;基因重组MIF促进腹膜神经母细胞增殖,而抗MIF mAb抑制其增殖,二者均呈现剂量依赖性,与对照组相比,50ng/mL和100ng/mL组的差异最明显（P〈0.05）。抗MIF单抗（50ng/mL）处理NK细胞12h和24h,可以明显抑制NK细胞对它的杀伤作用,尤其是效应细胞与靶细胞比例为50∶1和25∶1时最为明显;而用抗MIF单抗（50ng/mL）处理腹膜神经母细胞瘤细胞24h,可以明显提高NK细胞的杀伤率,可以明显抑制SK-N-SH细胞产生IL-10（P〈0.05）。结论：MIF可以通过促进腹膜神经母细胞瘤细胞的增殖和增强其对免疫监视功能的抵抗促进肿瘤的发展。     

辛伐他汀对结直肠癌患者IL-6与IL-8血清表达及癌细胞分泌影响的研究

目的:研究辛伐他汀对结直肠癌患者IL-6及IL-8血清表达和癌细胞分泌的影响,初步探讨辛伐他汀在结直肠癌中的治疗机制。方法:应用ELISA检测结直肠癌患者与健康对照者血清中IL-6及IL-8水平,应用RT-PCR比较IL-6与IL-8在结直肠癌及癌旁组织的表达情况;应用ELISA检测结直肠癌患者辛伐他汀治疗后血清IL-6与IL-8的变化规律。应用ELISA检测辛伐他汀干预后结直肠癌细胞株(HT-29与Ca-co-2)上清中IL-6与IL-8变化。结果:结直肠癌患者血清IL-6与IL-8水平显著高于健康对照者(P<0.05)。IL-8 mRNA表达水平在癌组织明显高于癌旁组织(P<0.05);而IL-6 mRNA在癌组织与癌旁组织表达差异无统计学意义(P>0.05)。结肠癌患者应用辛伐他汀(80 mg/d)治疗14 d后,血清IL-6水平显著降低(P<0.05),而IL-8无明显变化(P>0.05)。应用浓度达到5μmol/L以上辛伐他汀干预结直肠癌细胞株HT-29与Caco-2后,其IL-6及IL-8分泌明显下降(P<0.05)。结论:辛伐他汀可以降低结直肠癌患者血清IL-6的水平,并可以抑制结直肠癌细胞IL-8与IL-6分泌。     

大黄素对脂多糖诱导的内皮细胞骨架损伤及通透性影响的实验研究

目的：观察大黄素对脂多糖（ lipopolysaccharide,LPS）诱导损伤的人脐静脉血管内皮细胞（ human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）的干预作用,探讨其对内皮细胞细胞骨架及通透性的影响。方法：以0．2μg/ml LPS作用于HUVECs 24 h,造成血管内皮损伤模型。Y27632（ ROCK特异性抑制剂）和缬沙坦（西药对照,AngⅡ受体1拮抗剂,Rho/ROCK信号通路的间接抑制剂）作为阳性对照药物。观察了大黄素对LPS诱导的内皮损伤后的HUVECs的变化：流式细胞仪An-nexin V-FITC/PI染色观察凋亡率,transwell迁移实验观察细胞迁移能力,10 mg/ml波连蛋白预包被/无包被96孔板观察细胞黏附能力,硝酸还原酶法检测细胞培养上清中的cNOS、iNOS和NO浓度,免疫荧光法观察细胞骨架和黏着斑蛋白的结构和分布。结果：（1）LPS成功诱导构建了HUVECs细胞骨架损伤模型。HUVECs细胞增殖减弱、凋亡增加,细胞骨架肌动蛋白皱缩、黏着斑蛋白聚集,LPS活化内皮、诱导肌球蛋白收缩,导致细胞间隙开放、内皮通透性增加、细胞迁移能力和黏附能力下降。LPS作用24 h后,cNOS减低,tNOS、iNOS、NO升高,呈现内皮损伤和炎症状态。（2）大黄素诱导HUVECs细胞凋亡、提高细胞迁移能力和黏附能力、cNOS升高、iNOS减低,对细胞骨架和黏着斑蛋白形态无明显影响。结论：LPS诱导了HUVECs细胞骨架损伤,大黄素通过调节细胞的凋亡率、调节细胞合成和利用NO的能力、改变细胞迁移和黏附能力,而调节血管内皮通透性、改善内皮屏障功能。同时大黄素促进HUVECs凋亡,抑制内皮细胞的过度增殖,对内皮细胞有一定的保护作用。     

连续性血液透析滤过对MODS犬肝肾IL-6和IL-10 mRNA表达的影响

目的：探讨连续性血液透析滤过（CVVHDF）后多器官功能障碍综合征（MODS）犬肝、肾组织白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-10（IL-10）mRNA表达水平的变化及意义。方法：15只雄性Beagle犬,采用失血性休克＋复苏灌注＋内毒素血症复制MODS模型,随机分为CVVHDF组（n=8）和MODS组（n=7）,CVVHDF组在内毒素注射完毕后给予CVVHDF治疗12h,MODS组不给CVVHDF治疗。测定各器官功能相关指标,同时应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定两组肝、肾组织中IL-6、IL-10mRNA表达水平。结果：CVVHDF组治疗后肝、肾功能有关指标水平均有不同程度的改善;与MODS组相比,在内毒素注射后3h及以后各时间点,血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平显著降低（P〈0.05）;器官衰竭发生率较MODS组明显降低（37.5%vs85.7%,P〈0.05）;MODS组肝、肾组织IL-6mRNA表达水平显著高于正常对照组和CVVHDF组（P〈0.01）,而CVVHDF组肝、肾组织IL-10 mRNA表达水平显著高于正常对照组和MODS组（P〈0.01）。结论：连续性血液透析滤过能明显改善肾功能,CVVHDF早期应用可以降低MODS肝、肾组织IL-6/IL-10mRNA比值,有助于重建机体免疫系统内稳状态。     

不同剂量乌司他丁对老年患者胃切除术后血红素氧合酶-1与细胞因子的影响

目的：探讨不同剂量乌司他丁（UTI）对老年患者胃切除术后血红素氧合酶-1（HO-1）活性和细胞因子变化的影响。方法：48例胃癌行胃切除手术的老年患者,随机分为4组：生理盐水对照组,UTI 0．5万U／kg、1．0万U／kg、2．0万U／kg。并分别于手术不同时间点取血,检测血清肿瘤坏死因子（TNV—α）、白介素-6（IL-6）及血红素氧合酶-1。结果：0．5万U／kg UTI仅抑制术后24h的IL-6释放,不能促进术后HO-1活性升高;1．0万U／kg UTI可抑制术后6、12、24h的IL-6、TNF—α释放,促进术后24h的HO-1活性升高;2．0万U／kg UTI对围术期TNF—α、IL-6释放有明显抑制作用,促进术后12、24h的HO-1活性明显升高。结论：UTI具有剂量依赖性抑制促炎因子释放,促进HO-1反应性上调,发挥脏器保护作用。